丙酚替诺福韦降解杂质的制备方法

技术领域

本发明涉及药物化学领域，更具体地，涉及一种丙酚替诺福韦降解杂质的制 备方法。

背景技术

丙酚替诺福韦(Tenofovir Alafenamide Fumurate，TAF)是核苷酸类逆转录酶抑制剂替诺福韦(Tenofovir)的靶向前药，由美国Gilead Sciences公司研发，商品 名Vemlidy，于2016年11月在美国获批上市，用于一日一次治疗成年代偿性肝 病患者的慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染，于2018年11月在国内获批上市。TAF 的化学名为N-[(S)-[[[(R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基]氧]甲基](苯氧基)磷 酰基]-L-丙氨酸异丙酯，(2E)-2-丁烯二酸盐(2∶1)，其化学结构如下：

在合成TAF的过程中往往会伴随着一些副产物的生成，其中在丙酚替诺福 韦的降解实验中就发现：降解杂质(R)-1-(6-氨基-9H-嘌呤-9-基)丙-2-基)氧 基)甲基)-N-((S)-1-异丙氧基-1-氧丙烷-2-基)膦酸(如式Ⅱ)较易产生，这 势必影响TAF的的药品质量。因此，为了更好地对丙酚替诺福韦进行质量研究， 非常有必要得到这个杂质的标准品，进而用于丙酚替诺福韦生产中杂质的定性及 定量分析，从而提高丙酚替诺福韦的质量标准，为安全用药提供重要的指导意义。

目前关于合成杂质式Ⅱ标准品的文献非常少，其中专利CN 108101942 A公 开了半替诺福韦艾拉酚胺生产中潜在杂质的合成法，并具体公开了TAF-impurity C(相当于化合物式Ⅱ)的制备方法，其所采用的制备方法为：

采用式V化合物先与酰化剂发生酰化反应，然后再与L-丙氨酸异丙酯发生 酰胺反应，得到式C所示的TAF-impurity C。然而，该方法操作步骤长，所使用 试剂多，反应时间长，反应选择性较差，后处理及分离较难。且所选一些试剂如 酰化剂等有一定危险性。

因此，提供一种原料转化率高、后处理简单、绿色环保、纯度高的制备丙酚 替诺福韦降解杂质化合物式Ⅱ标准品的方法十分重要。

发明内容

本发明的目的是克服现有技术中丙酚替诺福韦降解杂质化合物式Ⅱ合成中 存在反应时间长、操作繁琐且后处理复杂，成本较高等技术问题，提供一种丙酚 替诺福韦降解杂质的制备方法，该制备方法简单，快速且制得的杂质具有高纯度， 可用作杂质标准品对替诺福韦的质量标准进行控制。

本发明提供了一种如式Ⅱ所示的丙酚替诺福韦降解杂质的制备方法，包括以 下反应步骤：

步骤一：将丙酚替诺福韦游离碱式Ⅰ与含有碱性物质的水溶液在有机溶剂二 氯甲烷中进行混合搅拌发生两相反应，控制反应温度为10～30℃，得到反应液；

步骤二：将步骤一得到的反应液进行分层，收集水相，水层经高压制备色谱 纯化，冻干，得到杂质化合物式Ⅱ；

其中，步骤一碱性物质为碳酸钾、碳酸钠、碳酸锂中的一种或几种。

上述制备方法中，优选的，碱性物质为碳酸钾。

上述制备方法中，优选的，步骤一中所述丙酚替诺福韦游离碱与碱性物质的 摩尔比为1：1.0～3.0。更优选的，丙酚替诺福韦游离碱与碱性物质的摩尔比为1： 2.0。

上述制备方法中，优选的，步骤一中反应温度控制为20～25℃；

上述制备方法中，优选的，步骤二中通过液相制备柱提取的方法为：采用等 度冲洗分离；色谱纯化的方法中流动相为3％的乙腈纯水溶液。

上述制备方法中，优选的，色谱纯化的方法中控制流速为20mL/min；色谱纯化 的方法中进样量为100mg/针。

本发明反应机理：由于本发明中的原料丙酚替诺福韦游离碱和产物丙酚替诺 福韦降解杂质化合物式Ⅱ对碱性物质具有较高的敏感度，碱性物质的种类和用量 的不同，可能都会引起原料一个或多个不同的活性位点发生水解(活性位点的标 识见式Ⅳ)，对目标产物的产率和纯度均具有较大影响。

