二氢黄酮类化合物Involucrasin B在制备JAK1-STAT6双靶点抑制剂中的应用

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及二氢黄酮类化合物Involucrasin B的应用，具体为Involucrasin B在制备JAK1-STAT6双靶点抑制剂中的应用。

背景技术

Janus激酶 (Janus kinases，JAKs) 是一种非受体型酪氨酸蛋白激酶，可以在众多细胞因子的作用下激活，然后通过信号转导子和转录激活子 (signal transducers andactivators of transcription， STATs) 启动下游靶基因，进而发挥细胞生物功能的调控作用，该途径被称为JAK-STAT信号通路。该信号通路与多种身体功能有关，并且参与了一些重要的生物学过程，如细胞增殖、分化、凋亡和免疫调节。JAK是免疫反应所必需的通路，当炎症发生时，JAK被过度激活后会反过来促进疾病的进展。在某些病理条件下，炎症过程被广泛认为是身体受到病原体或损伤时的局部保护反应。而JAK-STAT是细胞因子调节的主要信号通路，对启动先天免疫、协调适应性免疫机制以及最终抑制炎症和免疫反应至关重要。因此，针对性阻断JAK-STAT信号通路，可以抑制自身免疫疾病的病理生理过程，进而改善该类患者的临床症状，提高患者的生活质量。

肺部炎症表现为多种炎性细胞，特别是肥大细胞、嗜酸性粒细胞和T淋巴细胞等多种炎症细胞在气道浸润和聚集，这些细胞相互作用后可以分泌出多种炎症介质和细胞因子，构成复杂的网络，使气道收缩、粘液分泌增加，引发炎症，造成肺部损伤，从而引发一系列的肺部炎症疾病。吸入变应原是引发致敏的主要途径，当机体接触变应原时，T细胞会大量分泌炎性因子，从而引发一系列炎症反应。IL-6是机体免疫应答的重要炎症介质，结合受体后可活化JAK1，并促使STAT6的磷酸化和转录激活，最终调控T细胞的分化和炎症反应。JAK抑制剂目前在类风湿性关节炎和肿瘤疾病方面应用较为广泛，已知的JAK抑制剂主要包括托法替尼(Tofacitinib)、巴瑞替尼（Baricitinib）、乌帕替尼（Upadacitinib）、阿布昔替尼（Abrocitinib）、非戈替尼 （Filgotinib）和鲁索替尼（Ruxolitinib）。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型的JAK1抑制剂、JAK1和STAT6双靶点抑制剂；Involucrasin B，可以用于治疗肺部炎症。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

一种治疗肺部炎症的JAK1-STAT6双靶点抑制剂，双靶向抑制剂包括化合物Involucrasin B，化合物的结构式为：

。

Involucrasin B是从铜钱麻黄

Involucrasin B在制备JAK1抑制剂中的应用。

Involucrasin B在制备JAK1-STAT6双靶点抑制剂中的应用。

抑制剂包括药学上可接受的盐，药学上可接受的盐为化合物Involucrasin B与下列任一种碱形成的盐：碳酸氢钠，碳酸钠，碳酸钾，碳酸铯，硫酸钠，氢氧化钠，氢氧化锂，氢氧化钾、硫化钠、磷酸钠。

Involucrasin B在制备治疗肺部疾病药物中的应用。

Involucrasin B缓解气道炎性细胞浸润及基底膜增厚，减轻杯状细胞增生；改善气道黏液高分泌。

肺部疾病为慢性阻塞性肺疾病、上呼吸道咳嗽综合征、支气管哮喘、支气管扩张症、慢性支气管炎、呼吸衰竭、变异性咳嗽。

药物的制剂包括片剂、胶囊、丸剂、口服液、颗粒剂、混悬剂、注射剂、气雾剂、缓释制剂、舌下片。

Involucrasin B的用量为：200-800 mg/d。

本发明的有益效果是：

本发明首次提出了一种JAK1-STAT6双靶点抑制剂在制备治疗肺部炎症药物中的应用，扩大了化合物Involucrasin B的应用，JAK1和STAT6作用靶点之间具有协同作用。该化合物Involucrasin B可分别抑制JAK1和STAT6蛋白磷酸化水平，单独使用InvolucrasinB即可发挥对JAK1和STAT6的双重抑制作用，可降低用药剂量，提高治疗效果，减少耐药性，减少毒副作用。JAK是免疫细胞增殖、分化和免疫调节重要生物学过程的参与酶，抑制JAK可以阻断免疫细胞中由JAK激酶介导的大多数细胞因子的信号传导。将JAK1和STAT6双靶点同时阻断，对于异常炎症的抑制效果远高于两者分别阻断，可实现抑制炎症通路的上下游因素，并且通过小剂量的JAK1-STAT6双靶点抑制剂即可实现完全抑制炎症反应的效果，从而降低了大剂量药物对受试者的不良反应。

