由有机材料、无机材料或其盐组成的无定形纳米分子缔合物及其制备方法

[技术领域]

本发明涉及一种由有机/无机材料或其盐组成的无定形纳米分子缔合物，更具体地涉及一种无定形的纳米分子聚集体，该聚集体是通过对有机/无机材料或其盐施加剪切应力而制备的，因此对脂质膜具有极佳的溶解性和渗透性。

[背景技术]

通常，为了有效地将有机/无机材料或其盐形式的药理活性成分(所称的活性成分)递送至人体内的目标位置，已知必须满足以下两个条件。

首先，必须确保活性成分的水溶性。由于人体内的所有液体都是基于水的溶液或分散液，因此必须充分确保水溶性或分散性，从而可以使要递送的药物在体内移动。

另外，必须确保活性成分对疏水膜的渗透性。由于人体细胞被疏水膜(例如磷脂膜)包围，因此药物分子或药物结构的表面特性必须是疏水性的才可以穿过膜，或者其尺寸必须足够小才可以穿透细胞膜。

作为将这些药物以分子状态穿透细胞膜的常规方法，使用表面活性剂/聚合物结构作为第三种材料将乳液或悬浮液形式的药物包封在微球中的方法已被广泛使用。

然而，包封这类药物的方法具有局限性，即包封工艺困难、包封产率可能较低，以及药物周围的表面活性剂或聚合物组分必须被去除或穿过，药物才可以释放。另外，由于需要渗透的细胞或组织的表面大多由亲脂性的磷脂组分等组成，因此存在当药物为亲水性时药物的吸收率不高的问题。

为了解决这类药物包封方法的问题，许多研究人员已经通过使用上述第三种材料，而不是利用分子本身的结构，实现物理化学结合。

为了将药物分子分散或溶解在水中，可以采用使药物分子具有极性以诱导与水分子的极性相互作用的方法，或者采用将对水非常友好的分子(例如PEG)共价或离子络合到分子结构的一部分的方法等。

然而，这些方法都存在改变药物分子结构的不便之处，也存在着由于这些分子的制备工序而导致价格上涨的问题，而且，由于改变后的分子结构本身与原来的分子结构不同，药物只有在体内吸收后，然后恢复到原来的分子状态后，才能显示出最初的预期效果。因此，也存在药物分子不能保持原有药效的局限性，因为在不改变化学结构的情况下，药物分子无法保持多种聚集状态。另外，使用现有技术中几百纳米尺寸的药物结构难以穿透尺寸为80nm的皮肤间隙。

因此，已经研究了制备这类药物的各种方法。特别是，作为制备纳米尺寸药物的方法，存在自上而下的方法(自上而下的工序)技术，例如高压均质、研磨和活塞-间隙均化器，以及自下而上的方法(自下而上的工序)技术，例如沉淀和自组装。

自上而下的方法(自上而下的工序)是通过例如研磨等方法降低颗粒尺寸来制备微米尺寸颗粒的技术，具有例如增加成本、污染风险以及反复研磨导致产品损伤等缺点。另一方面，自下而上的方法(自下而上的工序)是在原子或分子单元上生长纳米尺寸结构的技术，与自上而下的方法完全相反，是为了克服常规的将块体状态降低到纳米尺寸的自上而下的方法的局限性而提出的一种技术。然而，在目前的技术水平下，原子或分子单元上的技术的经济优势很难得到直接的结果。此外，它具有成本较低、通过晶体生长(其为常规方法)的制备工序简单的优点，但是存在的问题在于只能制备结晶产物，以及在晶体过度成长和其聚集时必须添加单独化合物(例如表面活性剂)。

(专利文献1)韩国专利公开10-2011-0053775号(2011年5月24日)，一种使用强聚焦超声波的纳米粉末分散装置以及使用该装置的分散方法。

[发明内容]

[技术问题]

因此，为了解决上述问题，本发明人已经证实一种现象，其中当作为药理活性成分的药物分子溶解在溶剂中然后使分子彼此变得非常接近时，分子中的极性基团表现得就好像它们是单一实体。

另外，本发明人已经证实，当极性基团由于分子接近而相互作用时，药物分子整体上是疏水性的，但是分散度可能会增加，因为随着其中这些药物分子结合的结构的尺寸降低，表面张力也会降低。

根据上述，本发明人已经证实，在以自下而上的方法而不是自上而下的方法制备的同时，可以以无定形的非结晶的纳米尺寸药物的结构制备分子水平的小颗粒。

根据上述，本发明人已经证实，可以通过缩短分子间距离的各种方法，例如，利用粉末中的孔制备分子结构或者利用柔性辊的分子方法等，来制备具有新特性的分子结合的结构，从而完成了本发明。

因此，本发明的目的是在不改变药理活性成分分子化学结构的情况下，利用分子间的极性相互作用或氢键制备具有新结构的分子缔合物，使分子缔合物表面疏水，从而提供一种对磷脂膜具有增加的渗透性的药理活性成分分子缔合物。

因此，本发明采用一种新的方法而不是常规的自上而下的方法进行制备，并且通过改善货架期维持期的问题，以及改善尽管常规无定形药物纳米颗粒具有达到最高饱和溶解度的优点，但是由于无定形纳米颗粒的粒径而导致溶解速率过快的问题，有望为纳米医药领域，最终为纳米技术领域带来创新。综上所述，本发明将成为50nm以下的无定形纳米医学和纳米技术领域的一项新的创新技术。

[技术方案]

为了实现上述目的，本发明提供了一种有机材料或无机材料物理结合的无定形纳米分子缔合物，其中当形成在纳米分子聚集体中包含水的组合物时，组合物中的缔合物具有聚集结构，并且其中纳米分子缔合物的平均粒径为50nm以下。

另外，本发明提供了一种有机材料或无机材料的盐物理结合的无定形纳米分子缔合物，其中当形成为在纳米分子聚集体中包含水的组合物时，组合物中的纳米分子缔合物具有聚集结构，并且其中纳米分子缔合物的平均粒径为50nm以下。

另外，本发明提供了一种用于制备纳米分子聚集体的方法，其包括以下步骤：将含有有机材料、无机材料或其盐和水的组合物置于能够施加剪切应力的装置中；然后，

对组合物施加剪切应力以制备其中有机材料、无机材料或其盐物理结合的纳米分子缔合物。

[有益效果]

