一种苯甲酰胺衍生物改善认知功能障碍的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，具体涉及一种苯甲酰胺衍生物改善认知功能障碍的用途。

背景技术

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease，AD)，是一种以认知功能障碍为主要临床症状的神经退行性疾病，伴随着行为和社交功能障碍及生活能力的下降。令人遗憾的是，目前治疗AD的药物种类和疗效均十分有限，AD不能被显著的延缓和治愈。临床上两类治疗AD药物，胆碱酯酶抑制剂和N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂，均不能阻止AD的发展进程，仅能缓解症状且副作用大。

发明内容

本发明的主要目的是提供一种疗效确切、副作用少、天然安全的治疗与改善认知功能障碍相关的疾病和病症的药物，以解决现有技术中的常见的药物疗效欠佳、不能阻止AD的发展进程，仅能缓解症状且副作用大的问题。

为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种苯甲酰胺衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于改善认知功能障碍的药品中的用途，该苯甲酰胺衍生物具有式I所示的结构式：

进一步地，该苯甲酰胺衍生物的溶液配制方法包括：称取适量的苯甲酰胺衍生物，加入试剂进行溶解并稀释，得到该苯甲酰胺衍生物的溶液。

进一步地，该试剂为人工脑脊液，例如灭菌人工脑脊液。

进一步地，该苯甲酰胺衍生物的溶液配制浓度为0.01～2μg/mL，例如约0.1μg/mL或约0.3μg/mL或约0.9μg/mL。

根据本发明的另一个方面，提供了一种包含苯甲酰胺衍生物或其药学上可接受的盐的药物组合物在制备用于改善认知功能障碍的药品中的用途，该苯甲酰胺衍生物具有式I所示的结构式：

进一步地，该药物组合物进一步包含一种或多种用于改善认知功能障碍的药物和/或提取物。

进一步地，该药物选自以下的一种或多种：胆碱酯酶抑制剂、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂、单克隆抗体和脑肠轴调节剂。

进一步地，该胆碱酯酶抑制剂为多奈哌齐、卡巴拉汀、石杉碱甲和/或加兰他敏。

进一步地，该N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂为美金刚。

进一步地，该单克隆抗体为阿度埃尤单抗、仑卡奈单抗和/或多奈单抗。

进一步地，该脑肠轴调节剂为甘露特纳。

根据本发明的另一个方面，提供了一种包含苯甲酰胺衍生物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料的药物制剂在制备用于改善认知功能障碍的药品中的用途，该苯甲酰胺衍生物具有式I所示的结构式：

进一步地，该辅料选自以下的一种或多种：稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、包合剂、矫味剂、缓释剂、助留剂、润滑剂、分散剂、增塑剂、遮光剂和抗氧化剂。

进一步地，该药物制剂为散剂、片剂、滴丸剂、胶囊剂、膜剂、锭剂、颗粒剂、注射液或口服液。

进一步地，该认知功能障碍为神经退行性疾病，例如阿尔茨海默病。

本发明的有益效果：

本发明的具有式I所示的结构式的苯甲酰胺衍生物能够改善Aβ

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，还可以根据这些附图获得其他的附图，而并不超出本发明要求保护的范围。

图1为侧脑室给药本发明的具有式I所示的结构式的苯甲酰胺衍生物(简称“式I化合物”)改善Aβ

图2为灌胃给药本发明的具有式I所示的结构式的苯甲酰胺衍生物(简称“式I化合物”)改善APP/PS1转基因小鼠的认知障碍结果示意图。其中，(A)APP/PS1转基因小鼠灌胃给药流程图；(B)旷场实验小鼠运动总距离统计图；(C)旷场实验小鼠中央停留时间统计图；(D)旷场实验小鼠中央平均速度统计图；(E)Morris水迷宫实验小鼠游泳轨迹图；(F)Morris水迷宫实验小鼠目标象限停留时间百分比统计图；(G)Morris水迷宫实验小鼠穿台次数统计图；(H)Y迷宫实验自发性交替指数统计图；(I)新物体识别实验小鼠识别指数统计图。多组数据单因素相比较，采用单因素方差分析及Tukey事后分析。结果以均数±标准误表示，

