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BRM靶向化合物和相关使用方法

文献发布时间：2023-06-19 09:23:00

相关申请的交叉引用

本申请要求2018年4月1日提交的标题为“BRM TARGETING PROTAC COMPOUNDS ANDASSOCIATED METHODS OF USE”的美国临时专利申请序列号62/651,186和2019年1月28日提交的标题为“BRM TARGETING PROTAC COMPOUNDS AND ASSOCIATED METHODS OF USE”的美国临时专利申请序列号62/797,754的权益，这两篇临时专利申请均以引用方式全文并入本文。

技术领域

本说明书提供了包含靶蛋白结合部分和E3泛素连接酶结合部分的双官能化合物，以及相关使用方法。双官能化合物可用作靶向泛素化的调节剂，尤其是关于酵母交配型转换/蔗糖不发酵复合物(SWI/SNF)相关的染色质亚家族A成员2的基质相关肌动蛋白依赖调节剂(SMARCA2)(即，BRAHMA或BRM)，它们被根据本公开的双官能化合物降解和/或以其他方式抑制。

背景技术

大多数小分子药物在紧密和明确界定的口袋中结合酶或受体。另一方面，由于其大接触表面以及所牵涉的浅沟或平坦界面，蛋白质-蛋白质相互作用众所周知难以使用小分子靶向。E3泛素连接酶(其中数百种在人中已知)赋予关于泛素化的底物特异性，并且因此，由于其对于某些蛋白质底物的特异性，是比一般蛋白酶体抑制剂更有吸引力的治疗靶。E3连接酶配体的开发已证明是挑战性的，部分是由于它们必须破坏蛋白质-蛋白质相互作用的事实。然而，最近的发展已提供了与这些连接酶结合的特异性配体。例如，自从发现第一个小分子E3连接酶抑制剂nutlin以来，已报道了靶向E3连接酶的另外化合物，但该领域仍是发展不完全的。例如，自从发现第一个小分子E3连接酶小鼠双微体2同源物(MDM2)抑制剂Nutlin以来，已报道了靶向MDM2(即人双微体2或HDM2)E3连接酶的另外化合物(J.Di等人，Current Cancer Drug Targets(2011),11(8),987-994)。

具有令人兴奋的治疗潜力的一种E3连接酶是希佩尔-林道(von Hippel-Lindau,VHL)肿瘤抑制因子，E3连接酶复合物VCB的底物识别亚基，其也由延伸蛋白B和C、Cul2和Rbx1组成。VHL的主要底物是缺氧诱导因子1(HIF-1α)，其是响应低氧水平上调基因例如促血管生成生长因子VEGF和红血细胞诱导细胞因子促红细胞生成素的转录因子。生成针对E3连接酶的底物识别亚基的希佩尔-林道(VHL)的第一个小分子配体，并且获得晶体结构，证实该化合物模拟转录因子HIF-1α(VHL的主要底物)的结合模式。

双官能化合物(诸如美国专利申请公布2015-0291562和2014-0356322(以引用方式并入本文)中描述的那些)用于将内源蛋白质募集到E3泛素连接酶上以进行降解。确切地说，本公布提供了双官能或蛋白分解靶向嵌合(PROTAC)化合物，其适用作多种多肽和其他蛋白质的靶向泛素化调节剂，所述多肽和其他蛋白质在靶向泛素化之后被双官能化合物降解和/或以其他方式抑制。

酵母交配型转换/蔗糖不发酵复合物(SWI/SNF)是一种多亚基复合物，其通过两个相互排斥的解旋酶/ATP酶催化亚基SWI/SNF相关的染色质亚家族A成员2的基质相关肌动蛋白依赖调节剂(SMARCA2、BRAHMA或BRM)和SWI/SNF相关的染色质亚家族A成员4的基质相关肌动蛋白依赖调节剂(SMARCA4或BRG1)的活性来调节染色质结构。核心和调节亚基将ATP水解与组蛋白-DNA接触的扰动偶联起来，从而提供了转录因子和同源DNA元件的接入点，其促进了基因激活和抑制。

在将近20％的所有癌症中观察到编码二十个典型SWI/SNF亚基的基因中的突变，其中在横纹肌样瘤、女性癌症(包括卵巢癌、子宫癌、子宫颈癌和子宫内膜癌)、肺腺癌、胃腺癌、黑素瘤、食道癌和特征性透明细胞癌中观察到最高频率突变。尽管SMARCA2和SMARCA4具有高度的同源性和推测的重叠功能，但据报道它们在癌症中具有不同的作用。例如，SMARCA4在原发性肿瘤中经常发生突变，而SMARCA2失活在肿瘤发展中很少发生。实际上，已经显示许多类型的癌症是SMARCA4相关的(例如，具有SMARCA4突变或SMARCA4缺陷(诸如缺乏表达)的癌症)，包括例如肺癌(诸如非小细胞癌)。

SMARCA2已被证明是SMARCA4相关或突变癌细胞系中最重要的必需基因之一。这是因为SMARCA4缺陷患者群体或细胞仅依赖SMARCA2活性，即，SMARCA2更多地掺入复合物中以补偿SMARCA4缺陷。因此，SMARCA2可以靶向SMARCA4相关/缺陷性癌症。导致细胞死亡的两个(或多个)基因表达缺陷的共同发生被称为合成致死性。因此，在某些SMARCA2/SMARCA4相关的癌症的治疗中，可以利用合成致死性。

对于可通过抑制或降解SMARCA2(即BRAHMA或BRM)治疗的疾病的有效治疗存在持续的需求。然而，非特异性作用以及不能靶向和调节SMARCA2仍然阻碍着有效治疗剂的开发。因此，靶向SMARCA2并且利用或增强VHL的底物特异性的小分子治疗剂将是非常有用的。

发明内容

本公开描述了双官能化合物及其使用方法，所述双官能化合物用于将内源蛋白质募集到E3泛素连接酶上以进行降解。确切地说，本公开提供了双官能或蛋白分解靶向嵌合(PROTAC)化合物，其适用作多种多肽和其他蛋白质的靶向泛素化调节剂，所述多肽和其他蛋白质在靶向泛素化之后被如本文所述的双官能化合物降解和/或以其他方式抑制。本文所提供化合物的优势在于，与来自几乎任何蛋白质类别或家族的靶向多肽的降解/抑制一致，可以存在广谱药理学活性。另外，本说明书提供了使用有效量的如本文所述的化合物来治疗或改善疾病状况的方法，所述疾病状况诸如癌症，例如SMARCA4相关/缺陷性癌症，诸如肺癌或非小细胞肺癌。

因此，在一个方面，本公开提供了双官能或PROTAC化合物，该化合物包含E3泛素连接酶结合部分(即，E3泛素连接酶的配体或“ULM”基团)和靶蛋白结合部分(即，蛋白质/多肽靶向配体或“PTM”基团)，使得靶蛋白/多肽被置于泛素连接酶附近以实现该蛋白的降解(和抑制)。在一个优选的实施方案中，ULM(泛素化连接酶调节剂)可以是希佩尔-林道E3泛素连接酶(VHL)结合部分(VLM)。例如，双官能化合物的结构可以描绘为：

如本文中所图示的PTM和ULM部分的相应位置以及其数目仅为了举例而提供，并非旨在以任何方式限制所述化合物。如本领域技术人员所理解的，可以合成如本文所述的双官能化合物，使得各个官能部分的数目和位置可以根据需要而变。

在某些实施方案中，双官能化合物还包含化学接头(“L”)。在该实例中，双官能化合物的结构可以描绘为：

其中PTM是蛋白质/多肽靶向部分，L是接头，例如偶联PTM和ULM的键或化学基团，并且ULM是希佩尔-林道E3泛素连接酶(VHL)结合部分(VLM)。

例如，双官能化合物的结构可以描绘为：

其中：PTM是蛋白质/多肽靶向部分；“L”是偶联PTM和VLM的接头(例如，键或化学接头基团)，其中VLM是结合VHL E3连接酶的希佩尔-林道E3泛素连接酶结合部分。

在某些实施方案中，如本文所述的化合物包含多个独立选择的ULM、多个PTM、多个化学接头或它们的组合。

在另外的实施方案中，VLM可以是羟脯氨酸或其衍生物。此外，其他设想的VLM包含在美国专利申请公布No.2014/03022523中，如上所述，该申请公布全文并入本文。

在某些实施方案中，“L”是键。在另外的实施方案中，接头“L”是具有1至20范围内的线性非氢原子数的连接子。连接子“L”可包含但不限于官能团，例如醚、酰胺、烷烃、烯烃、炔烃、酮、羟基、羧酸、硫醚、亚砜和砜。接头可包含芳族、杂芳族、环状、双环和三环部分。卤素如Cl、F、Br和I的取代可包含在接头中。在氟取代的情况下，可包含单个或多个氟。

在某些实施方案中，VLM是反式-3-羟脯氨酸的衍生物，其中反式-3-羟脯氨酸中的氮和羧酸都被官能化为酰胺。

在另一方面，本说明书提供了治疗组合物，其包含有效量的如本文所述化合物或其盐形式和药学上可接受的载体。治疗组合物调节患者或受试者(例如动物，例如人)中的蛋白质降解和/或抑制，并且可以用于治疗或改善通过降解/抑制的蛋白质调节的疾病状态或状况。在某些实施方案中，如本文所述的治疗组合物可用于实现所关注蛋白质的降解，以治疗或改善疾病，例如癌症(包括SWI/SNF相关癌症、具有SMARCA4突变的癌症、具有SMARCA4缺陷的癌症或它们的组合中的至少一种)，诸如肺癌(例如非小细胞肺癌)。在又一方面，本公开提供了泛素化/降解细胞中的靶蛋白的方法。在某些实施方案中，该方法包括施用如本文所述的双官能化合物，该双官能化合物包含优选通过接头部分连接的VLM，如本文其他地方所述，其中VLM通过接头偶联至PTM以靶向蛋白质以进行降解。当靶蛋白被置于E3泛素连接酶附近时，将发生靶蛋白的降解，从而导致靶蛋白的作用的降解/抑制和蛋白质水平的控制。通过本公开提供的蛋白质水平的控制提供了疾病状态或状况的治疗，其通过降低患者细胞中该蛋白质的水平而通过靶蛋白调节。

在另一方面，本说明书提供了用于治疗或改善受试者或患者(例如动物，例如人类)的疾病、病症或其症状的方法，该方法包括向有需要的受试者施用组合物，该组合物包含有效量(例如治疗有效量)的本文所述化合物或其盐形式，和药学上可接受的载体，其中所述组合物能够有效治疗或改善受试者的疾病或病症或其症状。

在另一方面，本说明书提供了使用根据本公开的化合物鉴别生物系统中的所关注蛋白质降解的影响的方法。

前述一般实用领域仅为了举例而给出，并且不希望对本公开的范围和所附权利要求书构成限制。根据本权利要求、说明书和实例，本领域普通技术人员将了解与本公开的组合物、方法和方法相关的另外目的和优点。例如，本公开的各个方面和实施方案可以众多组合利用，所有这些组合都由本说明书明确地加以考虑。这些另外的方面和实施方案明确地包含在本公开的范围内。本文用于阐明本公开的背景并且在特定情况下提供关于实践的另外细节的出版物和其他材料以引用方式并入。

附图说明

并入本说明书中且构成本说明书的一部分的附图示出了本公开的若干实施方案，并且连同本说明书一起用于解释本公开的原理。附图仅用于示出本公开的实施方案的目的，并且不应理解为对本公开的限制。根据与附图结合的下述详细描述，本公开的另外的目的、特征和优点将变得显而易见，所述附图示出了本公开的例示性实施方案，其中：

图1A和图1B。PROTAC功能的一般原理的图示。(A)示例性PROTAC包含蛋白质靶向部分(PTM；深色阴影矩形)、泛素连接酶结合部分(ULM；浅色阴影三角形)和任选的将PTM偶联或束缚至ULM的接头部分(L；黑线)。(B)示出了如本文所述的PROTAC的功能用途。简而言之，ULM识别并结合特定的E3泛素连接酶，并且PTM结合并募集靶蛋白，使其紧密接近E3泛素连接酶。典型地，E3泛素连接酶与E2泛素结合的蛋白质复合，且单独或通过E2蛋白质催化泛素(深色圆圈)连接到靶蛋白上的赖氨酸，此连接是通过异肽键达成。然后靶向聚泛素化蛋白质(最右侧)以便细胞的蛋白酶体机器使其降解。

具体实施方式

下述是提供以帮助本领域技术人员实践本公开的详细描述。本领域普通技术人员可以在本文描述的实施方案中进行修改和变化，而不脱离本公开的实质或范围。本文提及的所有出版物、专利申请、专利、附图和其他参考文献均全文以引用方式明确并入。

本发明描述了组合物和方法，所述组合物和方法涉及E3泛素连接酶蛋白(例如，希佩尔-林道E3泛素连接酶(VHL))一旦与靶蛋白通过结合E3泛素连接酶蛋白和靶蛋白的双官能或嵌合构建体邻近定位就会使靶蛋白泛素化的惊人和意外发现。因此，本公开提供了此类化合物和组合物，其包含偶联至蛋白质靶标结合部分(“PTM”)的E3泛素连接酶靶向部分(“ULM”)，这将引起所选靶蛋白的泛素化，从而导致靶蛋白被蛋白酶体降解(参见图1)。本公开还提供了组合物文库及其用途。

在某些方面，本公开提供了包含配体诸如小分子配体(即，分子量低于2,000、1,000、500或200道尔顿)的化合物，所述配体能够与泛素连接酶诸如VHL结合。该化合物还包含能够与靶蛋白结合的部分，以这样的方式使得靶蛋白置于泛素连接酶附近，以实现该蛋白的降解(和/或抑制)。除上述之外，小分子还可以意指该分子是非肽基的，即，它一般不视为肽，例如包含少于4、3或2个氨基酸。根据本说明书，PTM、ULM或PROTAC分子可以是小分子。

除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语具有与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解相同的含义。本说明书中所用的术语仅用于描述特定实施方案，并非旨在限制本公开。

在提供值范围时，应当理解，在本公开内涵盖了每个中间值，至下限单位的十分之一，除非上下文另有明确规定(例如在含有多个碳原子的基团的情况下，在这种情况下，提供了落入该范围内的每个碳原子数)，在该范围的上限和下限之间，以及在该所述范围内的任何其他所述值或中间值。可以独立地包括在较小范围内的这些较小范围的上限和下限也涵盖在本公开内，遭受在所述范围内的任何特别排除的限制。当所述范围包括限制之一或两者时，排除这两个限制中任一的范围也包括在本公开中。

下述术语用于描述本公开。在其中术语在本文中没有具体定义的情况下，该术语给予由普通技术人员在描述本公开中其使用的背景下应用该术语的领域公认含义。

如本文和所附权利要求中使用的冠词“一个”和“一种”在本文中用于指冠词的一个或多于一个(即，至少一个)语法对象，除非上下文另有明确说明。例如，“要素”意指一个要素或多于一个要素。

如本文在说明书和权利要求中所用，短语“和/或”应理解为意指如此结合的要素中的“任一者或两者”，即在某些情况下结合地存在且在其他情况下分离地存在的要素。用“和/或”列出的多个要素应该以相同的方式加以解释，即，如此结合的“一个或多个”要素。除了由“和/或”子句具体鉴定的要素之外，可以任选地存在其他要素，无论与具体鉴定的那些要素相关还是不相关。因此，作为非限制性实例，当与开放式语言例如“包含”结合使用时，对“A和/或B”的提及可以在一个实施方案中仅指A(任选地包括除了B之外的要素)；在另一个实施方案中仅指B(任选地包括除了A之外的要素)；在再一个实施方案中指A和B两者(任选地包括其他要素)；等。

如本文在说明书和权利要求中使用的，“或”应该理解为具有与如上定义的“和/或”相同的含义。例如，当分开列表中的项目时，“或”或“和/或”应该解释为包含性的，即包含至少一个，但也包括许多要素或要素列表的多于一个，以及任选地，另外未列出的项目。只有明确指出相反的术语，例如“仅一个”或“恰好一个”，或者，当在权利要求中使用时，“由……组成”指许多要素或要素列表的恰好一个要素。一般而言，当之前为排他性术语例如“任一”、“之一”、“仅一个”或“恰好一个”时，如本文使用的，术语“或”应该仅解释为指示排他性替代物(即“一个或另一个但不是两者”)。

在权利要求以及上文说明书中，所有过渡短语、例如“包含”、“包括”、“携带”、“具有”、“含有”、“涉及”、“持有”、“组成”等等应理解为开放式的，即，意指包括但不限于。仅过渡短语“由……组成”和“基本上由……组成”应该分别为闭合式或半闭合式过渡短语，如美国专利局专利审查程序手册(United States Patent Office Manual of PatentExamining Procedures)第2111.03节中所述。

如本文在说明书和权利要求中使用的，提及一个或多个要素的列表，短语“至少一个”应该理解为意指选自要素列表中的任何一个或多个要素的至少一个要素，但不一定包括要素列表中具体列出的每个和每一个要素中的至少一个，并且不排除要素列表中的任何要素组合。该定义还允许除了在短语“至少一个”所指的要素列表内具体鉴定的要素之外，可以任选地存在无论与具体鉴定的那些要素相关还是不相关的要素。因此，作为非限制性实例，“A和B中的至少一个”(或等价地，“A或B中的至少一个”，或等价地“A和/或B中的至少一个”)在一个实施方案中，可以指至少一个，任选地包括多于一个A，而不存在B(并且任选地包括除了B之外的要素)；在另一个实施方案中，指至少一个，任选地包括多于一个B，而不存在A(并且任选地包括除了A之外的要素)；在再一个实施方案中，指至少一个，任选地包括多于一个A，以及至少一个，任选地包括多于一个B(以及任选地包括其他要素)；等。

还应该理解，在本文描述的包括多于一个步骤或动作的某些方法中，该方法的步骤或动作的次序不一定限于其中叙述该方法的步骤或动作的次序，除非上下文另有说明。

术语“共同施用”或“联合疗法”指并行施用(同时施用两种或更多种治疗剂)和不同时间施用(一种或多种治疗剂的施用时间不同于其他治疗剂或药剂的施用时间)，只要治疗剂在一定程度上，优选按照有效量同时存在于患者中。在某些优选方面，本文所述的一种或多种本发明化合物与至少一种其他生物活性剂(尤其包括抗癌剂)联合共同施用。在特别优选的方面，化合物的共同施用产生协同活性和/或治疗(包括抗癌)活性。

除非另外说明，否则如本文所用，术语“化合物”是指本文所公开的任何具体化合物，并且包括其互变异构体、区域异构体、几何异构体和适用的立体异构体，包括光学异构体(对映体)和其他立体异构体(非对映体)，以及在上下文中，适用的可药用盐及其衍生物(包括前药形式)。设想的氘代小分子是其中药物分子中包含的一个或多个氢原子已被氘取代的那些。

在其在上下文中的使用内，术语化合物一般指单一化合物，但也可包括其他化合物，例如立体异构体、区域异构体和/或光学异构体(包括外消旋混合物)以及所公开化合物的特定对映体或富含对映体的混合物。在上下文中，该术语还指已进行修饰以促进化合物对活性部位的施用和递送的化合物的前药形式。应注意，在描述本文化合物中，尤其描述了许多取代基以及与其相关的变量。普通技术人员应理解，本文所述的分子是如下文一般描述的稳定化合物。示出键时，双键和单键均在所示化合物和众所周知的价态相互作用规则的背景内表示或理解。

术语“泛素连接酶”是指促进泛素向特定底物蛋白质的转移以靶向底物蛋白质从而进行降解的蛋白质家族。例如，E3泛素连接酶蛋白，其单独或与E2泛素缀合酶组合引起泛素与靶蛋白上的赖氨酸的附接，并且随后靶向特定蛋白质底物以被蛋白酶体降解。因此，单独或与E2泛素缀合酶复合的E3泛素连接酶负责泛素至靶蛋白的转移。一般而言，泛素连接酶涉及多泛素化，使得第二泛素附接于第一泛素；第三泛素附接于第二泛素，如此等等。多泛素化将蛋白质标记用于被蛋白酶体降解。然而，存在一些泛素化事件，其限于单泛素化，其中仅单个泛素通过泛素连接酶加入底物分子。单泛素化蛋白质不被靶向蛋白酶体进行降解，而是可以在其细胞位置或功能方面改变，例如，经由结合具有能够结合泛素的结构域的其他蛋白质。更复杂的是，泛素的不同赖氨酸可被E3靶向以制备链。最常见的赖氨酸是泛素链上的Lys48。这是用于制备被蛋白酶体识别的聚泛素的赖氨酸。如本文所用，除非另有说明，否则术语“烷基”本身或作为另一种取代基的一部分意指具有指定碳原子数的直链或支链烃基(即C

2016年8月5日提交的美国专利申请序列号15/230,354；以及2014年7月11日提交的美国专利申请序列号14/371,956，公布为美国专利申请公布号2014/0356322；以及2016年3月18日提交的美国专利申请序列号15/074,820，公布为美国专利申请公布号2016/0272639；以及2016年2月24日提交的国际专利申请号PCT/US2016/019328，公布为国际专利申请公布号WO2016/138114；以及2016年3月18日提交的国际专利申请号PCT/US2016/023258，公布为国际专利申请公布号WO2016/149668；以及2018年1月31日提交的美国非临时专利申请号15/885,671，公布为美国专利申请公布号2018/0215731，这些文献全部以引用方式全文并入本文。此外，本文引用的所有参考文献都以引用的方式整体并入本文。

如与本文定义的取代基结合使用的，术语“任选被取代的”是指该取代基可以但不必须被一个或多个合适的官能团或本文提供的其他取代基取代。例如，取代基可任选地被以下基团中的一个或多个取代：卤素、氰基、C

如本文所用，术语“环烷基”是指C

如本文所用，术语“烯基”是指C

如本文所用，术语“炔基”是指C

术语“烷氧基”、“烷基氨基”和“烷硫基”以其常规含义使用，并且是指经由氧原子(氧代”)、氨基基团(“氨基”)或硫代基团与分子的其余部分连接的那些烷基。术语“烷基氨基”包括单烷基氨基基团、二烷基氨基基团，烷基部分可以相同或不同。

除非另有说明，否则术语“卤代”本身或作为另一取代基的一部分是指氟、氯、溴或碘原子，但优选氟或氯。

术语“卤代(C

术语“杂烷基”是指直链或支链烷基基团，例如在链中具有2至14个碳(例如2至10个碳)，其中一个或多个已被选自S、O、P和N的杂原子取代。示例性杂烷基包括烷基醚、仲烷基胺和叔烷基胺、烷基酰胺、烷基硫化物等。该基团可以是末端基团或桥联基团。如本文所用，当在桥联基团的上下文中使用时，提及正链是指连接桥联基团的两个末端位置的原子的直接链。

如本文所用，术语“芳基”是指单个全碳芳环或多个稠合全碳环体系，其中至少一个环是芳族环。例如，在某些实施方案中，芳基基团具有6至12个碳原子。芳基包括苯基。芳基还包括具有约9至12个碳原子的多稠环体系(例如，包含2、3或4个环的环体系)，其中至少一个环是芳族环，并且其中其他环可以是芳族环或不是芳族环。这样的多稠环体系任选地在该多稠环体系的任何碳环部分上被一个或多个(例如1、2或3)氧代基团取代。当价数要求允许时，多稠环体系的环可以通过稠合、螺环和桥键相互连接。应当理解，如上文所定义的，多稠环体系的附接点可以在环体系的任何位置，包括环的芳族部分或碳环部分。芳基基团的非限制性实例包括但不限于苯基、茚基、萘基、1,2,3,4-四氢萘基等。

如本文所用，术语“杂芳基”是指在环中具有除碳以外的至少一个原子的单个芳族环，其中该原子选自氧、氮和硫；“杂芳基”还包括具有至少一个这样的芳族环的多稠环体系，该多稠环体系在下面进一步描述。因此，“杂芳基”包括具有约1至6个碳原子和选自氧、氮和硫的约1-4个杂原子的单芳环。如果环是芳族环，则硫和氮原子也可以氧化形式存在。示例性杂芳基环体系包括但不限于吡啶基、嘧啶基、噁唑基或呋喃基。“杂芳基”还包括多稠环体系(例如，包含2、3或4个环的环体系)，其中如上定义的杂芳基与选自杂芳基(形成例如萘啶基诸如1,8-萘啶)、杂环(形成例如1,2,3,4-四氢萘啶基诸如1,2,3,4-四氢-1,8-萘啶)、碳环(形成例如5,6,7,8-四氢喹啉基)和芳基(形成例如吲唑基)的一个或多个环稠合，形成多稠环体系。因此，杂芳基(单芳环或多稠环体系)在杂芳基环内具有约1-20个碳原子和约1-6个杂原子。杂芳基(单芳环或多稠环体系)在杂芳基环内还可具有约5至12或约5至10个成员。多稠环体系可任选地被稠环的碳环或杂环部分上的一个或多个(例如1、2、3或4)氧代基团取代。当价数要求允许时，多稠环体系的环可以通过稠合、螺环和桥键相互连接。应当理解，多稠环体系的各个环可以以任何顺序相对于彼此连接。还应理解，多稠环体系(如上对于杂芳基所定义)的附接点可以在多稠环体系的任何位置，包括多稠环体系的杂芳基、杂环、芳基或碳环部分。还应理解，杂芳基或杂芳基多稠环体系的附接点可以在杂芳基或杂芳基多稠环体系的任何合适的原子处，包括碳原子和杂原子(例如氮)。示例性杂芳基包括但不限于吡啶基、吡咯基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、吡唑基、噻吩基、吲哚基、咪唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、呋喃基、噁二唑基、噻二唑基、喹啉基、异喹啉基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、吲唑基、喹喔啉基、喹唑啉基、5,6,7,8-四氢异喹啉基苯并呋喃基、苯并咪唑基、硫杂萘基、吡咯并[2,3-b]吡啶基、喹唑啉基-4(3H)-酮、三唑基、4,5,6,7-四氢-1H-吲唑和3b,4,4a,5-四氢-1H-环丙[3,4]环戊[1,2-c]吡唑。在一个实施方案中，术语“杂芳基”是指包含至少一个杂原子的单个芳环。例如，该术语包括包含一个或多个杂原子的5元和6元单环芳环。杂芳基的非限制性实例包括但不限于吡啶基、呋喃基、噻唑、嘧啶、噁唑和噻二唑。

如本文所用，术语“杂环基”或“杂环”是指在环中具有除碳以外的至少一个原子的单个饱和或部分不饱和的环，其中该原子选自氧、氮和硫；该术语还包括具有至少一个这样的饱和或部分不饱和环的多稠环体系，该多稠环体系在下面进一步描述。因此，该术语包括在环中具有约1至6个碳原子和约1至3个选自氧、氮和硫的杂原子的单个饱和或部分不饱和环(例如，3、4、5、6或7元环)。该环可被一个或多个(例如1、2或3个)氧代基团取代，并且硫和氮原子也可以其氧化形式存在。示例性杂环包括但不限于氮杂环丁烷基、四氢呋喃基和哌啶基。术语“杂环”还包括多稠环体系(例如，包含2、3或4个环的环体系)，其中单个杂环(如上所定义)可以与选自杂环(形成例如1,8-十氢萘啶)、碳环(形成例如十氢喹啉基)和芳基的一个或多个基团稠合，形成多稠合环体系。因此，杂环(单个饱和或单个部分不饱和的环或多稠环体系)在杂环内具有约2-20个碳原子和1-6个杂原子。这样的多稠环体系可任选地被多稠环的碳环或杂环部分上的一个或多个(例如1、2、3或4)氧代基团取代。当价数要求允许时，多稠环体系的环可以通过稠合、螺环和桥键相互连接。应当理解，多稠环体系的各个环可以以任何顺序相对于彼此连接。因此，杂环(单个饱和或单个部分不饱和的环或多稠环体系)在杂环体系内具有约3-20个原子，包括约1-6个杂原子。还应理解，多稠环体系(如上文对于杂环所定义)的附接点可以在多稠环体系的任何位置，包括环的杂环、芳基和碳环部分。还应理解，杂环或杂环多稠环体系的附接点可以在杂环或杂环多稠环体系的任何合适的原子处，包括碳原子和杂原子(例如氮)。在一个实施方案中，术语杂环包括C

如本文所用，术语“杂原子”是指包括氧(O)、氮(N)、硫(S)和硅(Si)。可行时，氮和硫可以是氧化形式。

如本文所用，术语“手性”是指具有镜像配偶体的不可重叠性的分子，而术语“非手性”是指可重叠在其镜像配体上的分子。

如本文所用，术语“立体异构体”是指具有相同化学组成，但是原子或基团在空间上的排列不同的化合物。如本文所用，交叉线

如本文所用，与化学结构中的键相交的波浪线

“非对映体”是指具有两个或更多个手性中心并且其分子不是彼此镜像的立体异构体。非对映体具有不同的物理性质，例如熔点、沸点、光谱性质和反应性。非对映体的混合物可以在高分辨率分析方法(诸如电泳和色谱法)下分离。

“对映体”是指化合物的两种立体异构体，它们是彼此不可重叠的镜像。

本文所用的立体化学定义和惯例通常遵循S.P.Parker编辑，McGraw-HillDictionary of Chemical Terms(1984)McGraw-Hill Book Company,New York；以及Eliel,E.和Wilen,S.,"Stereochemistry of Organic Compounds",John Wiley&Sons,Inc.,New York,1994。本发明的化合物可以包含不对称或手性中心，因此以不同的立体异构形式存在。意图是本发明化合物的所有立体异构形式，包括但不限于非对映体，对映体和阻转异构体以及它们的混合物，诸如外消旋混合物，均构成本发明的一部分。许多有机化合物以旋光活性形式存在，即它们具有旋转平面偏振光平面的能力。在描述旋光活性化合物时，前缀D和L或R和S用于表示分子围绕其手性中心的绝对构型。前缀d和l或(+)和(-)用来表示化合物对平面偏振光的旋转符号，其中(-)或1表示该化合物是左旋的。带有(+)或d前缀的化合物是右旋的。对于给定的化学结构，这些立体异构体是相同的，不同之处在于它们是彼此的镜像。特定的立体异构体也可以被称为对映体，并且这种异构体的混合物通常被称为对映体混合物。对映体的50:50混合物称为外消旋混合物或外消旋体，它们可以发生在化学反应或过程中没有立体选择或立体特异性的地方。术语“外消旋混合物”和“外消旋物”是指两种对映体物质的等摩尔混合物，没有旋光活性。

当以非立体化学方式(例如平坦)绘制本文化合物式中的键时，与该键连接的原子包括所有立体化学可能性。当本文化合物式中的键以定义的立体化学方式(例如粗体、粗体-楔形、虚线或虚线-楔形)绘制时，应理解，除非另有说明，否则立体化学键所连接的原子富含所描绘的绝对立体异构体。在一个实施方案中，该化合物可以是所描绘的绝对立体异构体的至少51％。在另一个实施方案中，该化合物可以是所描绘的绝对立体异构体的至少80％。在另一个实施方案中，该化合物可以是所描绘的绝对立体异构体的至少90％。在另一个实施方案中，该化合物可以是所描绘的绝对立体异构体的至少95％。在另一个实施方案中，该化合物可以是所描绘的绝对立体异构体的至少97％。在另一个实施方案中，该化合物可以是所描绘的绝对立体异构体的至少98％。在另一个实施方案中，该化合物可以是所描绘的绝对立体异构体的至少99％。

如本文所用，术语“互变异构体”或“互变异构形式”是指经由低能垒可相互转化的不同能量的结构异构体。例如，质子互变异构体(也称为质子异变互变异构体)包括经由质子迁移的相互转化，诸如酮-烯醇和亚胺-烯胺异构化。价互变异构体包括通过一些成键电子的重组而进行的相互转化。

如本文所用，术语“溶剂化物”是指一种或多种溶剂分子与本发明化合物的缔合或复合物。形成溶剂化物的溶剂的实例包括但不限于水、异丙醇、乙醇、甲醇、DMSO、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。术语“水合物”是指其中溶剂分子是水的复合物。

如本文所用，术语“保护基”是指通常用于阻断或保护化合物上的特定官能团的取代基。例如，“氨基保护基”是连接至氨基基团的取代基，其阻断或保护化合物中的氨基官能度。合适的氨基保护基包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)、苄氧羰基(CBZ)和9-芴基亚甲基氧羰基(Fmoc)。类似地，“羟基保护基”是指阻断或保护羟基官能度的羟基的取代基。合适的保护基包括乙酰基和甲硅烷基。“羧基保护基”是指阻断或保护羧基官能度的羧基基团取代基。常见的羧基保护基包括苯基磺酰基乙基、氰基乙基、2-(三甲基硅烷基)乙基、2-(三甲基硅烷基)乙氧基甲基、2-(对甲苯磺酰基)乙基、2-(对硝基苯基亚磺酰基)乙基、2-(二苯基膦基)-乙基、硝基乙基等。有关保护基及其使用的一般描述，参见P.G.M.Wuts和T.W.Greene,Greene's Protective Groups in Organic Synthesis第4版,Wiley-Interscience,New York,2006。