本发明通过利用极性相互作用或氢键制备具有新结构的分子缔合物，而不需要不便地改变有机材料、无机材料或其盐(例如药理活性成分)的分子结构以使分子缔合物的表面具有疏水性，因此本发明的优点在于，不仅增加了对磷脂膜的渗透性，而且由于原始分子和化学特性本身不变，因此可以显示出最初预期的药效，并且由于制备方法简单，可以节约制备成本。

由于这些优点，本发明的分子缔合物可以用于各种药物组合物中。

[附图说明]

图1示出了本发明的一个实施方式的用于制备药理活性成分的分子缔合物的装置的示意图。

图2示出了本发明另一个实施方式的用于制备药理活性成分的分子缔合物的装置的示意图。

图3是示出了本发明实施方式的药理活性成分的NOESY(即，二维核欧沃豪斯效应(NOE)谱图)测量结果的图。

图4是示出了本发明实施方式的药理活性成分的分子缔合物的NOESY(二维NOE谱图)测量结果的图。

图5示出了本发明实施方式的NMR谱图的比较。

图6示出了本发明实施方式的FT-IR谱图的比较。

图7A至图7C示出了本发明实施方式的HPLC测量结果的比较。

图8示出了本发明另一个实施方式的NMR谱图的比较。

图9示出了本发明另一个实施方式的FT-IR谱图的比较。

图10示出了本发明另一个实施方式的HPLC测量结果的比较。

图11示出了本发明另一个实施方式的FT-IR谱图的比较。

图12示出了本发明另一个实施方式的FT-IR谱图的比较。

图13示出了本发明的另一个实施方式的分子缔合物的TEM图。

图14是示出了本发明的另一个实施方式的分子聚集体的XRD测量结果图。

图15是示出了本发明的另一个实施方式的分子聚集体的XRD测量结果图。

图16是示出了本发明的另一个实施方式的分子聚集体的DSC测量结果图。

图17示出了本发明的另一个实施方式的分子缔合物的TEM图。

图18示出了本发明的另一个实施方式的分子缔合物的TEM图。

图19示出了本发明的另一个实施方式的分子缔合物的TEM图。

图20示出了本发明另一个实施方式的分子聚集体的磷脂膜穿透性能的3D全息图。

图21示出了本发明的另一个实施方式的用于测量分子缔合物的角膜渗透性能的Ussing室的示意图。

[具体实施方式]

本文提供了有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物，其具有无定形的非结晶的纳米尺寸药物的结构，同时以自下而上的方法而非自上而下的方法制备分子水平的小颗粒，并且在不改变有机材料、无机材料或其盐的化学结构的情况下，利用极性相互作用或氢键制备具有新结构的分子缔合物，使分子缔合物表面具有疏水性，从而提高对磷脂膜的渗透性。

下面，将更详细地描述本发明。

用于制备有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物的装置

本说明书中所述的用于制备有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物的装置，其特征在于，将含有有机材料、无机材料或其盐的溶液置于该装置中，然后对含有有机材料、无机材料或其盐的溶液施加剪切应力，以制备有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物。

作为制备纳米尺寸药物的方法，存在自上而下的方法技术，例如高压均质、研磨和活塞-间隙均化器，以及自下而上的方法技术，例如沉淀和自组装。

自上而下的方法的制备技术是通过例如研磨等方法降低颗粒尺寸来制备微米尺寸颗粒的技术，存在例如成本增加、污染风险以及因重复研磨而导致产品损伤等缺点。

另一方面，自下而上的方法的制备技术(例如沉淀法)具有成本较低、通过晶体生长的制备工序简单等优点，但是存在的问题在于只能制备结晶产物，以及在晶体过度成长和聚集时必须添加单独化合物(例如表面活性剂)。

另外，为了将有机材料、无机材料或其盐形式的药理活性成分良好地递送至人体内的靶点，必须确保有机材料、无机材料或其盐的水溶性及其对疏水膜的渗透性。作为使这些药物以分子状态透过细胞膜的常规方法，已被广泛使用使药物具有极性以诱导与水分子的极性相互作用的方法，或者将对水非常友好的分子(例如PEG)共价或离子络合到分子结构的一部分的方法。

然而，这些方法的局限性在于改变药物的分子结构带来的不便，以及由于改变后的分子结构本身与原来的分子结构不同，只有当药物在体内吸收然后再恢复到原有的分子状态后，才能显示出药物最初的预期效果。

为了解决上述问题，本发明人已经证实了一种现象，其中当有机材料、无机材料或其盐形式的药物分子溶解在溶剂中时，然后使分子相互之间非常接近时，分子中的极性基团就会相互作用，形成分子缔合物，并且表现得好像它们是单一实体。

根据上述，本发明人已经证实，当极性基团由于分子接近而相互作用时，药物分子整体上是疏水性的，但是分散度可能会增加，因为随着其中这些药物分子结合的结构的尺寸降低，表面张力也会降低。

本发明人已经证实，可以通过缩短分子间距离的各种方法，例如，利用粉末中的孔制备分子结构或者利用柔性辊的分子方法等，来制备具有新特性的分子缔合物的结构，从而完成了本发明。

也就是说，在以自下而上的方法而非自上而下的方法制备的同时，本发明在分子水平上制备无定形的非结晶的纳米尺寸药物结构的小颗粒。

首先，本发明提供了一种装置，其中将含有有机材料、无机材料或其盐的溶液置于该装置中，然后对含有有机材料、无机材料或其盐的溶液施加剪切应力，以制备有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物。用于制备有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物的装置可以没有特别限制地使用，只要可以通过对含有有机材料、无机材料或其盐的溶液施加剪切应力，制备本发明的有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物即可，但是优选可以使用利用辊磨工序或球磨工序施加剪切应力的那些。

当制备含有有机材料、无机材料或其盐的溶液时，可以在油相中制备。在这种情况下，作为用于将其制备在油相中的溶剂，可以使用以下的任意一种或多种：来源于种子提取物的油，例如蓖麻油、MCT油、大豆油和花生油；来源于具有药理作用的草药(例如，人参、山茶花、绿茶和朝鲜当归(angelica root))的油，但是无需限于此。