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

除非另外说明，本文所用的所有技术和科学术语和缩略语具有本发明领域或该术语应用领域中普通技术人员通常所理解的含义。虽然本发明实施过程中可使用类似于或等价于本文公开的那些的任何方法、条件、物质或材料，但本文描述了优选的方法、条件物质或材料。

本发明有预期地涵盖所有的选择余地、变体和同等物，这些可能如权利要求所定义的那样包含在现有发明领域。所属领域的技术人员将识别许多类似或等同于在此所描述的方法和物质，这些可以应用于本发明的实践中去。本发明绝非限于方法和物质的描述。

本发明将应用以下定义除非其他方面表明。根据本发明的目的，化学元素根据元素周期表，CAS版本和化学物理手册，75th Ed.，1994来定义。另外，有机化学一般原理见“Organic Chemistry”，Thomas Sorrell，University Science Books，Sausalito：1999，和“March’s Advanced Organic Chemistry”，Michael B.Smith和Jerry March，John Wiley&Sons，New York：2007，因此所有的内容都融合了参考文献。

说明书和所附权利要求中所用的单数形式“一个”，“一种”和“所述”包括复数指示物，除非上下文另有明确规定。

在本发明中，术语“包括”与“包含”同义。本文中所用的术语“包含”、“包括”、“具有”、“含有”或其任何其它变形，意在覆盖非排它性的包括。例如，包含所列要素的组合物、步骤、方法、制品或装置不必仅限于那些要素，而是可以包括未明确列出的其它要素或此种组合物、步骤、方法、制品或装置所固有的要素。

正如背景技术部分所描述的，现有技术中的治疗以认知功能障碍为主要临床症状的神经退行性疾病的常见药物存在疗效欠佳、不能阻止AD的发展进程，仅能缓解症状且副作用大的问题。为了解决上述问题，本发明提供了一种苯甲酰胺衍生物或其药学上可接受的盐在制备用于改善认知功能障碍的药品中的用途，该苯甲酰胺衍生物具有式I所示的结构式：

本发明所使用的术语“盐”是指在制药上可接受的并且具有母体化合物的所需药理学活性的本发明化合物的盐。合适的盐包括所有已知的可药用盐，包括与有机酸和无机酸形成的那些盐。因此，合适的盐包括由以下酸形成的那些盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、枸橼酸、酒石酸、乳酸、戊酸、乙酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、甲磺酸和苯磺酸。

在一种优选的实施方式中，该苯甲酰胺衍生物的溶液配制方法包括：称取适量的苯甲酰胺衍生物，加入试剂进行溶解并稀释，得到该苯甲酰胺衍生物的溶液。

在一种优选的实施方式中，该试剂为人工脑脊液，例如灭菌人工脑脊液。

在一种优选的实施方式中，该苯甲酰胺衍生物的溶液配制浓度为0.01～2μg/mL，例如约0.1μg/mL或约0.3μg/mL或约0.9μg/mL。

在本发明中，浓度或其它参数以范围、优选范围、或一系列上限优选值和下限优选值限定的范围表示时，这应当被理解为具体公开了由任何范围上限或优选值与任何范围下限或优选值的任一配对所形成的所有范围，而不论该范围是否单独公开了。例如，当公开了范围“0.01～2”时，所描述的范围应被解释为包括范围“0.01～2”、“0.01～1.5”、“0.01～1”、“0.01～0.5”、“0.5～2”、“0.50～1.50”、“0.50～1”、“1～2”、“1～1.5”、“1.5～2”等。当数值范围在本文中被描述时，除非另外说明，否则该范围意图包括其端值和在该范围内的所有整数和分数，并且该范围内的所有数值均能实现本发明的效果。