附图说明

图1为Involucrasin B的化学结构式。

图2为Involucrasin B对嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症模型小鼠肺组织病理学影响（HE染色）。

图3为Involucrasin B对嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症模型小鼠肺组织病理学影响（PAS染色）。

图4为Involucrasin B对嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症模型小鼠血清中总IgE水平的影响。

图5为Involucrasin B对嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症模型小鼠血清中OVA-特异性IgE水平的影响。

图6为Involucrasin B对嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症模型小鼠肺泡灌洗液中Eotaxin水平的影响。

图7为Involucrasin B对嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症模型小鼠肺泡灌洗液中INF-γ水平的影响。

图8为Involucrasin B对嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症模型小鼠肺泡灌洗液中IL-6水平的影响。

图9为Involucrasin B对嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症模型小鼠肺泡灌洗液中IL-7水平的影响。

图10为Involucrasin B对嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症模型小鼠肺泡灌洗液中IL-8水平影响。

图11为Involucrasin B对嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症模型小鼠肺泡灌洗液中IL-17A水平的影响。

图12为Involucrasin B对嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症模型小鼠肺泡灌洗液中MCP-1水平的影响。

图13为Involucrasin B对嗜酸性粒细胞浸润为主的炎症模型小鼠肺泡灌洗液中Muc5ac水平的影响。

图14为Involucrasin B对炎症模型小鼠JAK1/STAT6相关蛋白变化的影响。

图15为Involucrasin B对炎症模型小鼠JAK1/STAT6免疫荧光表达变化的影响。

图16为Involucrasin B对炎症模型小鼠炎症因子IL-4 mRNA表达水平变化的影响。

图17为Involucrasin B对炎症模型小鼠炎症因子IL-1β mRNA表达水平变化的影响。

图18为Involucrasin B对炎症模型小鼠炎症因子IL-13 mRNA表达水平变化的影响。

图19为Involucrasin B对炎症模型小鼠JAK1 mRNA表达水平变化的影响。

图20为Involucrasin B对炎症模型小鼠STAT6 mRNA表达水平变化的影响。

图21为不同浓度Involucrasin B处理16HBE细胞后细胞的增殖变化。

图22为Involucrasin B对16HBE细胞分泌IL-6的抑制效果。

图23为Involucrasin B对16HBE细胞分泌IL-5的抑制效果。

图24为Involucrasin B对16HBE细胞分泌IL-8的抑制效果。

图25为Involucrasin B对16HBE细胞中JAK1/STAT6相关蛋白变化的影响。

具体实施方式

以下将结合实施例与附图对本发明做进一步的说明。

一种治疗肺部炎症的JAK1-STAT6双靶点抑制剂，双靶向抑制剂包括化合物Involucrasin B，化合物的结构式见图1，为：

。

Involucrasin B是从铜钱麻黄

（1）使用乙醇对铜钱麻黄药材进行加热回流提取，提取液浓缩后得到浸膏。

（2）将步骤（1）得到的浸膏用水稀释后，先用石油醚萃取，再用乙酸乙酯萃取，浓缩乙酸乙酯萃取后的溶液得到萃取浸膏。

（3）将步骤（2）得到的萃取浸膏采用正相硅胶柱进行第一次柱层析分离，洗脱剂为三氯甲烷和丙酮不同比例的混合溶剂，收集含所述化合物的洗脱液，浓缩后得到含所述化合物的混合物。

（4）将步骤（3）得到的混合物采用MCI反相柱进行第二次层析分离，洗脱剂为甲醇和水不同比例的混合溶剂，收集富含所述化合物的洗脱液，浓缩后得到含所述化合物的粗产物。