另外，在本发明中，有机材料、无机材料或其盐都可以用作药理活性成分，并且可以没有特别限制地使用，只要其是药学上有用的材料或具有医疗效果的材料即可。作为实例，可以使用环孢菌素A、紫杉醇、多西他赛、紫花前胡素(decursin)、美洛昔康、伊曲康唑、塞来西布、卡培他滨、曲伏前列腺素(travo)、前列素(prost)、异黄酮、双氯芬酸钠、酪氨酸激酶抑制剂，例如舒尼替尼、帕唑帕尼、阿西替尼、瑞戈非尼、曲美替尼、人参皂苷Rg1、他克莫司、阿仑膦酸钠、拉坦前列素、比马前列素、阿托伐他汀钙、瑞舒伐他汀钙、恩替卡韦、两性霉素B、omega-3、各种胆酸，例如去氧胆酸和熊去氧胆酸或其钠盐或钾盐；类固醇，例如由氟取代或以氢存在的泼尼松龙；芳香油，例如桉树油、薰衣草油、柠檬油、檀香油、迷迭香油、洋甘菊油、肉桂油和橙油；α-红没药醇、维生素A(视黄醇)、维生素E、生育酚乙酸酯、维生素D、维生素F或其衍生物等，或者也可以使用其组合。

作为施加剪切应力的装置的具体实施方式，图1示出了用于解释本发明实施方式的制备有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物的装置的示意图。

如图1所示，本发明实施方式的用于制备有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物的装置可以设置有多个辊，以向含有有机材料、无机材料或其盐的溶液施加剪切应力。在这种情况下，多个辊可以是相对的两个辊，还可以进一步在其中包括一个或多个辊。

具体地，可以将含有有机材料、无机材料或其盐的溶液(例如，图1中表示为PTX溶液)放置在装置中两个相对的辊(图1中表示为辊A和辊B)之间。当相对的两个辊相对于置于两个辊之间的含有有机材料、无机材料或其盐的溶液旋转时，就会对含有有机材料、无机材料或其盐的溶液中所含的有机材料、无机材料或其盐施加剪切应力，从而可以制备出本发明的有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物。

在本发明的实施方式的用于制备有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物的装置中，可以将相对的两个辊之间的距离设定为0.5μm至1000μm。例如，相对的两个辊之间的距离可以设定为0.5μm以上、1μm以上、2μm以上、3μm以上、4μm以上、5μm以上、或10μm以上，还可以设定为1000μm以下、900μm以下、800μm以下、700μm以下、600μm以下、500μm以下、400μm以下、300μm以下、200μm以下、或100μm以下，优选可以设定为10至100μm。如果相对的两个辊之间的距离小于0.5μm，则辊之间的排出量太小，会造成生产速度的问题，如果大于1000μm，则剪切应力或压缩应力太小，导致颗粒不易形成的问题。

在上述使溶液通过辊之间的情况下，分子之间施加了过大的力，因此不会发生自上而下方法中的研磨，但是以自下而上方法产生各个分子之间的聚集颗粒结构。

另外，本发明实施方式的用于制备分子缔合物的装置可以以不同的速度旋转相对的两个辊，以便更有效地将剪切应力传递至溶液中包含的有机材料、无机材料或其盐。在这种情况下，相对的两个辊中的任意一个的转速可以为50至250rpm，另一个辊的转速可以为200至500rpm。或者，相对的两个辊的每一个的转速可以以1:1.5至1:5的比例旋转。

另外，在本发明的实施方式的用于制备分子缔合物的装置中，相对的两个辊的旋转方向可以设定为具有相同旋转方向的并流方向，或者可以设定为具有不同旋转方向的逆流方向。

另外，本发明实施方式的用于制备分子缔合物的装置可以对排出的内容物重复施加一次或数次剪切应力或压缩应力。

另外，本发明提供了一种装置，其中将含有有机材料、无机材料或其盐的溶液沿第一侧方向置于该装置中，将另一种溶液沿面向第一侧方向的第二侧方向投入，然后施加剪切应力以制备分子聚集体。用于制备本发明的分子缔合物的装置还可以没有特别限制地使用，只要可以通过向含有有机材料、无机材料或其盐的溶液施加剪切应力来制备本发明的分子缔合物即可，但是优选可以使用利用辊磨工序或球磨工序施加剪切应力的那些。

在本发明中，药理活性成分可以与上述相同。

在本发明中，作为水溶性化合物，可以使用选自由以下组成的组的任意一种或多种：柠檬酸、碳酸、乳酸、乙酸、磷酸、抗坏血酸、苹果酸、酒石酸、戊二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、丙二酸、HCl、H

作为施加剪切应力的装置的具体实施方式，图2示出了用于解释本发明实施方式的制备分子缔合物的装置的示意图。

如图2所示，本发明实施方式的用于制备分子缔合物的装置可以设置有多个辊，以向含有有机材料、无机材料或其盐的溶液施加剪切应力。在这种情况下，如图2所示，多个辊可以是相对的两个辊(辊A、辊B)，可以还包括一个或多个辊(辊C)。

具体地，可以将含有有机材料、无机材料或其盐的溶液(例如，图2中表示为PTX溶液)置于第一辊侧，而将含有水溶性化合物的溶液(例如，图2中表示为蔗糖溶液)置于面向第一辊的第二辊侧。

当相对的两个辊相对于分别置于两个辊的不同方向的含有有机材料、无机材料或其盐的溶液以及含有水溶性化合物的溶液旋转时，就会对这些溶液中含有的有机材料、无机材料或其盐施加剪切应力，从而可以制备出本发明的有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物。

在本发明的实施方式的用于制备分子缔合物的装置中，相对的两个辊之间的距离可以设定为0.5至1000μm。例如，相对的两个辊之间的距离可以设定为0.5μm以上、1μm以上、2μm以上、3μm以上、4μm以上、5μm以上，还可以设定为1000μm以下、900μm以下、800μm以下、700μm以下、600μm以下、或者500μm以下，优选可以设定为5至500μm。

如果相对的两个辊之间的距离小于0.5μm，则辊之间的排出量太小，会造成生产速度的问题，如果大于1000μm，则剪切应力或压缩应力太小，导致颗粒不易形成的问题。

另外，相对的两个辊可以以不同的速度旋转，以便更有效地将剪切应力传递至溶液中包含的有机材料、无机材料或其盐。在这种情况下，相对的两个辊中的任意一个的转速可以为50至150rpm，另一个辊的转速可以为200至500rpm。或者，相对的两个辊的每一个的转速可以以1:1.5至1:5的比例旋转。

