一种FPR2-WRW4抑制剂在降低促纤维化蛋白表达水平中的应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及一种FPR2-WRW4抑制剂在降低促纤维化蛋白表达水平中的应用。

背景技术

抗中性粒细胞胞浆抗体(Anti-neutrophil cytoplasmic antibody，ANCA)相关性血管炎(ANCA-associated vasculitis，AAV)是以血管炎症、内皮损伤和组织损伤为特征的疾病，致病性抗原主要为髓过氧化物酶(MPO)和蛋白酶3(PR3)，病理分型包括肉芽肿性多血管炎(GPA)、显微镜下多血管炎(MPA)和嗜酸性肉芽肿性多血管炎(EGPA)，常累及肾脏、肺部、关节、眼睛、鼻窦、皮肤等多种组织器官。我国病人多以MPO-ANCA导致的MPA为主，易累及肾脏造成ANCA相关性肾小球肾炎(ANCA-associated glomerulonephritis，AAGN)，病理改变以寡免疫性坏死性新月体形成和纤维化为特征。随着疾病进展，细胞性新月体可转变为纤维性新月体，最终导致肾小球硬化，50-70％病例会发展为终末期肾病。AAGN肾脏纤维化是预后不良的标志，多种因素参与纤维化的发展，但目前治疗或逆转病程的手段有限。因此，探讨AAGN新月体及形成及纤维化的发生发展机制，寻找潜在的有效干预靶点，为AAGN的精准治疗提供理论依据尤为重要。

FPR家族由FPR1、FPR2和FPR3组成，属于G蛋白偶联受体，它们通常表达在中枢神经系统、肾脏、肺脏、中性粒细胞和巨噬细胞等髓系免疫细胞以及内皮细胞等，参与宿主防御和炎症调节。近年来，FPR2在多种无菌炎症和自身免疫性疾病中发挥重要作用。既往研究发现，FPR2可以激活PI3K/Akt通路、NF-κB通路等。与野生型雌性小鼠及野生型、FPR2 KO雄性小鼠相比，敲除FPR2雌性小鼠胰腺肿瘤的生长明显受到抑制。同时，敲低FPR2后急性肺损伤小鼠的支气管肺泡灌洗液中蛋白浓度降低、病理损伤改善、中性粒细胞浸润减少。FPR2特应性抑制剂WRW4明显缓解急性肾损伤大鼠模型的肾功能减退，减轻组织损伤及炎症反应。然而，FPR2在AAGN(ANCA相关性肾小球肾炎)肾脏中的作用及对巨噬细胞极化、纤维化的调控中尚不清楚。

发明内容

本发明要解决的技术问题是：提供一种FPR2-WRW4抑制剂在降低促纤维化蛋白表达水平中的应用，以解决现有药物对ANCA相关性肾小球肾炎治疗效果不明显的技术问题。

为达到上述目的，本发明采用的技术方案是：提供一种FPR2-WRW4抑制剂在降低促纤维化蛋白表达水平中的应用。

在上述技术方案的基础上，本发明还可以做如下改进：

进一步，FPR2-WRW4抑制剂在降低促纤维化蛋白表达水平中的应用是通过调控M2型巨噬细胞极化，进而减轻促纤维化蛋白的表达。

进一步，M2型巨噬细胞的标志为CD163。

进一步，促纤维化蛋白为TGF-β1。

本发明还公开了一种包含FPR2-WRW4抑制剂、用于治疗ANCA相关性肾小球肾炎的药物。

本发明的有益效果为：本发明发现在MPO-AAV血清刺激的THP-1细胞模型中FPR2表达显著增加，而在施加FPR2-WRW4抑制剂后，THP-1细胞模型中促纤维化蛋白(TGF-β1)表达被抑制，M2型巨噬细胞极化减少。

附图说明

图1为MPO-AAGN患者肾组织中M2型巨噬细胞标志CD163、M1型巨噬细胞标志iNOS的表达情况；

图2为MPO-AAGN患者肾组织中巨噬细胞标志CD68以及FPR2的表达情况；

图3为MPO-AAV血清刺激THP-1细胞后CD163的表达情况；

其中，图3(a)为CD163的表达图，图3(b)为CD163的统计分析图；

图4为MPO-AAV血清刺激THP-1细胞后FPR2的表达情况；

其中，图4(a)为FPR2的表达图，图4(b)为FPR2的统计分析图；

图5为MPO-AAV血清刺激THP-1细胞后TGF-β1的表达情况；

其中，图5(a)为TGF-β1的表达图，图5(b)为TGF-β1的统计分析图；

图6为加入FPR2-WRW4抑制剂刺激THP-1细胞后CD163的表达情况；

其中，图6(a)为CD163的表达图，图6(b)为CD163的统计分析图；

图7为加入FPR2-WRW4抑制剂刺激THP-1细胞后TGF-β1的表达情况；

其中，图7(a)为TGF-β1的表达图，图7(b)为TGF-β1的统计分析图。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式进行描述，以便于本技术领域的技术人员理解本发明，实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行，所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。但应该清楚，本发明不限于具体实施方式的范围，对本技术领域的普通技术人员来讲，只要各种变化在所附的权利要求限定和确定的本发明的精神和范围内，这些变化是显而易见的，一切利用本发明构思的发明创造均在保护之列。

实施例1

1、筛选7例临床表现为MPO-AAGN的患者，通过免疫荧光验证患者肾脏各种类型新月体中CD163、iNOS、CD68、FPR2的表达量。

免疫荧光显示(图1和图2)，与健康对照相比，AAGN患者中CD163、FPR2的表达水平增加。

2、构建MPO-AAV血清刺激的THP-1细胞模型

在37℃下培养人THP-1细胞，传2-3代使细胞数量足够，按每孔1×10

如图3-图5所示，与对照组(HC)相比，CD163、FPR2、TGF-β1在含10wt％MPO-AAV血清培养基刺激3天(实验组)的THP-1细胞模型中表达升高，证明FPR2在MPO-AAV血清刺激THP-1细胞模型中表达升高，可能参与AAGN疾病的发生。

实施例2FPR2-WRW4抑制剂调控M2型巨噬细胞极化和降低促纤维化蛋白TGF-β1的表达水平

在10wt％MPO-AAV血清刺激的人THP-1细胞模型中，施加10μM FPR2-WRW4抑制剂刺激3天后，进行Western blot，检测CD163、TGF-β1的表达量。

如图6和图7所示，在加入FPR2-WRW4抑制剂后，CD163、TGF-β1表达量减少。由此可见，FPR2-WRW4抑制剂能够降低MPO-AAV血清刺激的人THP-1细胞模型中CD163、TGF-β1的表达水平。

综上所述，在MPO-AAGN患者中CD163、FPR2的表达量增加，且FPR2-WRW4抑制剂可以减轻MPO-AAV血清刺激的人THP-1细胞模型中促纤维化蛋白TGF-β1表达和调控M2型巨噬细胞极化，是MPO-AAGN的潜在治疗靶点。