（5）将步骤（4）得到的粗产物采用Sephadex LH-20柱进行纯化，洗脱液为纯甲醇，收集洗脱液得到所述化合物。

含Involucrasin B化合物的肺部炎症JAK1和STAT6双靶向抑制剂，双靶向抑制剂包括药学上可接受的盐，药学上可接受的盐为：化合物Involucrasin B与下列任一种碱形成的碱加成盐，碳酸氢钠，碳酸钠，碳酸钾，碳酸铯，硫酸钠，氢氧化钠，氢氧化锂，氢氧化钾、硫化钠、磷酸钠。

含Involucrasin B化合物的肺部炎症JAK1和STAT6双靶向抑制剂在制备治疗肺部炎症药物中的应用。

通过抑制炎性细胞因子生成；缓解气道炎性细胞浸润及基底膜增厚，减轻杯状细胞增生；改善气道黏液高分泌，可以用于治疗肺部炎症疾病。

所述疾病为慢性阻塞性肺疾病、上呼吸咳嗽综合征、支气管哮喘、支气管扩张症、慢性支气管炎、呼吸衰竭、变异性咳嗽。

所述药物组合物的药用制剂包括片剂、胶囊、丸剂、口服液、颗粒剂、混悬剂、注射剂、气雾剂、缓释制剂、舌下片。

一种治疗肺部炎症药物，包括含化合物Involucrasin B的肺部炎症JAK1和STAT6双靶向抑制剂以及药学上可接受的载体。

实施例1

化合物Involucrasin B对炎症模型小鼠的治疗作用

Involucrasin B的化学结构见图1。

Involucrasin B的制备方法参照论文《Xiao‐Hong Li, Feng Huang, Bin‐RuoZhang, Wen‐Hong Tan, Afsar Khan, Zhou Zhi‐Hong, Lu Liu&Zhu‐Ya Yang. (2022)Involucrasin C, Anti‐Inflammatory 2,3‐Dihydro‐1 H ‐Indene Derivative fromChinese Dai Ethnic Medicine Shuteria involucrata.

1、试剂：OVA（批号：9006-59-1）和地塞米松（批号：BCBV3214）购于Sigma公司；Eotaxin ELISA检测试剂盒（批号：2130802231）、IL-6 ELISA检测试剂盒（批号：A20681154）、INF-γ ELISA检测试剂盒（批号：A201B81053）、IL-7 ELISA检测试剂盒（批号：A20781123）、IL-17A ELISA检测试剂盒（批号：A21780741）、MCP-1 ELISA检测试剂盒（批号：A28780431）、Muc5ac ELISA检测试剂盒（批号：ZKVBMELGV3）、总IgE ELISA检测试剂盒（批号：A27581115）购于杭州联科生物技术有限公司；OVA-IgE检测试剂盒（批号：0544983）购于艾美捷科技有限公司。IL-8 ELISA检测试剂盒（批号：M181106-104α）购于欣博盛生物科技有限公司；HE染色套装（货号：G1003）、PAS染色套装（货号：G1008）、抗原修复液（货号：G1202）、4%多聚甲醛（货号：G1101）、环保型脱蜡透明液（货号：G1128）、PBS缓冲液（货号：G4202）购自武汉赛维尔科技有限公司；RIPA裂解液（货号：R0010）、蛋白磷酸酶抑制剂混合物（货号：P1260）、30%制胶液（货号：A1010）、1.5M Tris-HCl（货号：T1010）、1.0M Tris-HCl（货号：T1020）、10% SDS（货号：S1010）、10%PAGE 胶凝固剂（货号：A1030）、甘氨酸 （货号：G8200）、牛血清白蛋白 V（货号：A8020）、RNA 提取液（货号：G3013）购自索莱宝生物科技有限公司；无水乙醇（货号：100092683）、二甲苯（货号：10023418）购自国药集团化学试剂有限公司；β-actin抗体（货号：20536-1-AP）、HRP标记山羊抗兔（货号：SA00001-2)、超敏 ECL 化学发光检测试剂盒（货号：PK10003）购自武汉三鹰生物技术有限公司；一抗JAK1（货号：3332S）、P-JAK1（货号：3331S）、STAT6（货号：9362S）、P-STAT6（货号：56554S）购自CellSignaling Technology (CST)；三羟甲基氨基甲烷 Tris（货号：MB3739），购自美伦生物；氯化钠（货号：1266-2006）购自天津致远化学试剂；Tween- 20（货号：MB2483）购自美伦生物。