另外，在本发明的实施方式的用于制备分子缔合物的装置中，相对的两个辊的旋转方向可以设定为具有相同旋转方向的并流方向，或者可以设定为具有不同旋转方向的逆流方向。

另外，本发明实施方式的用于制备分子缔合物的装置可以对排出的内容物反复施加剪切应力或压缩应力一次或数次。

在本发明中，用于制备分子缔合物的装置可以还设置有第三辊，用于对在第一辊和第二辊之间通过的溶液重新施加剪切应力。可以在第二辊和第三辊之间施加剪切应力，可以将相对的第二辊和第三辊之间的距离设定为0.5μm至1000μm。例如，相对的两个辊之间的距离可以设定为0.5μm以上、1μm以上、2μm以上、3μm以上、4μm以上、5μm以上，还可以设定为1000μm以下、900μm以下、800μm以下、700μm以下、600μm以下、或者500μm以下，优选可以设定为5至500μm。如果第二辊与第三辊之间的距离小于0.5μm，则辊之间的排出量太低，会造成生产速度的问题，如果大于1000μm，则剪切应力或压缩应力太小，导致颗粒不易形成的问题。

另外，第二辊和第三辊可以以不同的速度旋转，以便更有效地传递剪切应力。在这种情况下，第二辊和第三辊中的任意一个的转速可以为200rpm至500rpm，另一个辊的转速可以为600rpm至1200rpm。或者，第二辊和第三辊的转速可以以1:1.5至1:5的比例旋转。

在本发明中，用于制备分子缔合物的装置不限于上述方法，自然地，任何能够对有机材料、无机材料或其盐施加剪切应力的装置都可以自由变形。

有机材料、无机材料或其盐的分子缔合物

本发明人已经证实了一种现象，其中当有机材料、无机材料或其盐形式的药物分子溶解在溶剂中，然后使分子相互之间非常接近时，分子中的极性基团就会相互作用，形成分子缔合物，并且表现得好像它们是单一的实体。

根据上述，本发明人已经证实，当极性基团由于分子接近而相互作用时，虽然药物分子整体上是疏水性的，但是分散度可能会增加，因为表面张力会随着这些药物分子结合的分子缔合物大小的降低而降低。

本发明人已经证实，可以通过缩短分子间距离的各种方法，例如，利用粉末中的孔制备分子缔合物或者利用柔性辊的分子方法，来制备具有新特性的分子结合的结构，从而完成了本发明。

因此，本说明书所述的装置制备的纳米分子缔合物具有以下特征：

首先，本发明的纳米分子缔合物的特征在于其是无定形的且同时具有纳米颗粒尺寸，通过对作为分子聚集体的前体的含有无机材料、有机材料或其盐的溶液施加剪切应力，将有机材料、无机材料或其盐的分子间距离降低至非常接近，从而制备分子聚集体。即，在具有相同结构的分子之间施加剪切应力，以形成它们相互物理结合的纳米尺寸的无定形分子缔合物。

此外，分子缔合物和作为分子聚集体前体的有机材料、无机材料或其盐的色谱法测量值相同，而分子缔合物和作为分子聚集体前体的药理活性成分的光谱法测量值具有不同的特征。

确定材料结构的常用方法包括通过各种仪器分析的方法，例如元素分析、FT-IR、NMR、UV光谱、X射线和差示扫描量热计(DSC)。其中，NMR和FT-IR是最能显示化学结构(即构成分子的原子及其连接方式)的分析方法。通常，X射线或DSC是广泛用于研究如晶体结构等二级结构(例如由分子形成的晶体结构)的方法。此外，还使用扫描电子显微镜或透射电子显微镜对微观结构进行分析。

在上述方法中，NMR可以了解原子核的电子环境，而原子核的电子环境是由分子的电子结构决定的。本发明的结果涉及一种制备某种化合物及其物理结构的方法，而NMR作为可以确定在物理结构的形成过程中是否有化学变化的方法提供了非常有用的信息。在不存在化学键形成或消失的情况下，化合物及其物理结构基本上具有相似的NMR谱图。当然，为了确定化合物相互之间形成分子聚集体的距离，通常通过核欧沃豪斯效应(NOE)或二维NOESY谱图来粗略测量通常位于0.5nm距离的化合物的分子间距离。

另外，根据本发明的纳米分子缔合物的实例，纳米分子缔合物的分子间距离可以为

在本发明中，还通过二维NOESY NMR证实了，由于分子间距离非常近，因此脱氧胆酸钠化合物(NaDC)和本发明获得的分子缔合物在埃(10

图3和图4分别示出了NaDC分子及其分子缔合物的NOESY(二维NOE谱图)。在图3和图4中，标有*和**的部分表示相同的位置。可以看出，图3中NaDC分子本身中标有*和**的区域没有出现非对角峰，而图4中的NaDC分子缔合物中标有*和**的区域出现了非对角峰。这表明纯NaDC中两个核之间的距离相互较远，但随着分子缔合物的形成，两个核之间的距离变得更近。根据上述，可以看出当形成分子缔合物时，分子间的距离变得非常近。由于通常已知两个氢表现出NOE所需的物理距离约为

综上所述，本发明提供的纳米分子缔合物出现了因分子本身距离较长而没有出现的峰的原因，是因为与纳米分子聚集体结合的有机材料、无机材料或其盐的分子物理位置发生了变化。即，这表明分子缔合物中的分子间距离非常近。

NMR谱图中的峰位置是指根据施加到上述由原子键构成的分子中的原子核的磁场强度而进行旋转运动的频率。施加到原子核的磁场强度根据周围官能团推拉电子的特性而变化，因此，当施加到原子核的磁场强度增加时，它转移到更高的频率，相反，当原子核感受到的磁场强度由于原子核周围的电子数量较多而变弱时，则向原子核旋转运动频率较低的方向降低。当物理地形成分子的缔合物时，原子核电子云的密度根据具有强相互作用的分子之间的距离变化而变化。在另一种方法中，在磁场下形成环状流的苯环(C

在本发明制备的分子缔合物的情况下，即使没有单独的粘合剂或添加剂，其也通过分子之间的相互作用而物理结合，并且可以实质上由有机材料或无机材料组成。

从这些点来看，当将本发明制备的分子缔合物和作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的NMR测量结果值进行比较时，可以看出NMR谱图的峰位置发生了部分变化，这是因为纳米分子缔合物与作为纳米分子聚集体前体的有机材料或无机材料之间的化学结构没有发生变化，但是物理结构发生了变化。具体地，当将纳米分子缔合物和作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的NMR测量的结果值进行比较时，当基于1H NMR峰位移为0.005ppm以上时，可以确定它们是不同的。