本申请的发明人通过大量的实验探索发现，当碱性物质为碳酸锂、碳酸钾、 碳酸钠中的一种或几种时，尤其是选自碳酸钾时，反应液中的原料转化率得到显 著提升，且具有较高的水解选择性。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

(1)本发明提供了一种丙酚替诺福韦降解杂质的制备方法，经选择性水解， 使得反应液中原料转化率≥90.0％，具有较高的反应选择性；反应液中有机溶剂 和水相分层后，将得到的水相经高压制备色谱纯化，冻干即可得到丙酚替诺福韦 降解杂质杂质化合物式Ⅱ，所得杂质化合物式Ⅱ的纯度≥98％，可作为杂质对照 品使用。

(2)本发明的原料简单易得，反应条件易控，产物纯度较高，后处理简单， 适合生产丙酚替诺福韦降解杂质化合物式Ⅱ，有利于合成丙酚替诺福韦过程中对 该杂质的检测监控，提高丙酚替诺福韦的质量标准，为安全用药提供重要的指导 意义。

附图说明

图1为本发明制得的丙酚替诺福韦降解杂质式Ⅱ的核磁氢谱图。

图2为本发明制得的丙酚替诺福韦降解杂质式Ⅱ的核磁碳谱图。

图3为本发明制得的丙酚替诺福韦降解杂质式Ⅱ的红外光谱谱图。

图4为本发明制得的丙酚替诺福韦降解杂质式Ⅱ的液相色谱图。

图5为本发明制得的丙酚替诺福韦降解杂质式Ⅱ的质谱图。

具体实施方式

为了更清楚、完整的描述本发明的技术方案，以下通过具体实施例进一步详 细说明本发明，应当理解，此处所描述的具体实施例仅用于解释本发明，并不用 于限定本发明，可以在本发明权利限定的范围内进行各种改变。

实施例1

一种丙酚替诺福韦降解杂质的制备方法，包括以下步骤：

步骤一.向反应瓶中加入5.0g丙酚替诺福韦游离碱，50mL二氯甲烷，搅拌 溶解；另取2.9g碳酸钾以20mL水搅拌溶解后，于25℃下保温反应15小时，反 应完成后，静置分层，二氯甲烷层弃去，将水相层控制内温10～30℃。

S2.经高压制备色谱仪纯化后，收集含物料的组分溶液，冻干，得白色固体 丙酚替诺福韦降解杂质化合物Ⅰ3.8g，HPLC纯度99.15％；其中高压制备色谱采 用等度冲洗分离，流动相为3％的乙腈纯水溶液，流速为15mL/min，进样量为 100mg/针。

实施例2～4

一种丙酚替诺福韦降解杂质的制备方法，与实施例1基本相同，其区别在于， 丙酚替诺福韦游离碱与碳酸钾的摩尔比(在表1中用A表示)不同，具体见表1。

表1不同投料比对产物收率的影响

对比例1～4

一种丙酚替诺福韦降解杂质的制备方法，与实施例1基本相同，其区别在于， 碱性物质不同，具体见表2。

表2不同碱性物质对产物纯度的影响

结果与讨论

对实施例1中制得的丙酚替诺福韦降解杂质化合物Ⅰ进行了核磁共振氢谱、 碳谱、红外光谱谱图以及LCMS分析结果如图1、图2、图3、图4、图5所示， 根据分析图谱，做出解析，解析结果如下：

(编号仅供结构解析用)

1H NMR(400MHz,D

13C NMR(100MHz,D

红外光谱谱图数据：δ418.55，669.30，769.60，798.53，852.52，912.33，920.05，1047.35，1062.78，1103.28，1201.65，1226.73，1253.73，1307.74，1421.54，1456.26，1489.05，1506.41，1521.84，1541.12，1558.48，1577.77，1608.63，1680.00，1734.01，2358.94，2978.09。

LCMS检测结果如下表：

表3被检样品的MS数据

从表3中可以看出：负离子模式下，检测出质荷比m/z为399.2峰，归属为[C

综上，可以判定制备出的化合物Ⅰ分子结构正确。

通过表1、表2可以看出丙酚替诺福韦游离碱与碱性物质的摩尔比，所选碱 性物质的种类对实验结果非常重要，经过我们不断地实验，选出了一个操作方便、 纯度高、收率较高的杂质的制备方法。