在本发明中，“约”是指一个特定值的±5％范围的值。例如，“约0.1”包括0.1的±5％，或从0.095到0.105；“约0.3”包括0.3的±5％，或从0.285到0.315；“约0.9”包括0.9的±5％，或从0.855到0.945。

根据本发明的另一个方面，提供了一种包含苯甲酰胺衍生物或其药学上可接受的盐的药物组合物在制备用于改善认知功能障碍的药品中的用途，该苯甲酰胺衍生物具有式I所示的结构式：

在一种优选的实施方式中，该药物组合物进一步包含一种或多种用于改善认知功能障碍的药物和/或提取物。

在一种优选的实施方式中，该药物选自以下的一种或多种：胆碱酯酶抑制剂、N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂、单克隆抗体和脑肠轴调节剂。

在一种优选的实施方式中，该胆碱酯酶抑制剂为多奈哌齐、卡巴拉汀、石杉碱甲和/或加兰他敏。

在一种优选的实施方式中，该N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体拮抗剂为美金刚。

在一种优选的实施方式中，该单克隆抗体为阿度埃尤单抗、仑卡奈单抗和/或多奈单抗。

在一种优选的实施方式中，该脑肠轴调节剂为甘露特纳。

根据本发明的另一个方面，提供了一种包含苯甲酰胺衍生物或其药学上可接受的盐和药学上可接受的辅料的药物制剂在制备用于改善认知功能障碍的药品中的用途，该苯甲酰胺衍生物具有式I所示的结构式：

采用有效剂量的本发明的上述苯甲酰胺衍生物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受的辅料用于生产药物组合物。活性化合物的剂量可随给药途径、患者的年龄和体重、待治疗疾病的性质和严重程度和类似因素而变化。

本发明化合物的药物组合物可以以下面的任意方式施用：口服，喷雾吸入，直肠用药，鼻腔用药，颊部用药，局部用药，非肠道用药，如皮下，静脉，肌内，腹膜内，鞘内，心室内，胸骨内和颅内注射或输入，或借助一种外植储器用药。其中优选口服、局部用药、腹膜内或静脉内给药方式。

在一种优选的实施方式中，本发明的药物制剂含有相对于药物制剂的重量计算总量为0.00001至50wt.％、或0.0001至10wt.％、或0.0001至5wt.％、或0.005至1wt.％、或0.1至20wt.％、或0.5至15wt.％、或1至5wt.％的至少一种药学上可接受的辅料。

在本发明中，术语“药学上可接受”这里指一种物质，如载体或稀释液，不会使化合物的生物活性或性质消失，且相对无毒，如，给予个体某物质，不会引起不想要的生物影响或以有害的方式与任何其含有的组分相互作用。

在本发明中，术语“药学上可接受的辅料”是指在药理学和/或生理学上与受试者和活性成分相容(即，能够引发所需的治疗效果而不会引起任何不希望的局部或全身作用)的载体和/或赋形剂，其是本领域公知的(参见例如Remington's PharmaceuticalSciences.Edited by Gennaro AR,19th ed.Pennsylvania:Mack Publishing Company,1995)。