2、仪器：超声雾化器(INQUA NEB plus，德国百瑞公司)；多功能酶标仪（Spectramax plus 384，倍捷科技）；台式高速冷冻离心机（HR/T16M，湖南赫西仪器装备有限公司）；-80℃超低温冰箱（8920，赛默飞世尔）；电子分析天平（AR224CN，奥豪斯仪器有限公司）；包埋机（JB-P5，武汉俊杰电子有限公司）；切片机（RM2016，上海徕卡仪器有限公司）；

组化笔（WG1066-1，武汉赛维尔科技有限公司）；脱色摇床（TSY-B，武汉赛维尔科技有限公司）；组织摊片机（KD-P，浙江省金华市科迪仪器设备有限公司）；玻片扫描仪（SQS-1000，生强科技）；荧光显微镜（NIKON digital sight DS-FI2，NIKON Eclipse ci）；低温型研磨仪（KZ-Ⅲ-FP，武汉赛维尔科技有限公司）；荧光定量PCR仪（CFX，Bio-rad）；超微量分光光度计（NanoDrop2000，赛默飞世尔）；成像系统（NIKON DS-Μ3，日本尼康）。

3、实验方法：

[1] 实验动物与分组：SPF级雌性BALB/c小鼠50只，体重18-22g，由北京斯贝福生物技术有限公司提供。小鼠适应性喂养一周后，随机分为正常组、模型组、地塞米松组、Involucrasin B高剂量组、InvolucrasinB低剂量组，每组10只。

[2]炎症模型制备与给药：于实验1，8，15天均腹腔注射模型组、地塞米松组、Involucrasin B高剂量组、InvolucrasinB低剂量组0.2ml OVA混悬液（1 mg/ml OVA，5 mg/ml氢氧化铝），正常组以0.2ml生理盐水代替。于实验21-27天，正常对照组和模型组均给予生理盐水0.01ml/g灌胃，地塞米松组给予地塞米松1mg/kg灌胃，Involucrasin B高、低剂量组分别给予Involucrasin B100 mg/kg、50 mg/kg灌胃，1小时后，将小鼠置于雾化激发装置内，除正常组给予生理盐水外其余各组给予1%OVA雾化激发，每天一次，每次30分钟。将小鼠呼吸急促，搔鼻抓痒、呛咳烦躁、点头运动等作为炎症小鼠模型成功的标准。

[3] 标本采集

①血清的收集：小鼠腹腔注射1 %的戊巴比妥钠进行麻醉，剂量为0.01 ml/g。75%乙醇消毒，摘眼球取血，室温静置1 h后，800×g，4℃离心10 min，-80℃保存。

②小鼠肺泡灌洗液的收集：小鼠采血完成后，将小鼠固定于泡沫板上，胸腹腔消毒后暴露胸腔，行气管插管术，用动脉夹夹闭右主支气管，并用PBS灌洗左肺2次，每次0.3 ml，反复抽吸3 次，合并2次灌洗液，4℃，800×g离心10 min，-80℃保存。

③肺组织的收集：小鼠肺组织灌洗完后，取下右肺动脉夹，取右肺中叶，经PBS冲洗后放入4%的多聚甲醛中，用脱脂棉球压入液面以下固定48h后用石蜡包埋。

[4]肺组织病理学检测

①肺组织病理学检测（HE染色）：无菌取出肺组织块固定在10%福尔马林中，制作石蜡切片，二甲苯脱蜡，依次用苏木精染液、0.1%-0.3%伊红染色，二甲苯处理后用中性树脂封片。观察小鼠肺组织的病理变化，如炎细胞浸润、管腔狭窄、气道上皮受损等病理变化。实验结果如图2所示。

②肺气道杯状细胞的观察（PAS染色）：取肺叶于10%中性福尔马林中固定24h，制作石蜡切片，依次用1%高碘酸钠水溶液氧化、Schiff液染色、苏木精染核、1%盐酸乙醇分化，梯度乙醇脱水，二甲苯透明，中性树胶封片。观察小鼠气道的杯状细胞增生情况。实验结果如图3所示。

结果显示，正常组小鼠肺组织结构完整，粘膜上皮完整，气管平滑肌和基底膜无明显增厚，气管周围无杯状细胞增生现象；OVA模型组小鼠气管、肺泡及肺间质周围有大量炎性细胞浸润，上皮增生，基底膜增厚明显，气管周围有大量杯状细胞增生，并分泌大量粘液。Involucrasin B高、低剂量组和模型组相比，炎性细胞浸润及基底膜增厚均得到不同程度缓解，杯状细胞增生明显减轻，说明Involucrasin B能够明显减轻炎症小鼠的气道炎症程度，改善气道黏液高分泌。

