一种提升狗免疫力饮料及其制备方法

技术领域

本发明涉及食品技术领域，具体为一种提升狗免疫力饮料及其制备方法。

背景技术

现今宠物狗日益增加，无论是几个月大的狗崽还是刚断奶的狗幼崽，都 随时会被购买或领养，但狗幼崽免疫力较低，经常会因为照顾不够仔细，或 其他原因如先天不足等，而生病造成身体不适，既给狗主人增加麻烦，狗也 会产生身体状况，更有可能遭到弃养。

面对多种不同的因素，制备一种可以增强免疫力的饮料，既增加免疫力 又可以替代水进行喂养，是很有发展前景的。因此制备一种既能增强免疫力， 且降低断奶应激带来的危害的提升狗免疫力的饮料，是非常有必要的。

发明内容

本发明的目的在于提供一种提升狗免疫力饮料，以解决上述背景技术中 提出的问题。

为了解决上述技术问题，本发明第一方面提供如下技术方案一种提升狗 免疫力饮料，包括以下重量份数的原料：

5～10份双歧杆菌微胶囊、5～10份硒蛋白复合物A、5～10份硒蛋白复 合物B、2～5份视黄醇、2～5份茶多酚、2～5份朴菇多糖、1～2份香精香 料、10～15份食品添加剂、50～100份饮用水。

优选的，所述双歧杆菌微胶囊由乳清蛋白凝胶与三次加入转谷氨酰胺转氨 酶的作用下制成凝胶颗粒后进行分散制得。

优选的，所述两次加入转谷氨酰胺转氨酶一次为制备乳清蛋白凝胶时，一 次为浓缩菌液与乳清蛋白凝胶混合时，一次为制备凝胶颗粒时。

优选的，所述视黄醇茶多酚酯为视黄醇与茶多酚进行烷基化反应制得。

优选的，硒蛋白复合物B是朴菇多糖与硒蛋白进行接枝共聚制得。

本发明第二方面提供一种提升狗免疫力饮料的制备方法，包括以下步骤：

(1)先配置浓度为10％的乳清蛋白溶液，将溶液在80℃下热变形30min，冷 却至室温后，用氢氧化钠调节pH至7.0或8.0，然后加入转谷氨酰胺转氨酶， 在40℃下处理2h，得到乳清蛋白凝胶；

(2)将冷冻保藏的双歧杆菌在MRSC琼脂培养基上进行48h的厌氧培养后， 选择单菌在MRSC液体培养基中进行37℃下厌氧培养24h，按1.0％的接种量 再次转移至新的MRSC液体培养基进行增殖培养，12h后将处于对数末期的 菌悬液在4℃，8000rpm的条件下，离心10min，菌泥用无菌的NaCl溶液洗 涤两次后，重悬于无菌水中，得到浓缩菌液；

(3)将浓缩菌液与乳清蛋白凝胶混合，快速加入转谷氨酰胺转氨酶，并旋涡 震荡使其转换均匀，将此混合液加入到盛有150g预热的大豆油的锥形瓶中， 在磁力搅拌的作用下(900rpm，40℃)，反应180min，待液滴在酶的作用下 转化为凝胶颗粒后进行离心，收集微胶囊粒并用林格式试剂清洗两次，再次 进行震荡、离心，得到双歧杆菌微胶囊，储藏于4℃备用；

(4)将茶多酚、乙酸乙酯、视黄醇处于绝对干燥的环境中混合，搅拌加热到 50℃，搅拌时间为2h，加入三乙胺调节溶液的pH值，冷却至室温，将溶液 转移至分液漏斗，再加入30℃的适量去离子水，摇匀，静置分层，放出下层 液，在反复水洗至滤液呈中性，然后将上层液转移至旋转蒸发仪中进行负压 蒸馏，至无溶剂乙酸乙酯时，得到丙烯酰茶多酚酯；

(5)将视黄醇茶多酚酯溶液与硒蛋白溶液等比例混合，高速搅拌2～4h， 120℃干燥24h，得到硒蛋白复合物A；

(6)将朴菇多糖研磨成粉与硒蛋白等比例混合，搅拌均匀后冻干，重新研磨， 置于湿度79％的饱和食盐水溶液中，在温度60℃的恒温烘箱中反应7d，反应 结束后立即放置在零下40℃的冰箱中冷冻1h，最后进行冻干、磨碎得到硒蛋 白复合物B；