另一方面，在FT-IR的情况下，已知由于构成分子中的键的电子密度是局部的，所以当分子运动过程中偶极矩发生变化时，就可以很好地出现峰的变化，并且已知谱图中的峰是由各种分子运动(例如拉伸和弯曲)激发的。当分子键的极性由杂原子形成时，会出现很多峰的变化。例如，作为碳和氧之间的主键的醚键(C-O)或作为次级键的羰基键(C＝O)通过红外激光显示出伸缩带。此外，即使在碳和氢的情况下，也会出现伸缩带，因为它是不同分子之间的键。在伸缩的情况下，可以用一种模型进行解释，其中两个质量块通过弹簧连接，当激发弹簧运动的能量是由红外线提供时，谱图中就会出现峰。

即使当多个碳原子相互连接时，当六个原子结合(例如在苯中)时，也会出现各种弯曲峰，例如面内振动和面外振动。特别地，在弯曲运动的情况下，可以通过FT-IR谱图观察到各种类型的分子运动。例如，发生左右移动的摇摆、像剪刀一样移动的剪切、在平面上来回摆动的摇摆、重复扭曲的扭曲/扭转等。

强极性分子的结构可能会发生例如氢键、极性相互作用或π-π堆积的相互作用，这些相互作用会导致FT-IR谱图中峰的位置和强度发生变化。因此，即使在相同的分子键中，峰的位置和强度也可能根据周围环境的变化而变化。即，当FT-IR谱图相同时，可以看出它们是相同的分子。特别地，400cm

本发明的目的是将化合物形成分子聚集体(即，物理聚集体)的结构。当该化合物在这种方式下形成分子聚集体(即，物理聚集体)时，缔合物中的分子间距离非常接近，在约

即，当基于FT-IR测量的结果值，当一个或多个峰出现或消失时，可以确定它们是不同的。

当将本发明制备的纳米分子缔合物和作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的FT-IR测量的结果值进行比较时，可以看出FT-IR谱图的一个或多个峰出现或消失，这是因为纳米分子缔合物和作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料之间的化学结构没有发生变化，但是发生了物理结构的变化。另外，当将纳米分子缔合物和作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的FT-IR测量的结果值进行比较时，当一个或多个峰位置相差5cm

然而，本发明制备的纳米分子缔合物以及作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的化学结构如上所述是相同的。这可以从以下事实看出：对纳米分子缔合物和作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料进行色谱分析，测量的值相同。色谱法的测量值可以是高效液相色谱法(HPLC)测量的结果值，可以观察到有机材料或无机材料及其分子缔合物(即本发明提供的所得物)在几乎相同的位置出现峰，且保留时间在约10％以内(即±5％)。通常，当色谱柱、流动相和固定相相同时，可将出现在10％以内的时间峰确定为相同材料。

同样，由于纳米分子缔合物和作为纳米分子聚集体前体的有机材料或无机材料具有不同的物理结构，因此两种目标材料的NMR谱图中大部分峰相似或者部分峰可能发生变化，FT-IR中可能出现例如峰的出现和消失、峰强度变化等各种类型的变化。另外，由于纳米分子缔合物和作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料具有相同的化学结构，因此通过色谱法测量的值可以是相同的。

在本发明中，纳米分子缔合物和作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的NMR测量没有特别限制，但是可以使用例如Bruker 400MHz Avance进行。

在本发明中，纳米分子缔合物和作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的FT-IR测量没有特别限制，但是可以使用例如Bruker Alpha 2ATR。

接下来，本发明的来源于药物分子的另一种分子缔合物，其特征在于，对含有作为纳米分子缔合物前体的有机材料或无机材料的盐的溶液施加剪切应力以制备具有有机材料或无机材料的盐物理结合的结构的纳米分子缔合物。

以这种方式制备的分子缔合物是药理活性成分和水溶性化合物结合的分子缔合物，其特征可以在于，作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的盐，以及其中有机材料或无机材料的盐结合的分子缔合物的色谱法的测量值相同，并且作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的盐，以及其中有机材料或无机材料的盐结合的分子缔合物的光谱法的测量值不同。

在纳米分子聚集体中，色谱法测量值和光谱法测量值与上述相同。

同样，即使没有单独的粘合剂或添加剂，它也能通过分子之间的相互作用而物理结合，并且可以主要由有机材料或无机材料的盐组成。

在本发明中，可以使用有机材料或无机材料的盐作为药理活性成分，并且也可以使用上述有机材料或无机材料的盐。

如上所述，由于作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的盐，以及其中有机材料或无机材料的盐物理结合的分子缔合物具有不同的物理结构，因此两种目标材料的NMR谱图中大部分峰相似，部分峰可能发生变化，FT-IR中可能出现各种类型的变化，例如峰的出现和消失以及峰强度的变化。

例如，当将作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的盐，以及其中有机材料或无机材料的盐物理结合的分子缔合物的NMR测量的结果值进行比较时，当峰位置改变时，可以确定它们是不同的，具体地，当将作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的盐，以及其中有机材料或无机材料的盐物理结合的分子缔合物的NMR测量的结果值进行比较时，当基于1H NMR的峰位移为0.005ppm以上时，可以确定它们是不同的。

另外，当将作为纳米分子聚集体前体的有机材料或无机材料的盐，以及其中有机材料或无机材料的盐结合的分子缔合物的FT-IR测量的结果值进行比较时，当一个或多个峰出现或消失时，可以确定它们是不同的，具体地，当将作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的盐，以及其中有机材料或无机材料的盐结合的分子缔合物的FT-IR测量的结果值进行比较时，当一个或多个峰相差5cm

另外，由于作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的盐，以及其中有机材料或无机材料的盐结合的分子缔合物具有相同的化学结构，因此通过色谱法测量的值也可能是相同的。具体地，当作为纳米分子聚集体的前体的有机材料或无机材料的盐，以及其中有机材料或无机材料的盐结合的分子缔合物的HPLC测量的结果值的保留时间在10％以内，可以确定它们是相同的。

另外，由于本发明的纳米分子缔合物的粒径非常小，因此平均粒径可以为50nm以下，优选可以为30nm以下，更优选可以为20nm以下，非常优选可以是15nm以下，最优选可以是10nm以下，或者5nm以下。可以通过衍射实验测量平均粒径，优选可以使用小角中子散射法(SANS)测量。另外，还可以使用透射电子显微镜测量图像。当纳米分子缔合物的平均粒径超过50nm时，存在分散性差、透明度和渗透性差的问题。另外，纳米分子缔合物的平均粒径的下限没有特别限制，但是可以为约1nm以上。

下文中，将通过本发明的实施例对本发明的制备方法进行更加详细的描述。不言而喻，本发明不限于这些实施例。

实施例

使用的装置

3辊磨机

制备

[实施例1]