如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指包括根据本文所述化合物上存在的特定取代基，用相对无毒的酸或碱制备的活性化合物的盐。当本发明的化合物含有相对酸性的官能团时，可以通过使此类化合物的中性形式与足够量的纯净的或在合适的惰性溶剂中的所需碱接触来获得碱加成盐。衍生自药学上可接受的无机碱的盐的实例包括铝、铵、钙、铜、铁、亚铁、锂、镁、三价锰、二价锰、钾、钠、锌等。衍生自药学上可接受的有机碱的盐包括伯、仲和叔胺的盐，包括取代的胺、环胺、天然存在的胺等，诸如精氨酸、甜菜碱、咖啡因、胆碱、N,N'-二苄基乙二胺、二乙胺、2-二乙基氨基乙醇、2-二甲基氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基吗啉、N-乙基哌啶、还原葡糖胺、葡糖胺、组氨酸、海巴明、异丙胺、赖氨酸、甲基葡糖胺、吗啉、哌嗪、哌啶、聚胺树脂、普鲁卡因、嘌呤、可可碱、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等。当本发明的化合物含有相对碱性的官能团时，可以通过使此类化合物的中性形式与足够量的纯净的或在合适的惰性溶剂中的所需酸接触来获得酸加成盐。药学上可接受的酸加成盐的实例包括衍生自无机酸的那些酸加成盐，这些无机酸如盐酸、氢溴酸、硝酸、碳酸、一氢碳酸、磷酸、一氢磷酸、二氢磷酸、硫酸、一氢硫酸、氢碘酸或亚磷酸等；以及衍生自相对无毒的有机酸的盐，这些相对无毒的有机酸如乙酸、丙酸、异丁酸、丙二酸、苯甲酸、琥珀酸、辛二酸、富马酸、扁桃酸、邻苯二甲酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、柠檬酸、酒石酸、甲基磺酸等。还包括氨基酸的盐(诸如精氨酸盐等)和有机酸(如葡萄糖醛酸或半乳糖醛酸等)的盐(参见例如，Berge,S.M.等人，“Pharmaceutical Salts”,Journal of Pharmaceutical Science,1977,66,1-19)。本发明的某些特定化合物含有允许化合物转化成碱加成盐或酸加成盐的碱性和酸性官能团。

化合物的中性形式可通过使盐与碱或酸接触并以常规方式分离母体化合物来再生。化合物的母体形式在某些物理性质(诸如在极性溶剂中的溶解度)方面与各种盐形式不同，但是对于本发明的目的而言，这些盐与化合物的母体形式等效。

除盐形式外，本发明还提供前药形式的化合物。如本文所用，术语“前药”是指在生理条件下容易经历化学变化以提供本发明的化合物的那些化合物。另外，可以在离体环境中通过化学或生化方法将前药转化为本发明的化合物。例如，当将前药与合适的酶或化学试剂一起置于透皮贴剂储库中时，前药可被缓慢转化为本发明的化合物。

本发明的前药包括这样的化合物，其中氨基酸残基或两个或更多个(例如，两个、三个或四个)氨基酸残基的多肽链通过酰胺或酯键共价连接到本发明化合物的游离氨基、羟基或羧酸基团。氨基酸残基包括但不限于通常由三字母符号表示的20种天然存在的氨基酸，并且还包括磷酸丝氨酸、磷酸苏氨酸、磷酸酪氨酸、4-羟基脯氨酸、羟基赖氨酸、锁链素、异锁链素、γ-羧基谷氨酸、马尿酸、八氢吲哚-2-羧酸、抑胃酶氨酸、1,2,3,4-四氢异喹啉-3-羧酸、青霉胺、鸟氨酸、3-甲基组氨酸、正缬氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、瓜氨酸、同型半胱氨酸、高丝氨酸、甲基丙氨酸、对苯甲酰基苯丙氨酸、苯基甘氨酸、炔丙基甘氨酸、肌氨酸、蛋氨酸砜和叔丁基甘氨酸。

还包括其他类型的前药。例如，本发明化合物的游离羧基基团可被衍生为酰胺或烷基酯。作为另一个实例，包含自由羟基基团的本发明化合物可以通过将羟基基团转化为例如但不限于磷酸酯、半琥珀酸酯、二甲基氨基乙酸酯或磷酰氧基甲基氧羰基基团的基团而衍生为前药，如Fleisher,D.等人,(1996)Improved oral drug delivery:solubilitylimitations overcome by the use of prodrugs Advanced Drug Delivery Reviews,19:115中概述的。还包括羟基和氨基基团的氨基甲酸酯前药，以及羟基基团的碳酸酯前药、磺酸酯和硫酸酯。羟基基团衍生为(酰氧基)甲基和(酰氧基)乙基醚，其中所述酰基基团可以是任选地被包括但不限于醚、胺和羧酸官能团的基团取代的烷基酯，或者其中酰基基团为还包括如上所述的氨基酸酯。这种类型的前药描述于J.Med.Chem.,(1996),39:10中。更具体的实例包括用一个基团取代醇基基团的氢原子，所述基团诸如(C

对于前药衍生物的其他实例，参见例如a)Design of Prodrugs，由H.Bundgaard编辑，(Elsevier,1985)和Methods in Enzymology，第42卷，第309-396页，由K.Widder等人编辑，(Academic Press,1985)；b)A Textbook of Drug Design and Development，由Krogsgaard-Larsen和H.Bundgaard编辑，第5章，"Design and Application ofProdrugs"，由H.Bundgaard所写，第113-191页(1991)；c)H.Bundgaard,Advanced DrugDelivery Reviews,8:1-38(1992)；d)H.Bundgaard等人，Journal of PharmaceuticalSciences,77:285(1988)；以及e)N.Kakeya等人，Chem.Pharm.Bull.,32:692(1984)，这些文献中的每一篇均特别地以引用方式并入本文。

另外，本发明提供了本发明化合物的代谢物。如本文所用，“代谢物”是指通过特定化合物或其盐在体内代谢产生的产物。这样的产物可以例如由所施用化合物的氧化、还原、水解、酰胺化、脱酰胺、酯化、脱酯化、酶促裂解等产生。

代谢产物通常通过制备放射性标记(例如

术语“患者”或“受试者”在说明书自始至终用于描述用根据本公开的组合物对其提供治疗，包括预防性治疗的动物，优选人或驯养动物。对于特定动物(例如人患者)特异性的那些感染、状况或疾病状态的治疗，术语患者指该特定动物，包括驯养动物如犬或猫或者农场动物如马、牛、绵羊等。一般而言，在本公开中，除非另有说明或由该术语使用的上下文暗示，否则术语患者指人类患者。

术语“有效”用于描述化合物、组合物或组分的量，当在其预期用途的上下文内使用时，所述量实现预期结果。术语有效包含在本申请中另外描述或使用的所有其他有效量或有效浓度项。

在一个方面，本说明书提供了包含E3泛素连接酶结合部分(“ULM”)的化合物，所述ULM是希佩尔-林道E3泛素连接酶(VHL)结合部分(VLM)。在一个示例性实施方案中，根据以下结构，ULM经由化学接头(L)偶联至靶蛋白结合部分(PTM)：

(A)PTM-L-ULM

其中L是键或化学接头基团，ULM是E3泛素连接酶结合部分，并且PTM是靶蛋白结合部分。本文示出的化合物中的部分的数目和/或相对位置仅为了举例而提供。如技术人员将理解的那样，本文所述的化合物可以按照各个官能部分的任何所需数目和/或相对位置来合成。

在另一方面，本公开提供了可用于通过诱导靶蛋白的降解来调节蛋白质活性的双官能或多官能化合物(例如PROTAC)。在某些实施方案中，该化合物包含偶联(例如，共价、直接或间接连接)至结合靶蛋白的部分(即，蛋白质靶向部分或“PTM”)的VLM。在某些实施方案中，VLM和PTM经由化学接头(L)接合或偶联。VLM结合VHL，并且PTM识别靶蛋白，各个部分与其靶标的相互作用有利于通过将靶蛋白置于泛素连接酶蛋白附近来降解靶蛋白。示例性双官能化合物可以描绘为：PTM—VLM。

在某些实施方案中，双官能化合物还包含化学接头(“L”)。例如，双官能化合物可以描绘为：PTM—L—VLM，

其中PTM是蛋白质/多肽靶向部分，L是化学接头，并且VLM是VHL结合部分。

在某些实施方案中，ULM(例如，VLM)显示活性或以小于约200μM的IC

在某些另外的实施方案中，本文所述的双官能化合物显示出IC

在其中化合物包含多个ULM的某些实施方案中，ULM是相同的。在化合物包含多个ULM(例如，ULM、ULM’等)的另外的实施方案中，至少一个PTM直接或经由化学接头(L)或这两者偶联至ULM。在某些另外的实施方案中，包含多个ULM的化合物还包含多个PTM。在另外的实施方案中，PTM是相同的或任选地不同的。在其中PTM不同的另外的实施方案中，各个PTM可以结合相同的蛋白质靶标或特异性地结合至不同的蛋白质靶标。

在某些实施方案中，化合物可包含多个ULM和/或多个ULM'。在化合物包含至少两个不同ULM的另外的实施方案中，多个ULM和/或多个ULM’还包含直接偶联或经由化学接头偶联或以这两种方式偶联至ULM或ULM’的至少一个PTM。在本文所述的任何实施方案中，包含至少两个不同ULM的化合物还可以包含多个PTM。在另外的实施方案中，PTM是相同的或任选地不同的。在其中PTM不同的另外的实施方案中，各个PTM可以结合相同的蛋白质靶标或特异性地结合至不同的蛋白质靶标。

在另外的实施方案中，本说明书提供了如本文所述的化合物，包括其对映体、非对映体、溶剂化物和多晶型物，包括其药学上可接受的盐形式，例如酸和碱盐形式。

在某些实施方案中，如本文所述的化合物包括用于结合E3泛素连接酶(例如，希佩尔-林道E3泛素连接酶)的部分。在某些实施方案中，ULM是VLM并且包含选自组ULM-a的化学结构：

其中：

虚线指示至少一个PTM、另一个ULM或VLM(即VLM’)或者将至少一个PTM、ULM’或VLM’与接头的另一端偶联的化学接头部分；

式ULM-a的X

式ULM-a的R

式ULM-a的W

式ULM-a的X

式ULM-a的T选自任选被取代的烷基、–(CH

式ULM-a的W

在某些实施方案中，R

在本文所述的任何实施方案中，T选自任选被取代的烷基、-–(CH

在某些实施方案中，式ULM-a的W

在任何实施方案中，式ULM-a的W

式ULM-a的R

在另外的实施方案中，用于本公开中的W

在某些另外的实施方案中，ULM-a任选地被吡咯烷部分中的0-3个R

在本文所述的任何实施方案中，W

并且其中虚线指示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或者将至少一个PTM或ULM'或两者与ULM偶联的化学接头部分的附接位点。

在某些实施方案中，ULM是VHL，并且由以下结构表示：

其中：

式ULM-b的W

式ULM-b的R

式ULM-b的W

式ULM-b的R

式ULM-b的每个R

式ULM-b的o是0、1、2、3或4；

式ULM-b的R

每个R

并且

式ULM-b的p是0、1、2、3或4，并且其中虚线指示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或者将至少一个PTM或ULM'或两者与ULM偶联的化学接头部分的附接位点。

在某些实施方案中，式ULM-b的R

在某些另外的实施方案中，式ULM-b的R

在某些实施方案中，式ULM-b的R

其中R

在某些实施方案中，式ULM-b的R

式ULM-b的R

在某些实施方案中，ULM具有选自以下的化学结构：

其中：

式ULM-c、ULM-d和ULM-e的R

式ULM-c、ULM-d和ULM-e的X是C、CH

式ULM-c、ULM-d和ULM-e的R

所述虚线指示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或者将至少一个PTM或ULM'或两者与ULM偶联的化学接头部分的附着位点。

在某些实施方案中，ULM包含根据以下化学结构的基团：

其中：

式ULM-f的R

或任选被取代的杂芳基；

式ULM-f的p是0、1、2、3或4；

式ULM-f的每个R

式ULM-f的R

其中式ULM-f的虚线指示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或者将至少一个PTM或ULM'或两者与ULM偶联的化学接头部分的附接位点。

在某些实施方案中，ULM选自下述结构：

其中n是0或1。

在某些实施方案中，ULM选自下述结构：

其中ULM-a1至ULM-a15、ULM-b1至ULM-b12、ULM-c1至ULM-c15和ULM-d1至ULM-d9中的苯环任选被氟、低级烷基和烷氧基取代，并且其中虚线指示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或者将至少一个PTM或ULM'或两者与ULM-a偶联的化学接头部分的附接位点。

在一个实施方案中，ULM-a1至ULM-a15、ULM-b1至ULM-b12、ULM-c1至ULM-c15和ULM-d1至ULM-d9中的苯环可以被官能化为酯，以使得其成为前药的部分。

在某些实施方案中，ULM-a1至ULM-a15、ULM-b1至ULM-b12、ULM-c1至ULM-c15和ULM-d1至ULM-d9的吡咯烷环上的羟基分别包含酯连接的前药部分。

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM和存在的ULM'各自独立地是根据以下化学结构的基团：

或是其药学上可接受的盐，其中：

ULM-g的R

ULM-g的每个R″独立地是H或可任选被一个或两个羟基或至多三个卤素基团(优选氟)取代的C

ULM-g的R

ULM-g的X和X’各自独立地是C＝O、C＝S、-S(O)、S(O)

ULM-g的R

ULM-g的V是O、S或NR

ULM-g的每个R

ULM-g的X

ULM-g的每个m独立地是0、1、2、3、4、5、6；

ULM-g的每个m'独立地是0或1；

ULM-g的每个n独立地是0、1、2、3、4、5、6；

ULM-g的每个n'独立地是0或1；

ULM-g的每个u独立地是0或1；

ULM-g的每个v独立地是0或1；

ULM-g的每个w独立地是0或1；并且

当PTM不是ULM’时，ULM-g的R

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM和存在的ULM'各自独立地是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-h的R

当PTM不是ULM’时，ULM-h的R

其药学上可接受的盐、对映体、非对映体、溶剂化物或多晶型物。

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM和存在的ULM'各自独立地根据化学结构：

其中：

当PTM不是ULM’时，ULM-I的R

其药学上可接受的盐、对映体、非对映体、溶剂化物或多晶型物。

在本公开进一步优选的方面，ULM-g至ULM-i的R

当存在时，ULM-g和ULM-h的X和X’优选地是C＝O、C＝S、-S(O)基团或S(O)

ULM-g至ULM-i的R

其中：

ULM-g至ULM-i的S

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)，或任选被取代的杂环基，优选四氢呋喃、四氢噻吩、哌啶、哌嗪或吗啉(当被取代时，所述基团各自优选被甲基或卤素(F、Br、Cl)取代，所述基团各自可以任选地经由接头基团与PTM基团(包括ULM'基团)连接。

在某些优选的方面，ULM-g至ULM-i的

关于ULM-g至ULM-i的R

其中：

ULM-g至ULM-i的S

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的Y

对于ULM-g至ULM-i的R

优选地，

其中：

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(通常是0或1)，所述基团中的每一个可任选地经由接头基团连接至PTM基团(包括ULM’基团)。

ULM-g至ULM-i的优选R

ULM-g至ULM-i的ULM-g的R

ULM-g至ULM-i的R

其中：

ULM-g至ULM-i的S

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的Y

ULM-g至ULM-i的R

其中：

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i中的每个n是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)，其中所述杂环基团各自可以任选地经由接头基团与PTM基团(包括ULM’基团)连接。

ULM-g至ULM-i的优选R

在某些替代的优选实施方案中，ULM-g至ULM-i的R

其中：

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的X

ULM-g至ULM-i的烷基是任选被取代的C1-C

ULM-g至ULM-i的芳基是任选被取代的苯基或萘基(优选苯基)；并且

ULM-g至ULM-i的HET是任选被取代的噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧杂咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、苯并呋喃、吲哚、吲嗪、氮杂吲嗪、喹啉(当被取代时，各自优选被C

ULM-g至ULM-i的S

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的Y

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)。

所述基团中的每一个可以任选地经由接头基团与PTM基团(包括ULM’基团)连接。

在本公开的某些替代的优选实施方案中，ULM-g至ULM-i的R

其中：

V是O、S或NR

烷基是任选被取代的C

芳基是任选被取代的苯基或萘基(优选苯基)；并且

HET是任选被取代的噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧杂咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、苯并呋喃、吲哚、吲嗪、氮杂吲嗪、喹啉(当被取代时，各自优选被C

ULM-g至ULM-i的S

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的Y

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)；

ULM-g至ULM-i的每个m’是0或1；并且

ULM-g至ULM-i的每个n’是0或1；

其中所述化合物各自，优选在烷基、芳基或Het基团上，任选地经由接头基团连接至PTM基团(包括ULM’基团)。

在替代的实施方案中，ULM-g至ULM-i的R

其中：

ULM-g至ULM-i的所述芳基是任选被一个或两个取代基取代的苯基，其中所述取代基优选选自(CH

ULM-g至ULM-i的所述芳基被-(CH

ULM-g至ULM-i的所述芳基基团任选被杂环基取代，所述杂环基包括杂芳基，选自噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧杂咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉、苯并呋喃、吲哚、吲嗪、氮杂吲嗪(当取代时，各自优选被C

ULM-g至ULM-i的S

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的Y

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的HET优选为噁唑、异噁唑、噻唑、异噻唑、咪唑、二唑、氧杂咪唑、吡咯、吡咯烷、呋喃、二氢呋喃、四氢呋喃、噻吩、二氢噻吩、四氢噻吩、吡啶、哌啶、哌嗪、吗啉、喹啉(各自优选被C

ULM-g至ULM-i的S

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的Y

ULM-g至ULM-i的R

ULM-g至ULM-i的每个m’独立地是0或1；并且

ULM-g至ULM-i的每个n独立地是0、1、2、3、4、5或6(优选0或1)，

其中所述化合物各自优选在所述烷基或HET基团上任选地经由接头基团连接至PTM基团(包括ULM’基团)。

在另外的实施方案中，优选的化合物包括根据以下化学结构的化合物：

其中：

ULM-i的R

ULM-i的芳基是苯基；

ULM-i的HET是任选被取代的噻唑或异噻唑；并且

ULM-i的R

或其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或多晶型物，其中所述化合物中的每一种任选经由接头基团连接至PTM基团(包括ULM’基团)。

在某些方面，双官能化合物包含泛素E3连接酶结合部分(ULM)，其中ULM是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-j的每个R

ULM-j的R

ULM-j的E是键、C＝O或C＝S；

ULM-j的G是键、任选被取代的烷基、-COOH或C＝J；

ULM-j的J是O或N-R

ULM-j的R

ULM-j的M是任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基、任选被取代的杂环基或

ULM-j的每个R

ULM-j的R

ULM-j的每个R

ULM-j的R

ULM-j的每个R

ULM-j的R

ULM-j的Z

ULM-j的o是0、1、2、3或4，或者其药学上可接受的盐、立体异构体、溶剂化物或多晶型物。

在某些实施方案中，其中ULM-j的G是C＝J，J是O，R

在某些实施方案中，其中ULM-j的E是C＝O，R

在某些实施方案中，其中ULM-j的E是C＝O，M是

在某些实施方案中，每个R

在某些实施方案中，ULM-j的R

在某些实施方案中，ULM和存在的ULM'各自独立地是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-k的G是C＝J，J是O；

ULM-k的R

ULM-k的每个R

R’和R”各自独立地是H、任选被取代的烷基或环烷基；

ULM-k的o是0；

ULM-k的R

在其他情况下，ULM-k的R

在其他实施方案中，ULM和存在的ULM'各自独立地是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-k的G是C＝J，J是O；

ULM-k的R

ULM-k的每个R

ULM-k的o是0；并且

ULM-k的R

在其他实施方案中，ULM和存在的ULM'各自独立地是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-k的E是C＝O；

ULM-k的M是

ULM-k的R

在另外其他实施方案中，具有以下化学结构的化合物，

其中：

ULM-k的E是C＝O；

ULM-k的R

ULM-k的M是

ULM-k的q是1或2；

ULM-k的R

在本文所述的任何实施方案中，ULM-j或ULM-k的R

在某些实施方案中，ULM-j或ULM-k的R

在某些实施方案中，ULM(或存在的ULM')是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-l的X是O或S；

ULM-l的Y是H、甲基或乙基；

ULM-l的R

ULM-l的M是任选被取代的芳基、任选被取代的杂芳基或

ULM-l的R

ULM-l的R11是任选被取代的杂芳族、任选被取代的杂环基、任选被取代的芳基或

ULM-l的R

在一些实施方案中，ULM和存在的ULM'各自独立地是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-m的Y是H、甲基或乙基；

ULM-m的R

在本公开的其他优选实施方案中，ULM和存在的ULM’各自独立地是根据以下化学结构的基团：

其中：

ULM-n的R

在本公开的其他优选实施方案中，ULM和存在的ULM’各自独立地是根据以下化学结构的基团：

或是其药学上可接受的盐，其中：

每个R

o是0、1或2；并且

p是0、1、2、3或4。

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM具有式：

其中：

q是1、2、3或4；

在本文所述的任何方面或实施方案中，R

在本公开的其他优选实施方案中，ULM和存在的ULM’各自独立地是根据以下化学结构的基团：

或是其药学上可接受的盐，其中：

X是CH或N；并且

ULM-q和ULM-r的R

在本文所述的任何方面或实施方案中，如本文所述的ULM(或存在的ULM’)可以是其药学上可接受的盐、对映体、非对映体、溶剂化物或多晶型物。另外，在本文所述的任何方面或实施方案中，如本文所述的ULM(或存在的ULM’)可经由键或化学接头直接偶联至PTM。

在本公开的某些方面，ULM部分选自：

其中VLM可以经由如本文所述的接头在任何适当的位置处连接至PTM，包括例如吲哚基团的芳基、杂芳基、苯基或苯基，任选地经由任何适当的官能团，例如胺、酯、醚、烷基或烷氧基。

在某些实施方案中，如本文所述的化合物包括用于将PTM化学偶联至ULM的部分，例如经由化学接头(L)化学连接或偶联至一个或多个ULM(例如VLM中的至少一个)的一个或多个PTM。在某些实施方案中，接头基团L是包含一个或多个共价连接的结构单元(例如，-A

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM(例如，VLM、ILM、CLM或MLM)的接头(L)连接或偶联是稳定的L-ULM连接。例如，在本文所述的任何方面或实施方案中，当接头(L)和ULM经由杂原子连接时，任何随后的杂原子(如果存在)被至少一个单碳原子(例如，-CH

在本文所述的任何方面或实施方案中，接头基团L是由式–(A

在本文所述的任何方面或实施方案中，接头基团L是–(A

接头的q是大于或等于1的整数；

每个A

在某些实施方案中，接头的q是大于或等于0的整数。在某些实施方案中，q是大于或等于1的整数。

在某些实施方案中，例如，当接头的q大于2时，(A

在某些实施方案中，例如，当接头的q为2时，(A

在某些实施方案中，例如，当接头的q为1时，接头基团L的结构是–A

在某些实施方案中，接头(L)的单元A

-NR(CH

接头的n可以是0至10；

接头的R可以是H、低级烷基；

接头的R1和R2可通过连接的N形成环。

在某些实施方案中，接头(L)的单元A

-N(R)-(CH2)

-O-(CH2)

-N(R)-(CH2)

-(CH2)

所述接头的m、n、o、p、q和r独立地是0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20；

当数目为零时，不存在N-O或O-O键

所述接头的R是H、甲基和乙基；

所述接头的X是H和F

其中所述接头的m可以是2、3、4、5

其中所述接头的每个n和m可以独立地是0、1、2、3、4、5、6。

在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)的单元A

其中每个n和m独立地选自0、1、2、3、4、5或6。

在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)的单元A

在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)的接头单元包含由选自以下的结构表示的基团：

-O-(CH

-(CH

-CH＝CH(CH

-O(CH

在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)选自：

在另外的实施方案中，接头(L)包含选自但不限于下文所示结构的结构，其中虚线指示与PTM或ULM部分的附接点：

其中：

n是0-10；并且

在另外的实施方案中，接头(L)包含选自但不限于下文所示结构的结构，其中虚线指示与PTM或ULM部分的附接点：

其中：

n是0-10；并且

在其他实施方案中，接头基团是任选被取代的(聚)乙二醇，其具有1到约100个乙二醇单元，约1到约50个乙二醇单元，1到约25个乙二醇单元，约1到10个乙二醇单元，1到约8个乙二醇单元和1到6个乙二醇单元，2到4个乙二醇单元；或任选被取代的烷基，其内散杂有任选被取代的O、N、S、P或Si原子。在某些实施方案中，接头被芳基、苯基、苯甲基、烷基、亚烷基或杂环基取代。在某些实施方案中，接头可以是不对称或对称的。

在本文所述化合物的任何实施方案中，接头基团可以是如本文所述的任何合适部分。在一个实施方案中，接头是取代或未取代的聚乙二醇基团，其大小范围是约1到约12个乙二醇单元、1到约10个乙二醇单元、约2到约6个乙二醇单元、约2到5个乙二醇单元、约2到4个乙二醇单元。

在另一个实施方案中，本公开涉及一种化合物，其包含结合到靶蛋白或多肽(例如SMARCA2、BRAHMA或BRM)的如上文所述的PTM基团，所述PTM基团通过泛素连接酶发生泛素化并且在直接化学连接到或通过接头部分L连接到ULM基团，或者PTM替代地是ULM’基团，所述ULM’基团也是泛素连接酶结合部分，可以与如上文所述的ULM基团相同或不同并且直接连接到ULM基团或通过接头部分连接到ULM基团；并且L是如上文所述的接头部分，可以存在或不存在并且使ULM化学(共价)连接至PTM；或其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物或多晶型物。

在某些实施方案中，接头基团L是包含一个或多个共价连接的结构单元的基团，所述结构单元独立地选自：

X选自O、N、S、S(O)和SO

尽管ULM基团和PTM基团可通过对于接头化学性质来说适当且稳定的任何基团共价连接至接头基团，但在本公开的优选方面，接头独立地共价结合至ULM基团和PTM基团，优选地通过酰胺、酯、硫酯、酮基、氨基甲酸酯(氨甲酸酯)、碳或醚共价结合，所述基团中的每一个可插入到ULM基团和PTM基团上的任何地方，以使得泛素连接酶上的ULM基团与待降解的靶蛋白上的PTM基团达成最大的结合。(需注意，在其中PTM基团是ULM基团的某些方面，用于降解的靶蛋白可以是泛素连接酶本身)。在某些优选方面，接头可连接到ULM和/或PTM基团上的任选被取代的烷基、亚烷基、烯基或炔基、芳基或杂环基。

在本公开的任何方面或实施方案中，PTM基团是结合靶蛋白的部分，所述靶蛋白诸如是酵母交配型转换/蔗糖不发酵复合物(SWI/SNF)相关的染色质亚家族A成员2的基质相关肌动蛋白依赖调节剂(SMARCA2)或BRM。因此，在本文所述的任何方面或实施方案中，PTM基团是特异性结合SMARCA2或BRM蛋白(结合靶蛋白SMARCA2、BRAHMA或BRM)的任何部分。

在某些实施方案中，本文所述的化合物包括用于结合靶蛋白例如Brm的部分。这样，在某些方面，本公开提供了一种双官能化合物，其具有用于结合Brm的部分、用于结合VHL的部分以及用于将用于结合Brm的部分化学偶联至用于结合VHL的部分的部分。

下文所述的组合物举例说明了小分子靶蛋白结合部分的一些成员。此类小分子靶蛋白结合部分还包括这些组合物的药学上可接受的盐、对映体、溶剂化物和多晶型物，以及可靶向SMARCA2的其他小分子。这些结合部分优选通过接头连接至泛素连接酶结合部分，以便在泛素连接酶附近呈递靶蛋白(蛋白质靶标部分与之结合)以进行泛素化和降解。根据本公开的靶蛋白是可结合至蛋白质靶标部分或PTM基团并作用于泛素连接酶或被其降解的任何蛋白质(即，SMARCA2、BRAHMA或BRM)。

本公开可以用于治疗众多疾病状态和/或状况，包括其中蛋白质失调(例如SMARCA4缺陷/突变)以及其中患者将受益于蛋白质(诸如SMARCA2、BRAHMA或BRM)的降解和/或抑制的任何疾病状态和/或状况。

在另一方面，本说明书提供了治疗组合物，其包含有效量的如本文所述化合物或其盐形式，以及药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂，和任选地另外的生物活性剂。治疗组合物调节患者或受试者(例如动物，例如人)中的蛋白质降解，并且可以用于治疗或改善通过降解的蛋白质调节的疾病状态或状况。在某些实施方案中，本文所述的治疗组合物可用于实现所关注蛋白质的降解，以治疗或改善疾病，例如癌症，诸如SWI/SNF相关癌症、SMARCA4突变相关癌症、SMARCA4缺陷性癌症或SMARCA4表达相对于正常SMARCA4表达降低(例如，相对于具有野生型SMARCA4的类似位置的非癌细胞中的非突变SMARCA4或SMARCA4的表达降低)的癌症中的至少一种，所述疾病包括肺癌或非小细胞肺癌。在本文所述的任何方面或实施方案中，所述疾病是SWI/SNF相关癌症、具有SMARCA4突变的癌症、具有SMARCA4缺陷的癌症或它们的组合中的至少一种，其可以是肺癌或非小细胞肺癌。

在某些另外的实施方案中，如本文所述的治疗组合物可用于实现所关注蛋白质的降解，以治疗或改善疾病，例如癌症，诸如SWI/SNF相关癌症、SMARCA2相关癌症或SMARCA2正常表达或过度表达的癌症中的至少一种。

在替代的方面，本公开涉及一种通过降解用以调节疾病状态或状况的蛋白质或多肽来治疗有需要的受试者的疾病状态或者改善疾病或病症的症状的方法，该方法包括向所述患者或受试者施用有效量例如治疗有效量的至少一种如上所述的化合物，任选地与药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂和任选地另外的生物活性剂组合，其中所述组合物能够有效治疗或改善受试者的疾病或病症或其症状。根据本公开的方法可用于通过施用有效量的至少一种本文所述化合物治疗多种疾病状态或状况，包括癌症。疾病状态或状况可以是由微生物剂或其他外源性剂(例如病毒、细菌、真菌、原生动物或其他微生物)引起的疾病，或者可以是由蛋白质的过表达引起的疾病状态，其导致疾病状态和/或状况。

在另一方面，本说明书提供了使用根据本公开的化合物鉴别生物系统中的所关注蛋白质降解的影响的方法。

术语“靶蛋白”用于描述蛋白质或多肽，其是用于结合根据本公开的化合物和通过下文的泛素连接酶降解的靶标。此类小分子靶蛋白结合部分还包括这些组合物的药学上可接受的盐、对映体、溶剂化物和多晶型物，以及可靶向目的蛋白质的其他小分子。这些结合部分通过至少一个接头基团L连接到至少一个ULM基团(例如VLM)。

所述蛋白质靶标可用于鉴定与蛋白质结合的化合物部分的筛查中，并且通过将该部分掺入根据本公开的化合物内，可以改变蛋白质的活性水平以实现治疗最终结果。

术语“蛋白质靶标部分”或PTM用于描述这样的小分子，其与靶蛋白或者其他目的蛋白质或多肽(诸如SMARCA2或BRM)结合，并且将该蛋白质或多肽置于/呈递于泛素连接酶附近，使得可发生通过泛素连接酶的蛋白质或多肽的降解。下文所述的组合物举例说明了小分子靶蛋白的一些成员。

在本文所述的任何方面或实施方案中，本公开的PTM具有由以下表示的化学结构：

其中：

在本文所述的任何方面或实施方案中，W

在某些实施方案中，W

在本文所述的任何方面或实施方案中，本公开的PROTAC的PTM由式I表示，其中满足以下中的至少一种情况：

它们的组合。

在本文所述的任何方面或实施方案中，例如，包括式I的PTM的实施方案，W

在本文所述的任何方面或实施方案中，本公开的PTM具有由以下表示的化学结构：

其中：

在本文所述的任何方面或实施方案中，本公开的PTM由式II表示，其中W

在本文所述的任何方面或实施方案中，本公开的PTM具有由以下表示的化学结构：

其中：

在本文所述的任何方面或实施方案中，本公开的PTM具有由式III表示的化学结构，其中W

在本文所述的任何方面或实施方案中，本公开的PTM由以下化学结构表示：

其中W

在本文所述的任何方面或实施方案中，本公开的PTM具有由式IV表示的化学结构，其中满足以下中的至少一种情况：

它们的组合。

在本文所述的任何方面或实施方案中，本公开的PTM由以下化学结构表示：

或是其药学上可接受的盐，其中：

并且

在本文所述的任何方面或实施方案中，本公开的PTM由以下化学结构表示：

或是其药学上可接受的盐，其中：

Rv是0、1、2或3个独立地选自羟基、卤素、烷氧基、烷基、卤代烷基、磷酸根、氨基、烷基氨基、氰基或它们的组合的取代基。

在某些实施方案中，羟基被磷酸根基团(即，磷酸酯基团)修饰。

在本文所述的任何方面或实施方案中，本公开的PTM具有由以下表示的化学结构：

在本文描述的任何方面或实施方案中，PTM选自：

在本文所述的任何方面或实施方案中，PTM选自由以下化学结构组成的组：

本文描述的组合物例证了这些类型的小分子靶蛋白结合部分的一些成员。此类小分子靶蛋白结合部分还包括这些组合物的药学上可接受的盐、对映体、溶剂化物和多晶型物，以及可靶向目的蛋白质的其他小分子。下文引用的参考文献以引用的方式整体并入本文。

