一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物及其制备与应用、药物

技术领域

本发明涉及生物医药领域，尤其涉及一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物及其制备与应用、药物。

背景技术

炎症性肠病(IBD)包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)，近年来发病率呈上升趋势。与IBD的关联主要因素最主要是依靠与肠道菌群之间的相互作用来实现的。肠道细菌通过产生特殊催化酶分解发酵产生短链脂肪酸。短链脂肪酸可以为宿主提供能量及细菌生长和繁殖所需的营养物质，同时具有为肠上皮细胞提供能量，刺激其分化增殖的作用，从而减少相关炎症因子的表达。

然而，炎症性肠病治疗上尚无特效方法，主要是内科药物治疗必要时手术治疗。目前对炎症性肠病的治疗分为控制治疗(即临床治疗)和维持治疗(即家庭治疗)。许多研究表明，异槲皮素具有天然的抗炎功效；另一方面，大多数天然类黄酮具有抗炎和抗氧化生物活性，多存在于甜橙、柚苷和柠檬等柑橘类产品果肉和果皮中。具有抗氧化、清除自由基、抗炎、抗菌、抗病毒活性、镇静和增强睡眠等作用。但是柑橘黄酮类化合物本身活性较低，水溶性较差，只有在大剂量才能显效，口服较难吸收，生物利用度低，因此难以利用作为直接治疗结肠炎的药物。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物，其能解决异槲皮素的吸收问题以及具有防治肠炎的功效。

本发明的第二个目的在于提供一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的制备方法，其能解决用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的制备问题。

本发明的第三个目的在于提供一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的应用，其能解决炎症性肠炎的预防和炎症抑制的问题。

本发明的第四个目的在于提供一种用于难治性肠炎的异槲皮素药物。

本发明的第一个目的采用以下技术方案实现：

一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物，包括按重量百分比计的以下成分：异槲皮素20-40％、柑橘黄酮类化合物30-50％、螯合剂0.5-2％、促溶剂5-30％、分散剂1.5-8％。

进一步地，所述柑橘黄酮类化合物为糖基化的柑橘黄酮类化合物。

进一步地，所述柑橘黄酮类化合物为橙皮素、橙皮苷、橙皮素单葡萄糖苷、柚皮素、柚皮苷、柚皮素单葡萄糖苷或川陈皮素中的一种或两种以上的组合物。

进一步地，按用于难治性肠炎的异槲皮素组合物重量百分比计，所述分散剂包括阿魏酸1-4％、左旋肉碱0.2-1％和烟酰胺0.5-2％。

进一步地，按用于难治性肠炎的异槲皮素组合物重量百分比计，所述促溶剂包括L-抗坏血酸3-7％和精氨酸6-20％。

进一步地，所述螯合剂为磷脂ω-3。

进一步地，包括按重量百分比计的以下组分：异槲皮素35％、橙皮素单葡萄糖苷40％、阿魏酸3％、左旋肉碱0.5％、精氨酸14.5％、L-抗坏血酸钠5％、烟酰胺1％和磷脂ω-31％。

本发明的第二个目的采用以下技术方案实现：

一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的制备方法，包括以下步骤：步骤1、将异槲皮素和促溶剂加入水中混合，加热搅拌得混合物体系；步骤2、停止加热混合物体系，加入柑橘黄酮类化合物，继续搅拌均匀；步骤3，向混合物体系加入螯合剂和分散剂后，继续搅拌均匀得用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的水溶液；步骤4，过滤用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的水溶液后冷冻干燥，完成用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的制备；所述步骤1中，加热搅拌的温度为80-90℃，加热搅拌的时间为3-10min。

本发明的第三个目的采用以下技术方案实现：

一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的应用，所述用于难治性肠炎的异槲皮素组合物在制备预防或治疗炎症性肠病的药物及保健品中的应用。

本发明的第四个目的采用以下技术方案实现：

一种用于难治性肠炎的异槲皮素药物，包括上述任一所述的用于难治性肠炎的异槲皮素组合物及药学上可接受的辅料；所述药物的剂型选自片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、缓释制剂、控释制剂、纳米制剂、注射剂、脂质体制剂中的一种。