将19.8mg NaDC(脱氧胆酸钠；Xi’an Lyphar Biotech Co.,Ltd.，中国)溶解在10mL水中，制备浓度为约0.2％的NaDC水溶液。如图1所示，准备由两个辊(辊A和辊B)组成的辊磨机，然后将制备的NaDC溶液以50ml/分钟的输入速度投入A辊和B辊之间。将辊A的转速调节为100rpm，将辊B的转速调节为300rpm，将辊A和B之间的距离设定为10μm。

将所得水溶液在-50℃下冷冻，然后在-70℃的温度和0.1巴的压力下冷冻干燥48小时以去除水分。所得样品为白色粉末。

[比较例1]

以与实施例1中相同的工序获得NaDC粉末，不同之处在于，制备了NaDC水溶液，而没有进行用于制备其分子缔合物的辊压工序。

[实施例2]

将500mg的苹果酸-舒尼替尼(SUNITINIB MALATE,TEVA)溶解于100mL乙醇中，以制备浓度为约0.5％的舒尼替尼溶液。如图1所示，将其置于辊压装置中以制备分子聚集体，其中各种溶液的输入速度为50ml/分钟。将辊A的转速调节为100rpm，将辊B的转速调节为300rpm，将辊A和B之间的距离设定为10μm。

然后，将通过辊磨机回收的水溶液在-50℃下冷冻，然后在-70℃的温度下在0.1巴的压力下冷冻干燥48小时以去除水，从而得到粉末形式的“舒尼替尼/苹果酸盐的分子缔合物”。

[比较例2]

以与实施例2相同的工序获得苹果酸舒尼替尼粉末，不同之处在于，将苹果酸舒尼替尼制备为水溶液，而没有进行用于制备其分子缔合物的辊压工序。

[实施例3]

以与实施例2相同的方式制备样品，不同之处在于将辊A和辊B之间的距离设定为90μm。

[实施例4]

以与实施例2中相同的方式制备样品，不同之处在于使用氯硝柳胺代替苹果酸-舒尼替尼(SUNITINIB MALATE，TEVA)并且将辊A和B之间的距离设定为90μm。

[比较例3]

以与实施例2相同的方式制备样品，不同之处在于将辊A和辊B之间的距离设定为110μm。

[比较例4]

以与实施例4相同的方式制备样品，不同之处在于将辊A和辊B之间的距离设定为110μm。

[实施例5]

将19.8mg DCF-DA(2',7'-二氯荧光素二乙酸盐；Sigma-Aldrich Co.Ltd.)溶解在10mL水中以制备浓度为约0.2％的NaDC水溶液。如图1所示，准备由两个辊(辊A和辊B)组成的辊磨机，然后将制备的DCF-DA溶液以50ml/分钟的输入速度置于A辊和B辊之间。将辊A的转速调节为100rpm，将辊B的转速调节为300rpm，将辊A和B之间的距离设定为10μm。

将所得水溶液在-50℃下冷冻，然后在-70℃的温度和0.1巴的压力下冷冻干燥48小时以去除水分。所得样品为黄色荧光粉末。

[比较例5]

以与实施例5中相同的工序获得DCF-DA粉末，不同之处在于，将DCF-DA制备为水溶液，而没有进行用于制备其分子缔合物的辊压工序。

[实施例6]

以与实施例1相同的方式制备分子缔合物，不同之处在于使用环孢菌素A代替NaDC。

[比较例6]

以与实施例6相同的工序获得API，不同之处在于，将环孢菌素A制备为水溶液，而没有进行用于制备其分子缔合物的辊压工序。

实验例1：实施例1与比较例1的化学/物理结构的比较

对于实施例1中制备的粉末形式的NaDC分子缔合物和比较例1中的NaDC本身，使用核磁共振(NMR；Bruker 400MHz Avance)和傅立叶变换红外光谱(FT-IR；Bruker Alpha2ATR)测量谱图，NMR的谱图结果如图5所示，FT-IR的谱图结果如图6所示。

如图5所示，可以看到NaDC的两个谱图。图5的顶部谱图示出了作为本发明的分子缔合物的前体的药理活性成分NaDC(纯化合物，比较例1)的H-NMR谱图，图5的底部谱图示出了通过本发明的制备方法制备的NaDC分子缔合物的H-NMR谱图。当将图5的顶部谱图和底部谱图进行比较时，图5的顶部谱图具有非常尖锐的峰和良好的分辨率，而图5的底部谱图具有钝峰和重叠现象。这种差异是因为，随着通过本发明的制备方法制备的分子缔合物的结构形成，实际分子运动发生时的分子量发生变化，自旋-自旋弛豫时间(T2)变得更短。

图6示出了两种材料的FT-IR谱图。当将纯NaDC(比较例1)的谱图(用蓝色表示)与实施例1中通过本发明的制备方法制备的分子缔合物的谱图(用红色所示)进行比较时，可以观察到特征性的新峰。600cm

从图5和图6的谱图结果可以看出，本发明的制备方法制备的纳米分子缔合物和作为纳米分子聚集体前体的药理活性成分的例如NMR或FT-IR的谱图分析测量的结果值不同，可以确定这些结果值之间的差异是由于两种材料物理结构的不同引起的。具体地，在比较通过NMR测量的结果值的情况下，当峰的位置发生变化时，可以确定它们是不同的，在比较通过FT-IR测量的结果值的情况下，当一个或多个峰出现或消失时，可以确定他们是不同的，在这种情况下，可以看出结果值的差异是由于两种材料的物理结构的不同引起的。

另外，对实施例1中制备的粉末形式的NaDC和比较例1中的NaDC的分子缔合物进行了HPLC(来自Waters的e2695)测定，结果如图7A所示。如图7A中用红色椭圆表示的主峰所示，制备结构前的API(比较例)和通过施加剪切应力新制备的分子缔合物具有相同的色谱特征，由此可以证实它们是具有相同峰的相同材料。因此，如图7A所示，通过HPLC测量结果可以看出，实施例1中制备的粉末形式的NaDC的分子缔合物与比较例1中的NaDC具有相同的结果值。

同样，为了证实制备分子缔合物之前的API和通过施加剪切应力新制备的分子缔合物具有相同的色谱特性，并且即使在使用本申请的实施例4中制备的氯硝柳胺作为API制备分子缔合物也是如此，以与之前的实验例相同的方式使用HPLC对它们进行测量，结果可以看出，它们具有相同的峰，如图7B所示。