药物组合物代表本公开的另外方面，所述药物组合物包含与药学有效量的载体、添加剂或赋形剂组合的、有效量的如本文所述的至少一种双官能化合物和本文其他地方所述的一种或多种化合物的组合。

适用时，本公开包括包含药学上可接受的盐，特别是如本文所述的化合物的酸或碱加成盐的组合物。用于制备可根据此方面使用的上述基础化合物的药学上可接受的酸加成盐的酸是形成无毒酸加成盐的那些酸，即含有药学上可接受的阴离子的盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硝酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、酸式磷酸盐、乙酸盐、乳酸盐、柠檬酸盐、酸式柠檬酸盐、酒石酸盐、酒石酸氢盐、琥珀酸盐、马来酸盐、富马酸盐、葡糖酸盐、蔗糖酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐和双羟萘酸盐[即1,1'-亚甲基-双-(2-羟基-3萘甲酸)]盐等等。

药学上可接受的碱加成盐也可以用于制备根据本公开的化合物或衍生物的药学上可接受的盐形式。在性质中为酸性的、可以用作制备本文化合物的药学可接受的碱性盐的试剂的化学碱是与此类化合物形成无毒碱性盐的那些化学碱。此类无毒碱性盐包括但不限于源自此类药学上可接受的阳离子的那些，所述阳离子例如碱金属阳离子(例如钾和钠)和碱土金属阳离子(例如钙、锌和镁)、铵或水溶性胺加成盐如N-甲基葡糖胺-(葡甲胺)，以及低级烷醇铵和药学上可接受的有机胺的其他碱性盐等等。

如本文所述的化合物可根据本公开通过经口、肠胃外或局部途径以单一剂量或分份剂量施用。活性化合物的施用范围可以从连续(静脉内滴注)到每天几次经口施用(例如，Q.I.D.)，并且可以包括经口、局部、肠胃外、肌内、静脉内、皮下、透皮(其可以包括渗透增强剂)、经颊、舌下和栓剂施用，以及其他施用途径。肠溶衣经口片剂也可以用于增强来自经口施用途径的化合物的生物利用度。最有效的剂型取决于所选择的特定药剂的药代动力学以及患者中的疾病的严重程度。也可以使用作为用于鼻内、气管内或肺部施用的喷雾剂、薄雾或气溶胶的根据本公开的化合物施用。因此，本公开还涉及药物组合物，其包含有效量的如本文所述的化合物，任选地与药学上可接受的载体、添加剂或赋形剂组合。根据本公开的化合物可以立即释放、中间释放或持续或控制释放形式施用。持续或控制释放形式优选经口施用，也可以栓剂和透皮或其他局部形式施用。以脂质体形式的肌内注射也可以用于控制或维持化合物在注射部位处的释放。

如本文所述的组合物可使用一种或多种药学上可接受的载体以常规方式配制，并且还可以在控制释放制剂中施用。可以用于这些药物组合物中的药学可接受的载体包括但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白例如人血清白蛋白、缓冲物质例如磷酸盐、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物、水、盐或电解质例如硫酸醇溶蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶体二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、纤维素基物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂。

如本文所述的组合物可以经口、肠胃外、吸入喷雾、局部、直肠、鼻腔、口腔、阴道或经由植入的储库施用。如本文所用的术语“肠胃外”包括皮下、静脉内、肌内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。优选地，组合物经口、腹膜内或静脉内施用。

如本文所述的组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性悬浮液。可以根据本领域已知的技术，使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂配制这些悬浮液。无菌可注射制剂还可以是在无毒的肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌可注射溶液或悬浮液，例如作为在1,3-丁二醇中的溶液。在可以采用的可接受的媒介物和溶剂有水、林格氏溶液和等渗氯化钠溶液。另外，无菌的不挥发性油照常规用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以采用任何温和的不挥发性油，包括合成的甘油单酯或甘油二酯。脂肪酸，例如油酸及其甘油酯衍生物可用于制备注射剂，如天然的药学可接受的油，例如橄榄油或蓖麻油一样，尤其以其聚氧乙基化形式。这些油溶液或悬浮液也可以含有长链醇稀释剂或分散剂，例如Ph.Helv或类似的醇。

如本文所述的药物组合物可以以任何经口可接受的剂型经口施用，包括但不限于胶囊、片剂、水性悬浮液或溶液。在用于经口使用的片剂的情况下，常用的载体包括乳糖和玉米淀粉。通常还添加润滑剂，如硬脂酸镁。对于以胶囊形式的经口施用，有用的稀释剂包括乳糖和干玉米淀粉。当需要水性悬浮液用于经口使用时，将活性成分与乳化剂和悬浮剂混合。需要时，还可以加入某些甜味剂、调味剂或着色剂。

可替代地，如本文所述的药物组合物可以以栓剂的形式施用，用于直肠施用。这些可以通过将试剂与合适的非刺激性赋形剂混合来制备，所述赋形剂在室温下为固体但在直肠温度下为液体，并且因此将在直肠中融化以释放药物。此类材料包括可可脂、蜂蜡和聚乙二醇。

如本文所述的药物组合物也可以局部施用。对于这些区域或器官中的每一个，容易制备合适的局部制剂。对于下肠道的局部施用可以以直肠栓剂制剂(参见上文)或以合适的灌肠剂制剂实现。也可以使用局部可接受的透皮贴剂。

对于局部应用，药物组合物可以配制成合适的软膏，所述软膏含有悬浮或溶解于一种或多种载体中的活性组分。用于局部施用本公开的化合物的载体包括但不限于矿物油、液体凡士林、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯、聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。在本公开的某些优选方面，可以将化合物涂布到支架上，所述支架将要手术植入患者体内，以便抑制或减少支架在患者中发生阻塞的可能性。

可替代地，可以将药物组合物配制成合适的洗剂或乳膏，所述洗剂或乳膏含有悬浮或溶解于一种或多种药学可接受的载体中的活性组分。合适的载体包括但不限于矿物油、脱水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、鲸蜡硬脂醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。

对于眼部使用，药物组合物可以配制为在等渗、pH调节的无菌盐水中的微粉化悬浮液，或者优选地，配制为在等渗、pH调节的无菌盐水中的溶液，使用或不使用防腐剂如苯扎氯铵。可替代地，对于眼部使用，可以将药物组合物配制成软膏例如凡士林。

如本文所述的药物组合物还可通过鼻气溶胶或吸入施用。此类组合物根据药物制剂领域众所周知的技术制备，并且可以制备为在盐水中的溶液，采用苯甲醇或其他合适的防腐剂、增强生物利用度的吸收促进剂、碳氟化合物和/或其他常规增溶剂或分散剂。

可以与载体材料组合以制备单一剂型的如本文所述的药物组合物中化合物的量将根据所治疗的宿主和疾病以及特定的施用模式而变。优选地，组合物应配制成包含约0.05毫克至约750毫克或更多、更优选地约1毫克至约600毫克、甚至更优选地约10毫克至约500毫克的活性成分，该活性成分单独存在或与至少一种根据本公开的其他化合物组合。

还应该理解，用于任何特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于各种因素，包括所采用的特定化合物的活性、年龄、体重、一般健康、性别、饮食、施用时间、排泄率、药物组合、以及治疗医师的判断和待治疗的特定疾病或状况的严重程度。

需要使用根据本文所述方法的化合物的治疗的患者或受试者可以通过向患者(受试者)施用单独或与如本文其他地方鉴定的其他已知治疗剂组合的有效量的根据本公开的化合物来治疗，所述化合物包括其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，任选地在药学上可接受的载体或稀释剂中。

这些化合物可通过任何适当的途径施用，例如经口、肠胃外、静脉内、皮内、皮下或局部，包括透皮、在液体中、乳膏、凝胶或固体形式或通过气溶胶形式。

活性化合物包括在药学可接受的载体或稀释剂中，其量足以向患者递送对于所需适应症的治疗有效量，而不在所治疗的患者中引起严重的毒性效应。用于所有本文提及状况的活性化合物的优选剂量在约10ng/kg至300mg/kg的范围内，优选地0.1至100mg/kg/天，更一般地0.5至约25mg/千克接受者/患者的体重/天。典型的局部剂量范围为在合适的载体中0.01-5重量％。

该化合物方便地以任何合适的单位剂型施用，包括但不限于每单位剂型含有小于1mg、1mg至3000mg，优选5至500mg的活性成分的单位剂型。约25-250mg的经口剂量通常是方便的。

优选施用活性成分以达到约0.00001-30mM，优选约0.1-30μM的活性化合物的峰值血浆浓度。这可以例如通过任选地在盐水或含水介质中的活性成分溶液或制剂的静脉内注射来实现，或作为活性成分的推注来施用。经口施用也适合于生成活性剂的有效血浆浓度。

药物组合物中活性化合物的浓度将取决于药物的吸收、分布、失活和排泄速率，以及本领域技术人员已知的其他因素。应注意，剂量值也将随着待缓解的状况的严重程度而变。还应理解，对于任何特定受试者，应该根据个体需要和施用或监督组合物施用的个人的专业判断，随着时间过去调整特定剂量方案，并且本文所述的浓度范围仅为示例性的，并且不预期限制请求保护的组合物的范围或实践。活性成分可以一次施用，或者可以分成许多较小的剂量，以不同的时间间隔施用。

经口组合物通常将包含惰性稀释剂或可食用载体。它们可以包封在明胶胶囊中或压制成片剂。为了经口治疗施用的目的，可以将活性化合物或其前药衍生物与赋形剂混合，并且以片剂、锭剂或胶囊的形式使用。可包含药学上相容的粘合剂和/或佐剂材料作为组合物的一部分。

片剂、丸剂、胶囊、锭剂等等可以含有下述成分或类似性质的化合物中的任一种：粘合剂如微晶纤维素、黄蓍胶或明胶；赋形剂如淀粉或乳糖，分散剂如海藻酸、Primogel或玉米淀粉；润滑剂如硬脂酸镁或Sterotes；助流剂如胶体二氧化硅；甜味剂如蔗糖或糖精；或调味剂如薄荷、水杨酸甲酯或橙子调味料。当剂量单位形式是胶囊时，除上述类型的材料之外，它还可以含有液体载体如脂肪油。另外，剂量单位形式可以含有修改剂量单位的物理形式的各种其他物质，例如糖包衣、虫胶或肠溶剂。

活性化合物或其药学可接受的盐可以作为酏剂、悬浮液、糖浆剂、晶片、口香糖等等的组分施用。除活性化合物之外，糖浆剂还可以含有蔗糖作为甜味剂与某些防腐剂、染料以及着色剂和调味料。

活性化合物或其药学上可接受的盐也可以与不损害所需作用的其他活性材料混合，或与补充所需作用的材料诸如抗癌剂(包括帕博利珠单抗)混合。在本公开的某些优选方面，根据本公开的一种或多种化合物与另一种生物活性剂，例如抗癌剂或伤口愈合剂包括抗生素共施用，如本文其他地方描述的。

用于肠胃外、皮内、皮下或局部施用的溶液或悬浮液可包含下列组分：无菌稀释剂如注射用水、盐水溶液、不挥发性油、聚乙二醇、丙三醇、丙二醇或其他合成溶剂；抗菌剂如苯甲醇或对羟基苯甲酸甲酯；抗氧化剂如抗坏血酸或亚硫酸氢钠；螯合剂如乙二胺四乙酸；缓冲剂如乙酸盐、柠檬酸盐或磷酸盐和用于调节张力的试剂如氯化钠或葡萄糖。肠胃外制剂可以包封在由玻璃或塑料制成的安瓿、一次性注射器或多剂量小瓶中。

如果静脉内施用，则优选的载体是生理盐水或磷酸盐缓冲盐水(PBS)。

在一个实施方案中，活性化合物与载体一起制备，所述载体将保护化合物免于从体内快速消除，例如控制释放制剂，包括植入物和微囊化递送系统。可以使用可生物降解的、生物相容的聚合物，例如乙烯乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类制剂的方法对于本领域技术人员是显而易见的。

脂质体悬浮液也可以是药学可接受的载体。这些可以根据本领域技术人员已知的方法制备，例如，如美国专利号4,522,811中所述(其以引用的方式整体并入本文)。例如，脂质体制剂可以通过将适当的脂质(例如硬脂酰磷脂酰乙醇胺、硬脂酰磷脂酰胆碱、花生四烯酰基磷脂酰胆碱和胆固醇)溶解于有机溶剂中来制备，然后蒸发所述有机溶剂，在容器的表面上留下干燥脂质的薄膜。然后将活性化合物的水溶液引入容器中。然后用手旋转容器，以从容器的侧面释放脂质材料且分散脂质聚集体，从而形成脂质体悬浮液。

在另一方面，本说明书提供了治疗组合物，其包含有效量的如本文所述化合物或其盐形式和药学上可接受的载体。治疗组合物调节患者或受试者(例如动物，例如人)中的蛋白质降解，并且可以用于治疗或改善通过降解的蛋白质调节的疾病状态或状况。

如本文使用的，术语“治疗(treat)”、“治疗(treating)”和“治疗(treatment)”等指对患者提供益处的任何动作，对于所述患者可以施用本文化合物，所述益处包括通过本文化合物与之结合的蛋白质调节的任何疾病状态或状况的治疗。上文阐述了可以使用根据本公开的化合物治疗的疾病状态或病症，包括癌症诸如肺癌，包括非小细胞肺癌。

本说明书提供了如本文所述的治疗组合物，用于实现目的蛋白质的降解，以治疗或改善疾病，例如癌症。在某些另外的实施方案中，疾病是多发性骨髓瘤。因此，在另一方面，本说明书提供了泛素化/降解细胞中的靶蛋白的方法。在某些实施方案中，该方法包括施用如本文所述的双官能化合物，该双官能化合物包含例如优选通过如本文另外所述的接头部分连接的ULM和PTM，其中ULM与PTM偶联且其中ULM识别泛素路径蛋白质(例如，泛素连接酶，诸如VHL E3泛素连接酶)并且PTM识别靶蛋白，使得当靶蛋白被置于泛素连接酶附近时，将发生靶蛋白的降解，从而实现靶蛋白的降解/靶蛋白效应的抑制及蛋白质水平的控制。通过本公开提供的蛋白质水平的控制提供了疾病状态或状况的治疗，其通过降低细胞(例如，患者的细胞)中该蛋白质的水平而通过靶蛋白调节。在某些实施方案中，该方法包括施用有效量的如本文所述的化合物，任选地包含药学上可接受的赋形剂、载体、佐剂、另一种生物活性剂或它们的组合。

在另外的实施方案中，本说明书提供了用于治疗或改善受试者或患者(例如动物，例如人类)的疾病、病症或其症状的方法，该方法包括向有需要的受试者施用组合物，该组合物包含有效量(例如治疗有效量)的本文所述化合物或其盐形式，和药学上可接受的赋形剂、载体、助剂、另一种生物活性剂或它们的组合，其中所述组合物能够有效治疗或改善受试者的疾病或病症或其症状。

在另一方面，本说明书提供了使用根据本公开的化合物鉴别生物系统中的所关注蛋白质降解的影响的方法。

在另一个实施方案中，本公开涉及治疗需要治疗通过蛋白质调节的疾病状态或状况治疗的人类患者的方法，其中该蛋白质的降解在该患者中产生治疗效果，所述方法包括向有需要的患者施用有效量的根据本公开的化合物，任选地与另一种生物活性剂组合。疾病状态或状况可以是由微生物剂或其他外源性剂(例如病毒、细菌、真菌、原生动物或其他微生物)引起的疾病，或者可以是由蛋白质的过表达引起的疾病状态，其导致疾病状态和/或状况。

术语“疾病状态或状况”用于描述任何疾病状态或状况，其中发生蛋白质失调(即，患者中表达的蛋白质的量升高)，并且其中患者中一种或多种蛋白质的降解可以为对此有需要的患者提供有益疗法或症状的缓解。在某些情况下，疾病状态或状况可以被治愈。

可使用根据本公开的化合物治疗的疾病状态或状况包括例如哮喘、自体免疫疾病如多发性硬化症、各种癌症、纤毛病、腭裂、糖尿病、心脏病、高血压、发炎性肠病、智力迟钝、情绪障碍、肥胖症、屈光不正、不育症、Angelman综合征、Canavan病、乳糜泻、夏-马-图三氏病(Charcot-Marie-Tooth disease)、囊肿性纤维化、杜氏肌营养不良、血色病、血友病、克氏综合征、神经纤维瘤病、苯丙酮尿症、多囊性肾病(PKD1)或4(PKD2)、Prader-Willi综合征、镰状细胞病、Tay-Sachs病、Turner综合征。

在整个说明书中使用术语“瘤形成”或“癌症”是指导致癌性或恶性肿瘤(即，通过细胞增殖而生长的异常组织)形成和生长的病理过程，所述形成和生长通常比正常组织更快并且在引发新增长的刺激停止后继续生长。恶性肿瘤显示出部分或完全缺乏与正常组织的结构组织和功能协调，并且大多数侵入周围组织，转移到若干个部位，并且在尝试移除后可能复发并且除非充分治疗，否则导致患者死亡。如本文所用，术语瘤形成用于描述所有癌性疾病状态，并且包括或涵盖与恶性血源性、腹水和实体肿瘤相关的病理过程。可用本发明的化合物单独地或与至少一种另外的抗癌剂组合地治疗的示例性癌症包括鳞状细胞癌、基底细胞癌、腺癌、肝细胞癌和肾细胞癌；膀胱、肠道、乳房、子宫颈、结肠、食道、头、肾、肝、肺、颈、卵巢、胰腺、前列腺和胃的癌症；白血病；良性和恶性淋巴瘤，尤其是伯基特氏淋巴瘤(Burkitt’s lymphoma)和非霍奇金淋巴瘤(Non-Hodgkin’s lymphoma)；良性和恶性黑素瘤；骨髓增生性疾病；肉瘤，包括尤文氏肉瘤(Ewing’s sarcoma)、血管内皮瘤、卡波西肉瘤(Kaposi’s sarcoma)、脂肪肉瘤、肌肉瘤、外周神经上皮瘤、滑膜肉瘤、神经胶质瘤、星形细胞瘤、少突神经胶质瘤、室管膜瘤、胶质母细胞瘤、神经母细胞瘤、节细胞神经瘤、神经节细胞胶质瘤、髓母细胞瘤、松果体细胞肿瘤、脑膜瘤、脑膜肉瘤、神经纤维瘤和许旺细胞瘤(Schwannomas)；肠道癌、乳癌、前列腺癌、子宫颈癌、子宫癌、肺癌、卵巢癌、睾丸癌、甲状腺癌、星形细胞瘤、食道癌、胰脏癌、胃癌、肝癌、结肠癌、黑素瘤；癌肉瘤、霍奇金病、维尔姆斯瘤和畸胎癌。可使用根据本公开的化合物治疗的另外的癌症包括例如T-谱系急性淋巴母细胞白血病(T-ALL)、T谱系淋巴母细胞淋巴瘤(T-LL)、外周T细胞淋巴瘤、成人T细胞白血病、Pre-B ALL、Pre-B淋巴瘤、大B细胞淋巴瘤、Burkitts淋巴瘤、B细胞ALL、费城染色体阳性ALL和费城染色体阳性CML。

术语“生物活性剂”用于描述除了根据本公开的化合物之外的试剂，其与本发明化合物组合用作具有生物活性的试剂，以帮助实现对于其使用本发明化合物的预期疗法、抑制和/或防止/预防。本文使用的优选生物活性剂包括药理学活性与所用或所施用的本发明化合物类似的那些试剂，并且包括例如抗癌剂、抗病毒剂，尤其包括抗HIV剂和抗HCV剂、抗微生物剂、抗真菌剂等。

术语“另外的抗癌剂”用于描述可以与根据本公开的化合物组合以治疗癌症的抗癌剂。这些剂包括例如依维莫司、曲贝替定、阿布拉生、TLK286、AV-299、DN-101、帕唑帕尼、GSK690693、RTA 744、ON 0910.Na、AZD 6244(ARRY-142886)、AMN-107、TKI-258、GSK461364、AZD 1152、恩扎妥林、凡德他尼、ARQ-197、MK-0457、MLN8054、PHA-739358、R-763、AT-9263、FLT-3抑制剂、VEGFR抑制剂、EGFR TK抑制剂、极光激酶抑制剂、PIK-1调节剂、Bcl-2抑制剂、HDAC抑制剂、c-MET抑制剂、PARP抑制剂、Cdk抑制剂、EGFR TK抑制剂、IGFR-TK抑制剂、抗HGF抗体、PI3激酶抑制剂、AKT抑制剂、mTORC1/2抑制剂、JAK/STAT抑制剂、检查点-1或2抑制剂、病灶粘附激酶抑制剂、Map激酶(mek)抑制剂、VEGF截获抗体、培美曲塞、埃罗替尼、达沙替尼、尼罗替尼、德卡坦尼、帕尼单抗、氨柔比星、奥戈伏单抗、Lep-etu、诺拉曲特、azd2171、巴他布林、奥法木单抗、扎木单抗、艾特咔林(edotecarin)、汉防己碱、鲁比替康、替米利芬、奥利默森、替西木单抗、伊匹单抗、棉子酚、Bio 111、131-I-TM-601、ALT-110、BIO 140、CC8490、西仑吉肽、吉马替康、IL13-PE38QQR、INO 1001、IPdR

术语“抗HIV剂”或“另外的抗HIV剂”包括例如核苷逆转录酶抑制剂(NRTI)、其他非核苷类逆转录酶抑制剂(即不能代表本公开的那些)、蛋白酶抑制剂、融合抑制剂等，其示例性化合物可包括例如3TC(拉米夫定)、AZT(齐多夫定)，(-)-FTC、ddI(地达诺新)、ddC(扎西他滨)、阿巴卡韦(ABC)、替诺福韦(PMPA)、D-D4FC(Reverset)、D4T(司他夫定)、Racivir、L-FddC、L-FD4C、NVP(奈韦拉平)、DLV(地拉夫定)、EFV(依法韦仑)、SQVM(甲磺酸沙奎那韦)、RTV(利托那韦)、IDV(茚地那韦)、SQV(沙奎那韦)、NFV(奈非那韦)、APV(安普那韦)、LPV(洛匹那韦)、融合抑制剂如T20等、其融合物和混合物，包括目前正处于临床试验或开发阶段的抗HIV化合物。

可与根据本公开的化合物共同施用的其他抗HIV剂包括例如其他NNRTI(即，除了根据本公开的NNRTI之外)，可选自奈韦拉平(BI-R6-587)、地拉夫定(U-90152S/T)、依法韦仑(DMP-266)、UC-781(N-[4-氯-3-(3-甲基-2-丁烯基氧基)苯基]-2-甲基-3-呋喃甲酰胺、依曲韦林(TMC125)、曲韦定(Ly300046.HCl)、MKC-442(依米韦林，coactinon)、HI-236、HI-240、HI-280、HI-281、利匹韦林(TMC-278)、MSC-127、HBY 097、DMP266、黄芩苷(TJN-151)ADAM-II(3’,3’-二氯-4’,4”-二甲氧基-5’,5”-双(甲氧基羰基)-6,6-二苯基己烯酸甲酯)、3-溴-5-(1-5-溴-4-甲氧基-3-(甲氧基羰基)苯基)庚-1-烯基)-2-甲氧基苯甲酸甲酯(Alkenyldiarylmethane类似物，Adam类似物)、(5-氯-3-(苯亚磺酰基)-2’-吲哚甲酰胺)、AAP-BHAP(U-104489或PNU-104489)、卡普韦林(AG-1549、S-1153)、阿替韦啶(U-87201E)、金精三羧酸(SD-095345)、1-[(6-氰基-2-吲哚基)羰基]-4-[3-(异丙基氨基)-2-吡啶基]哌嗪、1-[5-[[N]-(甲基)甲基磺酰基氨基]-2-吲哚基羰基-4-[3-(异丙基氨基)-2-吡啶基]哌嗪、1-[3-(乙基氨基)-2-[吡啶基]-4-[(5-羟基-2-吲哚基)羰基]哌嗪、1-[(6-甲酰基-2-吲哚基)羰基]-4-[3-(异丙基氨基)-2-吡啶基]哌嗪、1-[[5-(甲基磺酰基氧基)-2-吲哚基)羰基]-4-[3-(异丙基氨基)-2-吡啶基]哌嗪、U88204E、双(2-硝基苯基)砜(NSC 633001)、卡拉内酯A(NSC675451)、卡拉内酯B、6-苄基-5-甲基-2-(环己基氧基)嘧啶-4-酮(DABO-546)、DPC 961、E-EBU、E-EBU-dm、E-EPSeU、E-EPU、膦甲酸(Foscavir)、HEPT(1-[(2-羟乙氧基)甲基]-6-(苯硫基)胸腺嘧啶)、HEPT-M(1-[(2-羟乙氧基)甲基]-6-(3-甲基苯基)硫代)胸腺嘧啶)、HEPT-S(1-[(2-羟乙氧基)甲基]-6-(苯硫基)-2-硫代胸腺嘧啶)、海棠果素P、L-737,126、米歇尔胺A(NSC650898)、米歇尔胺B(NSC649324)、米歇尔胺F、6-(3,5-二甲基苄基)-1-[(2-羟乙氧基)甲基]-5-异丙基尿嘧啶、6-(3,5-二甲基苄基)-1-(乙氧基甲基)-5-异丙基尿嘧啶、NPPS、E-BPTU(NSC648400)、奥替普拉(4-甲基-5-(吡嗪基)-3H-1,2-二硫杂环戊烯-3-硫酮)、N-{2-(2-氯-6-氟苯乙基)-N’-(2-噻唑基)硫脲(PETT Cl，F衍生物)、N-{2-(2,6-二氟苯乙基)-N’-[2-(5-溴吡啶基)]硫脲(PETT衍生物)、N-{2-(2,6-二氟苯乙基)-N’-[2-(5-甲基吡啶基)]硫脲{PETT吡啶基衍生物]、N-[2-(3-氟呋喃基)乙基]-N’-[2-(5-氯吡啶基)]硫脲、N-[2-(2-氟-6-乙氧基苯乙基)]-N’-[2-(5-溴吡啶基)]硫脲、N-(2-苯乙基)-N’-(2-噻唑基)硫脲(LY-73497)、L-697,639、L-697,593、L-697,661、3-[2-(4,7-二氟苯并噁唑-2-基)乙基}-5-乙基-6-甲基(吡啶-2(1H)-硫酮(2-吡啶酮衍生物)、3-[[(2-甲氧基-5,6-二甲基-3-吡啶基)甲基]胺]-5-乙基-6-甲基(吡啶-2(1H)-硫酮、R82150、R82913、R87232、R88703、R89439(洛韦胺)、R90385、S-2720、舒拉明钠、TBZ(噻唑并苯并咪唑，NSC625487)、噻唑并异吲哚-5-酮、(+)(R)-9b-(3,5-二甲基苯基-2,3-二氢噻唑并[2,3-a]异吲哚-5(9bH)-酮、替韦拉平(R86183)、UC-38和UC-84等。

适用时，术语“药学上可接受的盐”在本说明书中通篇用于描述本文所述的一种或多种化合物的盐形式，其用于增加化合物在患者的胃肠道的胃液中的溶解度，以便促进化合物的溶出度和生物利用度。适用时，药学上可接受的盐包括源自药学上可接受的无机或有机碱和酸的盐。合适的盐包括源自碱金属如钾和钠的盐，碱土金属如钙、镁和铵盐，以及制药领域中众所周知的众多其他酸和碱。钠盐和钾盐作为根据本公开的磷酸盐的中和盐是特别优选的。

术语“药学上可接受的衍生物”在本说明书中通篇用于描述任何药学上可接受的前药形式(例如酯、酰胺、其他前药基团)，在施用于患者时，其直接或间接提供本发明化合物或本发明化合物的活性代谢产物。

如本文所述的双官能分子的合成实现和优化可以逐步或模块化的方式进行。例如，如果不能立即获得合适的配体，则鉴定与靶分子结合的化合物可涉及高通量或中通量的筛查活动。初始配体需要迭代设计和优化循环来改善次优方面并不罕见，如通过合适的体外和药理学和/或ADMET测定所确定的那样。优化/SAR活动的一部分将是探测配体的耐受取代的位置，并且可能是附接本文先前提到的化学接头的合适位置。在可获得晶体学或NMR结构数据的情况下，这些可用于集中这样的合成任务。

以非常类似的方式，可以鉴定和优化E3连接酶的配体，即ULM/VLM。

利用PTM和ULM(例如VLM)，本领域技术人员可以使用已知的合成方法将它们在有或没有接头部分的情况下进行组合。接头部分可以合成为具有一系列组成、长度和柔韧性，并且被官能化，使得PTM和ULM基团可以顺序地附接至接头的远端。因此，可以在体外和体内药理学和ADMET/PK研究中实现和分析双官能分子文库。与PTM和ULM基团一样，最终的双官能分子可以进行迭代设计和优化循环，以鉴定具有期望特性的分子。

在一些情况下，为了促进所需材料的制备，可能需要保护基团策略和/或官能团相互转化(FGI)。此类化学工艺是有机合成化学工作者众所周知的并且其中许多可见于教材中，例如“Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis”，Peter G.M.Wuts和Theodora W.Greene(Wiley)，以及“Organic Synthesis:The Disconnection Approach”，Stuart Warren和Paul Wyatt(Wiley)。

ACN：乙腈

ADDP：1,1’-(偶氮二羰基)二哌啶

BAST：N,N-双(2-甲氧基乙基)氨基三氟化硫

BPO：过氧化苯甲酰

Cbz：羰基苄氧基

DAST：二乙氨基三氟化硫

DBE：1,2-二溴乙烷

DCM：二氯甲烷

DEAD：偶氮二甲酸二乙酯

DIAD：偶氮二甲酸二异丙酯

DIBAL：二异丁基氢化铝

DIEA或DIPEA：二异丙基乙胺

DMA：N,N-二甲基乙酰胺

DMF：N,N-二甲基甲酰胺

DMP：戴斯-马丁过碘烷

EA：乙酸乙酯

EDCI：1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺

HBTU：N,N,N’N’-四甲基-O-(1H-苯并三唑-1-基)脲六氟磷酸酯

HMDS：双(三甲基甲硅烷基)胺

HMPA：六甲基磷酰胺

LDA：二异丙基氨基锂

MCPBA：间-氯过氧苯甲酸

MsCl：甲磺酰氯

M.W：微波

NBS：N-溴代琥珀酰亚胺

NMP：N-甲基吡咯烷酮

PCC：氯铬酸吡啶鎓

Pd-118或Pd(dtpf)Cl

Pd(dppf)Cl

Pd(dba)

PPTS：对甲苯磺酸吡啶鎓

PTSA：对甲苯磺酸

RuPhos-Pd-G3：XPhos-Pd-G3：[(2-二环己基膦基-2’,6’-二异丙氧基-1,1’-联苯基)-2-(2’-氨基-1,1’-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐

RuPhos-Pd-G2：氯[(2-二环己基膦基-2',6'-二异丙氧基-1,1'-联苯基)-2-(2'-氨基-1,1'-联苯基)]钯(II)

SFC：超临界流体色谱

t-BuXPhos-Pd-G3：[(2-二叔丁基膦基-2’,4’,6’-三异丙基-1,1’-联苯基)-2-(2’-氨基-1,1’-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐

TEA：三甲胺

TFA：三氟乙酸

TLC：薄层色谱

TMP：2,2,6,6-四甲基哌啶

TEMPO：2,2,6,6-四甲基哌啶-N-氧化物

TosCl或TsCl：对甲苯磺酰氯

TsOH：对甲苯磺酸

XantPhos：4,5-双(二苯基膦基)-9,9-二甲基呫吨

XPhos：2-二环己基膦基-2'4'6'-三异丙基联苯

XPhos-Pd-G3：[(2-二环己基膦基-2',4',6'-三异丙基-1,1'-联苯基)-2-(2'-氨基-1,1'-联苯基)]钯(II)甲磺酸盐

12354-85-7：双(五甲基环戊二烯基二氯化铑)

方案1

如方案1所示，具有W

方案2

如方案2所示，含羟基的部分R

方案3

如方案3所示，首先将乙烯基基团引入双卤代衍生物W

方案4

方案4示出了用于将PTM结合部分W

方案5

如方案5所示，含羟基的部分R

bu型反应产生偶联产物。然后在Suzuki或Buchwald条件下，用单保护的二胺W

方案6

如方案6所示，含乙缩醛的ULM部分可在足够温和的条件下进行酸催化的水解形成醛，然后使其与具有含氨基基团接头L'的W

方案7

如方案7所示，含羟基的部分R

方案8

如方案8所示，用包含R

方案9

如方案9所示，用具有R

合成本公开的示例性化合物的一种可能方法是通过遵循以下方案中详述的一般合成路线：

本领域的技术人员应当理解，可以采用改进的方法来经由不同的化学接头连接PTM。例如，在W

替代地，如果不存在W

本领域技术人员应当理解，可以修改本文所述的一般方法以适应W

在一个实施方案中，其中X表示NH，取决于是否存在W

当不存在W

由通式IV表示的示例性PTM可根据以下一般方案制备：

Z＝Br或I

在0C下，向2-(2-(2-羟基乙氧基)乙氧基)乙酸叔丁酯(1.5g，6.8mmol)和TEA(2.07g，20.5mmol)在DCM(5mL)的混合物中添加TsCl(1.95g，10.23mmol)。将所得混合物升温至室温，并搅拌3小时。将该溶液用水(20mL)淬灭，并用DCM萃取。用盐水(20mL x 2)洗涤有机相。将有机相经Na