[5]ELISA法检测相关细胞因子

于-80℃冰箱取出冰冻的肺泡灌洗液及血清，恢复至室温。准备所有的试剂和标准品，按照ELISA试剂盒所示方法配制标准品，分别设置空白孔、标准品孔及样品孔空白孔加入100μl标准品稀释液，标准品孔加入2倍比稀释的标准品溶液，样本孔加入l00ul稀释的样本，每孔再加入50 μl稀释检测抗体，在15分钟内完成加样过程，室温孵育1.5 h，洗涤6次，每孔加入100μl稀释的辣根过氧化物酶标记的链霉亲和素，室温孵育30 min，洗涤6次，每孔加入100 μl显色底物，避光，室温孵育5 -30 min，每孔加入100 μl终止液，30分钟内，于在450 nm波长检测OD值。以OD值为横坐标坐，以标准品浓度为纵坐标，绘制标准曲线，根据样品的OD值确定肺泡灌洗液中Eotaxin、INF-γ、Muc5ac、IL-6、IL-7、IL-8、IL-17A、MCP-1及血清中总IgE和OVA-IgE的水平。

如图4所示：Involucrasin B对小鼠血清中总IgE水平的影响。

如图5所示：Involucrasin B对小鼠血清中OVA- IgE水平的影响。

如图6所示：Involucrasin B对小鼠肺泡灌洗液中Eotaxin水平的影响。

如图7所示：Involucrasin B对小鼠肺泡灌洗液中INF-γ水平的影响。

如图8所示：Involucrasin B对小鼠肺泡灌洗液中IL-6水平的影响。

如图9所示：Involucrasin B对小鼠肺泡灌洗液中IL-7水平的影响。

如图10所示：Involucrasin B对小鼠肺泡灌洗液中IL-8水平影响。

如图11所示：Involucrasin B对小鼠肺泡灌洗液中IL-17A水平的影响。

如图12所示：Involucrasin B对小鼠肺泡灌洗液中MCP-1水平的影响。

如图13所示：Involucrasin B对小鼠肺泡灌洗液中Muc5ac水平的影响。

结果显示，Involucrasin B能明显抑制血清中总IgE和OVA-IgE的产生，显著降低炎症小鼠肺泡灌洗液中Eotaxin、INF-γ、Muc5ac、IL-6、IL-7、IL-8、IL-17A、MCP-1的因子表达水平，表明Involucrasin B对炎症有效。其中

[6] Western blot法测定小鼠肺组织中JAK1/STAT6蛋白表达水平

将小鼠肺组织加入适量RIPA裂解液以及蛋白酶抑制剂，置于冰上裂解15分钟，于4℃离心机离心后，吸取上清液，使用BCA法测定蛋白浓度；经过SDS-PAGE分离目的蛋白，将目的蛋白转印于PVDF膜，经过特异性一级抗体以及HRP标记的二级抗体孵育后，使用ECL发光液显色，Image J半定量分析目的蛋白表达量。实验结果如图14所示。

结果显示，与正常组（NC）相比，OVA模型组（Model）肺组织中JAK1/STAT6的蛋白表达显著增加，经过地塞米松（Dex）和Involucrasin B处理后均阻止了JAK1/STAT6蛋白的增加。其中

[7]免疫荧光法检测小鼠肺组织中JAK1/STAT6表达水平

将石蜡组织切片，厚度为5 μm，脱蜡，在修复盒中加入抗原修复液及组织切片进行抗原修复，然后用组化笔沿组织外侧在玻片上画圈并添加3% BSA，室温封闭30 min；经过特异性一级抗体以及HRP标记的二级抗体孵育后，进行DAPI复染细胞核，淬灭组织自发荧光，最后进行封片和镜检拍照。实验结果如图15所示。

结果显示，与正常组（NC）相比，模型对照组（Model）气道上皮JAK1/STAT6表达量显著增加，地塞米松（Dex）和Involucrasin B高低剂量组中JAK1/STAT6表达降低。

