COH29在制备提高前列腺癌对恩杂鲁胺治疗敏感性的药物中的应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及COH29在制备提高前列腺癌对恩杂鲁胺治疗敏感性的药物中的应用。

背景技术

在前列腺癌的治疗领域，恩杂鲁胺缩作为一种广泛使用的内分泌治疗药物，其效果受到肿瘤细胞对药物反应的限制。肿瘤细胞的衰老，或称为肿瘤细胞的治疗诱导的衰老(therapy-induced senescence,TIS)，是一种肿瘤细胞在遭受治疗压力后进入一种持久的增殖停滞状态。虽然TIS被认为是抑制肿瘤增长的防线，但长期来看，衰老的肿瘤细胞可能会促进肿瘤微环境的变化，从而导致治疗抵抗。

因此，寻找能通过抑制肿瘤细胞衰老来增强对恩杂鲁胺缩的敏感性的药物，可能为克服传统内分泌治疗的限制、提高治疗效果提供了新的策略。通过这种方式，不仅有望提高前列腺癌患者的生存率，还可能改善他们的生活质量，因为它有助于减少病人对于治疗剂量和治疗频次的需求。

发明内容

基于此，本发明的目的在于提供COH29(一种核糖核苷酸还原酶抑制剂)在制备提高前列腺癌对恩杂鲁胺治疗敏感性的药物中的应用，COH29和恩杂鲁胺可产生协同作用，提高治疗效果。

为达到上述目的，本发明采用如下技术方案。

本发明的第一方面，提供了COH29在制备提高肿瘤对恩杂鲁胺治疗敏感性的药物中的应用。

在一些实施例中，所述肿瘤包括前列腺癌。

在一些实施例中，所述COH29可以抑制恩杂鲁胺治疗导致的前列腺癌细胞衰老。

本发明的第二方面，提供了COH29和恩杂鲁胺作为活性成分在制备治疗前列腺癌的药物中的应用。

在一些实施例中，所述药物可以降低前列腺癌组织的重量和/或体积。

本发明的第三方面，提供了一种治疗肿瘤的药物，所述药物包括COH29和恩杂鲁胺。

在一些实施例中，所述肿瘤包括前列腺癌。

在一些实施例中，所述药物还包括药物学上可接受的辅料。

在一些实施例中，所述药物的剂型包括口服剂、注射剂。

在一些优选的实施例中，所述口服剂包括粉剂。

本发明提供了COH29在制备提高前列腺癌对恩杂鲁胺治疗敏感性的药物中的应用，发明人经过研究发现，COH29可增强恩杂鲁胺治疗的敏感性，对恩杂鲁胺产生抵抗性的癌症细胞，也能被有效地抑制或杀伤。COH29可逆转恩杂鲁胺治疗诱导的前列腺癌细胞衰老及衰老相关分泌表型，从而抑制了肿瘤微环境的恶化和治疗抵抗的形成。此外，COH29与恩杂鲁胺之间存在协同效应，进一步的体内外实验也证实了COH29与恩杂鲁胺联用在体内显著抑制前列腺癌进展。因此，在与COH29联用的情况下，可以使用较低剂量的恩杂鲁胺，从而减少内分泌治疗的副作用，改善患者的生活质量。

附图说明

图1为COH29与恩杂鲁胺协同效应的实验结果。

图2为COH29可逆转恩杂鲁胺治疗诱导的前列腺癌细胞衰老及衰老相关分泌表型的实验结果。

图3为COH29与恩杂鲁胺联用在体内显著抑制前列腺癌进展的实验结果。

具体实施方式

本发明下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。实施例中所用到的各种常用化学试剂，均为市售产品。

除非另有定义，本发明所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不用于限制本发明。

本发明的术语“包括”和“具有”以及它们任何变形，意图在于覆盖不排他的包含。例如包含了一系列步骤的过程、方法、装置、产品或设备没有限定于已列出的步骤或模块，而是可选地还包括没有列出的步骤，或可选地还包括对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤。

下面结合具体实施例进行说明。

实施例1COH29可增强前列腺癌对恩杂鲁胺治疗的敏感性并发挥协同效应

一、实验方法

细胞培养与处理

1.使用的细胞系：LNCAP和22RV1人前列腺癌细胞系。

2.培养基：RPMI 1640，补充10％胎牛血清、100单位/毫升青霉素和100微克/毫升链霉素。

3.培养条件：37℃、5％CO2的条件下培养。

4.药物处理：以不同浓度COH29(0uM、2.5uM、5uM、10uM、20uM、40uM)处理细胞前列腺癌细48h：LNCAP和22RV1细胞分别以COH29处理，并测定IC50值(LNCAP为14.21uM，22RV1为13.87uM)。

5.细胞活性测定：采用CCK8法细胞活性测定方法来评估COH29对细胞存活率的影响:具体言之，细胞在96孔培养板中生长，每孔培养基体积为100μL，药物作用48h后向每孔中加入10μL的CCK-8溶液，在37℃孵育2小时，让CCK-8与活细胞中的脱氢酶反应生成黄色的甲酮，使用酶标仪在450nm波长下测定各孔的吸光度(OD值)，用实验组的校正OD值除以对照组的校正OD值，计算出相对细胞活性百分比。