将4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(1.11g，5.722mmol)、2-(2-(2-(甲苯磺酰氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸叔丁酯(2.14g，5.722mmol)和Cs

将2-(2-(2-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸叔丁酯(1.5g，3.79mmol)、4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(1.1g，5.69mmol)、PdCl

将2-(2-(2-(4-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸叔丁酯(800mg，2.02mmol)、(2-羟苯基)硼酸(418mg，3.03mmol)、碳酸铯(1.65g，5.05mmol)、PdCl

在0C下，向2-(2-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基)-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸叔丁基酯(400mg，0.88mmol)在THF/H

在0C下，向2-(2-(2-(4-(3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基)-1H-吡唑-1-基)乙氧基)乙氧基)乙酸(200mg，粗品)、(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(430mg，1mmol)和DIPEA(516mg，4mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加HATU(570mg，1.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。用乙酸乙酯(50mL)萃取混合物。将合并的有机相用盐水(8mL x 2)洗涤，干燥(Na

根据下面的方案，使用类似于上文对于示例性化合物11所述的方法以及本领域技术人员已知和理解的方法来制备示例性化合物5：

使用针对示例性化合物11和示例性化合物5所述的方法来制备：示例性化合物1、示例性化合物2、示例性化合物3、示例性化合物4。

在0C下，向3,6,9,12-四氧杂十四烷-1,14-二醇(13.5g，56.8mmol)在无水DMF(30mL)中的溶液中添加60％NaH(1.25g，31.2mmol)。将反应混合物在室温下搅拌0.5小时。然后向该混合物中滴加4-溴-2-氟吡啶(5g，28.4mmol)，并将该混合物加热至75℃，保持2小时。将反应混合物用水(10mL)淬灭，并用EA(200mL)萃取。将有机相用盐水(10mL)洗涤，干燥(Na

在0C下，向14-((4-溴吡啶-2-基)氧基)-3,6,9,12-四氧杂十四烷-1-醇(5.0g，12.7mmol)在无水THF(50mL)中的溶液中添加60％NaH(660mg，16.5mmol)。将反应混合物在室温下搅拌40分钟。然后向该混合物中滴加2-溴乙酸叔丁酯(4.9g，25.4mmol)，并在室温下搅拌过夜。将反应混合物用2N NH

将17-((4-溴吡啶-2-基)氧基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷酸叔丁酯(250mg，1.18mmol)、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(718mg，1.4mmol)、碳酸铯(769mg，2.36mmol)、Pd

在室温下，向8-(2-((19,19-二甲基-17-氧代-3,6,9,12,15,18-六氧杂二十烷基)氧基)吡啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(550mg，0.86mmol)在MeOH(15mL)中的溶液中添加HCl的二噁烷溶液(6N的二噁烷溶液)(5ml，30mmol)。将反应混合物在室温下搅拌1小时。减压浓缩混合物，得到粗制的17-((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷酸甲酯(0.55g)。

向粗制的17-((4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷酸甲酯(550mg粗品)在DMSO(5mL)中的溶液中添加5-溴-6-氯哒嗪-3-胺(526mg，2.71mmol)和DIPEA(1.87g，14.5mmol)。将该溶液在150C下搅拌过夜。用EA(60mL)萃取该混合物。用水(8mL)和盐水(8mL)洗涤有机相。将有机层干燥(Na

向17-((4-((1R,5S)-3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷酸甲酯(325mg，0.52mmol)和(2-羟苯基)硼酸(93mg，0.68mmol)在二噁烷(12mL)和水(1.2mL)中的溶液中添加碳酸铯(542mg，1.66mmol)、PdCl

在0C下，向粗制的17-((4-((1R,5S)-3-(3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷酸(80mg，0.12mmol)和(2S,4R)-1-((S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(108mg，0.24mmol)在DMF(5mL)中的溶液中添加DIPEA(124mg，0.96mmol)和HATU(92mg，0.24mmol)。将反应混合物在室温下搅拌30分钟。用EA(50mL)萃取该混合物。用水(8mL)和盐水(8mL)洗涤有机相。将有机层干燥(Na

使用类似方法，制备示例性化合物7、8、10和35。

向2-(2-(2-(2-((4-溴吡啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙-1-醇(3.49g，10mmol)[使用类似于实施例A2979所述的方法制备]在DCM(50mL)和H

在0C下，向2-(2-(2-(2-((4-溴吡啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸(3.0g，8.26mmol)在MeOH(30mL)中的溶液中滴加SOCl

使用类似于示例性化合物9所述的方法，将2-(2-(2-(2-((4-溴吡啶-2-基)氧基)乙氧基)乙氧基)乙氧基)乙酸甲酯转化为最终化合物(2S,4R)-1-((2S)-14-((4-(3-(3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)-2-(叔丁基)-4-氧代-6,9,12-三氧杂-3-氮杂十四酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺(示例性化合物6)。

向3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1,17-二醇(4g，14.2mmol)和Et

向3,6,9,12,15-五氧杂十七烷-1,17-二基双(4-甲基苯磺酸酯)(3.5g，5.93mmol)在无水DMF(20mL)中的溶液中添加4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(1.15g，5.93mmol)和Cs

向4-甲基苯磺酸17-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷酯(0.3g，0.49mmol)和(2S,4R)-4-羟基-N-(2-羟基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-1-((S)-3-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(268mg，0.49mmol)在DMF(5mL)中的的溶液中添加K

向(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)丁酰基)-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)-2-((17-(4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷基)氧基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺和(1-(17-(2-(((2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)丁酰基)吡咯烷-2-羧酰胺基)甲基)-5-(4-甲基噻唑-5-基)苯氧基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷基)-1H-吡唑-4-基)硼酸的混合物(270mg，0.27mmol)和5-溴-6-氯哒嗪-3-胺(85mg，0.41mmol)在二噁烷(20mL)和水(2mL)中的溶液中添加碳酸铯(220mg，0.68mmol)、PdCl

向(2S,4R)-N-(2-((17-(4-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-1H-吡唑-1-基)-3,6,9,12,15-五氧杂十七烷基)氧基)-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(1-氧代异吲哚啉-2-基)丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(175mg，0.18mmol)和(2-羟苯基)硼酸(32mg，0.23mmol)在二噁烷(15mL)和水(1.5mL)中的溶液中添加碳酸铯(176mg，0.54mmol)、PdCl

使用类似于示例性化合物20所述的方法制备示例性化合物12、13和21。

在250-mL圆底烧瓶中置入4-(四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(1.5g，7.73mmol，1.00当量)在二噁烷/H

在10-mL密封管中置入6-氯-4-(1H-吡唑-4-基)哒嗪-3-胺(390mg，1.99mmol，1.00当量)在二噁烷(4mL)中的溶液、[2-(甲氧基甲氧基)苯基]硼酸(546mg，3.00mmol，1.50当量)、Pd(PPh

在50-mL圆底烧瓶中置入6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(1H-吡唑-4-基)哒嗪-3-胺(100mg，0.34mmol，1.00当量)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液、2-[2-(2-[[(4-甲基苯)磺酰基]氧基]乙氧基)乙氧基]乙-1-醇(100mg，0.33mmol，1.00当量)、碳酸钾(91mg，0.66mmol，2.00当量)。将所得溶液在70℃下在油浴中搅拌12小时。用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)的硅胶柱上。得到100mg(69％)呈黄色油状物的2-[2-[2-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙氧基]乙氧基]乙-1-醇。

在100-mL圆底烧瓶中置入2-[2-[2-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙氧基]乙氧基]乙-1-醇(100mg，0.23mmol，1.00当量)在二氯甲烷(20mL)中的溶液、4-甲苯磺酰氯(66.0mg，0.35mmol，1.50当量)、三乙胺(47mg，0.46mmol，2.00当量)、4-二甲基氨基吡啶(10mg，0.08mmol，0.30当量)。将所得溶液在室温下搅拌16小时。用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。得到100mg(74％)呈黄色油状物的4-甲基苯-1-磺酸2-[2-[2-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙氧基]乙氧基]乙酯。

在50-mL圆底烧瓶中置入4-甲基苯-1-磺酸2-[2-[2-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙氧基]乙氧基]乙酯(120mg，0.2mmol，1.00当量)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液、(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(130mg，0.2mmol，1.00当量)[如Qian,Y.等人在WO 2017/030814中所述制备]、碳酸钾(100mg，0.4mmol，2.00当量)。将所得溶液在70℃下搅拌12小时。用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。得到90mg呈无色油状物的(2S,4R)-1-[2-[3-(2-[2-[2-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙氧基]乙氧基]乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在50-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-1-[2-[3-(2-[2-[2-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙氧基]乙氧基]乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(90.0mg，0.10mmol，1.00当量)在异丙醇(2mL)和四氢呋喃(2mL)中的溶液，然后添加浓氯化氢溶液(12N，2mL)。在室温下搅拌所得溶液1小时。真空浓缩所得混合物。通过制备型HPLC纯化粗产物，条件如下：色谱柱：XBridge C18 OBD制备型色谱柱，

通过手性-制备型HPLC纯化产物，条件如下：色谱柱，CHIRAL ART Cellulose-SB，2*25cm，5um；流动相，Hex--HPLC和乙醇--HPLC(在24分钟内保持50％乙醇-HPLC)；检测器，UV 220/254nm。得到17.8mg(34％)呈白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-(3-[2-[2-(2-[4-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基]乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺[

使用上文用于示例性化合物14和示例性化合物15所述的方法制备示例性化合物16、17、18和19。

在250-mL圆底烧瓶中置入(Z)-4-(苄基氧基)-N-羟基丁碳亚氨基酰氯(8.7g，38.21mmol，1.00当量)、丁-3-炔-1-醇(3.3g，47.08mmol，1.23当量)、乙酸乙酯(70mL)、水(70mL)、碳酸氢钠(4.0g，47.61mmol，1.25当量)。将所得溶液在25C下搅拌2小时。将所得溶液用乙酸乙酯萃取，并用饱和氯化钠水溶液洗涤。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱的硅胶柱上。得到5.9g(59％)呈黄色油状物的2-[3-[3-(苄基氧基)丙基]-1,2-噁唑-5-基]乙-1-醇。

在100-mL圆底烧瓶中置入2-[3-[3-(苄基氧基)丙基]-1,2-噁唑-5-基]乙-1-醇(550.0mg，2.10mmol，1.00当量)、丙酮(30mL)、Cr

在250-mL圆底烧瓶中置入2-[3-[3-(苄基氧基)丙基]-1,2-噁唑-5-基]乙酸乙酯(8.0g，26.37mmol，1.00当量)、乙醇(50mL)、硫酸(0.1mL)。将所得溶液在70C下搅拌1.5小时。真空浓缩所得混合物。通过快速-制备型HPLC纯化粗产物，条件如下：色谱柱，C18硅胶；流动相，在49分钟内将乙腈:水＝0:100增加至乙腈:水＝60:40；检测器，UV 220nm。得到4.5g(56％)呈浅黄色油状物的2-[3-[3-(苄基氧基)丙基]-1,2-噁唑-5-基]乙酸乙酯。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的250-mL 3颈圆底烧瓶中置入2-[3-[3-(苄基氧基)丙基]-1,2-噁唑-5-基]乙酸乙酯(4.5g，14.83mmol，1.00当量)和四氢呋喃(70mL)。然后在20分钟内，在0C下，一边搅拌一边滴加t-BuOK(2.0g，17.82mmol，1.20当量)在四氢呋喃(17.8mL)中的溶液。在2分钟内，在0C下，一边搅拌一边向其中滴加2-碘丙烷(3.01g，17.71mmol，1.19当量)。将所得溶液在25C下搅拌2小时。然后用水淬灭该反应。将所得溶液用乙酸乙酯萃取，并用饱和氯化钠水溶液洗涤。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。得到4.3g(84％)呈橙色油状物的2-[3-[3-(苄基氧基)丙基]-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸乙酯。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的250-mL 3颈圆底烧瓶中置入2-[3-[3-(苄基氧基)丙基]-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸乙酯(4.2g，12.16mmol，1.00当量)和二氯甲烷(100mL)。然后在30分钟内，在-78C下，一边搅拌一边滴加BBr

在100-mL圆底烧瓶中置入2-[3-(3-羟基丙基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸乙酯(1.2g，4.70mmol，1.00当量)、乙醇(20mL)、水(10mL)、氢氧化钠(1.9g，47.50mmol，10.0当量)。将所得溶液在室温下搅拌1夜。用氯化氢(2M)将溶液的pH值调节至6。将所得溶液用乙酸乙酯萃取，并用饱和氯化钠洗涤。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。得到800mg(75％)呈黄色油状物的2-[3-(3-羟基丙基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸。

在100-mL圆底烧瓶中置入2-[3-(3-羟基丙基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸(800mg，3.52mmol，1.00当量)、(2S,4R)-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(1.24g，3.50mmol，1.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(15mL)、N-乙基-N-异丁基丙-2-胺(1.82g，14.08mmol，4.00当量)，T

在50-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-4-羟基-1-[2-[3-(3-羟基丙基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(870mg，1.65mmol，1.00当量)、二氯甲烷(10mL)、4-甲基苯-1-磺酰氯(377mg，1.98mmol，1.20当量)、三乙胺(334.0mg，3.30mmol，2.00当量)、4-二甲基氨基吡啶(40mg，0.33mmol，0.20当量)。将所得溶液在室温下搅拌4小时。将所得溶液用二氯甲烷萃取，并用水和饱和氯化钠洗涤。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到600mg(53％)呈黄色固体的4-甲基苯-1-磺酸3-(5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-([[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]氨基甲酰基)吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1,2-噁唑-3-基)丙酯。

在50-mL圆底烧瓶中置入2-(2-羟基乙氧基)乙-1-醇(273.0mg，2.57mmol，5.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。在0C下添加氢化钠(41.0mg，1.71mmol，2.00当量)，然后在20分钟后添加4-甲基苯-1-磺酸3-(5-[1-[(4S)-4-羟基-1-([[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]氨基甲酰基)吡咯烷-2-基]-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1,2-噁唑-3-基)丙酯(350.0mg，0.51mmol，1.00当量)。将所得溶液在室温下搅拌4小时。将反应混合物用水稀释并用DCM萃取。将有机相经硫酸钠干燥并浓缩，并将残余物进行快速色谱。得到160mg(51％)呈黄色油状物的(4S)-4-羟基-2-[2-(3-[3-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]丙基]-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-1-甲酰胺。

在50-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(3-[3-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]丙基]-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(160mg，0.26mmol，1.00当量)、二氯甲烷(5mL)、4-甲基苯-1-磺酰氯(59mg，0.31mmol，1.20当量)、三乙胺(53mg，0.52mmol，2.00当量)、4-二甲基氨基吡啶(6mg，0.05mmol，0.20当量)。将所得溶液在室温下搅拌5小时。用二氯甲烷萃取所得溶液。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(12:1)洗脱的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到72mg(36％)呈黄色油状物的4-甲基苯-1-磺酸2-[2-[3-(5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-([[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]氨基甲酰基)吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1,2-噁唑-3-基)丙氧基]乙氧基]乙酯。

在50-mL圆底烧瓶中置入4-甲基苯-1-磺酸2-[2-[3-(5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-([[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]氨基甲酰基)吡咯烷-1-基]-3-甲基-1-氧代丁烷-2-基]-1,2-噁唑-3-基)丙氧基]乙氧基]乙酯(70mg，0.09mmol，1.00当量)、6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(1H-吡唑-4-基)哒嗪-3-胺(27mg，0.09mmol，1.00当量)、乙腈(2mL)、碳酸钾(38mg，0.27mmol，3.00当量)。将所得溶液在80C下搅拌1夜。将所得溶液用乙酸乙酯萃取，并用水洗涤。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到30mg(37％)呈黄色油状物的(2S,4R)-1-[2-[3-(3-[2-[2-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙氧基]乙氧基]丙基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在50-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-1-[2-[3-(3-[2-[2-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙氧基]乙氧基]丙基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(27.0mg，0.03mmol，1.00当量)、甲醇(2mL)、氯化氢(水溶液)(0.5mL)。将所得溶液在室温下搅拌1夜。用水稀释所得溶液。用碳酸钠将溶液的pH值调节至8。将所得溶液用乙酸乙酯萃取，并用水洗涤。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。通过制备型HPLC纯化粗产物，条件如下：色谱柱：XBridge Shield RP18 OBD色谱柱，5um，19*150mm；流动相A：水(0.05％NH

在25-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-1-[2-[3-(3-[2-[2-(2-[4-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基]乙氧基)乙氧基]乙氧基]丙基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(87mg，0.10mmol，1.00当量)[如示例性化合物22所述制备]和甲醇(10mL)。将所得溶液在25C下搅拌1小时。通过手性-制备型HPLC纯化粗产物，条件如下：色谱柱，CHIRALPAK ID-3；流动相，MtBE(0.1％DEA):EtOH＝80:20，尺寸：0.46*10cm；3um；检测器，UV-254nm。得到17mg(20％)呈灰白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[3-(3-[2-[2-(2-[4-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基]乙氧基)乙氧基]乙氧基]丙基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺[

使用类似于上述用于示例性化合物22、23和24的方法制备示例性化合物25和26。

在50-mL圆底烧瓶中置入2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙-1-醇(257mg，1.71mmol，3.00当量)和N,N-二甲基甲酰胺(5mL)。然后在10分钟内，在0C下，添加氢化钠(34mg，1.42mmol，1.50当量)。向其中添加4-溴-2-氟吡啶(100mg，0.57mmol，1.00当量)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。然后通过添加5mL水/冰来淬灭反应。用乙酸乙酯萃取所得溶液，并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤所得混合物。将该混合物经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到90mg(52％)呈浅黄色液体的2-(2-[2-[(4-溴吡啶-2-基)氧基]乙氧基]乙氧基)乙-1-醇。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50mL圆底烧瓶中置入2-(2-[2-[(4-溴吡啶-2-基)氧基]乙氧基]乙氧基)乙-1-醇(500mg，1.63mmol，1.00当量)、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(347mg，1.64mmol，1.00当量)、Cs

在50mL圆底烧瓶中置入8-(2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]吡啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(419mg，0.96mmol，1.00当量)和1M HCl的甲醇溶液(8mL)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。真空浓缩所得混合物。得到319mg(99％)呈黄色油状物的2-(2-[2-[(4-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]乙氧基]乙氧基)乙-1-醇。

在10mL微波管中置入2-(2-[2-[(4-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]乙氧基]乙氧基)乙-1-醇(319mg，0.95mmol，1.00当量)、4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(780mg，3.74mmol，4.00当量)、DMSO(10mL)、DIEA(2mL)。将最终反应混合物在130C下用微波辐射照射3小时。然后通过添加10mL水来淬灭反应。用乙酸乙酯萃取所得溶液，并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤所得混合物。将该混合物经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到260mg(59％)呈黄色固体的2-[2-[2-([4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]氧基)乙氧基]乙氧基]乙-1-醇。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的10mL微波管中置入2-[2-[2-([4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]氧基)乙氧基]乙氧基]乙-1-醇(295mg，0.63mmol，1.00当量)、[2-(甲氧基甲氧基)苯基]硼酸(223mg，1.23mmol，2.00当量)、碳酸钾(254mg，1.84mmol，3.00当量)、二噁烷(4mL)、水(1mL)、Pd(PPh

在50mL圆底烧瓶中置入2-[2-(2-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]乙氧基)乙氧基]乙-1-醇(100mg，0.18mmol，1.00当量)、TsCl(50mg，0.26mmol，1.50当量)、二氯甲烷(5mL)、三乙胺(0.3mL)、4-二甲基氨基吡啶(2mg，0.02mmol，0.10当量)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。然后，通过添加水来淬灭该反应。用乙酸乙酯萃取所得溶液，并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤所得混合物。将该混合物经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到97mg(76％)呈黄色固体的4-甲基苯-1-磺酸2-[2-(2-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]乙氧基)乙氧基]乙酯。

在50mL圆底烧瓶中置入4-甲基苯-1-磺酸2-[2-(2-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]乙氧基)乙氧基]乙酯(87mg，0.12mmol，1.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(54mg，0.75mmol，1.00当量)、(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基吡咯烷-2-甲酰胺(79mg，0.16mmol，2.00当量)、Cs

在50mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-1-[2-(3-[2-[2-(2-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]乙氧基)乙氧基]乙氧基]-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(131mg，0.13mmol，1.00当量)、甲醇(5mL)和1M HCl的甲醇溶液(1.5mL)。将所得溶液在室温下搅拌7小时。用5mL H

使用类似于示例性化合物27和28所述的方法制备示例性化合物29和30。

在50mL圆底烧瓶中置入2-(噁烷-2-基氧基)乙-1-醇(4.5g，30.78mmol，1.00当量)、四氢呋喃(10mL)、t-BuOK(3.6g，32.08mmol，2.00当量)在四氢呋喃(60mL)中的溶液。然后在0C下，一边搅拌一边滴加3-溴丙-1-炔(2.61mL，1.00当量)。将所得溶液在室温下搅拌过夜。然后，通过添加水/冰来淬灭该反应。用乙酸乙酯萃取所得溶液，并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤所得混合物。将该混合物经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:5)洗脱的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到2.8g(49％)呈黄色油状物的2-[2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基]噁烷。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的10-mL微波管中置入2-[2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基]噁烷(2.8g，15.20mmol，1.00当量)、ZrCp

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的10-mL微波管中置入4,4,5,5-四甲基-2-[(1E)-3-[2-(噁烷-2-基氧基)乙氧基]丙-1-烯-1-基]-1,3,2-二氧杂戊硼烷(1g，3.20mmol，1.00当量)、Pd(PPh

在50-mL圆底烧瓶中置入8-[2-[(1E)-3-[2-(噁烷-2-基氧基)乙氧基]丙-1-烯-1-基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(639mg，1.35mmol，1.00当量)、碳载钯(200mg)和甲醇(15mL)，并将混合物在氢气气氛下于室温搅拌过夜。滤出固体，并将滤液浓缩。得到639mg(100％)呈黄色油状物的8-(2-[3-[2-(噁烷-2-基氧基)乙氧基]丙基]吡啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯。

在50-mL圆底烧瓶中置入8-(2-[3-[2-(噁烷-2-基氧基)乙氧基]丙基]吡啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(639mg，1.34mmol，1.00当量)、甲醇(15mL)，并向溶液中鼓泡通入氯化氢气体。将所得溶液在室温下搅拌3小时。真空浓缩所得混合物。得到387mg(100％)呈黄色油状物的2-[3-(4-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)丙氧基]乙-1-醇。

在10-mL微波管中置入2-[3-(4-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)丙氧基]乙-1-醇(387mg，1.85mmol，1.00当量)、4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(1.54g，7.39mmol，4.00当量)、DMSO(8mL)、DIEA(1.53mL，5.00当量)。将最终反应混合物在130C下用微波辐射照射3小时。然后，通过添加水来淬灭该反应。用二氯甲烷/MeOH＝10∶1萃取所得溶液，合并水层并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(7:3)的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到519mg(67％)呈黄色油状物的2-(3-[4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]丙氧基)乙-1-醇。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL圆底烧瓶中置入2-(3-[4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]丙氧基)乙-1-醇(650mg，1.55mmol，1.00当量)、[2-(甲氧基甲氧基)苯基]硼酸(566mg，3.11mmol，2.00当量)、二噁烷(8mL)、水(2mL)、碳酸钾(644mg，4.66mmol，3.00当量)、Pd(PPh

在50-mL圆底烧瓶中置入2-[3-[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]丙氧基]乙-1-醇(400mg，0.77mmol，1.00当量)、二氯甲烷(15mL)、TsCl(219mg，1.15mmol，1.50当量)、三乙胺(155mg，1.53mmol，2.00当量)、4-二甲基氨基吡啶(9.4mg，0.08mmol，0.10当量)。将所得溶液在室温下搅拌过夜。然后，通过添加水来淬灭该反应。用二氯甲烷萃取所得溶液，并合并有机层。用饱和氯化钠洗涤所得混合物。将该混合物经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到330mg(64％)呈黄色固体的4-甲基苯-1-磺酸2-[3-[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]丙氧基]乙酯。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL圆底烧瓶中置入2-(6-氯代吡啶-3-基)乙酸甲酯(500mg，2.69mmol，1.00当量)、哌嗪-1-羧酸叔丁酯(502mg，2.70mmol，1.00当量)、Cs

在50-mL圆底烧瓶中置入4-[5-(2-甲氧基-2-氧代乙基)吡啶-2-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(319mg，0.95mmol，1.00当量)、二氯甲烷(8mL)、三氟乙酸(2mL)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。真空浓缩所得混合物。得到223mg(100％)呈黄色油状物的2-[6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基]乙酸甲酯。

在50-mL圆底烧瓶中置入2-[6-(哌嗪-1-基)吡啶-3-基]乙酸甲酯(101mg，0.43mmol，1.00当量)、4-甲基苯-1-磺酸2-3-[4-(3-3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]丙氧基乙酯(320mg，0.47mmol，1.10当量)、乙腈(4mL)、碳酸钾(298mg，2.16mmol，5.00当量)、NaI(193mg，3.00当量)。将所得溶液在60C下搅拌过夜。真空浓缩所得混合物。将残余物在二氯甲烷和水之间分配，分离有机层，并用饱和氯化钠洗涤。将该混合物经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(5:1)洗脱的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到94mg(30％)呈黄色固体的2-[6-[4-(2-[3-[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]丙氧基]乙基)哌嗪-1-基]吡啶-3-基]乙酸甲酯。

在50-mL圆底烧瓶中置入2-[6-[4-(2-[3-[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]丙氧基]乙基)哌嗪-1-基]吡啶-3-基]乙酸甲酯(94mg，0.13mmol，1.00当量)、甲醇(5mL)、水(2mL)和LiOH(15mg，0.64mmol，5.00当量)。将所得溶液在室温下搅拌2天。真空浓缩所得混合物。用10mL H

根据以下方案并使用上述用于先前实施例的方法，将2-[6-[4-(2-[3-[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]丙氧基]乙基)哌嗪-1-基]吡啶-3-基]乙酸转化为最终化合物(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(6-(4-(2-(3-(4-(3-(3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)丙氧基)乙基)哌嗪-1-基)吡啶-3-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺。

使用针对示例性化合物31所述的方法制备示例性化合物50。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的250-mL圆底烧瓶中置入2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙-1-醇(10.0g，66.59mmol，1.00当量)在二氯甲烷(100mL)中的溶液、(二乙基氧瓮)三氟硼酸酯(1.9g，13.33mmol，0.20当量)和2-重氮乙酸乙酯(3.8g，0.50当量)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。然后，通过添加水来淬灭该反应。用乙酸乙酯萃取所得溶液，并合并有机层。所得混合物用盐水洗涤。将该混合物经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到3.6g(23％)呈黄色油状物的2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL圆底烧瓶中置入2-[2-[2-(2-羟基乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(1.0g，4.23mmol，1.00当量)在二氯甲烷(20mL)中的溶液、4-甲基苯-1-磺酰氯(970mg，5.09mmol，1.20当量)、三乙胺(860.0mg，8.50mmol，2.00当量)。将所得溶液在室温下搅拌5小时。然后，通过添加水来淬灭该反应。用乙酸乙酯萃取所得溶液，并合并有机层。所得混合物用盐水洗涤。将该混合物经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到1.1g(65％)呈黄色油状物的2-[2-[2-(2-[[(4-甲基苯)磺酰基]氧基]乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL圆底烧瓶中置入2-[2-[2-(2-[[(4-甲基苯)磺酰基]氧基]乙氧基)乙氧基]乙氧基]乙酸乙酯(1.0g，2.56mmol，1.20当量)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液、6-溴吡啶-2-醇(370mg，2.13mmol，1.00当量)、Cs

根据以下方案并使用类似于上述用于其他实施例的方法，将1-(6-溴吡啶-2-基)-1,4,7,10-四氧杂十二烷-12-酸乙酯转化为最终化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-(1-[6-[(1R,4R)-5-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-2,5-二氮杂双环[2.2.1]庚烷-2-基]吡啶-2-基]-1,4,7,10-四氧杂十二烷-12-酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在250-mL圆底烧瓶中置入1-溴-4-乙苯(5.5g，29.8mmol，1.0当量)、CCl

在100-mL圆底烧瓶中置入6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(1H-吡唑-4-基)哒嗪-3-胺(300mg，1.0mmol，1.0当量)、N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)、1-溴-4-(1-溴乙基)苯(400.0mg，1.5mmol，1.5当量)、碳酸钾(414mg，3.0mmol，3.0当量)。将所得溶液在60℃下搅拌3小时。然后通过添加10mL水来淬灭该反应。用乙酸乙酯(20.0mL x3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(1:10)洗脱的硅胶柱上。得到300mg(62％)呈棕色固体的4-[1-[1-(4-溴苯基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺。

在250-mL圆底烧瓶中置入丙-2-炔-1-醇(10g，178.4mmol，1.0当量)、四氢呋喃(100.0mL)、氢化钠(6.4g，266.7mmol，0.9当量)和2-溴乙酸叔丁酯(28g，143.6mmol，0.8当量)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。然后通过添加20mL氯化铵水溶液来淬灭该反应。真空浓缩所得混合物。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。得到24.0g(90％)呈黄色固体的2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙酸叔丁酯。

在250-mL圆底烧瓶中置入2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙酸叔丁酯(6.6g，38.8mmol，1.0当量)、三乙胺(400.0mg，3.9mmol，0.1当量)、频哪醇硼烷(20.0mL)、ZrCp

在10-mL密封管中置入4-[1-[1-(4-溴苯基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺(300mg，0.6mmol，1.0当量)、2-[[(2E)-3-(四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基]乙酸叔丁酯(279mg，0.9mmol，1.5当量)、Pd(PPh3)4(72mg，0.06mmol，0.1当量)、碳酸钾(259mg，1.9mmol，3.0当量)、二噁烷(4.0mL)和H

在100-mL圆底烧瓶中置入2-[[(2E)-3-[4-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]苯基]丙-2-烯-1-基]氧基]乙酸叔丁酯(93mg，0.2mmol，1.0当量)、甲醇(5.0mL)、碳载钯(100mg)。将所得溶液于室温在氢气气氛下搅拌1小时。滤出固体。真空浓缩所得混合物。得到56mg(60％)呈黄色固体的2-(3-[4-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]苯基]丙氧基)乙酸叔丁酯。

在100-mL圆底烧瓶中置入2-(3-[4-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]苯基]丙氧基)乙酸叔丁酯(56mg，0.1mmol，1.0当量)、二氯甲烷(10.0mg)、三氟乙酸(5mL)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。真空浓缩所得混合物。得到45mg(90％)呈棕色固体的2-(3-[4-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]苯基]丙氧基)乙酸。

在25-mL圆底烧瓶中置入2-[3-[4-(1-[4-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基]乙基)苯基]丙氧基]乙酸(26mg，0.06mmol，1.0当量)、N,N-二甲基甲酰胺(5mL)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基吡咯烷-2-甲酰胺(30mg，0.07mmol，1.2当量)、DIEA(21mg，0.2mmol，3.0当量)、T3P(53mg，1.2当量)。在室温下搅拌所得溶液1小时。然后通过添加0.5mL水来淬灭反应。滤出固体。通过制备型HPLC纯化粗产物(5mL)，条件如下：色谱柱，XBridge Prep C18 OBD色谱柱，150mm 5um；流动相，水(10MMOL/L碳酸氢盐胺)和ACN(在7分钟内45.0％ACN升至52.0％)；检测器，UV 254/220nm。得到6mg(12％)呈灰色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-(2-[3-[4-(1-[4-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基]乙基)苯基]丙氧基]乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

根据以下方案使用上文用于其他实施例的方法以及本领域技术人员已知和理解的方法制备示例性化合物34。

根据以下方案使用上文用于其他实施例的方法以及本领域技术人员已知和理解的方法制备示例性化合物36和37。

在500-mL圆底烧瓶中置入2-(哌嗪-1-基)乙-1-醇(26.0g，199.7mmol，1.0当量)、二氯甲烷(200.0mL)、三乙胺(40.4g，399.3mmol，2.0当量)、氯甲酸苄酯(40.8g，239.2mmol，1.2当量)。将所得溶液在0℃下搅拌2h。然后通过添加10mL水来淬灭该反应。用二氯甲烷(100mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。得到22g(42％)呈黄色油状物的4-(2-羟乙基)哌嗪-1-羧酸苄酯。

在100-mL圆底烧瓶中置入4-(2-羟乙基)哌嗪-1-羧酸苄酯(5.3g，20.1mmol，1.0当量)和N,N-二甲基甲酰胺(30.0mL)。然后在5分钟内添加氢化钠(1.6g，66.7mmol，1.2当量)。在20分钟内向其中添加4-溴-2-氟吡啶(3.9g，22.2mmol，1.1当量)。将所得溶液在0℃下搅拌4小时。然后通过添加10mL氯化铵水溶液来淬灭该反应。用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。得到5.2g(62％)呈黄色油状物的4-[2-[(4-溴吡啶-2-基)氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯。