在一种优选的实施方式中，该辅料选自以下的一种或多种：稀释剂、润湿剂、粘合剂、崩解剂、包合剂、矫味剂、缓释剂、助留剂、润滑剂、分散剂、增塑剂、遮光剂和抗氧化剂。

本领域技术人员将知晓如何选择具体的在上述辅料类别范围内的化学物质。例如，该稀释剂可选自以下的一种或多种：糖粉、淀粉、可压性淀粉、乳糖、糊精、甘露醇、山梨醇、微晶纤维素、硫酸钙和碳酸钙。该润湿剂可选自以下的一种或多种：硬脂酸聚甲醛、泊洛沙姆、聚氧乙烯山梨醇酐脂肪酸酯、聚氧乙烯氢化蓖麻油、聚氧乙烯烷基醚、聚山梨醇酯如聚山梨醇酯80、鲸蜡醇、甘油脂肪酸酯(如三醋精、甘油单硬脂酸酯和类似物)、聚氧乙烯脂肪酸酯、聚乙二醇脂肪酸酯、十二烷基硫酸钠、山梨醇脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、聚氧乙烯醚、苯扎氯铵、聚氧乙烯蓖麻油和多库酯钠。该粘合剂可选自以下的一种或多种：聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基纤维素、聚乙二醇和甲基纤维素。该崩解剂可选自以下的一种或多种：羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙盐和羧甲基纤维素钠。该矫味剂可选自以下的一种或多种：山梨醇、葡萄糖、甘露糖、蔗糖和乳糖。该分散剂可选自以下的一种或多种：交联羧甲基纤维素钠、淀粉甘醇钠和预明胶化的玉米淀粉。该增塑剂可以是二丁基癸二酸酯和/或各种柠檬酸酯。该缓释剂可选自以下的一种或多种：羧甲基纤维素钠、低取代的羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、微晶纤维素、羟乙基纤维素、阿拉伯胶、明胶和紫胶。该抗氧化剂可选自以下的一种或多种：亚硫酸氢钠、焦亚硫酸钠、亚硫酸钠和硫代硫酸钠。该润滑剂可选自以下的一种或多种：硬脂酸钙、滑石粉、硬脂酸镁、硬脂酸和胶态二氧化硅。

这些辅料优选为药物惰性的，或者可以具有协同或增加作用，以增强药物组合物的治疗活性，并且上述辅料仅是列举式的，本发明实际使用的辅料并不限于上述辅料，可根据实际情况进行调整，均能实现本发明的效果。

在一种优选的实施方式中，该药物制剂为散剂、片剂、滴丸剂、胶囊剂、膜剂、锭剂、颗粒剂、注射液或口服液。

本发明的上述药物、辅料和剂型仅是举例式的，在实际运用过程中不限于上述所列举的这些，只要可与本发明的药物组合物相互配合使用，均在本发明的保护范围内。

在一种优选的实施方式中，该认知功能障碍为神经退行性疾病，例如阿尔茨海默病。

在本发明中，术语“改善”也包括“预防”，除非存在与此相反的具体说明。术语“改善(的)”和“改善(地)”应该作相应的理解。

在本发明中，术语“改善”，包括缓和、抑制或预防疾病的症状或状况；抑制并发症的产生；预防潜在代谢综合症；抑制疾病或症状的产生，如控制疾病或情况的发展；减轻疾病或症状；使疾病或症状减退；减轻由疾病或症状引起的并发症，或预防由疾病或症状引起的征兆。如本文所用，某一药物组合物或某一药物制剂，给药后，可以使某一疾病、症状或情况得到改善，尤指其严重度得到改善，延迟发病，减缓病情进展，或减少病情持续时间。无论固定给药或临时给药、持续给药或断续给药，可以归因于或与给药有关的情况。

本发明还提供一种上述组合物或上述药物制剂，用于改善受试者中的认知功能障碍例如阿尔茨海默病。

本发明还提供一种改善受试者中的认知功能障碍例如阿尔茨海默病的方法，包括向该受试者施用有效量的上述组合物或上述药物制剂。

在本发明中，术语“受试者”是哺乳动物。哺乳动物可以是人、非人灵长类动物、小鼠、大鼠、狗、猫、马或牛，但不限于这些实例。除人以外的哺乳动物可以有利地用作代表阿尔茨海默病模型的受试者。优选地，所述受试者是人。