(7)将双歧杆菌微胶囊、硒蛋白复合物A、硒蛋白复合物B溶于饮用水中， 体积比为1：1：1：10，加入香精香料与食品添加剂混合均匀，制得成品。

优选的，所述步骤(1)中：乳清蛋白溶液与转谷氨酰胺转氨酶摩尔比为 10：1。

优选的，所述步骤(3)中：浓缩菌液与乳清蛋白凝胶混合的体积比为1： 15，转谷氨酰胺转氨酶与混合液的体积比为1：20。

优选的，所述步骤(4)中：茶多酚、乙酸乙酯、视黄醇质量比为1：1.2： 3。

与现有技术相比，本发明所达到的有益效果是：

本发明公开了一种提升狗免疫力饮料及其制备方法，包括双歧杆菌微胶 囊、硒蛋白复合物A、硒蛋白复合物B、视黄醇、茶多酚、朴菇多糖、香精 香料、食品添加剂等；制备双歧杆菌微胶囊时，传统的微胶囊制备方法是直 接将普通乳清蛋白凝胶与菌液直接混合，进行喷雾干燥制得；这种方法虽然 容易大规模生产和控制微胶囊粒径，但经过喷雾干燥过程所产生的高热量对 益生菌细胞具有巨大的破坏作用，从而使得益生菌包埋率偏低；通过加入转 谷氨酰胺转氨酶，可以使蛋白质分子的酰胺基受体经异肽键与酰胺基供体形 成共价交联，在酶、酸以及钙离子的交联作用，乳清蛋白能够在室温下形成 结构致密的凝胶，这样形成的体系反应条件温和，有利于乳清蛋白对那些极 易失活的生物活性成分进行包埋，这层致密的膜又能够有效地保护分散于乳 化液滴内的生物活性成分；搅拌混合后，再次滴加谷氨酰胺转氨酶，在酶的 作用下转化为凝胶颗粒，制备双歧杆菌微胶囊，避免了喷雾干燥的高热量的 同时，还可以借助乳清蛋白凝胶与转谷氨酰胺转氨酶的作用下，提高环境的pH，增加双歧杆菌在胃酸中的存活率；通过摄入生理性有益菌双歧杆菌，来 增强狗的免疫力。

在硒蛋白中嵌入视黄醇，视黄醇中的烯结构可以很好的嵌入硒蛋白中， 再将视黄醇与茶多酚结合，形成视黄醇茶多酚酯，结合后的物质不仅能作用 于浆细胞，通过酯的油溶性还可以更多的作用于黏膜上皮细胞，促进sIgA的 生成，进而促进免疫球蛋白IgA的生成，更大程度上的增强免疫力，嵌入到 硒蛋白中；视黄醇作为免疫功能必须的营养素，能够促进B淋巴细胞的的分 化发育，又可以提高抵抗细菌感染等能力，茶多酚可以在体内清楚自由基， 硒蛋白的引入为狗幼崽提供了足够的微量元素硒；利用蛋白质的强吸收性增 加狗对视黄醇和茶多酚的吸收，通过视黄醇、茶多酚、硒蛋白形成的硒蛋白 复合物A，加入到饮料中，既进行免疫力的增强，又可以缓解狗的氧化应激 反应，提供营养物质。

将朴菇多糖与硒蛋白进行接枝共聚，脱水缩合形成了酯键，使得反应后 的产物硒蛋白复合物B具有足够的稳定性，减少了朴菇多糖在胃中被唾液淀 粉酶过多的分解，一边将足够的朴菇多糖带到小肠后进行吸收进而在狗体内 进行作用，又可以增强断奶狗崽免疫力和抗病力，从而降低断奶应激带来的 危害。

硒蛋白复合物A与硒蛋白复合物B皆以硒蛋白为载体，相似相溶，使溶 剂均匀分散在溶剂中，以及双歧杆菌微胶囊的加入，共同对狗进行作用，增 强刚断奶的狗崽的免疫力，并且降低断奶应激带来的危害。

具体实施方式

下面将结合本发明中的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、 完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全 部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造 性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

一种提升狗免疫力饮料，包括以下重量份数的原料：

5～10份双歧杆菌微胶囊、5～10份硒蛋白复合物A、5～10份硒蛋白复 合物B、2～5份视黄醇、2～5份茶多酚、2～5份朴菇多糖、1～2份香精香 料、10～15份食品添加剂、50～100份饮用水。