步骤3

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的250-mL圆底烧瓶中置入4-[2-[(4-溴吡啶-2-基)氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯(2.1g，5.0mmol，1.0当量)、RuphosPd II(775.0mg，1.0mmol，0.2当量)和Cs

在100-mL圆底烧瓶中置入8-[2-(2-[4-[(苄基氧基)羰基]哌嗪-1-基]乙氧基)吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(670mg，1.2mmol，1.0当量)的甲醇(10.0mL)溶液。然后添加氯化氢的1,4-二噁烷溶液(4M，10mL)。将所得溶液在室温下搅拌5小时。真空浓缩所得混合物。得到410mg(69％)呈黄色固体的4-[2-[(4-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯盐酸盐。

在10-mL密封管中置入4-[2-[(4-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯盐酸盐(200.0mg，0.4mmol，1.0当量)、4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(137.0mg，0.7mmol，1.5当量)、甲基亚砜(3.0mL)和N,N-二异丙基乙胺(1mL)。将最终反应混合物在130℃下用微波辐射照射6小时。然后通过添加1mL水来淬灭该反应。用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。得到100mg(42％)呈棕色固体的4-[2-([4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]氧基)乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯。

在100-mL圆底烧瓶中置入4-[2-([4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]氧基)乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯(390mg，0.7mmol，1.0当量)、二噁烷(8.0mL)、水(2.0mL)、碳酸钾(279mg，2.0mmol，3.0当量)、[2-(甲氧基甲氧基)苯基]硼酸(184.0mg，1.0mmol，1.50当量)、Pd(PPh3)

在氮气气氛下，在100-mL圆底烧瓶中，向4-(2-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]乙基)哌嗪-1-羧酸苄酯(200mg，0.29mmol，1.00当量)在10mL异丙醇中的溶液中添加氢氧化钯(100mg，0.71mmol，2.42当量)。然后将烧瓶抽真空并用氢气冲洗。将所得溶液在室温下搅拌12小时。滤出固体。真空浓缩所得混合物。得到70mg(44％)呈棕色油状物的6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(8-[2-[2-(哌嗪-1-基)乙氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-胺。

在100-mL圆底烧瓶中置入4-(四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(1.9g，10.0mmol，1.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(30mL)、2-溴-3-甲基丁酸乙酯(2.1g，10.0mmol，1.0当量)和碳酸铯(10.0g，30.7mmol，3.0当量)。将所得溶液在90℃下搅拌12小时。然后通过添加10mL水来淬灭该反应。用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:6)洗脱的硅胶柱上。得到3.3g(93％)呈白色固体的3-甲基-2-[4-(四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]丁酸乙酯。

在250-mL圆底烧瓶中置入3-甲基-2-[4-(四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]丁酸乙酯(3.0g，9.3mmol，1.0当量)、四氢呋喃(30mL)、水(30mL)、过硼酸钠(3.5g，23.3mmol，2.5当量)。将所得溶液在室温下搅拌12小时。真空浓缩所得混合物。用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱的硅胶柱上。得到1740mg(88％)呈白色固体的2-(4-羟基-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁酸乙酯。

在50-mL圆底烧瓶中置入2-(4-羟基-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁酸乙酯(3.5g，16.5mmol，1.0当量)、甲醇(10mL)、水(10mL)和氢氧化钠(2.7g，67.5mmol，4.0当量)。将所得溶液在室温下搅拌12小时。用2M HCl将溶液的pH值调节至2。通过制备型HPLC纯化粗产物，条件如下：色谱柱，XBridge Shield RP18 OBD色谱柱，5um，19*150mm；流动相，水(0.1％FA)和乙腈(在2分钟内0.0％乙腈升至4.0％，在8分钟内升至20.0％)；检测器，UV 254nm。得到1.5g(49％)呈白色油状物的2-(4-羟基-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁酸。

在100-mL圆底烧瓶中置入2-(4-羟基-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁酸(500mg，2.7mmol，1.0当量)、N,N-二甲基甲酰胺(20mL)、(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(900mg，2.5mmol，0.9当量)、DIEA(1.1g，8.5mmol，3.0当量)、T3P(2.6g，1.5当量)。在室温下搅拌所得溶液1小时。然后通过添加5mL水来淬灭反应。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)的硅胶柱上。得到800mg(59％)呈黄色固体的(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(4-羟基-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在5-mL密封管中置入(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(4-羟基-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(300mg，0.60mmol，1.0当量)、N,N-二甲基甲酰胺(5.0mL)、1,2-二溴乙烷(222mg，1.2mmol，2.0当量)、碳酸钾(250mg，1.8mmol，3.0当量)。将所得溶液在70℃下搅拌12小时。然后通过添加1mL水来淬灭该反应。通过制备型HPLC纯化粗产物，条件如下：色谱柱，XBridge ShieldRP18 OBD色谱柱，5um，19*150mm；流动相，水(10mmol/L碳酸氢铵)和乙腈(在8分钟内35.0％乙腈升至47.0％)；检测器，UV 254nm。得到120mg(33％)呈黄色固体的(2S,4R)-1-[2-[4-(2-溴乙氧基)-1H-吡唑-1-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在100-mL圆底烧瓶中置入6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(8-[2-[2-(哌嗪-1-基)乙氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-胺(54.6mg，0.1mmol，1.0当量)、乙腈(10.0mL)、碳酸钾(41mg，0.30mmol，3.0当量)、碘化钠(18mg，0.1mmol，1.2当量)、(2S,4R)-1-2-[4-(2-溴乙氧基)-1H-吡唑-1-基]-3-甲基丁酰基-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5yl)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(60mg，0.1mmol，1.0当量)。将所得溶液在70℃下搅拌12小时。然后通过添加3mL水来淬灭该反应。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱的硅胶柱上。得到30mg(29％)呈浅棕色固体的(2S,4R)-1-(2-[4-[2-(4-[2-[(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]乙基]哌嗪-1-基)乙氧基]-1H-吡唑-1-基]-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在25-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-1-[2-(4-[2-[4-(2-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]乙基)哌嗪-1-基]乙氧基]-1H-吡唑-1-基)-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(40mg，0.04mmol，1.0当量)、甲醇(8mL)、氯化氢(150mL)。将所得溶液在室温下搅拌6小时。然后通过添加1mL水来淬灭反应。通过制备型HPLC纯化粗产物(5mL)，条件如下：色谱柱，XBridge Shield RP18 OBD色谱柱，5um，19*150mm；流动相，水(0.1％甲酸)和乙腈(在8分钟内13.0％乙腈升至27.0％)；检测器，UV254nm。得到30mg(78％)呈白色固体的(2S,4R)-1-(2-[4-[2-(4-[2-[(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]乙基]哌嗪-1-基)乙氧基]-1H-吡唑-1-基]-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺。

通过手性制备型HPLC纯化(2S,4R)-1-(2-[4-[2-(4-[2-[(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟基苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]乙基]哌嗪-1-基)乙氧基]-1H-吡唑-1-基]-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺，条件如下：色谱柱，Chiralpak IC，2*25cm，5um；流动相，DCM和甲醇(在11分钟内保持50.0％甲醇)；检测器，UV 220/254nm。得到5.6mg呈白色固体的(2S,4R)-1-[(2R)-2-[4-[2-(4-[2-[(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]乙基]哌嗪-1-基)乙氧基]-1H-吡唑-1-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺[

在250-mL圆底烧瓶中置入2-溴-4-氟吡啶(7.8g，44.32mmol，1.05当量)、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(9g，42.4mmol，1.00当量)、DIEA(25g，193mmol，4.00当量)在NMP(120mL)中的溶液。将所得溶液在150C下搅拌3小时。冷却反应混合物。然后，通过添加水(200mL)来淬灭该反应。用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取所得溶液，再合并有机层。用水(50mL x 1)和盐水(50mL x 1)洗涤所得混合物。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:2)洗脱的硅胶柱上。得到11.7g(75％)呈黄色固体的8-(2-溴吡啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯。

在250-mL圆底烧瓶中置入[(丙-2-炔-1-基氧基)甲基]苯(10g，68.4mmol，1.00当量)、频哪醇硼烷(10mL)、ZrCp

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的250-mL圆底烧瓶中置入8-(2-溴吡啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(4.0g，10.9mmol，1.00当量)、2-[(1E)-3-(苄基氧基)丙-1-烯-1-基]-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷(4.48g，16.3mmol，1.50当量)、Pd(dppf)

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的250-mL圆底烧瓶中置入8-[2-[(1E)-3-(苄基氧基)丙-1-烯-1-基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(12.9g，29.6mmol，1.00当量)在甲醇/HOAc(200/0.5mL)中的溶液。在氮气气氛下添加碳载钯(6g)。然后将烧瓶抽真空并用氢气冲洗。使用氢气球于50C在氢气气氛下将反应混合物氢化20小时。通过硅藻土垫过滤出固体，并减压浓缩滤液。得到10.2g(99％)呈黄色油状物的8-[2-(3-羟基丙基)吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯。

在100-mL圆底烧瓶中置入8-[2-(3-羟基丙基)吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(700mg，2.01mmol，1.00当量)在二氯甲烷(30mL)中的溶液，并在0～5C下添加戴斯-马丁氧化剂(1.7g，2.00当量)。将所得溶液在室温下搅拌6小时。在15C下真空浓缩所得混合物。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(5:1)洗脱的硅胶柱上。得到500mg(72％)呈白色固体的8-[2-(3-氧代丙基)吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯。

在50-mL圆底烧瓶中置入8-[2-(3-氧代丙基)吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(1.4g，4.05mmol，1.00当量)、哌嗪-1-羧酸苄酯(1.07g，4.86mmol，1.20当量)的二氯甲烷(20mL)溶液。将其搅拌20分钟，并在0C下添加NaBH(OAc)

在100-mL圆底烧瓶中置入8-[2-(3-[4-[(苄基氧基)羰基]哌嗪-1-基]丙基)吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(2.19g，3.98mmol，1.00当量)的甲醇(20mL)溶液。向所得溶液中鼓泡通入氯化氢气体，同时在室温下搅拌1h。真空浓缩所得混合物。得到1.79g(92％)呈浅黄色固体的4-[3-(4-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)丙基]哌嗪-1-羧酸苄酯盐酸盐。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的20-mL微波管中置入4-[3-(4-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)丙基]哌嗪-1-羧酸苄酯盐酸盐(1.79g，3.68mmol，1.00当量)、4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(2.47g，11.9mmol，3.00当量)、DIEA(5.0mL)的DMSO(10mL)溶液。将所得溶液在130C下在油浴中搅拌16小时。然后，通过添加水/冰(50mL)来淬灭该反应。用二氯甲烷(50mL x 3)萃取所得溶液，将有机层合并并经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(5/1)洗脱的硅胶柱上。得到1.21g(57％)呈棕色固体的4-(3-[4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]丙基)哌嗪-1-羧酸苄酯。根据以下方案并使用上述用于其他实施例的方法，将4-(3-[4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]丙基)哌嗪-1-羧酸苄酯转化为6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(8-[2-[3-(哌嗪-1-基)丙基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-胺(用于步骤10)。

在50-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(480mg，1.0mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液、碳酸钾(300mg，2.2mmol，2.2当量)和1,2-二溴乙烷(300mg，1.6mmol，1.6当量)。将所得溶液在70℃下在油浴中搅拌2小时。然后通过添加20mL水来淬灭反应。用乙酸乙酯(3x30mL)萃取所得溶液，并且将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:0)洗脱的硅胶柱上。得到235mg(40％)呈浅黄色固体的(2S,4R)-1-[2-[3-(2-溴乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的20-mL微波管中置入6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(8-[2-[3-(哌嗪-1-基)丙基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-胺(92mg，0.17mmol，1.00当量)[根据以下方案并使用上述用于其他实施例的方法，由来自步骤8的4-(3-[4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]丙基)哌嗪-1-羧酸苄酯制备]、(2S,4R)-1-2-[3-(2-溴乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基-4-羟基-N-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基吡咯烷-2-甲酰胺(100mg，0.17mmol，1.00当量)、碳酸钾(70mg，0.51mmol，3.00当量)、NaI(25mg，0.17mmol，1.00当量)的乙腈(10mL)溶液。将所得混合物在70C下在油浴中搅拌12小时。用二氯甲烷(100mL)萃取所得溶液，再合并有机层。用盐水(30mL)洗涤所得混合物。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。得到180mg(粗品)呈浅黄色固体的(2S,4R)-1-(2-[3-[2-(4-[3-[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]丙基]哌嗪-1-基)乙氧基]-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

根据以下方案并使用类似于上述用于其他实施例的方法，将(2S,4R)-1-(2-[3-[2-(4-[3-[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]丙基]哌嗪-1-基)乙氧基]-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺转化为最终化合物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[3-(2-[4-[3-(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)丙基]哌嗪-1-基]乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺和(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-(2-[4-[3-(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)丙基]哌嗪-1-基]乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

根据以下方案使用上文用于其他实施例的方法以及本领域技术人员理解的方法制备示例性化合物40。

根据以下方案使用上述用于其他示例性化合物的方法制备示例性化合物41和42。

在250-mL圆底烧瓶中置入2-[2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基]乙-1-醇(1g，6.94mmol，1.00当量)在二氯甲烷(80mL)中的溶液、三乙胺(2.8g，27.67mmol，3.00当量)、4-二甲基氨基吡啶(270mg，2.21mmol，0.30当量)和4-甲苯磺酰氯(1.9g，9.97mmol，1.50当量)。将所得溶液在室温下搅拌12小时。真空浓缩所得混合物。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:2)洗脱的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到1.4g(68％)呈黄色油状物的4-甲基苯-1-磺酸2-[2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基]乙酯。

在25-mL密封管中置入4-甲基苯-1-磺酸2-[2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基]乙酯(1.4g，4.69mmol，1.00当量)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液、碳酸钾(1.6g，11.58mmol，3.00当量)、碘化钠(280mg，0.50当量)和2-(哌嗪-1-基)乙酸叔丁酯(898mg，4.48mmol，1.20当量)。将所得溶液在70C下在油浴中搅拌12小时。用乙酸乙酯萃取所得溶液，并合并有机层。将所得混合物用盐水洗涤，并真空浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到910mg(59％)呈黄色油状物的2-(4-[2-[2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基]乙基]哌嗪-1-基)乙酸叔丁酯。

在25-mL密封管中置入2-(4-[2-[2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙氧基]乙基]哌嗪-1-基)乙酸叔丁酯(910mg，2.79mmol，1.00当量)在四氢呋喃(10mL)中的溶液、频哪醇硼烷(630mg，2.00当量)、ZrCp

在100-mL圆底烧瓶中置入3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(2.0g，9.42mmol，1.00当量)在二甲亚砜(40mL)中的溶液、N,N-二异丙基乙胺(714.0mg，5.52mmol，4.00当量)、4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(3.0g，14.39mmol，1.50当量)。将所得溶液在130C下在油浴中搅拌3小时。然后，通过添加水(90mL)来淬灭该反应。用乙酸乙酯(80mL x 3)萃取所得溶液，再合并有机层。用盐水(100mL x 1)洗涤所得混合物。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10/1)的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到1.7g(53％)呈黄色固体的3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的250-mL 3颈圆底烧瓶中置入3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(1.7g，5.00mmol，1.00当量)在二噁烷/水(50/10mL)中的溶液、碳酸钾(2.1g，15.19mmol，3.00当量)、(2-羟苯基)硼酸(1.04g，7.54mmol，1.50当量)、四(三苯基膦)钯(0)(578mg，0.50mmol，0.10当量)。将所得溶液在100C下在油浴中搅拌2小时。然后，通过添加水(60mL)来淬灭该反应。用乙酸乙酯(40mL x3)萃取所得溶液，再合并有机层。用盐水(60mL x1)洗涤所得混合物。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到1.62g(81％)呈黄色固体的3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯。

在250-mL圆底烧瓶中置入3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(1.62g，4.08mmol，1.00当量)在二噁烷(50mL)中的溶液。向上述溶液中引入氯化氢(气体)。将所得溶液在室温下搅拌5小时。真空浓缩所得混合物。得到1.2g(88％)呈黄色油状物的2-(6-氨基-5-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基)苯酚盐酸盐。

在100-mL圆底烧瓶中置入2-(6-氨基-5-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基)苯酚(400mg，1.35mmol，1.00当量)在1-甲基-2-吡咯烷酮(30mL)中的溶液、N,N-二异丙基乙胺(693mg，5.36mmol，4.00当量)、2-溴-4-氟吡啶(355.0mg，2.02mmol，1.50当量)。将所得溶液在130C下在油浴中搅拌2小时。然后，通过添加水(40mL)来淬灭该反应。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得溶液，再合并有机层。用盐水(40mL x 1)洗涤所得混合物。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(4/1)洗脱的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到410mg(67％)呈黄色固体的2-[6-氨基-5-[8-(2-溴吡啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚。

在20-mL密封管中置入2-[4-[2-(2-[[(2E)-3-(四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基]乙氧基)乙基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(628mg，1.38mmol，1.00当量)在二噁烷/水(5:1mL)中的溶液、四(三苯基膦)钯(108mg，0.15mmol，0.10当量)、碳酸钾(286mg，2.07mmol，1.50当量)、2-(6-氨基-5-((1R,5S)-8-(2-溴吡啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-基)苯酚(500mg，1.10mmol，0.80当量)。将所得溶液在80C下在油浴中搅拌2小时。真空浓缩所得混合物。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。合并所收集的级分并真空浓缩。得到540mg(56％)呈黄色固体的2-[4-[2-(2-[[(2E)-3-(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基]乙氧基)乙基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯。

在100-mL圆底烧瓶中置入2-[4-[2-(2-[[(2E)-3-(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基]乙氧基)乙基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(200mg，0.29mmol，1.00当量)在2-丙醇(30mL)和PtO

在100-mL圆底烧瓶中置入2-[4-(2-[2-[3-(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)丙氧基]乙氧基]乙基)哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(190mg，0.27mmol，1.00当量)在二噁烷(20mL)中的溶液。向上述溶液中引入氯化氢(气体)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。真空浓缩所得混合物。得到160mg(92％)呈黄色固体的2-[4-(2-[2-[3-(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)丙氧基]乙氧基]乙基)哌嗪-1-基]乙酸。

在100-mL圆底烧瓶中置入2-[4-(2-2-[3-(4-3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基吡啶-2-基)丙氧基]乙氧基乙基)哌嗪-1-基]乙酸(160mg，0.25mmol，1.00当量)、N,N-二异丙基乙胺(0.3mL，0.30当量)、(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(139mg，0.30mmol，1.20当量)在乙腈(20mL)中的溶液和T3P(188mg，3.00当量)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。真空浓缩所得混合物。通过制备型HPLC纯化粗产物(100mL)，条件如下：色谱柱，XBridge Prep C18 OBD色谱柱，5um，19*150mm；流动相，水(10mmol/L碳酸氢铵)和乙腈(在8分钟内26.0％乙腈升至49.0％)；检测器，UV 254nm。得到28.5mg(11％)呈白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[2-[4-(2-[2-[3-(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)丙氧基]乙氧基]乙基)哌嗪-1-基]乙酰胺基]-3,3-二甲基丁酰基]-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在50-mL圆底烧瓶中置入2-(3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸(2.0g，10.0mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液、N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸铀(4.1g，10.8mmol，1.1当量)、N,N-二异丙基乙胺(6.0g，46.4mmol，4.6当量)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(3.5g，9.5mmol，1.0当量)。在室温下搅拌所得溶液30分钟。然后通过添加30mL水来淬灭反应。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。得到2.1g(41％)呈浅黄色固体的(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在50-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2.1g，4.1mmol，1.0当量)和48％溴化氢水溶液(15mL)。将所得溶液在60C下在油浴中搅拌过夜。真空浓缩所得混合物，生成1.9g粗产物。

在50-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.9g，3.8mmol，1.0当量)在CH3CN(20mL)中的溶液，碳酸钾(3.5g，25.3mmol，6.6当量)、碘化钠(800.0mg，5.3mmol，1.4当量)和1,2-二溴乙烷(1g，5.3mmol，1.4当量)。将所得溶液在60C下在油浴中搅拌过夜。真空浓缩所得混合物。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。得到1.1g(48％)呈白色固体的(2S,4R)-1-[2-[3-(2-溴乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在50-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-1-[2-[3-(2-溴乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(200mg，0.3mmol，1.0当量)在CH3CN(20mL)中的溶液、碳酸钾(400mg，2.9mmol，8.8当量)、碘化钠(80mg，0.53mmol，1.6当量)和6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(8-2-[2-(哌嗪-1-基)乙氧基]吡啶-4-基-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-胺(190mg，0.4mmol，1.1当量)[如以上针对其他实施例所述制备]。将所得溶液在60℃下在油浴中搅拌过夜。真空浓缩所得混合物。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(5:1)洗脱的硅胶柱上。得到180mg(51％)呈浅黄色固体的(2S,4R)-1-[2-(3-[2-[4-(2-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]乙基)哌嗪-1-基]乙氧基]-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在50-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-1-[2-(3-[2-[4-(2-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]乙基)哌嗪-1-基]乙氧基]-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(180mg，0.17mmol，1.0当量)在甲醇(5mL)中的溶液和氯化氢(0.068mL 4M的二噁烷溶液，0.27mmol，1.6当量)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。真空浓缩所得混合物。通过手性-制备型HPLC纯化粗产物，条件如下：色谱柱；流动相，色谱柱：CHIRALPAK ID-03，2.0cm I.D*25cm L(5um)；流动相A：MTBE(0.2％IPA)--HPLC，流动相B：甲醇--HPLC；流速：18mL/min；梯度：在18分钟内50B至50B；254/220nm。得到46.7mg呈白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[3-[2-(4-[2-[(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]乙基]哌嗪-1-基)乙氧基]-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺[

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的100-mL圆底烧瓶中置入2-(6-氯代吡啶-3-基)乙酸甲酯(1.86g，10.0mmol，1.00当量)、甲苯(50mL)、Cs

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的100-mL 3颈圆底烧瓶中置入四氢呋喃(30mL)、氢化铝锂(0.34g，3.00当量)。然后在5分钟内，在0℃下，一边搅拌一边滴加2-[6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]乙酸甲酯(1.0g，3.01mmol，1.00当量)在四氢呋喃(5mL)中的溶液。将所得溶液在25℃下搅拌10小时。然后在0℃下通过一边搅拌一边添加水(3mL)、氢氧化钠水溶液(5％)、水(3mL)来淬灭该反应。滤出固体。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(v:v＝1:10)的硅胶柱上。得到750mg(81％)呈浅黄色固体的2-[6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]乙-1-醇。

在0℃下，在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL圆底烧瓶中置入2-[6-(4-苄基哌嗪-1-基)吡啶-3-基]乙-1-醇(750g，2.5mmol，1.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(20mL)、氢化钠(60％)(200mg，8.4mmol，2.00当量)。将所得溶液在0℃下搅拌0.5小时。然后在0℃下，一边搅拌一边滴加3-溴丙-1-炔(390mg，3.3mmol，1.30当量)。使所得溶液在搅拌下于25℃下再反应12小时。然后通过在0℃下添加水(20mL)来淬灭该反应。用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取所得溶液，再合并有机层。混合物经无水硫酸钠脱水并且在真空下浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(v:v＝1:3)洗脱的硅胶柱上。得到602mg(71％)呈黄色油状物的1-苄基-4-[5-[2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙基]吡啶-2-基]哌嗪。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的25-mL密封管中置入1-苄基-4-[5-[2-(丙-2-炔-1-基氧基)乙基]吡啶-2-基]哌嗪(1.0g，3.00mmol，1.00当量)、四氢呋喃(15mL)、频哪醇硼烷(2mL)、ZrCp

在100-mL圆底烧瓶中置入1-苄基-4-[5-(2-[[(2E)-3-(四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基]乙基)吡啶-2-基]哌嗪(928mg，2.00mmol，1.00当量)、二氯甲烷(25mL)。然后在0℃下，一边搅拌一边滴加氯甲酸1-氯乙基酯(568.0mg，3.97mmol，2.00当量)。将所得溶液在25℃下搅拌1小时。真空浓缩所得混合物。添加乙醇(5mL)。使所得溶液在搅拌下再反应2小时，同时在油浴中将温度保持在80℃。真空浓缩所得混合物。得到0.71g(95％)呈黄色油状物的1-[5-(2-[[(2E)-3-(四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基]乙基)吡啶-2-基]哌嗪。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的100-mL 3颈圆底烧瓶中置入N-(2-氨基乙基)-N-(2-氯代乙基)-5-(2-[[(2E)-3-(四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基]乙基)吡啶-2-胺(410mg，1.00mmol，1.00当量)的二氯甲烷溶液、N,N-二异丙基乙胺(645mg，4.99mmol，5.00当量)，并添加2-溴乙酸叔丁酯(585mg，3.00mmol，3.00当量)。将所得溶液在25C下搅拌12小时。真空浓缩所得混合物。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(v:v＝10:1)洗脱的硅胶柱上。得到0.32g(66％)呈黄色油状物的2-[4-[5-(2-[[(2E)-3-(四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基]乙基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的25-mL密封管中置入2-6-氨基-5-[8-(2-溴吡啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基苯酚(158mg，0.35mmol，1.00当量)的二噁烷/水溶液(v:v＝4:1)、2-[4-[5-(2-[[(2E)-3-(四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基]乙基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯(205mg，0.42mmol，1.20当量)、碳酸钾(145mg，1.05mmol，3.00当量)，并添加Pd(dppf)Cl

根据以下方案使用上述用于其他实施例的方法以及本领域技术人员所理解的方法，将2-[4-[5-(2-[[(2E)-3-(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基]乙基)吡啶-2-基]哌嗪-1-基]乙酸叔丁酯转化为最终化合物(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-(4-(5-(2-(3-(4-(3-(3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)丙氧基)乙基)吡啶-2-基)哌嗪-1-基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)吡咯烷-2-甲酰胺。

在0C下，在100-mL圆底烧瓶中置入3-羟基氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(3.11g，15.01mmol，1.00当量)、二氯甲烷(30mL)、2-溴乙酸叔丁酯(4.37g，22.40mmol，1.50当量)、氢氧化钠(37％水溶液)(30mL)和TBAC(4.17g，1.00当量)。将所得溶液在25C下搅拌3小时。用二氯甲烷(2x30mL)萃取所得溶液，并且将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1/5)洗脱的硅胶柱上。得到3.6g(75％)呈无色油状物的3-[2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯。

在250-mL圆底烧瓶中置入3-[2-(叔丁氧基)-2-氧代乙氧基]氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(3.22g，10.02mmol，1.00当量)、乙醇(100mL)、碳载钯(0.322g)。将所得溶液于25C在H

在50-mL圆底烧瓶中置入2-(氮杂环丁烷-3-基氧基)乙酸叔丁酯(374mg，2.00mmol，1.00当量)、N,N-二甲基甲酰胺(15mL)、碳酸钾(828mg，5.99mmol，3.00当量)和1,2-二溴乙烷(1.86g，9.90mmol，5.00当量)。将所得溶液在25C下搅拌12小时。然后，通过添加水(10mL)来淬灭该反应。用乙酸乙酯(2x20mL)萃取所得溶液，并且将有机层合并，再经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1/3)洗脱的硅胶柱上。得到80mg(14％)呈无色油状物的2-[[1-(2-溴乙基)氮杂环丁烷-3-基]氧基]乙酸叔丁酯。

使用上述用于其他实施例的方法以及对本领域技术人员显而易见的方法，将2-[[1-(2-溴乙基)氮杂环丁烷-3-基]氧基]乙酸叔丁酯转化为最终化合物(2S,4R)-1-((2S)-2-(2-((1-(2-(4-(3-(4-(3-(3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)丙基)哌嗪-1-基)乙基)氮杂环丁烷-3-基)氧基)乙酰胺基)-3,3-二甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺。

根据以下方案使用来自上述实施例(例如，示例性化合物37)的方法和本领域技术人员理解的其他方法制备示例性化合物51。

根据以下方案制备示例性化合物52。

根据以下方案制备示例性化合物53。

在100-mL圆底烧瓶中置入2-(3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸(2.1g，10.5mmol，1.00当量)、乙醇(20.0g，434mmol，41.2当量)、硫酸(2.0g，20.4mmol，1.9当量)。将所得溶液在70℃下在油浴中搅拌12小时。真空浓缩所得混合物。得到1.9g(79％)呈白色固体的2-(3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸乙酯。

在50-mL圆底烧瓶中置入2-(3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸乙酯(1.9g，8.4mmol，1.0当量)和硫酰氯(20mL)。将所得溶液在室温下搅拌过夜。真空浓缩所得混合物。然后通过添加30mL水来淬灭反应。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得溶液，再合并有机层。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱的硅胶柱上。得到1.5g(69％)呈黄色油状物的2-(4-氯-3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸乙酯。

在50-mL圆底烧瓶中置入2-(4-氯-3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸乙酯(1.5g，5.7mmol，1.0当量)在甲醇/H2O(5/5mL)中的溶液和氢氧化锂(300mg，12.5mmol，2.2当量)。将所得溶液在50℃下在油浴中搅拌过夜。用1M HCl将溶液的pH值调节至6。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得溶液，合并有机层并真空浓缩。通过制备型HPLC纯化粗产物，条件如下：色谱柱；流动相，色谱柱：XBridge Prep C18 OBD色谱柱，5um，19*150mm；流动相A：水(0.1％FA)，流动相B：ACN；流速：20mL/min；梯度：在8分钟内34％B降至48％B；220nm。得到300mg(22.4％)呈白色固体的2-(4-氯-3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸。

在50-mL圆底烧瓶中置入2-(4-氯-3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸(260mg，1.1mmol，1.0当量)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液、N,N,N',N'-四甲基-O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)六氟磷酸铀(360mg，1.0mmol，0.9当量)、N,N-二异丙基乙胺(350mg，2.7mmol，2.4当量)和(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(350mg，1.1mmol，1.0当量)。在室温下搅拌所得溶液30分钟。然后通过添加30mL水来淬灭反应。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得溶液，并且将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。得到275mg(45％)呈白色固体的(2S,4R)-1-[2-(4-氯-3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在50-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-1-[2-(4-氯-3-甲氧基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(275mg，0.5mmol，1.0当量)和4M氯化氢的二噁烷(25mL)溶液。将所得溶液在60℃下在油浴中搅拌96小时。真空浓缩所得混合物。得到259mg(97％)呈黄色固体的(2S,4R)-1-[2-(4-氯-3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺。

根据以下实施方案并使用上述用于较早实施例的方法，将(2S,4R)-1-[2-(4-氯-3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺转化为最终化合物(2S,4R)-1-((2S)-2-(3-(2-(4-(2-((4-(3-(3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)哌嗪-1-基)乙氧基)-4-氯代异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺和(2S,4R)-1-((2R)-2-(3-(2-(4-(2-((4-(3-(3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)乙基)哌嗪-1-基)乙氧基)-4-氯代异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺。

在250-mL圆底烧瓶中置入3-(苄基氧基)环丁-1-酮(6.0g，34.05mmol，1.0当量)在乙醇(100mL)中的溶液。然后在0℃下分数批添加硼氢化钠(1.25g，33.94mmol，1.00当量)。将所得溶液在0℃下搅拌3小时。然后通过添加水(100mL)来淬灭该反应。反应。用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取所得溶液，并且将有机层合并，经无水硫酸钠干燥，真空浓缩。得到6.0g(99％)呈浅黄色油状物的(1s,3s)-3-(苄基氧基)环丁-1-醇。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的500-mL圆底烧瓶中置入(1s,3s)-3-(苄基氧基)环丁-1-醇(8.0g，44.89mmol，1.10当量)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液。然后在0℃下分数批添加氢化钠(60％)(2.15g，89.58mmol，1.20当量)。向其中添加4-溴-2-氟吡啶(70.0g，39.78mmol，1.00当量)。将所得溶液在室温下搅拌过夜。然后，通过添加水/冰来淬灭该反应。用乙酸乙酯(80mL x 2)萃取所得溶液，再合并有机层。用盐水(80mL x 2)洗涤所得混合物。减压浓缩所得混合物。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱的硅胶柱上。得到7.0g(53％)呈浅黄色油状物的4-溴-2-[(1s,3s)-3-(苄基氧基)环丁氧基]吡啶。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的500-mL圆底烧瓶中置入4-溴-2-[(1s,3s)-3-(苄基氧基)环丁氧基]吡啶(8.4g，25.13mmol，1.30当量)在甲苯(200mL)中的溶液、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(4.11g，19.36mmol，1.00当量)、叔丁醇钠(3.2g，33.2mmol，1.5当量)、xantphos(2.32g，4.01mmol，0.20当量)和Pd

在氮气气氛下，在250ml圆底烧瓶中，向8-[2-[(1s,3s)-3-(苄基氧基)环丁氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(7.0g，15.03mmol，1.00当量)在150mL乙醇中的溶液中添加氢氧化钯(7.0g，49.85mmol，3.32当量)和乙酸(2mL)。然后将烧瓶抽真空并用氢气冲洗。将反应混合物在氢气气氛下使用氢气球在50℃下氢化3天，然后通过硅藻土垫过滤并减压浓缩。得到5.4g(96％)呈浅黄色油状物的8-[2-[(1s,3s)-3-羟基环丁氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯。