相比现有技术，本发明的有益效果在于：

1.本发明的一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物，以异槲皮素和柑橘黄酮类化合物为主要成分，协同降低肠道的炎症因子水平。L-抗坏血酸和精氨酸能够改善异槲皮素的水溶性从而更好地被肠道所吸收，提高异槲皮素的生物利用度；本发明的异槲皮素组合物能够形成肠道黏膜屏障，以提高肠道的杯状细胞数量，同时肠粘膜的厚度均有一定程度的增加，短链脂肪酸的水平也有上升，能够更好地减轻肠道炎症的病理损伤。

2.本发明的一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物制备方法简便，通过本发明制备方法制备的组合物性质稳定，可长时间储存。本发明组合物能应用于预防或治疗炎症性肠病的药物及保健品中，降低肠道炎症因子的表达水平或抑制炎症。

附图说明

图1为本发明使用后体外细胞炎症抑制率图。

图2为本发明使用后体外细胞炎症因子的相对表达量图。

图3为本发明使用后肠道短链脂肪酸的含量变化图。

图4为本发明使用后炎症基因的相对表达量图。

图5为本发明使用后肠道杯状细胞和肠粘膜厚度变化情况。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明的技术方案进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明的部分实施例，而不是全部实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

炎症性肠病(IBD)包括溃疡性结肠炎(UC)和克罗恩病(CD)，近年来发病率呈上升趋势。然而，由于发病机制尚不明确，上述肠病/肠炎在治疗上尚无特效方法。目前对炎症性肠病的治疗分为控制治疗(即临床治疗)和维持治疗(即家庭治疗)。早期的研究者通过动物实验表明，肠道菌群在IBD的发生和发展过程中都起了很重要的作用。另一方面，饮食与IBD的发生发展有着较强的因果关系，食物与IBD的关联最主要是依靠与肠道菌群之间的相互作用来实现的。肠道细菌通过产生特殊催化酶分解发酵产生短链脂肪酸。短链脂肪酸可以为宿主提供能量及细菌生长和繁殖所需的营养物质，同时具有为肠上皮细胞提供能量，刺激其分化增殖的作用。

许多研究表明，异槲皮素具有天然的抗炎功效；另一方面，大多数天然类黄酮具有抗炎和抗氧化生物活性，多存在于甜橙、柚苷和柠檬等柑橘类产品果肉和果皮中。具有有抗氧化、清除自由基、抗炎、抗菌、抗病毒活性等作用。但是柑橘黄酮类化合物本身活性较低，水溶性较差，只有在大剂量才能显效，口服较难吸收，生物利用度低，因此难以利用作为直接治疗结肠炎的药物。

为了克服现有技术的不足，本发明的第一个目的在于提供一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物，其能解决异槲皮素的吸收问题以及具有防治肠炎的功效。

一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物，包括按重量百分比计的以下成分：异槲皮素20-40％、柑橘黄酮类化合物30-50％、螯合剂0.5-2％、促溶剂5-30％、分散剂1.5-8％。

进一步地，所述柑橘黄酮类化合物为糖基化的柑橘黄酮类化合物。糖基化柑橘类黄酮类化合物溶解度高、生物利用好，疗效更显著。所述糖基化的柑橘黄酮类化合物包括但不限于橙皮苷、柚皮苷、新橙皮苷的单葡萄糖苷。

进一步地，所述柑橘黄酮类化合物为橙皮素、橙皮苷、橙皮素单葡萄糖苷、柚皮素、柚皮苷、柚皮素单葡萄糖苷或川陈皮素中的一种。

所述橙皮素单葡萄糖苷去掉了一个鼠李糖之后的分子结构能够在结肠被更好吸收利用，并且在细胞和分子水平对炎症因子和肿瘤坏死因子的表达水平具有抑制作用。

进一步地，当异槲皮素和橙皮素单葡糖苷联合使用时，能降低炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、白介素22(IL-22)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平。

进一步地，按用于难治性肠炎的异槲皮素组合物重量百分比计，所述分散剂包括阿魏酸1-4％、左旋肉碱0.2-1％和烟酰胺0.5-2％。

分散剂在起到分散的同时，也具有一定的抗炎作用。所述阿魏酸具有抑制花生四烯酸代谢、拮抗组胺、降低血管通透性、清除自由基、抑制脂质过氧化，抑制巨噬细胞活化等广泛药理作用，能够有效缓解肠炎的症状。左旋肉碱则能与长链脂肪酸结合后进入线粒体内膜被代谢，不会进一步合成脂肪，增加短链短链脂肪酸的含量。所述烟酰胺可以减轻部分肠道炎症的病理损伤，降低肠组织血小板水平。