本发明所用的药物组合物或制剂的“有效量”可以获得所需要的治疗和/或预防效果。对此用途有效的量将取决于例如药物组合物、给药方式、治疗的疾病的阶段和严重性、个体体重和总体健康状况、以及处方医师的判断。剂量的给予可以每周一次，或两天或每天一次，或甚至每天几次。可以在短期(例如数周至数月)或更长时间段(数月至数年)给予剂量单元。

下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件或制造厂商所建议的条件。

除非另行定义，文中所使用的所有专业与科学用语与本领域熟练人员所熟悉的意义相同。此外，任何与所记载内容相似或均等的方法及材料皆可应用于本发明方法中。文中所述的较佳实施方法与材料仅作示范之用。

本发明提到的上述特征，或实施例提到的特征可以任意组合。本专利说明书所揭示的所有特征可与任何组合物形式并用，说明书中所揭示的各个特征，可以任何可提供相同、均等或相似目的的替代性特征取代。因此除有特别说明，所揭示的特征仅为均等或相似特征的一般性例子。

实施例

1、实验材料

1.1、实验动物

雄性SPF级C57BL/6J小鼠，体重22±2g，8-10周龄，购自扬州大学比较医学中心，苏州大学卫生与环境技术研究所质检，实验动物许可证号：SCXK(苏)2017-0007。

雄性SPF级转基因APP/PS1小鼠及野生型对照小鼠，体重25±2g，9月龄，购自杭州子源实验动物科技有限公司，浙江省实验动物质量监督监测站质检，实验动物许可证号：SCXK(浙)2019-0004。

动物饲养条件：恒温22±2℃，湿度50±5％，光暗周期12h/12h，光照时间为07:00-19:00，实验动物自由获取食物与饮水，1周的环境适应后开始实验。所以操作均符合中国动物保护协会及郑州大学实验动物管理委员会的规定。

1.2、实验试剂

本发明中主要使用的实验试剂如表1所示。

表1实验试剂

1.3、实验仪器

本发明中主要使用的实验仪器如表2所示。

表2实验仪器

1.4、主要试剂溶液的配制

灭菌人工脑脊液(ACSF)：称取3.66g NaCl，0.11g KCl，0.075gNa

Aβ

本发明式I所示苯甲酰胺衍生物溶液：1.称取本发明式I所示苯甲酰胺衍生物1.0mg，加1.0mL灭菌人工脑脊液充分溶解，得到1.0mg/mL母液。用灭菌人工脑脊液稀释至0.1μg/μL、0.3μg/μL、0.9μg/μL，用于侧脑室给药。2.称取本发明式I所示苯甲酰胺衍生物30mg，溶于10mL的0.5％甲基纤维素溶液中，用于灌胃给药。

多奈哌齐溶液：称取多奈哌齐5mg，溶于10mL的0.5％甲基纤维素溶液中，用于灌胃给药。

2、动物手术

小鼠经异氟烷(1.5-5％)呼吸麻醉后，采用脑立体定位技术向目标核团注射药物。具体手术方法如下：小鼠固定在脑立体定位架上，头部剪毛后切开小鼠皮肤，暴露颅骨；根据小鼠脑图谱，确定目标核团坐标；以前囟为基点，对小鼠颅骨进行三维定位，使用高速颅骨钻在目标核团坐标处钻孔；使用微量注射器将药物注射到目标核团，微量注射泵控制注射体积及速度；注射完毕后留针5分钟，缓慢拔出微量注射器并缝合头部皮肤。值得注意的是，整个手术过程中需要保持小鼠颅骨的湿润，手术后给予小鼠镇痛和消炎药物。本发明脑立体定位注射核团为大脑侧脑室(Lateral Ventricle，LV)，坐标为(AP:-0.30，ML:-1.00，DV:-2.50)。

3、动物行为学实验

3.1、旷场实验(OFT)