在100-mL圆底烧瓶中置入8-[2-[(1s,3s)-3-羟基环丁氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(5.0g，13.32mmol，1.00当量)在乙酸乙酯和甲醇的混合溶剂(10:1)(50mL)中的溶液。将氯化氢(气体)通入溶液。将所得混合物在室温下搅拌3小时，并减压浓缩。得到4.0g(96％)呈灰白色固体的(1s,3s)-3-[(4-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]环丁-1-醇盐酸盐。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的20-mL压力罐反应器中置入(1s,3s)-3-[(4-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]环丁-1-醇盐酸盐(1.0g，3.21mmol，1.00当量)在二甲亚砜(10mL)中的溶液。然后添加N,N-二异丙基乙胺(5mL)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(3.01g，14.44mmol，4.00当量)。将所得溶液在130C下搅拌16小时。然后，通过添加水(50mL)来淬灭该反应。用乙酸乙酯(3x30mL)萃取所得溶液，再合并有机层。用盐水(3x50mL)洗涤所得混合物。将该混合物经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。得到490mg(38％)呈黄色油状物的(1s,3s)-3-([4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]氧基)环丁-1-醇。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的20-mL压力罐反应器中置入(1s,3s)-3-([4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]氧基)环丁-1-醇(800mg，1.99mmol，1.00当量)在二噁烷和水的混合溶剂(4:1)(15mL)中的溶液，[2-(甲氧基甲氧基)苯基]硼酸(544mg，2.99mmol，1.50当量)、碳酸钾(824mg，6.0mmol，3.00当量)和Pd(PPh

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL 3颈圆底烧瓶中置入三苯膦(351mg，1.34mmol，2.00当量)在四氢呋喃(蒸馏的)(30mL)中的溶液。然后，在0℃下，一边搅拌一边滴加偶氮二羧酸二异丙酯(270mg，1.34mmol，2.00当量)，同时出现白色沉淀。在0℃下，向其中添加(1s,3s)-3-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]环丁-1-醇(338mg，0.67mmol，1.00当量)和6-溴吡啶-3-醇(232mg，1.33mmol，1.50当量)。将所得溶液在50℃下搅拌过夜。真空浓缩所得混合物。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。得到389mg(88％)呈黄色固体的6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(8-[2-[(1r,3r)-3-[(6-溴吡啶-3-基)氧基]环丁氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-胺。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的20-mL压力罐反应器中置入6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(8-[2-[(1r,3r)-3-[(6-溴吡啶-3-基)氧基]环丁氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-胺(155mg，0.23mmol，1.00当量)在二噁烷和水的混合溶剂(3:1)(8mL)中的溶液、叔丁基二甲基{[3-(四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基}硅烷(140mg，0.47mmol，2.00当量)、碳酸钾(95mg，0.69mmol，0.15当量)、Pd(PPh

在25-mL圆底烧瓶中置入6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(8-[2-[(1r,3r)-3-[(6-[3-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]丙-1-烯-1-基]吡啶-3-基)氧基]环丁氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-胺(120mg，0.16mmol，1.00当量)在四氢呋喃(2mL)中的溶液、氟化四丁基铵(1M的四氢呋喃溶液)(3.2mL，2.00当量)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。然后，通过添加水来淬灭该反应。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得溶液，并且将有机层合并，再经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。通过快速-制备型HPLC进一步纯化粗产物，条件(CombiFlash-1)如下：色谱柱，C18硅胶；流动相，ACN的水溶液，在30分钟内0％ACN增加至40％ACN；检测器，UV 220nm。得到70mg(69％)呈浅黄色固体的3-[5-[(1r,3r)-3-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]吡啶-2-基]丙-2-烯-1-醇。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL 3颈圆底烧瓶中置入三丁基膦(149mg，0.74mmol，10.00当量)在四氢呋喃(20mL)中的溶液。然后在-5℃下，一边搅拌一边滴加四甲基偶氮二甲酰胺(126mg，0.73mmol，10.00当量)在四氢呋喃(5mL)中的溶液。向该混合物中添加(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]吡咯烷-2-甲酰胺(42mg，0.09mmol，1.20当量)和(2E)-3-[5-[(1r,3r)-3-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]吡啶-2-基]丙-2-烯-1-醇(47mg，0.07mmol，1.00当量)。将所得溶液在50℃下搅拌过夜。然后通过添加水将来淬灭该反应。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得溶液，再合并有机层。用盐水(50mL)洗涤所得混合物。减压蒸发有机相，并将其施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。得到32mg(39％)呈浅黄色固体的(2S,4R)-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-[3-甲基-2-(3-[[(2E)-3-[5-[(1r,3r)-3-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]吡啶-2-基]丙-2-烯-1-基]氧基]-1,2-噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的25-mL圆底烧瓶中置入(2S,4R)-4-羟基-N-[[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]-1-(3-甲基-2-[3-[(3-[5-[(1r,3r)-3-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]吡啶-2-基]丙-2-烯-1-基)氧基]-1,2-噁唑-5-基]丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺(23mg，0.02mmol，1.00当量)在甲醇(3mL)和37％盐酸(1.5mL)中的溶液。将所得溶液在室温下搅拌2小时。用水/冰浴将反应混合物冷却至0℃。用NH

根据以下方案使用上述用于制备其他示例性化合物的方法制备示例性化合物57。

在0℃下，向2-哌嗪-1-基乙醇(60g，460mmol，1当量)、碳酸氢钠(116g，1.38mol，3当量)在二噁烷(300mL)和水(300mL)中的溶液中添加(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)碳酸苄酯(137g，553mmol，1.2当量)。然后将反应混合物在20℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(300mL)稀释，然后用乙酸乙酯(300mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱(乙酸乙酯:甲醇＝500∶1至100∶1)纯化残余物。得到呈浅黄色油状物的化合物4-(2-羟乙基)哌嗪-1-羧酸苄酯(74g，279mmol，60％产率)。

在0℃下，向氢化钠(6.26g，156mmol，1.3eq)在二甲基甲酰胺(240mL)中的溶液中添加4-(2-羟乙基)哌嗪-1-羧酸苄酯(35g，132mmol，1.1当量)0.5小时。然后将4-溴-2-氟吡啶(21.18g，120mmol，1当量)添加到反应中，并在25℃下搅拌1h。通过添加饱和氯化铵溶液(500mL)来淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(300mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝1:0至200:1)纯化残余物。得到呈浅黄色固体的化合物4-[2-[(4-溴-2-吡啶基)氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯(39.2g，92mmol，76％产率)。

在小瓶中装入4-[2-[(4-溴-2-吡啶基)氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯(18.15g，43mmol，1当量)、3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(11g，51mmol，1.2当量)、[2-(2-氨基苯基)苯基]-氯-钯二环己基-[2-(2,6-二异丙氧基苯基)苯基]膦酸酯(1.68g，2.16mmol，0.05当量)，将碳酸铯(28.14g，86.36mmol，2当量)添加到甲苯(350mL)中。将混合物用氮气吹扫5分钟，然后加热至110℃保持12小时。将反应混合物用水(200mL)稀释，并用乙酸乙酯(300mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10:1至0:1)纯化残余物。得到呈苍黄色固体的8-[2-[2-(4-苄氧基羰基哌嗪-1-基)乙氧基]-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(18.37g，31.30mmol，72％产率)。

向8-[2-[2-(4-苄氧基羰基哌嗪-1-基)乙氧基]-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(18.3g，33.17mmol，1当量)在甲醇(150mL)中的混合物中添加盐酸/甲醇(4M，360mL，43.41当量)。然后将反应混合物在25℃下搅拌2小时。减压浓缩反应混合物，得到化合物，无需纯化。得到呈黄色固体的化合物4-[2-[[4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-2-吡啶基]氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯(19g，粗品)。

将4-[2-[[4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-2-吡啶基]氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯(19g，42.08mmol，1当量)、4-溴6-氯-哒嗪-3-胺(10.52g，50.49mmol，1.2当量)在二甲亚砜(190mL)中的混合物中添加二异丙基乙胺(54.38g，420.76mmol，10当量)。然后将反应混合物在130℃下搅拌5小时。通过添加水(600mL)来淬灭反应混合物，然后用乙酸乙酯(150mL)稀释并用乙酸乙酯(300mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL x 5)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱法(石油醚/乙酸乙酯＝1∶1至二氯甲烷:甲醇＝50∶1)纯化残余物。得到呈浅黄色固体的化合物4-[2-[[4-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯(12.6g，21mmol，50％产率)。

向4-[2-[[4-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯(10.6g，18.30mmol，1当量)、(2-羟苯基)硼酸(5.05g，36.61mmol，2当量)在二噁烷(160mL)和水(25mL)中的混合物中添加四[三苯基膦]钯(0)(2.12g，1.83mmol，0.1当量)和碳酸钾(5.06g，36.61mmol，2当量)。然后将反应混合物在110℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(200mL)稀释，然后用乙酸乙酯(200mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物(碱性条件：色谱柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-乙腈]；B％：50％-80％，20MIN 60％min)，得到所需化合物。得到呈黄色固体的化合物4-[2-[[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯(7g，10.22mmol，55％产率)。

在氮气下，向4-[2-[[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸苄酯(7g，10.99mmol，1当量)在四氢呋喃(100mL)中的溶液中添加活性炭载氢氧化钯催化剂(0.7g，0.49mmol，0.04当量)。然后将反应混合物于60℃在氢气(50Psi)下搅拌48小时。然后将150mL乙醇添加到反应混合物中。将反应混合物过滤并减压浓缩，得到2-[6-氨基-5-[8-[2-(2-哌嗪-1-基乙氧基)-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(5g，9.68mmol，88％产率)。

向2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(3.5g，17.57mmol，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中的溶液中添加2-溴-1,1-二乙氧基-乙烷(5.19g，26.35mmol，1.5当量)和碳酸钾(4.86g，35.14mmol，2当量)。将反应混合物在70℃下搅拌12小时。通过添加水50mL来淬灭反应混合物，然后用水100mL稀释，并用乙酸乙酯(80mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝100:1至50:1)纯化残余物。得到呈无色油状物的所需化合物2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(4.38g，12.50mmol，71％产率)。

向2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(4.38g，12.5mmol，1当量)在甲醇(30mL)和水(15mL)中的溶液中添加氢氧化锂一水合物(2.10g，50mmol，4当量)。将反应混合物在40℃下搅拌2小时。用1M氯化氢将pH调节至4～5，并用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取反应混合物。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈无色油状物的2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸(4g，粗品)。

向2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸(3.84g，11.99mmol，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液中添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸酯(5.47g，14.38mmol，1.2当量)。将反应混合物在20℃下搅拌0.5小时。然后向混合物中添加(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(4.41g，11.99mmol，1当量)和三乙胺(3.64g，35.96mmol，5mL，3当量)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液。将反应混合物在20℃下搅拌0.15小时。通过添加水(30mL)来淬灭反应混合物，然后用水80mL稀释，并用乙酸乙酯(60mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(80mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过硅胶色谱(二氯甲烷:甲醇＝100:1至50:1)纯化残余物。得到呈白色固体的所需化合物(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(7g，10.96mmol，91％产率)。

通过SFC分离(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(7g，11.39mmol，1当量)。条件是色谱柱：DAICEL CHIRALPAK AD(250mm*30mm，10um)；流动相：[0.1％NH3H2O IPA]；B％：35％-35％，2.4分钟：550min。得到呈白色固体的(2S,4R)-1-[(2S)-2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(3.2g，5.08mmol，89％产率)和(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2.67g，4.17mmol，73％产率)。

向(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(2g，3.25mmol，1当量)在四氢呋喃(40mL)中的溶液中添加硫酸(1M，40mL，12.3当量)。将该溶液加热至50℃保持7小时。将溶液冷却至20℃，并用饱和碳酸氢钠溶液淬灭至pH＝8。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取混合物。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，并用硫酸钠干燥。然后过滤该混合物，并将滤液真空浓缩。粗产物直接用于下一步骤。得到呈白色固体的(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(1.7g，2.52mmol，77％产率)。

向(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(930mg，1.38mmol，1当量)和2-[6-氨基-5-[8-[2-(2-哌嗪-1-基乙氧基)-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(691mg，1.38mmol，1当量在甲醇(15mL)和二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加乙酸(82mg，1.38mmol，1当量)。将该溶液在30℃下搅拌0.5小时。然后将氰基硼氢化钠(129mg，2.06mmol，1.5当量)添加到溶液中，并在30℃下搅拌7小时。真空除去溶剂，并通过制备型HPLC纯化粗产物(色谱柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10um；流动相：[水(10mM NH

使用上述用于其他实施例的方法，如以下方案所述制备。

在室温下，在500mL圆底烧瓶中，向1-(6-溴吡啶-3-基)乙-1-酮(10g，49.99mmol，1当量)在EtOH(200mL)中的溶液中添加硼氢化钠(4g，105.73mmol，2.11当量)的水(80ml)溶液。在室温下搅拌所得混合物30分钟。真空浓缩混合物。将残余物通过使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱的硅胶柱色谱纯化，得到呈黄色油状物的1-(6-溴吡啶-3-基)乙-1-醇(9.2g，91％)。

在0℃下，在100mL圆底烧瓶中，向1-(6-溴吡啶-3-基)乙-1-醇(2g，9.90mmol，1当量)和三乙胺(3g，0.03mmol)的二氯甲烷(30mL)溶液中添加甲磺酰氯(1.3g，11.35mmol，1.15当量)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。用二氯甲烷(30mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(20mL x 1)洗涤，经无水硫酸钠干燥。过滤后，减压浓缩滤液。得到呈黄色固体的甲磺酸1-(6-溴吡啶-3-基)乙酯(1.6g，23％)。

在室温下，在25mL密封管中，将甲磺酸1-(6-溴吡啶-3-基)乙酯(1.4g，1.2当量)、6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(1H-吡唑-4-基)哒嗪-3-胺(350mg，1当量)和碳酸钾(490mg，3.0当量)添加到N,N-二甲基甲酰胺(15mL)中。将所得混合物于60℃在氮气气氛下搅拌2小时。用二氯甲烷(50mL x 3)萃取水层。将残余物用盐水(20mL x 1)洗涤，经无水硫酸钠干燥。过滤后，减压浓缩滤液。将残余物通过使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱色谱纯化，得到呈黄色固体的4-[1-[1-(6-溴吡啶-3-基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺(90mg，16％)。

根据以下方案使用上述用于其他实施例的方法，将4-[1-[1-(6-溴吡啶-3-基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺转化为最终化合物。

将6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(1H-吡唑-4-基)哒嗪-3-胺(300mg，1.01mmol，1当量)、1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(702mg，3.03mmol，3当量)在二甲基甲酰胺(3mL)中的混合物添加到碳酸钾(418mg，3.03mmol，3当量)中。然后将反应混合物在70℃下搅拌2小时。添加水(10mL)，并用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(15mL x2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化残余物。得到呈黄色油状物的4-[1-[2-(2-溴乙氧基)乙基]吡唑-4-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺(100mg，0.22mmol，22％产率)。

步骤2

向4-[1-[2-(2-溴乙氧基)乙基]吡唑-4-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺(100mg，0.22mmol，1当量)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(83mg，0.44mmol，2当量)在乙腈(2mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(86.49mg，0.66mmol，3当量)。然后将反应混合物在100℃下搅拌12小时。添加水(5mL)，并用乙酸乙酯(15mL x 3)萃取反应混合物。将合并的有机层用盐水(10mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化残余物。得到呈黄色固体的化合物4-[2-[2-[4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]吡唑-1-基]乙氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(93mg，0.15mmol，71％产率)。

根据以下方案使用上述用于其他实施例的方法，将4-[2-[2-[4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]吡唑-1-基]乙氧基]乙基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物165和124。

于10℃在氮气下，向吡啶-4-醇(3.20g，33.66mmol，1.5当量)和3-苄氧基环丁醇(4g，22.44mmol，1当量)在四氢呋喃(200mL)中的溶液中一次性添加三苯基膦(7.06g，26.93mmol，1.2当量)和偶氮二羧酸二异丙酯(5.45g，26.93mmol，1.2当量)。将该混合物在50℃下搅拌12小时。减压浓缩反应混合物，以去除四氢呋喃。将水(50mL)倒入混合物内且搅拌1分钟。用二氯甲烷(50mL x 3)萃取水相。将合并的有机相用盐水(50mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶柱色谱(石油醚/四氢呋喃＝20:1至5:1)纯化残余物。通过快速C18柱色谱[乙腈：水(0.5％氢氧化铵)＝5％～50％]纯化残余物。得到呈白色固体的化合物4-(3-苄氧基环丁氧基)吡啶(3.2g，12.53mmol，55％产率)。

向4-(3-苄氧基环丁氧基)吡啶(4.2g，16.45mmol，1当量)在甲苯(65mL)中的溶液中添加苄基溴(2.81g，16.45mmol，1当量)。将该混合物在80℃下搅拌12小时。减压浓缩反应混合物，以去除甲苯。将粗产物用石油醚(80mL)研磨。得到呈白色固体的化合物1-苄基-4-(3-苄氧基环丁氧基)吡啶-1-鎓溴化物(6.5g，15.25mmol，92％产率)。

在0℃下，向1-苄基-4-(3-苄氧基环丁氧基)吡啶-1-鎓溴化物(6.5g，15.25mmol，1当量)在乙醇(120mL)中的溶液中添加硼氢化钠(3.46g，91.47mmol，6当量)。将混合物在15℃下搅拌4小时。减压浓缩反应混合物，以去除乙醇。将残余物用水(25mL)稀释，并用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取。将合并的有机相用饱和盐水(40mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。得到呈无色油状物的化合物1-苄基-4-(3-苄氧基环丁氧基)-3,6-二氢-2H-吡啶(4.5g，12.88mmol，84％产率)。

在氮气气氛下，向1-苄基-4-(3-苄氧基环丁氧基)-3,6-二氢-2H-吡啶(4.5g，12.88mmol，1当量)在四氢呋喃(95mL)和乙醇(70mL)中的溶液中添加活性炭载钯催化剂(0.5g，10％纯度)。将悬浮液脱气并用氢气吹扫3次。将混合物在氢气(50Psi)下在25℃下搅拌24小时，然后在35℃下搅拌12小时。过滤反应混合物且浓缩滤液。通过硅胶柱色谱(二氯甲烷:甲醇:氢氧化铵＝20∶1∶0，10∶1∶0.1)纯化残余物。得到呈无色油状物的化合物3-[(1-苄基-4-哌啶基)氧基]环丁醇(2.8g，10.71mmol，83％产率)。

在氮气气氛下，向3-[(1-苄基-4-哌啶基)氧基]环丁醇(1.1g，4.21mmol，1当量)在甲醇(10mL)中的溶液中添加氢氧化钯(591mg)和二碳酸二叔丁酯(1.84g，8.42mmol，2当量)。将悬浮液脱气并用氢气吹扫3次。将混合物在氢气(50psi)下在25℃下搅拌12小时。过滤反应混合物并浓缩滤液。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至2:1)纯化残余物。得到呈无色油状物的化合物4-(3-羟基环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(820mg，3.02mmol，71％产率)。

将4-(3-羟基环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，3.69mmol，1当量)、4-溴-2-氟-吡啶(778mg，4.42mmol，1.2当量)、碳酸铯(2.40g，7.37mmol，2当量)在乙腈(10mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫三次，然后将混合物于90℃在氮气气氛下搅拌12小时。将反应混合物过滤并浓缩，得到粗产物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:0至10:1)纯化粗产物。得到呈无色油状物的化合物4-[3-[(4-溴-2-吡啶基)氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.36g，3.18mmol，86％产率)。

向3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-羧酸叔丁酯(10g，47.11mmol，1当量)在二氯甲烷(140mL)中的溶液中添加CbzCl(9.64g，56.53mmol，8.04mL，1.2当量)和三乙胺(8.58g，84.79mmol，11.80mL，1.8当量)。将该混合物在20℃下搅拌20小时。TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)显示反应物1未完全消耗，因此再次添加CbzCl(1.61g，9.42mmol，1.34mL，0.2当量)。将反应混合物在20℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(80mL)洗涤两次，将有机层经无水硫酸钠干燥，并浓缩，得到粗产物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:0至4:1)纯化粗产物。得到呈无色油状物的化合物3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二羧酸8-苄基3-(叔丁基)酯(11.48g，33.14mmol，70％产率)。

向3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3,8-二羧酸8-苄基3-(叔丁基)酯(6.20g，17.90mmol，1当量)在二氯甲烷(80mL)中的溶液中添加三氟乙酸(12.32g，108.05mmol，8.00mL，6.04当量)。将该混合物在20℃下搅拌2小时。用饱和碳酸氢钠水溶液调节反应混合物直至pH＝8，用氯仿和异丙醇(80mL×3，5∶1)萃取。将合并的层经无水硫酸钠干燥，浓缩，得到呈黄色油状物的3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸苄酯(4.7g，17.68mmol，98％产率，92％纯度)。

将3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸苄酯(784mg，3.18mmol，1当量)、4-[3-[(4-溴-2-吡啶基)氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.36g，3.18mmol，1当量)、[2-(2-氨基苯基)苯基]-氯代钯二环己基-[2-(2,6-二异丙氧基苯基)苯基]膦酸酯(148mg，0.19mmol，0.06当量)和碳酸铯(2.07g，6.37mmol，2当量)在甲苯(27mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫三次，然后将混合物于110℃在氮气气氛下搅拌12小时。将反应混合物用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(40mL)萃取两次。将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(30mL)洗涤两次，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:0至1:1)纯化粗产物。得到呈无色油状物的化合物8-[2-[3-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]环丁氧基]-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸苄酯(1.35g，2.28mmol，71％产率)。

在氮气下，向8-[2-[3-[(1-叔丁氧基羰基-4-哌啶基)氧基]环丁氧基]-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸苄酯(1.35g，2.28mmol，1当量)在四氢呋喃(27mL)和乙醇(27mL)的混合物中的溶液中添加活性炭载氢氧化钯催化剂(320mg，10％纯度)。将悬浮液真空脱气并用氢气吹扫数次。将混合物在氢气(50psi)下在60℃下搅拌12小时。过滤反应混合物且浓缩滤液。得到呈棕色固体的化合物4-[3-[[4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-2-吡啶基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(932mg，2.03mmol，89％产率)。

将4-[3-[[4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)-2-吡啶基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(932mg，2.03mmol，1当量)、4-溴-6-氯-哒嗪-3-胺(508mg，2.44mmol，1.2当量)、N,N-二异丙基乙胺(2.63g，20.32mmol，3.54mL，10当量)在二甲亚砜(30mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫三次，然后将混合物于130℃在氮气气氛下搅拌3小时。将反应混合物用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL)萃取两次。将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(30mL)洗涤两次，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物。通过半制备型反相HPLC(色谱柱：Phenomenex Gemini C18 250*50 10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-ACN]；B％：45％-70％，24MIN；53％min)纯化残余物。得到呈黄色油状物的化合物4-[3-[[4-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(772mg，1.32mmol，64％产率)。

将4-[3-[[4-[3-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(772mg，1.32mmol，1当量)、(2-羟苯基)硼酸(218mg，1.58mmol，1.2当量)、四[三苯基膦]钯(0)(152mg，0.13mmol，0.1当量)、碳酸钾(364mg，2.63mmol，2当量)在二噁烷(12mL)和水(2mL)的混合物中的混合物脱气并用氮气吹扫三次，然后将混合物于90℃在氮气气氛下搅拌10小时。浓缩反应混合物，得到粗产物。通过半制备型反相HPLC(色谱柱：Kromasil 250*50mm*10um；流动相：[水(0.1％三氟乙酸)-ACN]；B％：20ACN％-50ACN％，20min)纯化残余物。得到呈黄色固体的化合物4-[3-[[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，0.71mmol，54％产率，91％纯度)。

向4-[3-[[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]氧基]环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(500mg，0.78mmol，1当量)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加盐酸/二噁烷(4M，5mL，25.75当量)。将该混合物在20℃下搅拌2小时。浓缩混合物，得到粗产物。得到呈黄色固体的化合物2-[6-氨基-5-[8-[2-[3-(4-哌啶基氧基)环丁氧基]-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(500mg，粗制三盐酸盐)。

向2-[6-氨基-5-[8-[2-[3-(4-哌啶基氧基)环丁氧基]-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚三盐酸盐(400mg，612umol，1当量)和(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-(2-氧代乙氧基)异噁唑-5-基]丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(331mg，0.61mmol，1当量)在二氯甲烷(16mL)和甲醇(16mL)的混合物中的溶液中添加乙酸钠(201mg，2.45mmol，4当量)，然后添加乙酸直至pH＝6，然后再添加氰基硼氢化钠(192mg，3.06mmol，5当量)。将该混合物在20℃下搅拌10小时。将反应混合物用水(20mL)稀释，并用二氯甲烷(20mL)萃取三次。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物，其通过半制备型反相HPLC纯化(色谱柱：PhenomenexSynergi C18 150*25*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：18％-48％，9min)。得到呈灰白色固体的(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-[2-[4-[3-[[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]氧基]环丁氧基]-1-哌啶基]乙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺双三氟乙酸酯(321mg，0.28mmol，45％产率)。

使用类似的方法制备示例性化合物63和146。

在室温下，向NaOH(10g，0.250mol，2.7当量)在水(500mL)的搅拌溶液中添加苯甲醇(10g，92.47mmol，1当量)、1,4-二溴丁烷(39.93g，184.9mmol，2.00当量)和Bu

于0℃在氮气气氛下，向2-(2-羟基乙氧基)乙-1-醇(14.18g，133.7mmol，5当量)在DMF(100mL)中的溶液中添加氢化钠(60％的油溶液，2.15g，2.5当量)。15分钟后，向反应混合物中添加[(4-溴丁氧基)甲基]苯(6.5g，26.7mmol，1当量)。将所得混合物在25℃下搅拌3小时，然后通过添加水(250mL)淬灭。用EA(3x200mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。通过使用PE/EtOAc(60％)洗脱的硅胶柱色谱纯化残余物。得到呈无色油状物的2-[2-[4-(苄基氧基)丁氧基]乙氧基]乙-1-醇(4g，72％)。

在室温下，向2-[2-[4-(苄基氧基)丁氧基]乙氧基]乙-1-醇(2.4g，8.94mmol，1当量)和DMAP(218mg，1.79mmol，0.2当量)在DCM(50mL)中的搅拌溶液中添加TsCl(5.1g，26.83mmol，3当量)和TEA(2.7g，26.83mmol，3当量)。将所得混合物在40℃下搅拌过夜。用DCM(100mL)稀释反应混合物，并用2×50mL盐水洗涤。将有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。通过使用PE/EtOAc(3:1)洗脱的硅胶柱色谱纯化残余物。得到呈浅黄色固体的4-甲基苯-1-磺酸2-[2-[4-(苄基氧基)丁氧基]乙氧基]乙酯(2.4g，64％)。

在氮气气氛下，向4-甲基苯-1-磺酸2-[2-[4-(苄基氧基)丁氧基]乙氧基]乙酯(3.5g，8.28mmol，1当量)在100mL EtOH中的溶液中添加10％Pd/C(3.5g)和CH

于室温在氮气气氛下，向2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(1.5g，7.53mmol，1当量)和4-(2-[2-[(4-甲基苯磺酰基)氧基]乙氧基]乙氧基)丁-1-醇(3.0g，9.04mmol，1.2当量)在丙酮(50mL)中的搅拌溶液中添加Cs

在0℃下，向2-(3-[2-[2-(4-羟基丁氧基)乙氧基]乙氧基]-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(550mg，1.53mmol，1当量)在DCM(20mL)中的搅拌溶液中添加戴斯-马丁过碘烷(1298mg，3.06mmol，2当量)。将所得混合物在30℃下搅拌2小时，然后通过添加饱和硫代硫酸钠溶液淬灭。用DCM(3x20mL)萃取所得混合物。将合并的有机层用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，经硫酸钠干燥并减压浓缩。通过制备型-TLC(CH

根据以下方案使用类似于针对该系列其他实施例(例如，示例性化合物91)所述并且对本领域技术人员而言显而易见的方法，将3-甲基-2-(3-[2-[2-(4-氧代丁氧基)乙氧基]乙氧基]-1,2-噁唑-5-基)丁酸甲酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物65、66、71、73和74。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的500-mL圆底烧瓶中置入(1s,3s)-3-(苄基氧基)环丁-1-醇(8.0g，44.89mmol，1.10当量)在N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中的溶液。然后在0℃下分数批添加氢化钠(60％)(2.15g，89.58mmol，1.20当量)。向其中添加4-溴-2-氟吡啶(70.0g，39.78mmol，1.00当量)。将所得溶液在室温下搅拌过夜。然后，通过添加水/冰来淬灭该反应。用乙酸乙酯(80mL x 2)萃取所得溶液，再合并有机层。用盐水(80mL x 2)洗涤所得混合物。减压浓缩所得混合物。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)的硅胶柱上。得到7.0g(53％)呈浅黄色油状物的4-溴-2-[(1s,3s)-3-(苄基氧基)环丁氧基]吡啶。

在氮气气氛下，在250ml圆底烧瓶中，向8-[2-[(1s,3s)-3-(苄基氧基)环丁氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(7.0g，15.03mmol，1.00当量)在150mL乙醇中的溶液中添加氢氧化钯催化剂(7.0g，49.85mmol，3.32当量)和乙酸(2mL)。然后将烧瓶抽真空并用氢气冲洗。将反应混合物在氢气气氛下使用氢气球在50℃下氢化3天，然后通过硅藻土垫过滤并减压浓缩。得到5.4g(96％)呈浅黄色油状物的8-[2-[(1s,3s)-3-羟基环丁氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯。

在100-mL圆底烧瓶中置入8-[2-[(1s,3s)-3-羟基环丁氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯(5.0g，13.32mmol，1.00当量)在乙酸乙酯和甲醇的混合溶剂(10:1)(50mL)中的溶液。通入氯化氢(g)。将所得混合物在室温下搅拌3小时，并减压浓缩。得到4.0g(96％)呈灰白色固体的(1s,3s)-3-[(4-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]环丁-1-醇盐酸盐。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的20-mL压力罐反应器中置入(1s,3s)-3-[(4-[3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]环丁-1-醇盐酸盐(1.0g，3.21mmol，1.00当量)在二甲亚砜(10mL)中的溶液。然后添加N,N-二异丙基乙胺(5mL)和4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(3.01g，14.44mmol，4.00当量)。将所得溶液在130℃下搅拌16小时。然后通过添加水(50mL)来淬灭该反应。用乙酸乙酯(3x30mL)萃取所得溶液，再合并有机层。用盐水(3x50mL)洗涤所得混合物。将该混合物经无水硫酸钠干燥。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)的硅胶柱上。得到490mg(38％)呈黄色油状物的(1s,3s)-3-([4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]氧基)环丁-1-醇。

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的20-mL压力罐反应器中置入(1s,3s)-3-([4-[3-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基]氧基)环丁-1-醇(800.0mg，1.99mmol，1.00当量)在二噁烷和水的混合溶剂(4:1)(15mL)中的溶液、[2-(甲氧基甲氧基)苯基]硼酸(543.5mg，2.99mmol，1.50当量)、碳酸钾(823.9mg，6.0mmol，3.00当量)、Pd(PPh

在0℃和氮气气氛下，向6-溴吡啶-3-醇(12.70g，72.9mmol，1.00当量)和咪唑(7.45g，109.5mmol，1.50当量)在DMF(100mL)中的搅拌溶液中分批添加TBSCl(16.50g，109.47mmol，1.50当量)。于室温在氮气气氛下，将所得混合物搅拌3小时。在室温下用水(100mL)淬灭反应，并将所得混合物用EtOAc(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物通过使用PE/EtOAc(5:1)洗脱的硅胶柱色谱纯化，得到呈无色油状物的2-溴-5-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]吡啶(19g，90％)。

于室温在氮气气氛下，向2-溴-5-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]吡啶(4.00g，13.88mmol，1.00当量)和NaI(10.40g，69.38mmol，5.00当量)在1,4-二噁烷(20mL)中的搅拌混合物中滴加CuI(0.26g，1.365mmol，0.10当量)和甲基[2-(甲基氨基)乙基]胺(0.12g，1.361mmol，0.10当量)。将所得混合物于110℃在氮气气氛下搅拌5小时。过滤反应混合物，并将滤饼用1,4-二噁烷冲洗。将滤液减压浓缩。将残余物通过使用己烷/EtOAc(5:1)洗脱的硅胶柱色谱纯化，得到呈灰白色固体的5-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-2-碘吡啶(4.2g，90％)。

于0℃在氢气气氛下，向5-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-2-碘吡啶(4.20g，12.53mmol，1.00当量)在THF(20mL)中的搅拌溶液中滴加TBAF(1mol/L，27mL，27mmol，2.00当量)。于室温在氮气气氛下，将所得混合物搅拌2小时。在室温下用水(50mL)淬灭反应。用EtOAc(50mL x3)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物通过使用己烷/EtOAc(2:1)洗脱的硅胶柱色谱纯化，得到呈浅黄色固体的6-碘吡啶-3-醇(2.3g，83％)。

