一种建立单向阀门漏口型骶管囊肿大鼠模型的方法

技术领域

本发明涉及实验动物模型领域，更具体地涉及单向阀门漏口型骶管囊肿大鼠模型的建立方法。

背景技术

骶管囊肿属脊膜囊肿的一种类型，大体分为两种：1)NaborsIB型：不含有脊神经根纤维的硬膜外脊膜囊肿(Nabors IB型)，为先天性硬膜憩室或先天性硬膜缺陷所致蛛网膜疝出，多位于骶管S1-3水平，常见于成年人，男女之间无明显差异；2)Nabors II型：含有脊神经根纤维的硬膜外脊膜囊肿，又称之为Tarlov神经束膜囊肿或脊神经根憩室(NaborsII型)，为脊髓神经根袖远端的异常扩张形成囊肿，一般位于S2-3水平脊神经节或其远端，多见于成年人。

其中，Nabors II型含有神经根的硬膜外囊肿可能与脊神经根鞘内创伤性出血导致神经内膜和束膜之间潜在的腔隙异常扩张形成囊肿，或因脊神经根远端的蛛网膜异常增生阻碍脑脊液的正常流动而形成囊肿。约1/4有临床症状，可表现为神经源性跛行、下腰痛、坐骨神经痛和慢性会阴部痛，有时会出现感觉运动功能障碍和反射改变。MRI上病变位于硬脊膜囊侧方，囊内有神经根存在。

随着磁共振检查在县市级医院的普及，骶管囊肿的发现率呈逐年增加的趋势。尽管目前对此疾病的发病机制和治疗方式等方面认识仍存在诸多争议，不过目前一致认同的是：一旦出现临床症状应立即手术，以免发生持久性神经根损伤。在此情况下，需要有效的治疗骶管囊肿，了解其发生发展机制、并针对其发病进程进行逆向性纠正措施才是最为可靠的治疗方式。

然而，令人遗憾的是，目前尚无实验动物模型来模拟含脊神经根纤维的骶管囊肿，因此难以比较全面地了解含神经根型骶管囊肿的形成过程及相关发病机制。

因此，针对骶管囊肿的诊断和治疗研究，需要一种能够准确模拟含神经根型骶管囊肿的实验动物模型。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的一个目的在于提供一种能够准确模拟含神经根型骶管囊肿的动物模型。

上述目的通过以下方案来实现：

在一方面，本发明提供一种建立单向阀门漏口型骶管囊肿大鼠模型的方法，所述方法包括以下步骤：步骤1)：选择模型动物；步骤2)：通过手术暴露出所述模型动物腰骶椎管内硬膜囊末端；步骤3)：在所述模型动物的神经根穿出所述硬膜囊处，将局部移行处的硬膜纵行切开，但使内部的蛛网膜保留完整；和步骤4)：用筋膜或人工硬膜在切开两侧缝合成“只出不进”的单向阀门漏口模型。

进一步优选地，所述模型动物选自大鼠或兔中的一种，年龄为4周龄至12周龄。

通过使用该周龄的模型动物，能够提高建模的成功率。

进一步优选地，所述步骤2)中的手术为切除局部椎板。

通过切除椎板，能够快速露出硬膜囊末端而不伤及蛛网膜，从而有利于实施后续手术。

进一步优选地，所述方法还包括：步骤5)：将手术后的模型动物饲养在只允许单向爬行的饲养装置内，其中所述饲养装置呈竖立状态，并且将饲料和水源放置在竖直方向上的高位处。

通过使模型动物每天至少处于直立体位一段时间，能够使脑脊液在重力作用下通过“阀门”进入囊肿内，从而模拟真实的囊肿状态。

进一步优选地，所述饲养装置为竹筒，其直径比所述模型动物的腰部直径大至多20％。

竹筒容易获得，且结构轻质、结实、耐用，易于使模型动物处于直立状态。通过该技术方案，能够使模型动物在竹筒内保持直立状态，且同时能有适度的活动空间。

进一步优选地，所述饲养装置为不锈钢筒，其直径比所述模型动物的腰部直径大至多20％。

不锈钢筒容易制作，且坚固、耐用，易于使模型动物处于直立状态。通过该技术方案，能够使模型动物在不锈钢筒内保持直立状态，且同时能有适度的活动空间。

进一步优选地，保证所述模型动物处于直立体位至少1小时，优选至少2小时。

通过使模型动物每天至少处于直立体位合适的时间长度，能够较好地控制重力作用下通过“阀门”进入囊肿内的脑脊液的量，从而更好地控制建模过程。

综上所述，通过上述方法，本发明能够实现如下良好的技术效果：

1)成功模拟存活率达100％的骶管囊肿动物模型，且其囊肿形态跟真实病例中的囊肿形态非常相似；

2)操作方法简单、可靠，且建模时间短；

3)利用所建立的动物模型，本领域的普通技术人员能更好地了解神经根型骶管囊肿形成的过程，有力的诠释既有发病机制，同时以实验的方式探索更好的治疗方案，为神经根型骶管囊肿找到更有效的预防和治疗方法奠定基础。