将小鼠放置于尺寸为50cm×50cm×40cm的塑料旷场测试箱中，摄像机记录小鼠5分钟的自发活动，使用ANY-MAZE动物行为视频分析系统分析小鼠的移动总距离、中央停留时间和中央运动速度。每只小鼠测试完毕，使用75％酒精溶液擦拭旷场测试箱，消除小鼠气味。

3.2、水迷宫实验(MWM test)

水迷宫实验装置包含白色圆形水池(直径1.2m，高0.5m)、白色站台(直径9cm)和摄像采集系统。水池壁外有四个可供小鼠识别的标志物，同时将圆形水池分为四个象限，分别设为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ象限。放置站台于第Ⅳ象限，低于水面1cm处，站台上有可拆卸的白色三角形旗帜。池内水深30cm，水温维持在22-24℃，并加入适量白色食品添加剂使黑色小鼠能够被视频采集系统识别。水迷宫实验分为三个阶段：第一阶段(可见平台训练期)，实验开始第1-2天进行，依次将小鼠从水池Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ和Ⅳ象限面壁放入水中，若90秒内，小鼠能爬上站台(携带旗子，放置在第Ⅳ象限)并停留10秒，则所用时间为逃离潜伏期(Escape latency)；若超出90秒小鼠仍未发现站台，则引导小鼠爬上站台并停留30秒，潜伏期记为90秒；第二阶段(隐藏平台训练期)，实验开始第3-5天进行，移走站台旗帜，训练方法同可见平台训练；第三阶段(空间探索测试阶段)，实验开始第6天进行，移除水池内部站台，选择小鼠从Ⅱ象限(与第Ⅳ象限成对角)面壁放入水池中，摄像机记录小鼠90秒的游泳活动。使用ANY-MAZE动物行为视频分析系统分析小鼠运动轨迹、第Ⅳ象限游泳时间百分比及穿台次数。

3.3、Y迷宫实验(Y-maze test)

Y迷宫具有均匀的三个臂(40cm×9cm×16cm)，依次编号A、B和C，臂与臂夹角呈120°，形似字母“Y”。将小鼠面壁放置起始臂A末端，摄像机记录小鼠8分钟在Y迷宫内的自由活动。小鼠连续进入三个臂，如(ABC、ACB、BCA等)，设为一个交替周期，使用ANY-MAZE动物行为视频分析系统分析小鼠的交替周期数。自发性交替反应百分数＝(实际交替周期数)/(总进臂数-2)。

3.4、新物体识别实验(NOR test)

本实验在旷场实验基础上进行测试。实验分为两个阶段：第一阶段(训练期)，在旷场箱对角线上放置两个相同蓝色圆柱体物块(相同大小、颜色和材质)，物块距离两侧壁5cm，将小鼠放置其中，使其自由探索5分钟后放回鼠笼；间隔24小时后进行第二阶段(测试期)，随机将旷场箱中一个圆柱体物块换成一个白色正方体物块(大小、颜色和材质均与圆柱体不同)，使其作为新物体。将小鼠放置其中，摄像机记录小鼠5分钟的探索活动。使用ANY-MAZE动物行为视频分析系统分析小鼠分别对圆柱体(Original object A)和正方体(Novel object B)的探索时间。新物体识别指数＝(B探索时间-A探索时间)/(A和B总探索时间)。

4、统计方法

所有实验及数据处理采用双盲操作，数据分析使用SPSS软件(版本：22.0)，数据图绘制使用GraphPad prism软件(版本：7.00)。当多组数据单因素相比较时，我们采用单因素方差分析及Tukey事后分析(one-way ANOVA with Tukey’s post-hoc analysis)方法。所有数据以均数±标准误(mean±SEM)的形式表示，以

5、实验结果

5.1、侧脑室给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物改善Aβ

选用2月龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠，随机分为5组，分别设为空白对照组(Veh+Veh)、侧脑室Aβ