于0℃在氮气气氛下，向PPh

在室温下，向(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(780mg，1.56mmol，1.00当量)在丙酮(40mL)中的溶液中添加Cs

于室温在氮气气氛下，向6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(8-[2-[(1r,3r)-3-[(6-碘吡啶-3-基)氧基]环丁氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-胺(224mg，0.317mmol，1.00当量)和CuI(6.0mg，0.032mmol，0.10当量)在DMF(5mL)的搅拌混合物中添加TEA(96mg，0.950mmol，3.00当量)和Pd(PPh

通过手性HPLC分离(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-(3-甲基-2-[3-[(3-[5-[(1r,3r)-3-[(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]环丁氧基]吡啶-2-基]丙-2-炔-1-基)氧基]-1,2-噁唑-5-基]丁酰基)吡咯烷-2-甲酰胺的两种非对映体(620mg)，条件如下：色谱柱：CHIRALPAK IG，2.0cm I.D*25cm(5um)；流动相A：MeOH(8mmol/L NH3.MeOH)，流动相B：DCM；流速：20mL/min；梯度：在17分钟内30％B至30％B；220/254nm；RT1：8.495min；RT2：12.854min。得到137mg(22％)初步确定为(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2S)-3-甲基-2-[3-[(3-[5-[(1r,3r)-3-[(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]环丁氧基]吡啶-2-基]丙-2-炔-1-基)氧基]-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(浅黄色固体)的异构体1和199mg(32％)初步确定为(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[(2R)-3-甲基-2-[3-[(3-[5-[(1r,3r)-3-[(4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]吡啶-2-基)氧基]环丁氧基]吡啶-2-基]丙-2-炔-1-基)氧基]-1,2-噁唑-5-基]丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(灰白色固体)的异构体2。

使用类似的方法制备示例性化合物226、227、231、232、236和237。

步骤1

在0℃下，向(1S)-1-(4-溴苯基)乙胺(5g，24.99mmol，1.0当量)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中添加三乙胺(2.53g，24.99mmol，1.0当量)。然后将混合物在0℃下搅拌30分钟。然后添加二碳酸二叔丁酯(5.45g，24.99mmol，1.0当量)，并将混合物在0℃下搅拌30分钟，然后在20℃下搅拌2小时。将混合物用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)淬灭，用水(50mL)稀释，用二氯甲烷(100mL x 2)萃取，用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩。将残余物与石油醚:乙酸乙酯(50mL，v/v＝5/1)一起搅拌，然后过滤。得到呈白色固体的N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(6.4g，20.68mmol，82％产率)。

在氮气气氛下，向N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(3g，9.99mmol，1.0当量)和2-甲基-1H-咪唑(902mg，10.99mmol，1.1当量)在二甲亚砜(15mL)中的溶液中添加L-脯氨酸(1.38g，11.99mmol，1.2当量)、碳酸铯(9.77g，29.98mmol，3.0当量)和碘化亚铜(2.28g，11.99mmol，1.2当量)。然后将混合物在130℃下搅拌12小时。将混合物用水(200mL)稀释，过滤，然后用乙酸乙酯(200mL x 3)萃取，用盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。通过反相快速色谱(甲酸)纯化残余物。得到呈黄色油状物的N-[(1S)-1-[4-(2-甲基咪唑-1-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(250mg，0.83mmol，8％产率)。

如以下方案中所述使用上述用于示例性化合物47和64的方法，将N-[(1S)-1-[4-(2-甲基咪唑-1-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物75。

在氮气气氛下，向1-(6-溴-3-吡啶基)乙酮(11.88g，59.41mmol，1.2当量)和四乙氧基钛(22.58g，99.01mmol，2当量)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中添加(R)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(6g，49.50mmol，1当量)。将反应混合物在70℃下搅拌12小时。通过添加水(30mL)来淬灭反应混合物，然后用水(100mL)进一步稀释，过滤并用乙酸乙酯(80mL×3)萃取。经合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到呈浅黄色固体的所需化合物(R,E)-N-(1-(6-溴吡啶-3-基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(16g，43.27mmol，87％产率)。

在0℃下，向(R,E)-N-(1-(6-溴吡啶-3-基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(16g，52.77mmol，1当量)在四氢呋喃(160mL)中的溶液中添加三仲丁基硼氢化锂(1M，158mL，3当量)。将反应混合物加热并在20℃下搅拌3小时。通过添加水(100mL)来淬灭反应混合物，然后用水(100mL)进一步稀释，过滤并用乙酸乙酯(100mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到粗产物，将其通过从石油醚:乙酸乙酯＝1:1(10mL)中重结晶来纯化。然后通过半制备型反相HPLC(FA条件：色谱柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：20％-55％，30min)纯化残余物。得到呈白色固体的N-[(1S)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(4.7g，12.89mmol，24％产率)。

向N-[(1S)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(2.6g，8.52mmol，1当量)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加盐酸/甲醇(4M，21.3mL，10当量)。将反应混合物在20℃下搅拌0.15小时。减压浓缩反应混合物，得到呈白色固体的(1S)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙胺(1.9g，粗品，盐酸盐)。

在0℃下，向(1S)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙胺盐酸盐(1.9g，8.00mmol，1当量)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中添加三乙胺(2.43g，24.00mmol，3.34mL，3当量)0.5小时，然后在0℃下，添加二碳酸二叔丁酯(2.62g，12.00mmol，2.76mL，1.5当量)0.5小时。将反应混合物在20℃下搅拌12小时。通过添加水(20mL)来淬灭反应混合物，然后用水60mL进一步稀释，并用乙酸乙酯(80mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，将其通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝50∶1至3∶1)纯化。得到呈白色固体的N-[(1S)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(2.2g，7.06mmol，88％产率)。

向5-溴-4-甲基-噻唑(800mg，4.49mmol，1当量)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂戊硼烷(1.37g，5.39mmol，1.2当量)在二噁烷(10mL)中的溶液中添加1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)(164mg，0.22mmol，0.05当量)和乙酸钾(882mg，8.99mmol，2当量)。将反应混合物在100℃下搅拌12小时。将反应混合物过滤并减压浓缩，得到呈棕色油状物的4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)噻唑(1g，粗品)，其无需纯化即可使用。

向4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)噻唑(617mg，2.74mmol，1.5当量)和N-[(1S)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(550mg，1.83mmol，1当量)在二噁烷(12mL)和水(2mL)中的溶液中添加1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁-二氯化钯(II)(134mg，0.18mmol，0.1当量)和碳酸钾(505mg，3.65mmol，2当量)。将反应混合物在100℃下搅拌12小时。通过添加水(10mL)来淬灭反应混合物，然后用水(30mL)稀释，过滤并用乙酸乙酯(30mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(60mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物，将其通过制备型-TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1∶1)纯化。得到呈浅黄色固体的所需化合物N-[(1S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)-3-吡啶基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(200mg，0.62mmol，34％产率)。

如上针对示例性化合物76所述，将N-[(1S)-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)-3-吡啶基]乙基]氨基甲酸叔丁酯转化成最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物160。

在-78℃下，向N-[(1S)-1-(6-溴-3-吡啶基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(1g，3.32mmol，1当量)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中添加正丁基锂(2.5M，2.9mL，2.2当量)。将混合物在-78℃下搅拌0.5小时，然后在-78℃下向混合物中添加N,N-二甲基甲酰胺(728mg，9.96mmol，0.8mL，3当量)，并将混合物在-78℃下搅拌0.5小时。然后将混合物加热至15℃并保持1小时。通过添加饱和氯化铵(10mL)来淬灭反应混合物，然后用水(20mL)稀释，过滤并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(60mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至1:1)纯化残余物。得到呈浅黄色固体的所需化合物N-[(1S)-1-(6-甲酰基-3-吡啶基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(550mg，2.20mmol，66％产率)。

向N-[(1S)-1-(6-甲酰基-3-吡啶基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(550mg，2.20mmol，1当量)和1-(1-异氰基乙基磺酰基)-4-甲基-苯(506mg，2.42mmol，1.1当量)在甲醇(10mL)中的溶液中添加碳酸钾(607mg，4.39mmol，2当量)。将反应混合物在70℃下搅拌12小时。通过添加水(20mL)来淬灭反应混合物，然后用水(10mL)稀释，过滤并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(60mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝50:1至1:1)纯化残余物。得到呈白色固体的所需化合物N-[(1S)-1-[6-(4-甲基噁唑-5-基)-3-吡啶基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(570mg，1.65mmol，75％产率，87％纯度)。

如上针对示例性化合物76所述，将N-[(1S)-1-[6-(4-甲基噁唑-5-基)-3-吡啶基]乙基]氨基甲酸叔丁酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物161、229和230。

步骤1

在250-mL圆底烧瓶中置入1-(4-羟苯基)乙-1-酮(6.0g，44.08mmol，1当量)、叔丁基(氯)二甲基硅烷(10g，66.1mmol，1.5当量)和K

在250-mL圆底烧瓶中置入1-[4-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]苯基]乙-1-酮(5g，20.0mmol，1当量)的MeOH(100mL)溶液，在室温下向其中分批添加硼氢化钠(1.5g，39.94mmol，2当量)。将所得溶液在室温下搅拌5h，然后减压浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱的硅胶柱上。得到3.8g(76％)呈黄色油状物的1-[4-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]苯基]乙-1-醇。

在250-mL圆底烧瓶中置入1-[4-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]苯基]乙-1-醇(3.8g，15.05mmol，1当量)和TEA(6.1g，60.21mmol，4当量)的二氯甲烷(100mL)溶液，在室温下向其中缓慢添加甲磺酰氯(2.1g，18.07mmol，1.20当量)。将所得混合物在室温下搅拌2小时。减压浓缩该混合物。得到3.6g呈黄色固体的粗制甲磺酸1-[4-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]苯基]乙酯。

在氮气气氛下，在250-mL圆底烧瓶中置入甲磺酸1-[4-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]苯基]乙酯(5.0g，15.13mmol，1当量)、2-(环戊-1,4-二烯-1-基)-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷(3.5g，18.17mmol，1.20当量)和K

根据以下方案使用类似于针对其他实施例所述的方法，将1-(1-[4-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]苯基]乙基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物156。

在250-mL的圆底烧瓶中置入1-(6-氟吡啶-3-基)乙-1-酮(4.17g，29.97mmol，1当量)在EtOH(60mL)中的溶液。将该溶液在水/冰浴中冷却至0℃，并滴加硼氢化钠(2.27g，61.65mmol，2.06当量)在H

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的500-mL 3颈圆底烧瓶中置入1-(6-氟吡啶-3-基)乙-1-醇(4.06g，28.76mmol，1当量)的二氯甲烷(200mL)溶液。将该溶液在水/冰浴中冷却至0℃，并在0℃下依次添加PPh

在100-mL圆底烧瓶中置入5-(1-溴乙基)-2-氟吡啶(3.06g，15.00mmol，1当量)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(3.20g，16.49mmol，1.10当量)和K

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的100-mL圆底烧瓶中置入2-氟-5-[1-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑-1-基]乙基]吡啶(2.54g，8.01mmol，1当量)、4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(2.00g，9.60mmol，1.20当量)、Na

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的30-mL密封管中置入6-氯-4-[1-[1-(6-氟吡啶-3-基)乙基]-1H-吡唑-4-基]哒嗪-3-胺(765mg，2.40mmol，1当量)、[2-(甲氧基甲氧基)苯基]硼酸(524mg，2.88mmol，1.20当量)、K

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL圆底烧瓶中置入乙烷-1,2-二醇(1.48g，23.84mmol，10.03当量)的DMF(15mL)溶液。将该溶液在水/冰浴中冷却至0℃，并在0℃下向其中分批添加NaH(0.76g，19.00mmol，7.99当量，60％)。将所得混合物在室温下搅拌1.5小时，然后在0℃下滴加4-[1-[1-(6-氟吡啶-3-基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺(1.00g，2.38mmol，1当量)在DMF(5mL)中的溶液。将反应混合物再搅拌3小时，同时在油浴中将温度保持在55℃。将反应混合物冷却至室温，然后通过添加水(200mL)淬灭。用乙酸乙酯(300mL x 2)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(200mL x2)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(15:1)洗脱的硅胶柱上。得到361mg(33％)呈浅黄色固体的2-([5-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]吡啶-2-基]氧基)乙-1-醇。

在0℃下，在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL圆底烧瓶中置入四甲基偶氮二甲酰胺(861mg，5.00mmol，10.00当量)和三丁基膦(1.01g，4.99mmol，9.98当量)在THF(15mL)中的溶液。向混合物中添加2-([5-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]吡啶-2-基]氧基)乙-1-醇(231.3mg，0.50mmol，1当量)和(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(249mg，0.50mmol，1.00当量)。将所得溶液在0℃下搅拌10分钟，然后在50℃下在油浴中再搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温，并用水(150mL)稀释。用乙酸乙酯(150mL)萃取所得混合物，并将有机层用盐水(150mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱的硅胶柱上。通过制备型HPLC进一步纯化所得产物，条件如下：色谱柱，XBridge Prep OBD C18色谱柱，19x150mm，5um；流动相，水(含10mmol/L NH

使用类似于上述用于其他实施例的方法，将(2S,4R)-1-(2-(3-(2-(5-(1-(4-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)哒嗪-4-基)-1H-吡唑-1-基)乙基)-2-氧代吡啶-1(2H)-基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物157。

在氮气气氛下，向乙醇(350mL，7.60mmol，0.04当量)和水(60mL，3.33mmol，0.02当量)的搅拌混合物中分批添加无水乙酸钠(18g，264.71mmol，1.47当量)。将所得混合物于70℃在氮气气氛下搅拌16小时。减压浓缩所得混合物。用水(500mL)稀释所得混合物。用乙酸乙酯(300mL x 2)萃取水层。将残余物用盐水(100mL x 2)洗涤，干燥并减压浓缩。将残余物通过使用乙酸乙酯/石油醚(1:5)洗脱的硅胶柱色谱纯化，得到呈白色固体的1-(4-溴苯基)-2-羟基乙-1-酮(32g，83％)。

于室温在氮气气氛下，向1L圆底烧瓶中添加1-(4-溴苯基)-2-羟基乙-1-酮(32g，148.8mmol，1当量)、二氯甲烷(500mL)、咪唑(30g，440.7mmol，2.96当量)、4-二甲基氨基吡啶(1.8g，14.73mmol，0.10当量)和叔丁基二甲基甲硅烷基氯(26.8g，177.8mmol，1.19当量)。于室温在氮气气氛下，将所得混合物搅拌2小时。在室温下用水淬灭反应。用二氯甲烷(200mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(100mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物通过使用乙酸乙酯/石油醚(1:20)洗脱的硅胶柱色谱纯化，得到呈浅黄色固体的1-(4-溴苯基)-2-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]乙-1-酮(29g，59％)。

在室温下，向1L 3颈圆底烧瓶中添加1-(4-溴苯基)-2-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]乙-1-酮(27g，81.99mmol，1当量)、四氢呋喃(500mL)和(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(19.5g，160.9mmol，1.96当量)。于室温在氮气气氛下向搅拌的溶液中滴加Ti(i-PrO)

在室温下，向500mL 3颈圆底烧瓶中添加(S)-N-[(1Z)-1-(4-溴苯基)-2-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]亚乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(15g，34.68mmol，1当量)和四氢呋喃(150mL)。于-70℃在氮气气氛下向搅拌的溶液中滴加BH

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的100-mL圆底烧瓶中置入(S)-N-[(1R)-1-(4-溴苯基)-2-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.6g，5.98mmol，1.00当量)、二噁烷(30mL)、4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1,3-噻唑(2g，8.88mmol，1.48当量)、碳酸钾(2.5g，18.09mmol，3.02当量)、水(5mL)和Pd(dppf)Cl

在250-mL圆底烧瓶中置入(S)-N-[(1R)-2-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.6g，5.74mmol，1.00当量)和氯化氢的二噁烷(100mL，4M)溶液。将所得溶液在室温下搅拌过夜。真空浓缩所得混合物。得到1.5g(96％)呈黄色油状物的(2R)-2-氨基-2-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙-1-醇盐酸盐。

在250-mL圆底烧瓶中置入2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸乙酯(1g，4.69mmol，1当量)、Cs

根据以下方案使用针对其他实施例所述并对本领域技术人员显而易见的方法，将(2R)-2-氨基-2-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙-1-醇和2-[3-(2-溴乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸乙酯转化为(2S,4R)-1-(2-(3-(2-溴乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((R)-2-羟基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺。

使用类似于针对示例性化合物47所述的方法，将(2S,4R)-1-(2-(3-(2-溴乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((R)-2-羟基-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基吡咯烷-2-甲酰胺转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物158。

在烧瓶中装入N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.4g，4.66mmol，1当量)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂戊硼烷(1.42g，5.60mmol，1.2当量)、(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(II)(170mg，0.23mmol，0.05当量)、乙酸钾(915mg，9.33mmol，2当量)和二噁烷(30mL)。将混合物用氮气吹扫10min，然后加热至80℃保持1h。将反应混合物冷却至20℃，并通过硅藻土垫过滤。真空浓缩滤液。通过柱(石油醚:乙酸乙酯＝10∶1)纯化粗产物。得到呈无色油状物的N-[(1S)-1-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.9g，粗品)。

在烧瓶中装入N-[(1S)-1-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.90g，5.47mmol，1.1当量)、2-溴-1-甲基-咪唑(800mg，4.97mmol，1当量)、(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(II)(181mg，0.24mmol，0.05当量)、碳酸钠(1.05g，9.94mmol，2当量)、二噁烷(18mL)和水(3mL)。将混合物用氮气吹扫5min，并加热至110℃保持12h。将混合物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取。将有机层用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥并过滤。真空浓缩滤液。通过柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝1:0至3:1)纯化粗残余物。得到呈灰色固体的N-[(1S)-1-[4-(1-甲基咪唑-2-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(850mg，2.82mmol，56％产率)。

向N-[(1S)-1-[4-(1-甲基咪唑-2-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(850mg，2.82mmol，1当量)在二噁烷(2mL)中的溶液中添加氯化氢溶液(4M的二噁烷溶液，10mL，14.18当量)。将该溶液在20℃下搅拌1小时。真空去除溶剂。得到呈灰色固体的(1S)-1-[4-(1-甲基咪唑-2-基)苯基]乙胺(670mg，粗品，盐酸盐)。

向(2S,4R)-1-叔丁氧基羰基-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸(651mg，2.82mmol，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(2mL)中的溶液中添加1-羟基苯并三唑(456mg，3.38mmol，1.2当量)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(648mg，3.38mmol，1.2当量)。将该溶液在20℃下搅拌0.5h，然后将(1S)-1-[4-(1-甲基咪唑-2-基)苯基]乙胺(670mg，2.82mmol，1当量，盐酸盐)和N,N-二异丙基乙胺(1.09g，8.46mmol，1.47mL，3当量)在N,N-二甲基甲酰胺(3mL)中的溶液添加到该溶液中并搅拌11.5h。真空去除溶剂。通过半制备型反相HPLC(色谱柱：Phenomenex Gemini C18 250*50 10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-ACN]；B％：20％-50％，20min；60％min)纯化粗残余物。得到呈无色油状物的(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(1-甲基咪唑-2-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(800mg，1.93mmol，68％产率)。

向(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(1-甲基咪唑-2-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(350mg，0.84mmol，1当量)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中添加盐酸/二噁烷(4M的二噁烷溶液，3mL，14.21当量)。然后将反应混合物在20℃下搅拌2h。减压浓缩反应混合物，得到呈浅黄色固体的(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(1-甲基咪唑-2-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(400mg，粗品，盐酸盐)。

使用针对实施例示例性化合物47所述的方法，将(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(1-甲基咪唑-2-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺转化为最终化合物。

使用类似的方法制备化合物159。

在100-mL圆底烧瓶中置入5-(1-溴乙基)-2-氟吡啶(3.06g，15.00mmol，1当量)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(3.20g，16.49mmol，1.10当量)和K

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL圆底烧瓶中置入乙烷-1,2-二醇(1.48g，23.84mmol，10.03当量)的DMF(15mL)溶液。将该溶液在水/冰浴中冷却至0℃，并在0℃下向其中分批添加NaH(0.76g，19.00mmol，7.99当量，60％)。将所得混合物在室温下搅拌1.5h，然后在0℃下滴加4-[1-[1-(6-氟吡啶-3-基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺(1.00g，2.38mmol，1当量)在DMF(5mL)中的溶液。将反应混合物再搅拌3h，同时在油浴中将温度保持在55℃。将反应混合物冷却至室温，然后通过添加水(200mL)淬灭。用乙酸乙酯(300mL x 2)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(200mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(15:1)洗脱的硅胶柱上。得到361mg(33％)呈浅黄色固体的2-([5-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]吡啶-2-基]氧基)乙-1-醇。

在0℃下，在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL圆底烧瓶中置入四甲基偶氮二甲酰胺(861mg，5.00mmol，10.00当量)和三丁基膦(1.01g，4.99mmol，9.98当量)在THF(15mL)中的溶液。向混合物中添加2-([5-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]吡啶-2-基]氧基)乙-1-醇(231.3mg，0.50mmol，1当量)和(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(249mg，0.50mmol，1.00当量)。将所得溶液在0℃下搅拌10min，然后在50℃下在油浴中再搅拌2h。将反应混合物冷却至室温，并用水(150mL)稀释。用乙酸乙酯(150mL)萃取所得混合物，并将有机层用盐水(150mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10/1)洗脱的硅胶柱上。通过制备型HPLC进一步纯化所得产物，条件如下：色谱柱，XBridge Prep OBD C18色谱柱，19x150mm，5um；流动相，水(含10mmol/L NH

使用类似的方法制备示例性化合物157。

在100-mL圆底烧瓶中置入2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯(498mg，2.50mmol，1当量)、2-(2-溴乙氧基)噁烷(627.3mg，3.00mmol，1.20当量)、Cs

在100-mL圆底烧瓶中置入3-甲基-2-[3-[2-(噁烷-2-基氧基)乙氧基]-1,2-噁唑-5-基]丁酸甲酯(520mg，1.59mmol，1当量)的二噁烷(6mL)溶液，在室温下向其中添加HCl溶液(4M的二噁烷溶液，6mL)。将所得溶液在室温下搅拌3小时。用饱和NaHCO

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL圆底烧瓶中置入2-[3-(2-羟基乙氧基)-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯(375mg，1.54mmol，1.20当量)的DMF(6mL)溶液。将该溶液在水/冰浴中冷却至0℃，并添加NaH(128.4mg，3.21mmol，2.50当量，60％)。将所得混合物在室温下搅拌1小时，然后在0℃下滴加4-[1-[1-(6-氟吡啶-3-基)乙基]-1H-吡唑-4-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺(540mg，1.28mmol，1当量)在DMF(4mL)中的溶液。将所得混合物再搅拌1小时，同时在油浴中将温度保持在35℃。然后通过添加饱和NH

使用类似于上述用于其他实施例的方法，将2-[3-[2-([5-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]吡啶-2-基]氧基)乙氧基]-1,2-噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物163。

在0℃下，向2-羟基-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.8g，7.46mmol，1当量)在DMF(20mL)中的溶液中添加氢化钠(60％的油溶液，358mg，14.9mmol，2当量)。将混合物搅拌15分钟。然后添加2-(2-溴乙氧基)噁烷(2.3g，11.00mmol，1.47当量)，并将混合物加热至50℃并搅拌16h。将反应混合物用水(100mL)淬灭，并用DCM(100mL x 3)萃取，用水(50mL x3)和盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(v:v＝1:7)的硅胶柱上。得到1.0g(36％)呈无色油状物的2-[2-(噁烷-2-基氧基)乙氧基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯。

在100-mL圆底烧瓶中置入2-[2-(噁烷-2-基氧基)乙氧基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸叔丁酯(1.0g，2.71mmol，1当量)在二噁烷(15mL)中的溶液，向其中添加氯化氢的1,4-二噁烷溶液(4.0M，15mL)。将所得溶液在室温下搅拌16h，然后减压浓缩。得到800mg(53％)呈黄色油状物的2-[7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基氧基]乙-1-醇。

在100-mL圆底烧瓶中置入2-[7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基氧基]乙-1-醇(600mg，3.24mmol，1当量)、Et

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的50-mL圆底烧瓶中置入2-(2-羟基乙氧基)-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(400mg，1.25mmol，1当量)、Et

在100-mL圆底烧瓶中置入2-[2-(甲磺酰氧基)乙氧基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(300mg，0.75mmol，1当量)、6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-[1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]哒嗪-3-胺(291mg，0.75mmol，1当量)、K

在0℃下，在100-mL圆底烧瓶中置入2-[2-(9-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)乙氧基]-7-氮杂螺[3.5]壬烷-7-羧酸苄酯(230mg，0.33mmol，1当量)在THF(5mL)中的溶液，向其中添加三乙基硼氢化锂(1.0M的THF溶液，1.65mmol，5.0当量)。将所得混合物在室温下搅拌16小时，然后用水(50mL)淬灭，并用二氯甲烷(50mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。得到140mg(76％)呈黄色油状物的4-[4-(2-[7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基氧基]乙基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺。

根据以下方案使用上述用于其他实施例的方法，将4-[4-(2-[7-氮杂螺[3.5]壬烷-2-基氧基]乙基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物164。

向丁-2-炔-1,4-二醇(10g，116.16mmol，1当量)、2,3-二氢-2H-吡喃(9.77g，116.16mmol，10.6mL，1当量)在二氯甲烷(200mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸吡啶鎓(2.92g，11.62mmol，0.1当量)。将反应混合物在40℃下搅拌1小时。向混合物中添加水(200mL)，并用二氯甲烷(150mL x 2)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝100∶1至1∶1)纯化残余物。得到呈淡黄色油状物的4-四氢吡喃-2-基氧基丁-2-炔-1-醇(10.2g，59.93mmol，51％产率)。

在0℃下，向4-四氢吡喃-2-基氧基丁-2-炔-1-醇(5g，29.38mmol，1当量)、三苯基膦(7.70g，29.38mmol，1当量)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中添加四溴化碳(10.72g，32.31mmol，1.1当量)。将反应混合物在20℃下搅拌1小时。真空浓缩混合物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1∶0至100∶1)纯化残余物。得到呈浅黄色油状物的2-(4-溴丁-2-炔氧基)四氢吡喃(4g，17.16mmol，58％产率)。

向4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(3g，15.46mmol，1当量)、2-(4-溴丁-2-炔氧基)四氢吡喃(3.96g，17.01mmol，1.1当量)在乙腈(30mL)中的溶液中添加碳酸钾(2.56g，18.55mmol，1.2当量)。将反应混合物在70℃下搅拌12小时。向混合物中添加水(100mL)，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝200:1至3:1)纯化残余物。得到呈浅黄色油状物的1-(4-四氢吡喃-2-基氧基丁-2-炔基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)吡唑(4.5g，13.00mmol，84％产率)。

在氮气下，向1-(4-四氢吡喃-2-基氧基丁-2-炔基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)吡唑(2g，5.78mmol，1当量)、4-溴-6-氯-哒嗪-3-胺(1.20g，5.78mmol，1当量)在二噁烷(60mL)和水(20mL)中的溶液中添加碳酸钠(1.53g，14.44mmol，2.5当量)和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(II)(422mg，0.58mmol，0.1当量)。将反应混合物在110℃下搅拌3小时。向混合物中添加水(200mL)，并用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(二氯甲烷:甲醇＝1:0至50:1)纯化残余物。得到呈黄色固体的6-氯-4-[1-(4-四氢吡喃-2-基氧基丁-2-炔基)吡唑-4-基]哒嗪-3-胺(1.3g，3.40mmol，58％产率)。

向6-氯-4-[1-(4-四氢吡喃-2-基氧基丁-2-炔基)吡唑-4-基]哒嗪-3-胺(1.6g，4.60mmol，1当量)在甲醇(15mL)中的溶液中添加盐酸溶液(4M的甲醇溶液，15mL，13.04当量)。将反应混合物在20℃下搅拌1小时。向混合物中添加饱和碳酸氢钠(50mL)以将pH调节至约6，然后用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(30mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。得到呈浅黄色固体的4-[4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)吡唑-1-基]丁-2-炔-1-醇(1.0g，3.79mmol，82％产率)。

向4-[4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)吡唑-1-基]丁-2-炔-1-醇(1.0g，3.79mmol，1当量)、三苯基膦(1.19g，4.55mmol，1.2当量)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中添加四溴化碳(1.51g，4.55mmol，1.2当量)。将反应混合物在20℃下搅拌1小时。真空浓缩混合物。通过硅胶色谱(二氯甲烷:甲醇＝1:0至50:1)纯化残余物。得到呈浅黄色固体的4-[1-(4-溴丁-2-炔基)吡唑-4-基]-6-氯-哒嗪-3-胺(1.0g，1.87mmol，49％产率)。

向4-[1-(4-溴丁-2-炔基)吡唑-4-基]-6-氯-哒嗪-3-胺(1g，1.87mmol，1当量)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(696mg，3.74mmol，2当量)在乙腈(10mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(724mg，5.60mmol，1.0mL，3当量)。将该混合物在80℃下搅拌12小时。向混合物中添加水(30mL)，并用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(二氯甲烷:甲醇＝1:0至20:1)纯化残余物。得到呈棕色固体的4-[4-[4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)吡唑-1-基]丁-2-炔基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(600mg，1.34mmol，71％产率)。

在氮气气氛下，向4-[4-[4-(3-氨基-6-氯-哒嗪-4-基)吡唑-1-基]丁-2-炔基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(500mg，1.16mmol，1当量)、(2-羟苯基)硼酸(192mg，1.39mmol，1.2当量)在二噁烷(10mL)和水(2mL)中的溶液中添加碳酸钾(400mg，2.89mmol，2.5当量)和四[三苯基膦]钯(0)(134mg，0.12mmol，0.1当量)。将反应混合物在110℃下搅拌10小时。向混合物中添加水(100mL)，并用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型薄层色谱(二氯甲烷:甲醇＝10∶1)纯化残余物。得到呈浅黄色固体的4-[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]吡唑-1-基]丁-2-炔基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(340mg，0.65mmol，56％产率)。

根据以下方案使用上述用于其他实施例的方法，将4-[4-[4-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]吡唑-1-基]丁-2-炔基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯转化为最终化合物。

在250-mL圆底烧瓶中置入4-(1-羟乙基)苯甲酸甲酯(2.5g，13.87mmol，1当量)、二溴三苯基膦(5.9g，13.87mmol，1当量)在DCM(100mL)中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌3小时。减压浓缩反应混合物，并将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(v:v＝1:12)洗脱的硅胶柱上。得到2.3g(68％)呈无色油状物的4-(1-溴乙基)苯甲酸甲酯。

在30-mL小瓶中置入4-(1-溴乙基)苯甲酸甲酯(1.2g，4.94mmol，1当量)、6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(1H-吡唑-4-基)哒嗪-3-胺(1.2g，3.95mmol，0.80当量)、K

在100-mL圆底烧瓶中置入4-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]苯甲酸甲酯(600mg，1.31mmol，1当量)在THF(20mL)中的溶液，在0℃下向其中添加LiAlH

在100-mL圆底烧瓶中置入[4-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]苯基]甲醇(310mg，0.72mmol，1当量)在DCM(10.0mL，117mmol，218当量)中的溶液，在室温下向其中添加二氧化锰(1.2g，14.37mmol，20当量)。将所得混合物在室温下搅拌16小时。滤出固体，并减压浓缩滤液。得到286mg(93％)呈黄色固体的4-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]苯甲醛。

在100-mL圆底烧瓶中置入4-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]苯甲醛(300.0mg，0.70mmol，1当量)、哌嗪-1-甲酸苄酯(185mg，0.84mmol，1.2当量)、HOAc(0.1mL，1.75mmol，2.50当量)的DCM(10mL)溶液。将所得混合物搅拌0.5小时，然后添加NaBH(OAc)

在用氮气惰性气氛吹扫并保持的100-mL圆底烧瓶中置入4-([4-[1-(4-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1H-吡唑-1-基)乙基]苯基]甲基)哌嗪-1-羧酸苄酯(260.0mg，0.41mmol，1当量)在THF(8mL)中的溶液，在0℃下向其中添加三乙基硼氢化锂(2.1mL，2.05mmol，5.00当量)。

将反应混合物在室温下搅拌16小时。然后将反应混合物用水(30mL)淬灭，并用二氯甲烷(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。得到200mg(98％)呈黄色油状物的6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-[1-(1-[4-[(哌嗪-1-基)甲基]苯基]乙基)-1H-吡唑-4-基]哒嗪-3-胺。

根据以下方案使用上述用于其他实施例的方法，将6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-[1-(1-[4-[(哌嗪-1-基)甲基]苯基]乙基)-1H-吡唑-4-基]哒嗪-3-胺转化为标题化合物。

向N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(5g，16.7mmol，1当量)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂戊硼烷(5.08g，20.0mmol，1.2当量)在二噁烷(100mL)中的溶液中添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(975mg，1.33mmol，0.08当量)和乙酸钾(3.27g，33.31mmol，2当量)。将该混合物在90℃下搅拌2小时。浓缩反应混合物，得到粗产物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:0至10:1)纯化粗产物。得到呈黄色油状物的化合物N-[(1S)-1-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(8.2g，16.44mmol，99％产率)。