附图说明

以下将结合附图来具体描述本发明的一些优选实施方式。本领域的普通技术人员将会理解，这些附图仅用于举例说明的目的，而无意于以任何方式来限制本发明的范围。

图1是显示骶管囊肿的形成示意图；

图2是根据本发明一个实施方案建立含神经根型骶管囊肿的示意性图示。

附图标记说明：1：瘘入口；2：颈部；3：出口。

具体实施方式

以下将结合附图和实施例来描述本发明的一些具体实施方式。本领域的普通技术人员会理解，提供这些实施例的目的仅仅是为了举例说明如何能够实施本发明的方案，而非以任何方式限制本发明的范围。

图1显示骶管囊肿的形成示意图。如图1可见，骶管包括两层，外膜即外层的硬膜囊和位于其内的蛛网膜层。一种可能的机制包括，囊肿通过一个活瓣(阀门)与蛛网膜下隙相通，活瓣只允许脑脊液进入，但是脑脊液无法流出，这样液体逐渐蓄积成为囊肿。

基于上述机制，本发明提出了一种建立单向阀门漏口型骶管囊肿大鼠模型的方法，例如参考图2中示意性示出的。不拘泥于任何理论，单向阀门机制可能为：囊肿和终池蛛网膜下腔相通，直立体位的条件下，囊肿内压力低于终池内脑脊液压力，这一静水压力差导致脑脊液通过阀门进入囊肿内，时间越久，进入的越多。但因阀门通道是单方向的，囊肿液无法反流回终池、参与正常的脑脊液循环，日积月累作用囊液越积越多后囊肿越来越大。

该方法主要包括通过手术暴露出所述模型动物腰骶椎管内硬膜囊末端；在所述模型动物的神经根穿出骶管硬膜处，将局部移行处硬膜纵行切开，但使蛛网膜保留完整。最后，用筋膜或人工硬膜在硬膜切开两侧缝合成“只出不进”的单向阀门漏口模型，从而完成建模。手术后，将模型动物饲养在只允许单向爬行的饲养装置内，其中所述饲养装置呈竖立状态，并且将饲养模型动物的饲料和水源放置在竖直方向上的高位处。不拘泥于任何理论，通过直立饲养术后的动物模型，能够使脑脊液更快、更多地通过该“单向阀门”漏出，从而快速建立囊肿模型。

下面将结合实施例对建模方法进行更为详细的描述和说明。本领域的普通技术人员将会理解，提供这些实施例的目的只是用于示例性说明的目的，即使本领域的普通技术人员能够更好地理解本发明是如何实施的，而不是对本发明的范围构成任何限制。

实验方法

1)实验动物及分组

从北京医学实验动物中心获得4周龄和12周龄SPF级SD雄性大鼠各20只，体重分别为(250±10)和(350±10)克，进行普通喂养。饮食自由，室温20-25℃，空气湿度40-60％，自然昼夜节律。饮水量和摄食量每天记录一次。

2)手术方法取4周龄和12周龄大鼠各10只进行实验，另外10只分别留作对照。

术前停止饲喂及饮水8小时进行术前准备。用10％水合氯醛溶液腹腔注射麻醉。确认麻醉后对大鼠进行备皮、消毒。之后进行局部椎板切除手术，暴露出大鼠腰骶椎管内硬膜囊末端；在神经根穿出骶管硬膜处，将局部移行处硬膜纵行切开，但使蛛网膜保留完整；用筋膜或人工硬膜在硬膜切开两侧缝合成“只出不进”的单向阀门漏口模型，从而完成单向阀门漏口型骶管囊肿大鼠模型。

3)术后处理

手术1天后将大鼠饲养在只允许单向爬行的竹筒内，将其放置为呈竖立状态，并且将饲养用的饲料和水源放置在竖直方向上的高位，使大鼠必须以直立状态休息和进食。每天使大鼠直立3个小时，连续观察14天，每天通过MRI观察骶管囊肿情况。

4)影像学结果分析方法

利用Photoshop CS4.0软件进行图像处理，并且测量囊肿的最宽维度尺寸。

5)实验结果

所有实验大鼠均顺利度过手术期，无手术并发症或死亡。囊肿尺寸见下表1。

表1：4周龄和12周龄大鼠中的囊肿尺寸表

由上可见，根据本发明的方法建模的成功率非常高，成活率和成功率均达到了100％。另外，由MRI获得的图像可见，所得模型大鼠的骶管囊肿清晰可见，呈球形或条状囊形，囊液信号与脑脊液信号相似，证明确实是脑脊液进入囊肿形成囊肿。

本具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。