另外，为了证实制备分子缔合物之间的API和通过施加剪切应力而新制备的分子缔合物具有相同的色谱特性，即使在本申请的实施例2中制备的舒尼替尼/苹果酸盐分子缔合物以及比较例2中制备的舒尼替尼和苹果酸盐的情况下也是如此，以与之前的实验例相同的方式使用HPLC对它们进行测量，结果可以看出，它们具有相同的峰，如图7C所示。

因此，从图7的结果来看，通过例如HPLC的色谱分析对本发明的制备方法制备的纳米分子缔合物和作为纳米分子聚集体的前体的药理活性成分测量的结果值相同，并且确定这些结果是因为两种材料具有相同的化学结构。

另外，观察图5所示的两个谱图，虽然在峰的清晰度方面观察到有所变化，但峰的位置几乎相同。这意味着，当将纯NaDC和通过本发明的制备方法新制备的其分子缔合物进行比较时，没有形成新的化学键，也没有去除化学键，它们的化学结构也是相同的。

由此可见，本发明的制备方法制备的分子缔合物具有新的特点，其化学结构与作为分子聚集体前体的药理活性材料相同，但是分子物理结构不同。

实验例2：实施例2与比较例2的化学/物理结构的比较

对于实施例2中制备的舒尼替尼/苹果酸盐分子缔合物和比较例2中制备的舒尼替尼和苹果酸盐的盐，使用NMR和FT-IR测量谱图，NMR的谱图结果如图8所示，FT-IR的谱图结果如图9所示。

首先，舒尼替尼/苹果酸盐的1H-NMR谱图结果和本发明制备的分子缔合物的1H-NMR谱图结果如图8所示。图8中，顶部的谱图为舒尼替尼和苹果酸盐的成盐混合物的1H-NMR谱图，底部的谱图为本发明制备的两种化合物物理结合的分子缔合物的1H-NMR谱图。发生变化的部分用*和**标记，其中随着分子缔合物的形成，分子之间的距离变得非常近，这些接近的分子引起核环境的相互变化，因此，这些证据表明它们足够接近，可以观察到NMR峰的变化。

接下来，舒尼替尼/苹果酸盐的FT-IR谱图结果和本发明制备的分子缔合物的FT-IR谱图结果如图9所示。从图9中观察到，可以看出观察到的变化比NMR谱图的变化要大得多。如上所述，可以看出分子的伸缩和弯曲模式不仅因分子聚集体的形成而改变运动模式的激发能，还会因为这些约束条件改变峰的出现和消失、位置移动和强度。1300-1700cm

从图8和图9的谱图结果可以看出，本发明的制备方法制备的纳米分子缔合物以及作为纳米分子聚集体前体的药理活性成分的谱图分析(例如NMR或FT-IR)测量的结果值不同，并且确定这些结果值之间的差异是由于两种材料的物理结构的差异造成的。具体地，在比较通过NMR测量的结果值的情况下，当峰位置改变时，可以确定通过谱图分析测量的结果值彼此不同，而在比较通过FT-IR测量的结果值时，当一个或多个峰出现或消失时，可以确定谱图分析测得的结果值彼此不同，在这种情况下，可以看出结果值的差异是由于两种材料的物理结构的差异造成的。

另外，从图10的结果可以看出，本发明的制备方法制备的纳米分子缔合物以及作为纳米分子聚集体前体的药理活性成分的色谱分析(例如HPLC)测量的结果值相同，可以确定这些结果是由于两种材料具有相同的化学结构。

实验例3：实施例3与比较例3的化学/物理结构的比较

对于实施例3中制备的粉末和比较例3中制备的粉末，使用傅立叶变换红外光谱(FT-IR；Bruker Alpha 2ATR)测量谱图，并与比较例1(不是通过本发明的制备方法制备的初始前体，已经对其进行了测量)的谱图结果进行比较。

首先，实施例3、比较例3和比较例1的FT-IR谱图结果的比较如图11所示，实施例4、比较例4和比较例4以及比较例1的FT-IR谱图结果的比较如图12所示。

如图11所示，比较例3和比较例1的FT-IR显示出非常相似的FT-IR谱图结果，因此可以看出，当将两个辊磨机之间的距离调节至超过100μm时，无法制备出本发明的分子缔合物。相反，在实施例3的情况下，可以看出，当将两个辊磨机之间的距离调节至100μm以下时，制备出了具有不同物理结构的新结构，即本发明的分子缔合物。

接下来，如图12所示，比较例4和比较例1也显示出非常相似的FT-IR谱图结果，因此可以看出，当将两个辊磨机之间的距离调节至超过100μm时，无论药理活性成分的类型如何，都无法制备出本发明的分子缔合物。相反，在实施例4的情况下，可以看出，当将两个辊磨机之间的距离调节至100μm以下时，制备出了具有不同物理结构的新结构，即本发明的分子缔合物。

因此，可以看出，无论药理活性成分的类型如何，当将两个辊磨机之间的距离调节至大于100μm时，都不会产生本发明的分子缔合物，但是当将其调节至100μm以下时，就会制备出本发明的分子缔合物。

另外，通过TEM(FEI公司的Tecnai G2 Spirit Twin)对实施例4中制备的氯硝柳胺的分子缔合物进行拍摄，如图13所示。使用透射电子显微镜图像测量的偏心率的平均值约为0.85，分布在0.48和1.0之间。另外，最小和最大尺寸分别为约2.5nm和7.7nm，平均尺寸为约4.8nm。

实验例4：实施例2中分子缔合物的稳定性测试和粒径确认

将实施例2中制备的粉末形式的“舒尼替尼/苹果酸盐的分子缔合物”制备成0.05％的水溶液，然后在以下条件下测量6个月的pH、粒径、含量％和浓度的变化，如下表2所示。

pH测量方法

取0.5mL样品并分析一次。使用1mL移液器加入0.5mL样品，使得pH计传感器被完全覆盖，然后测量pH值。

粒径(通过zetasizer的粒径)测量方法

取1mL样品。将样品小心地置于比色皿中，以免产生气泡。对同一样品共进行了10次重复分析(默认设置值为一次测量重复分析10次)。在处理后的数据中，使用了部分按体积的粒径分布，尺寸和PDI值以10次值的平均值进行处理。

Zetasizer测量条件

[表1]