[8] RT-qPCR测定小鼠肺组织中IL-4、IL-5、IL-13、JAK1/STAT6 mRNA表达水平

50-100 mg 组织中加入TRIzol后匀浆，室温静置；加入氯仿振荡混匀，静置后离心；吸取上清液，并加入等量的异丙醇，颠倒混匀，室温静置后离心；舍弃上清液，加入75%的乙醇，于4℃冰箱离心；舍弃上清，室温干燥；使用反转录试剂盒、荧光定量试剂盒检测靶基因的表达量。

如图16所示：Involucrasin B对小鼠肺组织IL-4 mRNA表达水平的影响。

如图17所示：Involucrasin B对小鼠肺组织IL-1β mRNA表达水平的影响。

如图18所示：Involucrasin B对小鼠肺组织IL-13 mRNA表达水平的影响。

如图19所示：Involucrasin B对小鼠肺组织JAK1 mRNA表达水平的影响。

如图20所示：Involucrasin B对小鼠肺组织STAT6 mRNA表达水平的影响。

结果显示，与正常组（NC）相比，OVA模型组（Model）mRNA表达水平显著升高，地塞米松（Dex）和Involucrasin B高低剂量组mRNA表达水平显著降低。其中

实施例2

化合物Involucrasin B对炎症模型16HBE细胞的治疗作用

1、试剂：DMEM高糖培养基（货号：C3010）、胎牛血清（货号：C04001）、双抗（货号：C340）购自VivaCell；二甲基亚砜（货号：# RNBJ1863）、LPS（货号：L2630(0111:B4）

购自Sigma；CCK-8试剂盒（货号：abs50003）购自爱必信；PBS（货号：GP21070062093）、SWE快速高分辨电泳缓冲液（货号：G2081）购自武汉赛维尔科技有限公司。

QμickBlockTMWestern一抗稀释液（货号：P0258）购自碧云天生物；蛋白质常规分子量预染标记（货号：PL00001）购自武汉三鹰生物技术有限公司。β-actin抗体（货号：20536-1-AP）、HRP标记山羊抗兔（货号：SA00001-2)购自武汉三鹰生物技术有限公司；一抗JAK1（货号：3332S）、P-JAK1（货号：3331S）、STAT6（货号：9362S）、P-STAT6（货号：56554S）购自Cell Signaling Technology (CST)。

2、仪器：CO

3、实验方法

[1] 化合物Involucrasin B细胞增殖活性检测

按照CCK8法测定该化合物在24h抑制16HBE细胞增值活性的抑制浓度。将16HBE细胞经胰酶消化后，用DMEM完全培养基调整细胞密度为2.5x10

结果显示，与正常组（NC）相比，药物组在120 μM时对细胞产生了抑制作用，即选择药物剂量60、30、15 μM作为后续实验浓度。

[2] ELISA法测定16HBE细胞上清中细胞因子的表达

使用ELISA法检测16HBE细胞上清中IL-6、IL-5、IL-8的表达水平。取对数生长期细胞消化、离心、计数后调整细胞密度为2.5x10

如图22所示：Involucrasin B对16HBE细胞分泌的IL-6的抑制效果。

如图23所示：Involucrasin B对16HBE细胞分泌的IL-5的抑制效果。

如图24所示：Involucrasin B对16HBE细胞分泌的IL-8的抑制效果。

结果显示，与正常组（NC）相比，OVA模型组（Model）的细胞因子表达水平显著升高，而阳性对照Dex组和Involucrasin B药物组以剂量依赖性方式降低。其中

[3]Westernblot法测定16HBE细胞中JAK1/STAT6蛋白表达水平

取对数生长期细胞消化、离心、计数后调整细胞密度为2.5×10

结果显示，与正常组（NC）相比，模型组（Model）16HBE中JAK1/STAT6的蛋白表达显著增加，经过地塞米松（Dex）和Involucrasin B处理后均阻止了JAK1/STAT6蛋白的增加。其中

由此可见，Involucrasin B具有较强的拮抗肺部炎症的活性，可用于制备防治炎症的药物。

本发明所述的小鼠炎症模型实验中，Involucrasin B低剂量为50 mg/kg，高剂量为100 mg/kg。换算为人（以成人体重60kg计算）剂量为300-600mg。考虑到人的体重及其他生理病理情况，推荐剂量为200-800 mg/d。

本发明所涉及的实施例仅用于说明本发明的技术方案而非限制，尽管通过上述实施例已经对本发明进行了详细的描述，但本领域技术人员应当理解，可以在形式上和细节上对其作出各种改变，而不偏离本发明权利要求书所限定的范围。