进一步地，按用于难治性肠炎的异槲皮素组合物重量百分比计，所述促溶剂包括L-抗坏血酸3-7％和精氨酸6-20％。

L-抗坏血酸和精氨酸能够改善异槲皮素的水溶性从而更好地被肠道所吸收，提高异槲皮素的生物利用度。

进一步地，包括按重量百分比计的以下组分：异槲皮素35％、橙皮素单葡萄糖苷40％、阿魏酸3％、左旋肉碱0.5％、精氨酸14.5％、L-抗坏血酸钠5％、烟酰胺1％和磷脂ω-31％。

本发明的第二个目的在于提供一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的制备方法，其能解决用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的制备问题。

本发明的第二个目的采用以下技术方案实现：

一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的制备方法，包括以下步骤：

步骤1、将异槲皮素和促溶剂加入水中混合，加热搅拌得混合物体系；

步骤2、停止加热混合物体系，加入柑橘黄酮类化合物，继续搅拌均匀；

步骤3，向混合物体系加入螯合剂和分散剂后，继续搅拌均匀得用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的水溶液；

步骤4，过滤用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的水溶液后冷冻干燥，完成用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的制备。

进一步地，所述步骤1中，加热搅拌的温度为80-90℃，加热搅拌的时间为3-10min。

进一步地，先将异槲皮素、L-抗坏血酸钠、精氨酸加入水中搅拌加热至85℃，搅拌5分钟后停止加热；随即加入橙皮素单葡萄糖苷，搅拌均匀后继续加入余下组分，过滤后冷冻干燥干燥即得组合物。

本发明提供一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的应用，其能解决炎症性肠炎的预防和炎症抑制的问题。

一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的应用，所述用于难治性肠炎的异槲皮素组合物在制备预防或治疗炎症性肠病的药物及保健品中的应用。

进一步地，所述用于难治性肠炎的异槲皮素组合物能抑制炎症因子的表达。

本发明还提供一种用于难治性肠炎的异榔皮素药物，包括所述用于难治性肠炎的异槲皮素组合物作及药学上可接受的辅料。

进一步的，所述药物的剂型选自片剂、胶囊、颗粒剂、口服液、缓释制剂、控释制剂、纳米制剂、注射剂、脂质体制剂及任何一种药学上可接受的剂型；优选为汤剂、颗粒剂、胶囊。

进一步地，所述用于难治性肠炎的异槲皮素药物能抑制炎症因子的表达。

下面，结合附图以及具体实施方式，对本发明做进一步描述：

实施例1-5为一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物，包括按重量份计的以下成分，原料组成如表1所示。

表1一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物原料组成

进一步地，实施例1-5所述防治肠炎的异槲皮素的组合物制备方法，包括以下步骤：

步骤1、将异槲皮素和L-抗坏血酸钠、精氨酸加入水中混合，加热至85℃，搅拌5分钟后停止加热，搅拌得混合物体系；

步骤2、停止加热混合物体系，加入橙皮素单葡萄糖苷，继续搅拌均匀；

步骤3，向混合物体系加入剩下组分，继续搅拌均匀得用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的水溶液；

步骤4，过滤用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的水溶液后冷冻干燥，完成用于难治性肠炎的异槲皮素组合物的制备。

对比例1

一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物，包括异槲皮素75％，阿魏酸3％、左旋肉碱0.5％、精氨酸14.5％、L-抗坏血酸钠5％、烟酰胺1％和磷脂ω-31％。制备方法同实施例1。

对比例2

一种防治肠炎的橙皮素单葡糖苷组合物，包括橙皮素单葡糖苷75％，阿魏酸3％、左旋肉碱0.5％、精氨酸14.5％、L-抗坏血酸钠5％、烟酰胺1％和磷脂ω-31％。制备方法同实施例1。

对比例3

一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物，包括异槲皮素35％、橙皮素40％、阿魏酸3％、左旋肉碱0.5％、精氨酸14.5％、L-抗坏血酸钠5％、烟酰胺1％和磷脂ω-31％。制备方法同实施例1。

对比例4

一种用于难治性肠炎的异槲皮素组合物，包括异槲皮素35％、柚皮素40％、阿魏酸3％、左旋肉碱0.5％、精氨酸14.5％、L-抗坏血酸钠5％、烟酰胺1％和磷脂ω-31％。制备方法同实施例1。