含量测量条件

制备20mM乙酸铵和乙腈作为流动相。将流动相注入HPLC约30分钟。将舒尼替尼样品溶解在载剂中，制备0.005％、0.01％、0.03％、0.05％和0.1％标准溶液。使用标准溶液在HPLC条件下测量面积值。通过将测量面积值设置为y轴，将已知浓度设置为x轴，创建了校准曲线。当校准曲线完成后，就得到了y轴的公式。

HPLC浓度

取出1mL样品并放入LC小瓶中。将流动相注入HPLC约30分钟。通过注入10μl测量HPLC面积。使用创建的校准曲线计算浓度。

[表2]

如上表2所示，实施例2中制备的分子缔合物的平均粒径为2.2nm，PDI为1。此外，由于pH、含量和粒径均保持了6个月，因此保持了稳定性。

实验例5：实施例与比较例的XRD结构的比较

将本发明实施例6中使用环孢菌素A制备的分子缔合物与比较例6中环孢菌素A本身的XRD测量结果进行比较，如图14所示。通过图的比较可以看出，除了夹持样品的支架(SUS材料)出现的峰(图的右侧相同出现的峰)以外，可以看出，加工前的比较例6中的API(环孢菌素A)本身以晶型存在(左侧的尖峰)，而本发明的实施例6中的分子缔合物在加工后随着物理结构的变化而变为无定形形式(左侧的无定形峰)。

在结晶结构而非无定形结构(例如本申请的分子缔合物)的情况下，峰可能随着内部晶格大小的变化而变化，但是这也只是从现有晶型到另一种晶型的变化，不会像本发明中那样转变成无定形的形式。

因此，从图14可以看出，本发明的分子缔合物并未转变为吸着物形式，而是物理结构本身转变为无定形形式。

同样，将本发明实施例2中使用舒尼替尼/苹果酸盐作为API制备的分子缔合物与比较例2的XRD测量结果进行比较，如图15所示。

类似上述环孢菌素A，可以看出，加工前的比较例2中API(舒尼替尼/苹果酸盐)本身以晶型存在，而本发明实施例2中分子缔合物在加工后随着物理结构的变化的变为无定形的形式。即，可以看出，本发明的分子缔合物没有转变为吸着物形式，但是物理结构本身转变为无定形形式。

实验例6：实施例与比较例的DSC测量实验的比较

为了清楚地证明本申请的分子缔合物没有结晶(吸着)，本申请的申请人进行了以下的DSC测量实验。

具体地，将本发明实施例6中使用环孢菌素A作为API制备的分子缔合物与比较例6中的环孢菌素A本身的DSC测量结果进行比较，如图16所示。如果经过本发明的工序的分子缔合物为吸着物，DSC图上应该会出现溶剂(本发明中使用的溶剂为水或乙醇)在沸点(水为100℃，乙醇为约60℃)附近吹散的峰，但是在图16所示的DSC测量结果数据中根本没有出现这样的峰。因此，可以清楚地看出，本申请的分子缔合物与作为纳米分子聚合物前体的药理活性成分的光谱测量值的差异是由于物理结构的变化，而不是吸着引起的变化所导致的。

实验例7：实施例的颗粒图片的证实

为了证实本申请的分子缔合物为API的分子缔合物结构，本申请的申请人拍摄了实施例6中以环孢菌素A为API制备的分子缔合物以及实施例2中使用舒尼替尼/苹果酸盐制备的分子缔合物的TEM照片。首先，拍摄了实施例6中使用环孢菌素A作为API制备的分子缔合物的TEM照片，如图17所示。由于环孢菌素A在水中的溶解度不好，因此环孢菌素A本身无法通过TEM确认，但是从图17的TEM照片可以看出，可以确认本发明的分子结构是其中由多个API物理结合的结构。

同样地，拍摄了实施例2中使用舒尼替尼/苹果酸盐制备的分子缔合物的TEM照片，如图18所示。

从图18的TEM照片中可以看出，可以证实本发明的分子缔合物是其中多个API物理结合的结构。另一方面，如图19的TEM照片所示，观察比较例2(即舒尼替尼/苹果酸盐本身溶解在水中)的TEM照片的结果，根本无法确定API物理结合的结构。

因此，可以清楚地看出，本发明的结构是其中多个API物理结合的分子缔合物的结构。

实验例8：实施例5与比较例5的细胞渗透性能的比较

将实施例5中制备的粉末形式的DCF-DA分子缔合物和比较例5中的DCF-DA本身的细胞渗透性能进行比较。悬浮细胞(MV-4-11人巨噬细胞)在培养皿中生长至填充至50％。将比较例5中的DCF-DA溶解于乙醇中，将实施例5中的DCF-DA分子缔合物溶解于蒸馏水中，分别以相同浓度0.005％处理细胞30分钟，然后用磷酸盐缓冲溶液(PBS)洗涤细胞以去除细胞外DCF-DA并阻止其通过扩散进入细胞。通过另外培养30分钟稳定细胞，然后用0.03％过氧化氢(H

实验例9：实施例2与比较例2的角膜渗透性能对比

进行实施例2中制备的粉末形式的舒尼替尼-苹果酸分子缔合物和比较例2中的舒尼替尼-苹果酸本身的角膜渗透实验。

角膜渗透实验参照已发表的论文的内容“Lee等人，Modulating the TransportCharacteristics of Bruch’s Membrane With Steroidal Glycosides and itsRelevance to Age-Related Macular Degeneration(AMD).Invest.Ophthalmol.Vis.Sci.2015,56,8403.,2015,”进行。采用如图21所示的自制的Ussing室作为渗透实验的池，Ussing室主要由三部分组成：用于给药的供体室、接收室以及药物渗透的膜。基本地，将药物置于Ussing室的供体室中，将猪眼的角膜部分收集成8mm大小的圆形，去除附着在角膜上的其他组织，然后将其固定在膜的位置上，在接收室接收渗透该膜的溶液，此时将其放入恒温室中，其中将扩散发生的温度调节至接近人体温度的37℃，并储存。一定时间后，通过测量各个供体室和接收室中溶液的浓度，可以确定各个样品的扩散特性。各个样品18小时后的浓度如下表1所示。对于浓度，使用了UV/VIS谱图(Evolution201 UV/Vis；Thermo)，使用420nm的峰高测量浓度。

[表3]

如上表3所示，当渗透的量以百分比表示时，可以看出药理活性材料的分子缔合物的渗透性比药理活性材料的渗透性高约4倍。因此，正如从上述实施例4的DCF-DA的细胞渗透实验中观察到的那样，可以看出本发明的分子缔合物对细胞的渗透性较药理活性材料本身的渗透性好得多。