一种辣木凝集素的成分应用

技术领域

本发明涉及凝集素应用领域，特别涉及一种辣木凝集素的成分应用。

背景技术

凝集素(Lectin)是指一种从各种植物，无脊椎动物和高等动物中提纯的糖蛋白或结合糖的蛋白，因其能凝集红血球(含血型物质)，故名凝集素。常用的为植物凝集素(Phytoagglutin，PNA)，通常以其被提取的植物命名，如刀豆素A(Conconvalina，ConA)、麦胚素(Wheat germ agglutinin，WGA)、花生凝集素(Peanut agglutinin，PNA)和大豆凝集素(Soybean agglutinin，SBA)等，凝集素是它们的总称。凝集素不是来源或参与免疫反应的产物，凝集素具有的某些“亲合”特性，能被免疫细胞化学技术方法所应用。因此，Ponder(1983)提出应称“凝集素组织化学”而不能称为“凝集素免疫组织化学”。

发明内容

为解决上述现有技术存在的问题，本发明的目的在于提供一种辣木凝集素的成分应用。

为达到上述目的，本发明的技术方案为：

一种辣木凝集素的成分应用，所述辣木凝集素具有促进哺乳动物肠道通透性的活性；从而增加70kd的高分子量大分子入血。

进一步的，所述哺乳动物为小鼠。

进一步的，所述辣木凝集素的分子量包括但不限于：55kd，35kd，26kd，14kd，10kd。

进一步的，所述辣木凝集素能够促进辣木过敏。

进一步的，所述辣木凝集素不耐热，通过高温方式可被灭活。

进一步的，所述辣木凝集素能够增加高分子抗原的免疫活性，在口服疫苗佐剂方面以及促进大分子药物通过肠壁入血方面有广泛应用。

进一步的，使用辣木凝集素蛋白及其改性蛋白，促进抗原、大分子药物与免疫系统接触的一些治疗方法以及疫苗接种方法。

相对于现有技术，本发明的有益效果为：

本发明一种辣木凝集素的成分应用，使用辣木凝集素蛋白及其改性蛋白的，促进抗原、大分子药物与免疫系统接触的一些治疗方法，疫苗接种方法。

辣木凝集素可增加高分子抗原的免疫活性，在口服疫苗佐剂方面以及促进大分子药物通过肠壁入血方面有广泛应用。

附图说明

图1辣木粗蛋白55kd凝集素的分离；

图2电泳鉴定分离效果；

图3辣木粗蛋白提取34kd、16kd、10kd的凝集素纯化方法；

图4辣木粗蛋白精制34、16kd、10kd凝集素的鉴定；

图5辣木凝集素可以促进70KD葡聚糖-FITC荧光素入血；

图6辣木过敏小鼠肠道形态学变化，有明显的水肿，且绒毛变短，说明辣木凝集素作用下辣木叶更容易过敏；

图7辣木过敏小鼠肠道肥大细胞分布变化，说明辣木凝集素作用下辣木叶更容易引发肥大细胞脱粒从而引发过敏。

具体实施方式

下面结合附图和具体实施方式对本发明技术方案做进一步详细描述：

如图1所示，一种辣木凝集素成分应用

凝集素是指能够通过蛋白上的糖结合部与血红细胞结合，并形成凝血的植物蛋白；

本专利涉及的凝集素是指通过辣木叶，辣木果荚，辣木种子种包含的能够凝集红血球的成分；

本专利公开的凝集素是指通过纯化以及蛋白分析可知凝集素包括但不限于以下分子量：55kd，35kd，26kd，14kd，10kd。图1-4通过血凝成分可知以上组分均有凝集红血球的活性，表1；

通过研究我们得知凝集素具有促进哺乳动物(小鼠)肠道通透性的活性，通过与4kd葡聚糖-FITC的比较，在与辣木凝集素共同灌胃的条件下，辣木凝集素可增加70kd葡聚糖-FITC进入血液的速度和浓度。由此可知，凝集素具有增加肠道通透性的活性，见图5；

同时我们观察到辣木凝集素的作用可能在促进辣木过敏的进程中发挥重要作用见图6-7；

辣木凝集素特征在于1，来源于辣木，不限种源2分子量范围3能凝集红血球4能增加肠壁通透性，从而增加高分子量(70kd)大分子入血见图5；

据此可证明辣木凝集素可增加高分子抗原的免疫活性，在口服疫苗佐剂方面以及促进大分子药物通过肠壁入血方面有广泛应用。

保护范围：使用辣木凝集素蛋白及其改性蛋白的，促进抗原、大分子药物与免疫系统接触的一些治疗方法，疫苗接种方法。

图1辣木粗蛋白55kd凝集素的分离；

图2电泳鉴定分离效果；

图3辣木粗蛋白提取34kd、16kd、10kd的凝集素纯化方法；

图4辣木粗蛋白精制34、16kd、10kd凝集素的鉴定；

表1不同分子量凝集素的血球凝集活性

采用5种不同离子强度(20％、40％、60％、80％、100％)mol/LNaCI20mmol/LTri-HCI的缓冲液分别洗脱共存的杂蛋白及目标蛋白。初纯化辣木蛋白样品在强阴离子交换柱产生的洗脱曲线分成五个峰(Ⅰ～Ⅴ)结果如图3所示。其中，在洗脱管数为3-6的单一峰经凝血活性检测，含较高活力的凝血活性。较强的凝乳活力测试结果证明Ⅰ组分存在目标蛋白。将Ⅰ峰的组分进一步分级，在50K Millipore离心管上进行超滤。SDS-PAGE可得，两种蛋白分子量差别较大，可以通过5K的Millipore超滤离心管进行分离纯化，4℃离心(1300×g，15min)，便可将分子量分别为18kDa和35kDa的蛋白分开。通过SDS-PAGE凝胶电泳检测纯化程度。

图5辣木凝集素可以促进70KD葡聚糖-FITC荧光素入血，说明辣木凝集素可以增加肠道通透性，可以增加过敏风险(小鼠用生理盐水稀释的10mg/ml FITC-dextran进行灌胃，每只鼠灌0.35ml，设置组别：空白(生理盐水)、FITC-4、FITC-70、FITC-70+MO(80mg/ml)，分别在2、4、8h后眼球取血1ml左右，沉淀后4℃4500rpm离心10min,取上清约200ul，荧光分光光度计测荧光强度。

图6辣木过敏小鼠肠道形态学变化，有明显的水肿，且绒毛变短，说明辣木凝集素作用下辣木叶更容易过敏，也说明辣木凝集素的存在促进大分子抗原通过肠壁接触免疫系统。而灭活凝集素不再具备上述特征。

图7辣木过敏小鼠肠道肥大细胞分布变化，说明辣木凝集素作用下辣木叶更容易引发肥大细胞脱粒从而引发过敏。而灭活凝集素不再具备上述特征。

以上所述，仅为本发明的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何不经过创造性劳动想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。因此，本发明的保护范围应该以权利要求书所限定的保护范围为准。