6.药物联用实验：前列腺癌细胞分别用一系列不同浓度的COH29(4uM、8uM、16uM)和恩杂鲁胺(5uM、10uM、20uM)处理48小时。细胞活性通过CCK8检测法测量。IC50的计算和剂量-反应曲线的绘制均使用GraphPad Prism 8软件完成。为了计算COH29和恩杂鲁胺的协同效应，前列腺癌细胞分别单独或联合两种药物处理，然后通过CCK8法测量细胞活性。联合指数(CI)使用CalcuSyn软件计算，CI小于1.0被认为是协同效应。

7.统计与分析

所有实验至少重复三次，数据以平均值±标准误表示。使用GraphPad Prism 8进行数据分析。根据实验数据，使用t检验或方差分析评估不同处理组之间的差异，p值小于0.05为统计学意义。

二、实验结果

如图1所示，图1A为LNCAP细胞系中COH29浓度与细胞存活率关系图，显示IC50值为14.21μM。图1B为22RV1细胞系中COH29浓度与细胞存活率关系图，显示IC50值为13.87μM。图1C为LNCAP细胞系对不同剂量的Enz(恩杂鲁胺)、COH29以及它们的组合处理的效应曲线。图1D为22RV1细胞系对不同剂量的Enz、COH29以及它们的组合处理的效应曲线。图1E为LNCAP细胞系中Enz与COH29组合治疗的组合指数(CI)图，CI值为0.52，表示有协同作用。图1F为22RV1细胞系中Enz与COH29组合治疗的组合指数图，CI值为0.68，表示有协同作用。

实施例2COH29可逆转恩杂鲁胺治疗诱导的前列腺癌细胞衰老及衰老相关分泌表型

一、实验方法

1.恩杂鲁胺预处理：将PC3和LNCAP细胞分别种植在六孔板中，分别用10uM和5uM的浓度处理48h，更换新的完全培养基后再分别用DMSO(等体积)或COH29(8uM)处理48h。

2.SA-β-gal(β半乳糖苷酶检测)：按照SA-β-gal检测试剂盒的说明书操作，具体而言：

固定细胞：a.移除培养基，并用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤细胞。

b.使用4％的甲醛在室温下固定细胞10-15分钟。继续执行SCI样本中提到的第3-5步，进行SA-β-gal染色分析。

洗涤：a.用磷酸盐缓冲盐水(PBS)冲洗两次固定后的细胞，以去除任何残留的固定剂。

准备染色液：a.按照SA-β-gal染色试剂盒生产商的说明准备染色液。b.染色液通常包含X-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚基-β-D-半乳糖苷)作为检测β-半乳糖苷酶活性的底物。c.根据试剂盒说明调整染色液的pH值(pH＝6)。

染色：a.在37℃下将固定的组织或切片与染色液孵育，孵育时间按照试剂盒说明书推荐的时间。b.在显微镜下监测染色过程，以观察是否出现蓝色，表明β-半乳糖苷酶活性的存在(产品货号：Abbkine,E-CK-A211-100,KTA3030)。

3.细胞因子检测：使用ELISA试剂盒检测培养上清中的IL-6和IL-8水平。收集经COH29处理的细胞培养上清。按照试剂盒说明进行操作，并在酶标仪中读取吸光度值。

4.数据处理与分析：将得到的数据与DMSO对照组比较，计算相对活性和因子水平的变化。

对结果进行统计分析，评估实验组与对照组之间的显著性差异。

二、实验结果

如图2所示，COH29可降低恩杂鲁胺治疗诱导的SA-β-gal活性，主要降低IL-6的分泌量。说明COH29可逆转恩杂鲁胺治疗诱导的前列腺癌细胞衰老及衰老相关分泌表型。

实施例3COH29与恩杂鲁胺联用在体内显著抑制前列腺癌进展

一、实验方法

1.动物模型建立：使用LNCAP前列腺癌细胞2*10

2.药物处理：约1周成瘤后开始分组给予小鼠不同的治疗：对照组、COH29单独治疗组、恩杂鲁胺(Enz)单独治疗组、以及COH29和恩杂鲁胺联合治疗组。

3.药物浓度和给药量：COH29:100mg/kg，灌胃，每日一次；恩杂鲁胺：10mg/kg，灌胃，每日一次。

4.治疗周期：从肿瘤成瘤后开始，连续给药至实验终点：实验终点时间或小鼠发生死亡或肿瘤最大径达到2cm。

5.肿瘤测量：定期测量并记录小鼠体重和肿瘤体积(长度和宽度)，使用公式(肿瘤体积＝长度×宽度2/2)计算肿瘤体积。

6.数据收集与分析：实验结束时，处死小鼠，并切除肿瘤进行称重。

7.使用统计软件(如GraphPad Prism)分析肿瘤重量和体积的数据，比较不同治疗组间的差异性。统计显著性通过t检验或方差分析进行评估，p<0.05为统计学差异显著。

8.安全性评估：观察并记录小鼠的活动情况、食欲和任何不良反应，以评估药物的安全性。

二、实验结果

如图3所示，与COH29和恩杂鲁胺处理组相比，COH29与恩杂鲁胺联合处理能有效降低前列腺癌模型小鼠的肿瘤肿瘤和体积，且无任何不良反应。

综上所述，COH29可有效增强前列腺癌对恩杂鲁胺治疗的敏感性并发挥协同效应，本发明为前列腺癌的治疗提供了新的策略。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对以上实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。