结果与分析

1.体外抗炎效果

通过体外与RAW 264.7株小鼠巨噬细胞共培养，对实施例1、对比例1-4进行体外抗炎试验，分别设立空白对照组、脂多糖(LPS)组、实施例1为1组、对比例1-4为2-5组。

每组都有6个平行样本，RAW 264.7株小鼠巨噬细胞在150mm的培养皿中培养，方法如下：

空白对照组正常培养12小时；LPS组添加LPS(0.2μg/ml)培养12小时；各治疗组同时添加LPS(0.2μg/ml)与上述实施例或对比例样品(5μmol/L)共孵育12小时。治疗后，收集细胞，并用PBS缓冲液洗涤两次，以供以后的分析。检测炎症因子一氧化氮(NO)的抑制率，并通过实时荧光定量PCR分析白细胞介素1β(IL-1β)和白细胞介素6(IL-6)的表达水平，结果如图1、图2。

由图1、图2可见，在细胞层面上，加入LPS可使巨噬细胞产生大量炎症因子，分别使用实施例1(1组)、对比例1-4(2-5组)后，炎症因子水平均有降低。其中，对比例1仅含橙皮素单葡糖苷，对比例2仅含异槲皮素，炎症抑制率相比实施例1低，说明同时添加橙皮素单葡糖苷和异槲皮素的具有协同降低炎症水平的作用。另一方面，实施例1与对比例3相比抗炎效果更佳，说明橙皮素单葡萄糖苷能够在结肠被更好吸收利用。对比例3和对比例4的效果接近，说明柑橘黄酮类化合物都能够具有较好的抗炎功效，其中橙皮素及其衍生物相比柚皮素抗炎效果更好。

2.动物体内抗炎试验

通过对小鼠进行体内抗炎试验测试实施例1、对比例1-4的抗炎效果。动物实验程序按照中国国家准则进行。共有40只6周大的雌性c57bl/6n小鼠(16-18g体重)，安置在无特定病原体动物室内，恒温恒湿，12小时光/暗周期。在适应该条件1周后，将小鼠随机分成对照组、DDS(葡聚糖硫酸钠)组、实施例1为1组，对比例1-4为2-5组，每组8只小鼠，试验方法如下：

对照组：自由饮用纯净水，灌胃纯净水，持续7天。

DDS组：自由饮用1.5％ DSS(葡聚糖硫酸钠)，持续7天

1-5治疗组：自由饮用1.5％ DSS，并以以上组合物(1mg/ml)灌胃，持续7天。

治疗期结束时，空腹8小时后服用异氟烷麻醉后立即收集小鼠的血浆、肝脏、结肠和盲肠内容物。所有采集的样品均储存在-80℃处。实时荧光定量PCR分析炎症因子白细胞介素1β(IL-1β)、白介素6(IL-6)、白介素22(IL-22)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的表达水平，结果如图3-5所示。

由图3可见，使用了DSS后，肠道短链脂肪酸含量有所降低。与其他治疗组组相比，本发明实施例1治疗组肠道短链脂肪酸的含量相比对比例1-4有明显的增加，对比例2和对比例3结果与DSS组接近，对比例3和对比例4对肠道短链脂肪酸的增加幅度在实施例1和对比例2-3之间，说明柑橘黄酮类化合物都能够具有较好的抗炎功效，其中橙皮素单葡萄糖苷相比柚皮素或橙皮素抗炎效果更好；由图4可知，各个治疗组的炎症因子相对表达量均有所降低，但对比例1-4的效果明显差于实施例1，使用实施例1后，部分炎症因子水平恢复至使用DSS前的水平，说明本发明实施例使用异槲皮素和橙皮苷单葡萄糖苷，能够具有良好的协同降低炎症的效果。进一步对观察肠道的组织变化进行观察，由图5可知，发现治疗组的杯状细胞数量和肠粘膜的厚度均有一定程度的增加，其中本发明实施例1治疗组对于杯状细胞数量和肠粘膜厚度的提升幅度最大，说明本发明的实施例能够减轻部分肠道炎症的病理损伤，从而更能有效地起到保护肠道粘膜、防治肠炎的效果。

对本领域的技术人员来说，可根据以上描述的技术方案以及构思，做出其它各种相应的改变以及形变，而所有的这些改变以及形变都应该属于本发明权利要求的保护范围之内。