优选的，所述双歧杆菌微胶囊由乳清蛋白凝胶与三次加入转谷氨酰胺转氨 酶的作用下制成凝胶颗粒后进行分散制得。

优选的，所述两次加入转谷氨酰胺转氨酶一次为制备乳清蛋白凝胶时，一 次为浓缩菌液与乳清蛋白凝胶混合时，一次为制备凝胶颗粒时。

优选的，所述视黄醇茶多酚酯为视黄醇与茶多酚进行烷基化反应制得。

优选的，硒蛋白复合物B是朴菇多糖与硒蛋白进行接枝共聚制得。

本发明第二方面提供一种提升狗免疫力饮料的制备方法，包括以下步骤：

(1)先配置浓度为10％的乳清蛋白溶液，将溶液在80℃下热变形30min，冷 却至室温后，用氢氧化钠调节pH至7.0或8.0，然后加入转谷氨酰胺转氨酶， 在40℃下处理2h，得到乳清蛋白凝胶；

(2)将冷冻保藏的双歧杆菌在MRSC琼脂培养基上进行48h的厌氧培养后， 选择单菌在MRSC液体培养基中进行37℃下厌氧培养24h，按1.0％的接种量 再次转移至新的MRSC液体培养基进行增殖培养，12h后将处于对数末期的 菌悬液在4℃，8000rpm的条件下，离心10min，菌泥用无菌的NaCl溶液洗 涤两次后，重悬于无菌水中，得到浓缩菌液；

(3)将浓缩菌液与乳清蛋白凝胶混合，快速加入转谷氨酰胺转氨酶，并旋涡 震荡使其转换均匀，将此混合液加入到盛有150g预热的大豆油的锥形瓶中， 在磁力搅拌的作用下(900rpm，40℃)，反应180min，待液滴在酶的作用下 转化为凝胶颗粒后进行离心，收集微胶囊粒并用林格式试剂清洗两次，再次 进行震荡、离心，得到双歧杆菌微胶囊，储藏于4℃备用；

(4)将茶多酚、乙酸乙酯、视黄醇处于绝对干燥的环境中混合，搅拌加热到 50℃，搅拌时间为2h，加入三乙胺调节溶液的pH值，冷却至室温，将溶液 转移至分液漏斗，再加入30℃的适量去离子水，摇匀，静置分层，放出下层 液，在反复水洗至滤液呈中性，然后将上层液转移至旋转蒸发仪中进行负压 蒸馏，至无溶剂乙酸乙酯时，得到丙烯酰茶多酚酯；

(5)将视黄醇茶多酚酯溶液与硒蛋白溶液等比例混合，高速搅拌2～4h， 120℃干燥24h，得到硒蛋白复合物A；

(6)将朴菇多糖研磨成粉与硒蛋白等比例混合，搅拌均匀后冻干，重新研磨， 置于湿度79％的饱和食盐水溶液中，在温度60℃的恒温烘箱中反应7d，反应 结束后立即放置在零下40℃的冰箱中冷冻1h，最后进行冻干、磨碎得到硒蛋 白复合物B；

(7)将双歧杆菌微胶囊、硒蛋白复合物A、硒蛋白复合物B溶于饮用水中， 体积比为1：1：1：10，加入香精香料与食品添加剂混合均匀，制得成品。

优选的，所述步骤(1)中：乳清蛋白溶液与转谷氨酰胺转氨酶摩尔比为 10：1。

优选的，所述步骤(3)中：浓缩菌液与乳清蛋白凝胶混合的体积比为1： 15，转谷氨酰胺转氨酶与混合液的体积比为1：20。

优选的，所述步骤(4)中：茶多酚、乙酸乙酯、视黄醇质量比为1：1.2： 3。

实施例1：提升狗免疫力饮料一：

一种提升狗免疫力饮料，该饮料组分以重量份计：

双歧杆菌微胶囊重量分数为5份、硒蛋白复合物A重量分数为5份、硒 蛋白复合物B重量分数为5份、视黄醇重量分数为2份、茶多酚重量分数为2份、朴菇多糖重量分数为2份、香精香料重量分数为1份、食品添加剂重 量分数为10份、饮用水重量分数为50份。

该饮料的制备方法如下：

(1)先配置浓度为10％的乳清蛋白溶液，将溶液在80℃下热变形30min，冷 却至室温后，用氢氧化钠调节pH至7.0，然后加入转谷氨酰胺转氨酶，乳清 蛋白溶液与转谷氨酰胺转氨酶摩尔比为10：1，在40℃下处理2h，得到乳清 蛋白凝胶；