旷场实验结果显示：各组小鼠运动总距离(F(4,45)＝0.036，P＝0.997)、中央停留时间(F(4,45)＝0.103，P＝0.981)和中央运动速度(F(4,45)＝0.068，P＝0.992)均无显著性差异(图1B-1D)。这表明侧脑室给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物不影响小鼠的自发活动。

Morris水迷宫实验结果显示：与空白对照组小鼠比较，Aβ

Y迷宫实验结果显示：与空白对照组小鼠比较，Aβ

新物体识别实验结果显示：与空白对照组小鼠比较，Aβ

以上结果表明，侧脑室给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物能够改善Aβ

5.2、灌胃给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物改善APP/PS1转基因小鼠的认知障碍

选用9月龄雄性SPF级转基因APP/PS1小鼠及野生型对照小鼠，随机分为4组，分别设为空白对照组(Veh+Veh)、认知障碍模型组(APP/PS1+Veh)、灌胃给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物组(APP/PS1+本发明式I所示苯甲酰胺衍生物)和阳性对照多奈哌齐组(APP/PS1+多奈哌齐)，每组10只小鼠。各组小鼠经过一周的适应性饲养后，APP/PS1小鼠灌胃给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物(30mg/kg)予以治疗，阳性对照组APP/PS1小鼠灌胃给药多奈哌齐(5mg/kg)。空白对照组小鼠选用野生型对照小鼠，其和认知障碍模型组小鼠灌胃相同体积的0.5％甲基纤维素溶液。每天1次，连续给药4周后，各组小鼠依次进行旷场实验检测小鼠自发活动，Morris水迷宫实验检测小鼠空间学习记忆，Y迷宫实验检测小鼠空间工作记忆，新物体识别实验检测小鼠情景记忆(图2A)。

旷场实验结果显示：各组小鼠运动总距离(F(3,36)＝0.383，P＝0.766)、中央停留时间(F(3,36)＝0.066，P＝0.978)和中央运动速度(F(3,36)＝0.152，P＝0.929)均无显著性差异(图2B-2D)。这表明灌胃给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物不影响小鼠的自发活动。

Morris水迷宫实验结果显示：与空白对照组小鼠比较，APP/PS1小鼠目标象限停留时间百分比(F(3,36)＝10.240，P<0.01)和穿台次数显著下降(F(3,36)＝6.352，P<0.01)，而灌胃给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物和多奈哌齐显著增加APP/PS1小鼠目标象限停留时间百分比(P<0.01和P<0.01)和穿台次数(P<0.05和P<0.01，图2E-2G)。结果表明，灌胃给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物能够改善APP/PS1小鼠的空间学习记忆障碍。

Y迷宫实验结果显示：与空白对照组小鼠比较，APP/PS1小鼠自发性交替指数显著下降(F(3,36)＝11.325，P<0.01)，而灌胃给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物和多奈哌齐显著增加APP/PS1小鼠自发性交替指数(P<0.01和P<0.01，图2H)。结果表明，灌胃给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物能够改善APP/PS1小鼠的空间工作记忆障碍。

新物体识别实验结果显示：与空白对照组小鼠比较，APP/PS1小鼠识别指数显著下降(F(3,36)＝14.318，P<0.001)，而灌胃给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物和多奈哌齐显著增加APP/PS1小鼠识别指数(P<0.01和P<0.001，图2I)。结果表明，灌胃给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物能够改善APP/PS1小鼠的情景记忆障碍。

以上结果表明，灌胃给药本发明式I所示苯甲酰胺衍生物能够改善APP/PS1小鼠的认知障碍，而不影响小鼠自发活动。

以上对本发明实施例进行了详细介绍，本文中应用了具体个例对本发明的原理及实施方式进行了阐述，以上实施例的说明仅用于帮助理解本发明的方法及其核心思想。同时，本领域技术人员依据本发明的思想，基于本发明的具体实施方式及应用范围上做出的改变或变形之处，都属于本发明保护的范围。综上所述，本说明书内容不应理解为对本发明的限制。