(2)将冷冻保藏的双歧杆菌在MRSC琼脂培养基上进行48h的厌氧培养后， 选择单菌在MRSC液体培养基中进行37℃下厌氧培养24h，按1.0％的接种量 再次转移至新的MRSC液体培养基进行增殖培养，12h后将处于对数末期的 菌悬液在4℃，8000rpm的条件下，离心10min，菌泥用无菌的NaCl溶液洗 涤两次后，重悬于无菌水中，得到浓缩菌液；

(3)将浓缩菌液与乳清蛋白凝胶混合，浓缩菌液与乳清蛋白凝胶混合的体积 比为1：15，快速加入转谷氨酰胺转氨酶，转谷氨酰胺转氨酶与混合液的体 积比为1：20，并旋涡震荡使其转换均匀，将此混合液加入到盛有150g预热 的大豆油的锥形瓶中，在磁力搅拌的作用下(900rpm，40℃)，反应180min， 待液滴在酶的作用下转化为凝胶颗粒后进行离心，收集微胶囊粒并用林格式 试剂清洗两次，再次进行震荡、离心，得到双歧杆菌微胶囊，储藏于4℃备 用；

(4)将茶多酚、乙酸乙酯、视黄醇处于绝对干燥的环境中混合，茶多酚、乙 酸乙酯、视黄醇质量比为1：1.2：3，搅拌加热到50℃，搅拌时间为2h，加 入三乙胺调节溶液的pH值，冷却至室温，将溶液转移至分液漏斗，再加入 30℃的适量去离子水，摇匀，静置分层，放出下层液，在反复水洗至滤液呈 中性，然后将上层液转移至旋转蒸发仪中进行负压蒸馏，至无溶剂乙酸乙酯 时，得到丙烯酰茶多酚酯；

(5)将视黄醇茶多酚酯溶液与硒蛋白溶液等比例混合，高速搅拌2～4h， 120℃干燥24h，得到硒蛋白复合物A；

(6)将朴菇多糖研磨成粉与硒蛋白等比例混合，搅拌均匀后冻干，重新研磨， 置于湿度79％的饱和食盐水溶液中，在温度60℃的恒温烘箱中反应7d，反应 结束后立即放置在零下40℃的冰箱中冷冻1h，最后进行冻干、磨碎得到硒蛋 白复合物B；

(7)将重量分数为5份的双歧杆菌微胶囊、5份的硒蛋白复合物A、5份的 硒蛋白复合物B溶于50份的饮用水中，加入1粉香精香料与10粉食品添加 剂混合均匀，制得成品。

实施例2：提升狗免疫力饮料二：

一种提升狗免疫力饮料，该饮料组分以重量份计：

双歧杆菌微胶囊重量分数为10份、硒蛋白复合物A重量分数为10份、 硒蛋白复合物B重量分数为10份、视黄醇重量分数为5份、茶多酚重量分数 为5份、朴菇多糖重量分数为5份、香精香料重量分数为2份、食品添加剂 重量分数为15份、饮用水重量分数为100份。

该饮料的制备方法如下：

(1)先配置浓度为10％的乳清蛋白溶液，将溶液在80℃下热变形30min，冷 却至室温后，用氢氧化钠调节pH至8.0，然后加入转谷氨酰胺转氨酶，乳清 蛋白溶液与转谷氨酰胺转氨酶摩尔比为10：1，在40℃下处理2h，得到乳清 蛋白凝胶；

(2)将冷冻保藏的双歧杆菌在MRSC琼脂培养基上进行48h的厌氧培养后， 选择单菌在MRSC液体培养基中进行37℃下厌氧培养24h，按1.0％的接种量 再次转移至新的MRSC液体培养基进行增殖培养，12h后将处于对数末期的 菌悬液在4℃，8000rpm的条件下，离心10min，菌泥用无菌的NaCl溶液洗 涤两次后，重悬于无菌水中，得到浓缩菌液；

(3)将浓缩菌液与乳清蛋白凝胶混合，浓缩菌液与乳清蛋白凝胶混合的体积 比为1：15，快速加入转谷氨酰胺转氨酶，转谷氨酰胺转氨酶与混合液的体 积比为1：20，并旋涡震荡使其转换均匀，将此混合液加入到盛有150g预热 的大豆油的锥形瓶中，在磁力搅拌的作用下(900rpm，40℃)，反应180min， 待液滴在酶的作用下转化为凝胶颗粒后进行离心，收集微胶囊粒并用林格式 试剂清洗两次，再次进行震荡、离心，得到双歧杆菌微胶囊，储藏于4℃备 用；

(4)将茶多酚、乙酸乙酯、视黄醇处于绝对干燥的环境中混合，茶多酚、乙 酸乙酯、视黄醇质量比为1：1.2：3，搅拌加热到50℃，搅拌时间为2h，加 入三乙胺调节溶液的pH值，冷却至室温，将溶液转移至分液漏斗，再加入 30℃的适量去离子水，摇匀，静置分层，放出下层液，在反复水洗至滤液呈 中性，然后将上层液转移至旋转蒸发仪中进行负压蒸馏，至无溶剂乙酸乙酯 时，得到丙烯酰茶多酚酯；

(5)将视黄醇茶多酚酯溶液与硒蛋白溶液等比例混合，高速搅拌2～4h， 120℃干燥24h，得到硒蛋白复合物A；

(6)将朴菇多糖研磨成粉与硒蛋白等比例混合，搅拌均匀后冻干，重新研磨， 置于湿度79％的饱和食盐水溶液中，在温度60℃的恒温烘箱中反应7d，反应 结束后立即放置在零下40℃的冰箱中冷冻1h，最后进行冻干、磨碎得到硒蛋 白复合物B；

(7)将重量分数为10份的双歧杆菌微胶囊、10份的硒蛋白复合物A、10份 的硒蛋白复合物B溶于100份的饮用水中，加入2粉香精香料与15粉食品添 加剂混合均匀，制得成品。

对比例1

对比例1的处方组成同实施例1。该饮料的的制备方法与实施例1的区 别仅在于不进行步骤(4)的制备，步骤(7)直接使用视黄醇与硒蛋白 制备的复合物进行制备，其余制备步骤同实施例1。

对比例2

对比例2的处方组成同实施例1。该饮料的的制备方法与实施例1的区 别仅在于不进行步骤(6)的制备，步骤(7)仅使用双歧杆菌微胶囊与 硒蛋白复合物A进行制备，其余制备步骤同实施例1。

对比例3

对比例3的处方组成同实施例1。该饮料的的制备方法与实施例1的区 别仅在于步骤(6)的制备，选用普通蛋白质与朴菇多糖进行接枝共聚， 其余制备步骤同实施例1。

试验例1

1、试验方法

实施例1与对比例1、2为对照试验，称取10mL的实施例1与对比例1、 2制备的饮料，对狗幼崽进行前腔静脉无菌采血15mL，用肝素抗凝，制成血 浆，利用全自动血液生化分析仪，按照相关试剂盒说明，测定血浆中的免疫 球蛋白IgG、IgM和IgA的含量。

2、试验结果

实施例1与对比例1、2制备的血浆中的免疫球蛋白IgG、IgM和IgA 的含量值参见表1。

表1免疫球蛋白IgG、IgM和IgA的含量

通过实施例1与对比例1、2制备的血浆中的免疫球蛋白IgG、IgM和IgA 对比，实施例1制备的血浆中的免疫球蛋白的含量最高，说明本发明使用的 硒蛋白复合物，可以最大程度上的增强狗幼崽的免疫球蛋白的产生，预示着 本发明提升狗免疫力饮料，具有较强增强免疫力的能力。

试验例2

1、试验方法

实施例1与对比例3为对照试验，分别取10mL、20mL、30mL实施例1 与对比例3制备的饮料进行低速离心，静置7d，将实施例1与对比例3进行 酸水解为还原糖，在碱性的条件下加热，加入酒石酸钾，搅拌反应完全后， 进行离心、干燥，将固体物质称重对比。

2、试验结果

实施例1与对比例3测定朴菇多糖还原后产生的固体物质进行重量对 比值参见表2。

表2固体物质重量

通过实施例1与对比例3测定朴菇多糖还原后产生的固体物质进行重 量对比，可以明显发现实施例1与对比例3得到的固体物质重量差异较大， 说明对比例3制备的饮料存在不均匀的状况，而实施例1则相对稳定，预示 着本发明制备的提升狗免疫力饮料，溶剂分散均匀，使得作用效果良好。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限 制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的 技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或 者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作 的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。