将5-溴噻唑-4-羧酸乙酯(3.49g，14.77mmol，0.9当量)、N-[(1S)-1-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(5.70g，16.41mmol，1当量)、[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(120mg，0.16mmol，0.01当量)、碳酸钾(4.54g，32.83mmol，2当量)在二噁烷(130mL)和水(22mL)的混合物中的混合物脱气并用氮气吹扫三次，然后将混合物在80℃在氮气气氛下搅拌10小时。将反应混合物浓缩并添加水(50mL)，然后用乙酸乙酯(60mL)萃取两次。将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(50mL)洗涤两次，经无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:0至1:1)纯化粗产物。得到呈黄色固体的化合物5-[4-[(1S)-1-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]苯基]噻唑-4-羧酸乙酯(5.07g，13.48mmol，82％产率)。

在氮气气氛下，将5-[4-[(1S)-1-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]苯基]噻唑-4-羧酸乙酯(4g，10.63mmol，1当量)在四氢呋喃(60mL)中的溶液冷却至-78℃。然后在-78℃下滴加二异丁基氢化铝THF溶液(1M，11.69mL，1.1当量)。将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时。添加甲醇(2mL)以淬灭反应，然后添加水(50mL)。用乙酸乙酯(40mL×2)萃取混合物。将有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩，得到残余物。通过硅胶柱色谱(10％-50％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化残余物。得到呈白色固体的化合物N-[(1S)-1-[4-(4-甲酰基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(3.2g，9.63mmol，91％产率)。

向盐酸二甲胺(368mg，4.51mmol，0.41mL，3当量)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中添加三乙胺(609mg，6.02mmol，0.84mL，4当量)、N-[(1S)-1-[4-(4-甲酰基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(500mg，1.50mmol，1当量)在二氯甲烷(10mL)中的溶液和三乙酰氧基硼氢化钠(1.28g，6.02mmol，4当量)，并将混合物在20℃下搅拌2小时。通过添加水(50mL)来淬灭反应混合物，并用二氯甲烷(40mL)萃取两次。将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(60mL)洗涤两次，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到产物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:0至0:1)纯化粗产物。得到呈黄色油状物的化合物N-[(1S)-1-[4-[4-[(二甲基氨基)甲基]噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(364mg，1.01mmol，67％产率)。

使用针对示例性化合物76所述的方法，将N-[(1S)-1-[4-[4-[(二甲基氨基)甲基]噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯转化为最终产物。

于0℃在氮气下，向5-[4-[(1S)-1-(叔丁氧基羰基氨基)乙基]苯基]噻唑-4-羧酸乙酯(900mg，2.39mmol，1当量)和氯化钙(796mg，7.17mmol，3当量)在水(40mL)和

使用针对示例性化合物76所述的方法，将N-[(1S)-1-[4-[4-(羟甲基)噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯转化为最终产物。

也使用类似于上述那些的方法制备示例性化合物211和219。

使用针对示例性化合物168所述的方法制备。

于0℃在氮气下，向(5-溴噻唑-4-基)甲醇(980mg，5.05mmol，1当量)在THF(30mL)中的溶液中添加氢化钠(404mg，10.10mmol，2当量)。将混合物在0℃下搅拌30分钟，然后在0℃下添加碘甲烷(3.58g，25.25mmol，1.57mL，5当量)。将混合物于15℃在氮气下搅拌2小时。将混合物冷却至0℃，用饱和氯化铵水溶液缓慢淬灭，然后用乙酸乙酯(50mL×3)萃取。将合并的有机相用盐水(25mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝20/1至10/1)纯化残余物，得到呈黄色固体的5-溴-4(甲氧基甲基)噻唑(910mg，4.37mmol，86％产率)。

在烧瓶中装入N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.4g，4.66mmol，1当量)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂戊硼烷(1.42g，5.60mmol，1.2当量)、(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(II)(170mg，0.23mmol，0.05当量)、乙酸钾(915mg，9.33mmol，2当量)和二噁烷(30mL)。将混合物用氮气吹扫10分钟，然后加热至80℃保持1小时。将反应混合物冷却至20℃，并通过硅藻土垫过滤。真空浓缩滤液。通过快速色谱(石油醚:乙酸乙酯＝10∶1)纯化粗产物。得到呈无色油状物的N-[(1S)-1-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.9g，粗品)。

于15℃在氮气下，向5-溴-4-(甲氧基甲基)噻唑(900mg，4.33mmol，1当量)和N-[(1S)-1-[4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(2.25g，6.49mmol，1.5当量)在二噁烷(30mL)和水(5mL)中的混合物中一次性添加碳酸钾(1.20g，8.65mmol，2当量)和[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(316mg，0.43mmol，0.1当量)。将该混合物在90℃下搅拌3小时。将混合物冷却至15℃，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1至1/1)纯化残余物，得到呈黄色固体的N-[(1S)-1-[4-[4-(甲氧基甲基)噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.87g，粗品)。

使用针对示例性化合物76所述的方法，将N-[(1S)-1-[4-[4-(甲氧基甲基)噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯N-[(1S)-1-[4-[4-(羟甲基)噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯转化为最终产物。

也使用类似于上述那些的方法制备示例性化合物184和185。

向2-[3-(3-羟基丙基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(460mg，1.91mmol，1当量)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中添加戴斯-马丁过碘烷(970mg，2.29mmol，1.2当量)。将反应混合物在20℃下搅拌1小时。向混合物中添加乙酸乙酯(50mL)，并将混合物过滤，并真空浓缩滤液。将有机相用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝100:1至50:1)纯化残余物。得到呈无色油状物的3-甲基-2-[3-(3-氧代丙基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(300mg，1.25mmol，65％产率)。

根据以下方案使用上述用于其他实施例的方法，将3-甲基-2-[3-(3-氧丙基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯转化为最终化合物。

使用类似于上述那些的方法制备示例性化合物190和191。

步骤1

在-78℃下，向2-丁-3-炔氧基四氢吡喃(2g，12.97mmol，1当量)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中添加正丁基锂(2.5M，5.7mL，1.1当量)，然后将混合物在-78℃下搅拌1小时。然后向混合物中添加低聚甲醛(2.10g，23.35mmol，1.8当量)，并在-78℃下搅拌30分钟，在20℃下搅拌15小时。将混合物用饱和氯化铵溶液(80mL)淬灭，并用乙酸乙酯(2x40mL)萃取。将合并的有机相经硫酸钠干燥，然后浓缩，得到残余物。通过柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1至0:1)纯化残余物。得到呈无色油状物的5-四氢吡喃-2-基氧基戊-2-炔-1-醇(1.4g，7.60mmol，58％产率)。

向5-四氢吡喃-2-基氧基戊-2-炔-1-醇(1.4g，7.60mmol，1当量)和对甲苯磺酰氯(2.90g，15.20mmol，2当量)在四氢呋喃(15mL)中的混合物中添加氢氧化钾(2.13g，38.00mmol，5当量)。然后将反应混合物在20℃下搅拌2小时。将反应混合物用水(30mL)稀释，然后用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL x 2)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝50:1至10:1)纯化残余物。得到呈无色油状物的化合物5-四氢吡喃-2-基氧基戊-2-炔基4-甲基苯磺酸酯(2.5g，7.39mmol，97％产率)。

向4-甲基苯磺酸5-四氢吡喃-2-基氧基戊-2-炔酯(2.5g，7.39mmol，1当量)、4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(1.72g，8.86mmol，1.2当量)在乙腈(20mL)中的溶液中添加碳酸钾(2.04g，14.77mmol，2当量)。然后将反应混合物在80℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(30mL)稀释，然后用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(20mL x 2)洗涤，在硫酸钠上干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝50:1至10:1)纯化残余物。得到呈浅黄色油状物的化合物1-(5-四氢吡喃-2-基氧基戊-2-炔基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)吡唑(2g，5.55mmol，75％产率)。

根据以下方案使用上述用于其他实施例的方法，将1-(5-四氢吡喃-2-基氧基戊-2-炔基)-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)吡唑转化为最终化合物。

根据以下方案使用上述用于其他实施例并对本领域技术人员显而易见的方法，制备(2S,4R)-N-((R)-2-(二甲基氨基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-2-氧代乙基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺。

使用上述用于其他实施例的方法，将(2S,4R)-N-((R)-2-(二甲基氨基)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)-2-氧代乙基)-4-羟基吡咯烷-2-甲酰胺转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物171。

在0℃下，向N-[(1S)-1-[4-(4-甲酰基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(2g，6.02mmol，1当量)和1-重氮-1-二甲氧基磷酰基-丙烷-2-酮(1.16g，6.02mmol，1当量)在甲醇(20mL)中的溶液中添加碳酸钾(1.66g，12.03mmol，2当量)。将反应混合物在15℃下搅拌16小时。然后添加1-重氮-1-二甲氧基磷酰基-丙烷-2-酮(116mg，0.60mmol，0.1当量)，并将反应混合物在15℃下再搅拌1小时。添加乙酸乙酯(50mL)和水(40mL)，并分离混合物。将有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩，得到残余物，将其通过硅胶柱色谱(10％-30％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到呈白色固体的N-[(1S)-1-[4-(4-乙炔基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.8g，5.48mmol，91％产率)。

在0℃下，向N-[(1S)-1-[4-(4-乙炔基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(400mg，1.22mmol，1当量)、二甲胺(1.37g，12.18mmol，1.54mL，10当量)和三聚甲醛(362mg，4.02mmol，3.3当量)在二噁烷(8mL)中的溶液中添加碘化亚铜(232mg，1.22mmol，1当量)。将反应混合物脱气并充入氮气3次，然后在30℃下搅拌4小时。真空浓缩反应溶液，得到残余物。通过硅胶柱色谱(0-8％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化残余物，得到呈浅黄色胶状物的N-[(1S)-1-[4-[4-[3-(二甲基氨基)丙-1-炔基]噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(274mg，0.71mmol，58％产率)。

使用针对示例性化合物76所述的方法，将N-[(1S)-1-[4-[4-[3-(二甲基氨基)丙-1-炔基]噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯转化为最终化合物。

于15℃在氮气下，向2,2-二乙氧基乙醇(22.87g，170mmol，1.5当量)和4-溴-2-氟-吡啶(20g，113.65mmol，1当量)在乙腈(200mL)中的的混合物中一次性添加碳酸铯(74.06g，227mmol，2当量)。将该混合物在90℃下搅拌3小时。将混合物冷却至20℃，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚)纯化残余物，得到呈黄色油状物的4-溴-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)吡啶(22.8g，74.7mmol，66％产率)。

于15℃在氮气下，向4-溴-2-(2,2-二乙氧基乙氧基)吡啶(10g，34.46mmol，1当量)和3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸苄酯(8.49g，34.46mmol，1当量)在甲苯(200mL)中的混合物中一次性添加碳酸铯(22.46g，68.93mmol，2当量)和[2-(2-氨基苯基)苯基]-氯-钯二环己基-[2-(2,6-二异丙氧基苯基)苯基]膦酸酯(1.61g，2.07mmol，0.06当量)。将该混合物在110℃下搅拌12小时。将混合物冷却至20℃，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝10/1，3/1)纯化残余物，得到呈黄色油状物的8-[2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸苄酯(12.1g，26.6mmol，77％产率)。

在氮气下，向8-[2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸苄酯(13.1g，28.76mmol，1当量)在

根据以下方案使用上述用于其他实施例的方法以及对本领域技术人员显而易见的标准方法，将8-[2-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷转化为最终化合物。

使用类似于针对示例性化合物132所述的方法制备以下示例性化合物：135、136、139、141、133、140、142和210。

在-78℃下，在用氮气惰性气氛吹扫并保持的250-mL 3颈圆底烧瓶中置入1,4-二溴苯(12.0g，50.8mmol，1.0当量)的THF(150.0mL)溶液。然后在-78℃下添加正丁基锂溶液(1M的己烷溶液，60.9mL，60.9mmol，1.2当量)。将所得混合物在-78℃下搅拌30分钟，然后在-78℃下缓慢添加2,2-二氟乙酸乙酯(12.6g，101.5mmol，2.0当量)。除去冷却浴，并将所得混合物在室温下再搅拌1小时。然后通过添加50mL水来淬灭反应。用乙酸乙酯(250mL x3)萃取所得混合物，并且将有机层合并，用盐水洗涤，经无水硫酸钠干燥并减压浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:10)洗脱的硅胶柱上。得到7.6g(64％)浅黄色半固体的1-(4-溴苯基)-2,2-二氟乙-1-酮。

在氮气气氛下，在用氮气惰性气氛吹扫并保持的30-mL密封管中置入1-(4-溴苯基)-2,2-二氟乙-1-酮(3.5g，14.9mmol，1.0当量)、(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(3.6g，29.8mmol，2.0当量)和四(丙-2-基氧基)钛(12.7g，44.7mmol，3.0当量)的THF(10mL)溶液。将所得混合物于80℃在氮气气氛下在油浴中搅拌14小时。减压浓缩该混合物。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:5)洗脱的硅胶柱上。得到2.8g(56％)呈黄色油状物的(S)-N-[(1Z)-1-(4-溴苯基)-2,2-二氟亚乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺。

在0℃下，在用氮气惰性气氛吹扫并保持的250-mL 3颈圆底烧瓶中置入(S)-N-[(1Z)-1-(4-溴苯基)-2,2-二氟亚乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(2.8g，8.3mmol，1当量)和BH

在氮气气氛下，在用氮气惰性气氛吹扫并保持的30-mL密封管中置入(S)-N-[(1R)-1-(4-溴苯基)-2,2-二氟乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(1.3g，3.8mmol，1.0当量)、4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1,3-噻唑(1.25g，5.5mmol，1.5当量)、K

根据以下方案使用类似于针对本申请中其他实施例所述的方法，将(S)-N-[(1R)-2,2-二氟-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)-苯基]乙基]-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物267和268。

在0℃下，向N-[(1S)-1-[4-[4-(羟甲基)噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(400mg，1.20mmol，1当量)、异吲哚啉-1,3-二酮(352mg，2.39mmol，2当量)和三苯基膦(471mg，1.79mmol，1.5当量)在四氢呋喃(8mL)中的溶液中添加偶氮二甲酸N,N-二异丁酯(290mg，1.44mmol，0.27mL，1.2当量)。将混合物在15℃下搅拌16小时。浓缩反应混合物，得到粗产物，将其通过制备型-TLC(石油醚:乙酸乙酯＝1∶1)纯化，得到呈白色固体的N-[(1S)-1-[4-[4-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(560mg)。

步骤2

将N-[(1S)-1-[4-[4-[(1,3-二氧代异吲哚啉-2-基)甲基]噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(600mg，1.29mmol，1当量)和水合肼(661mg，12.94mmol，0.64mL，98％纯度，10当量)在乙醇(24mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫三次，然后将混合物于70℃在氮气气氛下搅拌3小时。过滤反应混合物，并用乙醇(30mL)洗涤滤饼。浓缩滤液，得到粗产物。得到呈白色固体的化合物N-[(1S)-1-[4-[4-(氨基甲基)噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(530mg，粗品)。

在0℃下，在N-[(1S)-1-[4-[4-(氨基甲基)噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(618mg，1.85mmol，1当量)和三乙胺(563mg，5.56mmol，0.77mL，3当量)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中添加乙酸酐(227mg，2.22mmol，0.21mL，1.2当量)。将混合物在15℃下搅拌3小时。用水(30mL)稀释反应混合物，然后浓缩有机层，得到粗产物。通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10∶1)纯化粗产物。得到呈白色固体的化合物N-[(1S)-1-[4-[4-(乙酰胺基甲基)噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(400mg，1.07mmol，58％产率)。

使用针对示例性化合物76所述的方法，将N-[(1S)-1-[4-[4-(乙酰氨基甲基)噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯转化为最终化合物。

步骤1

于-78℃在氮气下，向N-[(1S)-1-[4-(4-乙炔基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.73g，5.27mmol，1当量)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中添加正丁基锂(2.5M，4.42mL，2.1当量)。将反应混合物在-50℃下搅拌2小时。然后添加三甲酚(474mg，5.27mmol，1当量)，并使反应混合物升温至10℃，保持22h。将反应混合物在10℃下再搅拌20小时。添加水(40mL)，并用乙酸乙酯(40mL)萃取混合物。将有机层经硫酸钠干燥，然后真空浓缩。通过硅胶柱色谱(10％-80％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化残余物，得到呈白色固体的N-[(1S)-1-[4-[4-(3-羟基丙-1-炔基)噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(480mg，1.34mmol，25％产率)。回收了950mg起始材料。

使用上述用于示例性化合物174的方法，将N-[(1S)-1-[4-[4-(3-羟基丙-1-炔基)噻唑-5-基]苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯转化为(S)-(1-(4-(4-(3-乙酰胺基丙-1-炔-1-基)噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。

使用类似于针对示例性化合物76所述的方法，将(S)-(1-(4-(4-(3-乙酰胺基丙-1-炔-1-基)噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯转化为最终化合物。

根据以下方案使用上述方法制备。

使用类似的方法制备示例性化合物176。

根据以下方案使用上述方法制备。

使用类似的方法制备示例性化合物179。

在0℃下，向2,2-二乙氧基乙醇(2.06g，15.38mmol，1.5当量)在THF(50mL)中的溶液中添加氢化钠(615mg，15.38mmol，60％纯度，1.5当量)，并将混合物在0℃下搅拌30分钟。然后在0℃下向其中添加2-溴乙酸叔丁酯(2g，10.25mmol，1.52mL，1当量)在THF(50mL)中的溶液，并将反应混合物于15℃在氮气下搅拌2小时。将混合物冷却至0℃，并用饱和氯化铵水溶液淬灭。用乙酸乙酯(20mL×3)萃取水相。将合并的有机相用盐水(15mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝50/1至20/1)纯化残余物，得到呈黄色油状物的2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙酸叔丁酯(883mg，3.56mmol，34％产率)。

于15℃在氮气下，向2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙酸叔丁酯(0.7g，2.82mmol，1当量)在THF(3mL)、甲醇(3mL)和水(6mL)的混合物中的溶液中一次性添加氢氧化锂一水合物(1.18g，28.19mmol，10当量)。将该混合物搅拌2小时。用1M盐酸将pH调节至6。用乙酸乙酯(35mL×4)萃取水相。将合并的有机相用盐水(20mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。得到呈黄色油状物的粗产物2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙酸(460mg，粗品)。

于15℃在氮气气氛下，向(2S,4R)-1-[(2S)-2-氨基-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(0.2g，0.45mmol，1当量)和2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙酸(87mg，0.45mmol，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的混合物中一次性添加O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸酯(222mg，0.59mmol，1.3当量)和三乙胺(137mg，1.35mmol，0.19mL，3当量)。将该混合物在15℃下搅拌1小时。将该混合物倒入冰水(w/w＝1/1，20mL)中，并搅拌5分钟。用乙酸乙酯(20mL×4)萃取水相。将合并的有机相用盐水(15mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过半制备型反相HPLC(甲酸条件；色谱柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um，流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：30％-60％，9min)纯化残余物。得到呈黄色油状物的产物(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-(2,2-二乙氧基乙氧基)乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(230mg，0.37mmol，82％产率)。

根据以下方案并使用上述用于其他实施例的方法，将(2S,4R)-1-[(2S)-2-[[2-(2,2-Di乙氧基乙氧基)乙酰基]氨基]-3,3-二甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺转化为最终化合物。

于0℃在氮气气氛下，向PPh

以下反应以4个平行相等的批次进行，并将其合并用于后处理和纯化。在每批中，于室温在氮气气氛下，向6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(8-[2-[(1r,3r)-3-[(6-溴吡啶-3-基)氧基]环丁氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-胺(571mg，0.864mmol，1.00当量)和叔丁基二甲基[[(2E)-3-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)丙-2-烯-1-基]氧基]硅烷(387mg，1.297mmol，1.50当量)在1,4-二噁烷(15mL)和水(5mL)中的溶液中添加K

于0℃在氮气气氛下，向6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]-4-(8-[2-[(1r,3r)-3-([6-[(1E)-3-[(叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基]丙-1-烯-1-基]吡啶-3-基]氧基)环丁氧基]吡啶-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)哒嗪-3-胺(2.10g，2.79mmol，1.00当量)在THF(20mL)中的搅拌溶液中滴加TBAF(1mol/L，8.3mL，8.3mmol，3.0当量)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。然后，通过添加水(25mL)来淬灭该反应。用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取所得混合物。将有机层合并，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物施加到使用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱的硅胶柱上。得到呈浅黄色固体的3-[5-[(1r,3r)-3-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]吡啶-2-基]丙-2-烯-1-醇(1.1g，62％)。

于-10℃在氮气气氛下，向三丁基膦(634mg，3.14mmol，10.00当量)和四甲基偶氮二甲酰胺(588mg，3.14mmol，10.00当量)在THF中的溶液中添加(2S,4R)-4-羟基-1-[2-(3-羟基-1,2-噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(172mg，0.345mmol，1.10当量)和(2E)-3-[5-[(1r,3r)-3-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]吡啶-2-基]丙-2-烯-1-醇(70mg，0.11mmol，1当量)。于室温在氮气气氛下，将所得混合物搅拌16小时。通过在室温下添加水(50mL)来淬灭该反应，并用EtOAc(30mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。通过硅胶柱色谱纯化残余物，用二氯甲烷/甲醇(10:1)洗脱，得到呈浅黄色固体的(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[3-甲基-2-(3-[[(2E)-3-[5-[(1r,3r)-3-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]吡啶-2-基]丙-2-烯-1-基]氧基]-1,2-噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺(120mg，34％)。

使用上述用于其他实施例的标准方法，将(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]乙基]-1-[3-甲基-2-(3-[[(2E)-3-[5-[(1r,3r)-3-[[4-(3-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基]氧基]环丁氧基]吡啶-2-基]丙-2-烯-1-基]氧基]-1,2-噁唑-5-基)丁酰基]吡咯烷-2-甲酰胺转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物186、206和207。

在0℃下，向4-(3-羟基环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g，7.37mmol，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中的溶液中添加氢化钠(353mg，8.84mmol，60％纯度，1.2当量)。将混合物在25℃下搅拌1小时。然后添加4-甲基苯磺酸2-苄氧基乙酯(3.39g，11.06mmol，1.5当量)的N,N-二甲基甲酰胺(2mL)溶液。将该混合物在60℃下搅拌15小时。通过添加水(200mL)来淬灭反应混合物，并用乙酸乙酯(200mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(200mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过制备型HPLC(色谱柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：50ACN％-80ACN％，26min，20％min)纯化残余物。得到呈无色油状物的化合物4-[3-(2-苄氧基乙氧基)环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.1g，5.18mmol，70％产率)。

在氮气下，向4-[3-(2-苄氧基乙氧基)环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.1g，5.18mmol，1当量)在乙醇(20mL)和四氢呋喃(20mL)中的溶液中添加活性炭载5％钯催化剂(500mg)。将悬浮液真空脱气并用氢气吹扫3次。将混合物在氢气(15Psi)下在25℃下搅拌16小时。将反应混合物过滤并减压浓缩，得到残余物。得到呈无色油状物的4-[3-(2-羟基乙氧基)环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.6g，5.07mmol，97％产率)。

根据以下方案使用上述用于其他实施例的方法，将4-[3-(2-羟基乙氧基)环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯转化为最终化合物。

于0℃在氮气气氛下，向1,4-二甲基-1H-吡唑(2.5g，26.0mmol，1当量)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中滴加正丁基锂的己烷溶液(2.5M的己烷溶液，78.0mmol，31mL，3当量)。将所得溶液在室温下搅拌1h，然后冷却至-78℃。添加2-异丙氧基-4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷(14.52g，78.017mmol，3当量)，并将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时，然后缓慢升温至0℃。用盐水淬灭反应，并用EtOAc(250mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水洗涤，经Na

在250-mL圆底烧瓶中置入N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.0g，3.331mmol，1当量)、1,4-二甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑(1.48g，6.664mmol，2.00当量)、K

使用上述用于其他实施例的方法，将N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸苄酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物193。

在0℃下，向2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸(1g，5.40mmol，1当量)在甲醇(10mL)中的溶液中添加亚硫酰氯(2.57g，21mmol，1.57mL，4当量)。将反应混合物在70℃下搅拌3小时。减压浓缩反应混合物。将残余物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(80mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。得到呈黄色油状物的2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(1g，5.02mmol，92％产率)。

向2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(800mg，4.02mmol，1当量)在乙腈(5mL)中的溶液中添加碳酸钾(1.11g，8.03mmol，2当量)和全氟丁基磺酰氟(1.46g，4.82mmol，1.2当量)。将反应混合物在25℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(80mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝100/1至20/1)纯化残余物。得到呈无色油状物的3-甲基-2-[3-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰基氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(530mg，1.10mmol，27％产率)。

将3-甲基-2-[3-(1,1,2,2,3,3,4,4,4-九氟丁基磺酰基氧基)异噁唑-5-基]丁酸甲酯(400mg，0.83mmol，1当量)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(154mg，0.83mmol，1当量)在二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液在130℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(30mL x 3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型-TLC(石油醚:乙酸乙酯＝3∶1)纯化残余物。得到呈无色油状物的4-[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(130mg，0.35mmol，42％产率)。

向4-[5-(1-甲氧基羰基-2-甲基-丙基)异噁唑-3-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(130mg，0.35mmol，1当量)在甲醇(2mL)、四氢呋喃(2mL)和水(2mL)中的溶液中添加氢氧化锂(44mg，1.06mmol，3当量)。将反应混合物在15℃下搅拌1小时。添加水(3mL)。用盐酸(1M的水溶液)将pH调节至6，然后用乙酸乙酯(10mL x 5)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL x 1)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。得到呈白色固体的2-[3-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸(100mg，0.28mmol，79％产率)。

向2-[3-(4-叔丁氧基羰基哌嗪-1-基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸(100mg，0.28mmol，1当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸酯(129mg，0.33mmol，1.2当量)在二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中添加(2S,4R)-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺盐酸盐(104mg，0.28mmol，1当量)和二异丙基乙胺(109mg，0.84mmol，3当量)。将反应混合物在15℃下搅拌0.5小时。将反应混合物倒入水(20mL)中，用乙酸乙酯(30mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL x3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过制备型TLC(二氯甲烷:甲醇＝10:1)纯化残余物。得到呈无色油状物的4-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(180mg，0.26mmol，92％产率)。

通过手性超临界流体色谱法分离4-[5-[1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(200mg，0.29mmol，1当量)。仪器：CASWH-Prep-SFC-C，SFC色谱柱：DAICELChiralpak AS(250mm*30mm，10um)；流动相：乙醇(0.1％NH

向4-[5-[(1R)-1-[(2S,4R)-4-羟基-2-[[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羰基]-2-甲基-丙基]异噁唑-3-基]哌嗪-1-羧酸叔丁酯(70mg，0.1mmol，1当量)在二氯甲烷(2mL)中的溶液中添加盐酸(4M的二噁烷溶液，3mL)。将反应混合物在15℃下搅拌1小时。减压浓缩反应混合物。得到呈白色固体的(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-哌嗪-1-基异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(55mg，0.09mmol，91％产率)。

向(2S,4R)-4-羟基-1-[(2R)-3-甲基-2-(3-哌嗪-1-基异噁唑-5-基)丁酰基]-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺(100mg，0.16mmol，1当量，盐酸盐)、1,2-二溴乙烷(31mg，0.16mmol，1当量)和2-[6-氨基-5-[8-[2-[3-(4-哌啶基氧基)环丁氧基]-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚二盐酸盐(102mg，0.16mmol，1当量)在乙腈(12mL)中的混合物中添加N,N-二异丙基乙胺(128mg，0.99mmol，6当量)。将该混合物于100℃在微波下搅拌2h。减压浓缩该反应混合物，得到残余物。通过制备型HPLC(色谱柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：5％-35％，10min)纯化残余物。得到呈灰白色固体的化合物(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-[4-[2-[4-[3-[[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]氧基]环丁氧基]-1-哌啶基]乙基]哌嗪-1-基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-N-[(1S)-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]吡咯烷-2-甲酰胺甲酸酯(24.6mg，0.02mmol，12％产率)。

使用与示例性化合物195类似的方法制备。

使用类似于针对示例性化合物112和116所述的方法制备。

向2-氟-3-氧代-丁酸乙酯(33.6g，226.82mmol，28.47mL，1当量)和乙二醇(70.39g，1.13mol，63.42mL，5当量)在甲苯(500mL)中的溶液中添加三氟化硼乙醚(3.36g，23.67mmol，2.92mL，0.1当量)。将该混合物在80℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(300mL)稀释，并用乙酸乙酯(300mL)萃取两次。将合并的有机相用盐水(300mL)洗涤两次，经无水硫酸钠干燥，过滤并浓缩，得到粗产物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝100:1至10:1)纯化残余物。得到呈无色油状物的化合物2-氟-2-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)乙酸乙酯(29.3g，152.5mmol，67％产率)。

于0℃在1小时内，向2-氟-2-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)乙酸乙酯(29.3g，152.46mmol，1当量)和盐酸羟胺(21.19g，304.92mmol，2当量)在吡啶(164mL)中的溶液中滴加甲醇钠(28％)的甲醇(61mL)溶液。将该混合物在20℃下搅拌1小时。过滤反应混合物，并将滤液用四氢呋喃(500mL)稀释并另外过滤。浓缩滤液，得到粗产物，将其通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1∶0至0∶1)纯化，得到产物。得到呈橙色油状物的化合物2-氟-2-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)乙烷异羟肟酸(10.4g，58.1mmol，38％产率)。

将2-氟-2-(2-甲基-1,3-二氧戊环-2-基)乙烷异羟肟酸(10.35g，57.77mmol，1当量)在硫酸(18M，50mL，15.58当量)中的溶液在70℃下搅拌2小时。将反应混合物倒入冰水(250mL)中，然后用乙酸乙酯(250mL)萃取两次。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物。将粗产物直接用于下一步骤，无需纯化。得到呈黄色固体的化合物4-氟-5-甲基-异噁唑-3-醇(4.60g，39.29mmol)。

向4-氟-5-甲基-异噁唑-3-醇(5.7g，48.69mmol，1当量)在二氯甲烷(228mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸一水合物(926mg，4.87mmol，0.1当量)和3,4-二氢-2H-吡喃(20.48g，243.43mmol，22.26mL，5当量)。将该混合物在20℃下搅拌10小时。将反应混合物倒入水(100mL)中，并用饱和碳酸氢钠溶液(60mL)将pH调节至7。然后将混合物用二氯甲烷(200mL)萃取两次。将合并的有机层用饱和氯化钠水溶液(200mL)洗涤两次，经无水硫酸钠干燥并过滤。浓缩滤液，得到粗产物，将其通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1∶0至8∶1)纯化。得到呈黄色固体的化合物4-氟-5-甲基-3-四氢吡喃-2-基氧基-异噁唑(7.94g，39.5mmol，81％产率)。

于-78℃在氮气下，向4-氟-5-甲基-3-四氢吡喃-2-基氧基-异噁唑(8.07g，40.13mmol，1当量)在四氢呋喃(115mL)中的溶液中滴加双(三甲基甲硅烷基)氨基钾(1M，60.20mL，1.5当量)，并且将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时。然后在-78℃下向反应混合物中鼓泡通入二氧化碳(15psi)1小时，并将混合物在20℃下搅拌1小时。将反应混合物用饱和氯化铵水溶液(150mL)淬灭，并用乙酸乙酯(100mL)萃取两次。在0℃下用盐酸水溶液(1M)将水层调节至pH＝3，然后用氯仿和异丙醇(v/v＝5∶1，150mL，三次)萃取。将合并的层经无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液，得到粗产物。得到呈黄色固体的化合物2-(4-氟-3-四氢吡喃-2-基氧基-异噁唑-5-基)乙酸(8.07g，32.91mmol)。

在-10℃下，向2-(4-氟-3-四氢吡喃-2-基氧基-异噁唑-5-基)乙酸(7.87g，32.10mmol，1当量)在甲醇(70mL)和乙酸乙酯(70mL)的混合物中的溶液中滴加三甲基甲硅烷基重氮甲烷醚溶液(2M，24.07mL，1.5当量)，并将混合物在-10℃下搅拌1小时。用乙酸调节反应混合物直至pH＝7，并添加乙酸乙酯(150mL)。将有机层用饱和碳酸氢钠溶液(50mL)洗涤，并经无水硫酸钠干燥，过滤，并浓缩滤液，得到粗产物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:0至5:1)纯化粗产物。得到呈无色油状物的化合物2-(4-氟-3-四氢吡喃-2-基氧基-异噁唑-5-基)乙酸甲酯(4.51g，17.40mmol，54％产率)。

在0℃下，向2-(4-氟-3-四氢吡喃-2-基氧基-异噁唑-5-基)乙酸甲酯(4.42g，17.05mmol，1当量)在二甲基甲酰胺(66mL)中的溶液中添加叔丁醇钾(2.87g，25.58mmol，1.5当量)，然后添加2-碘丙烷(3.48g，20.46mmol，2.05mL，1.2当量)。将该混合物在20℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(60mL)稀释，并用乙酸乙酯(80mL)萃取三次。将合并的层用饱和氯化钠水溶液(100mL)洗涤两次，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物。通过硅胶色谱(石油醚)纯化粗产物。得到呈黄色油状物的化合物2-(4-氟-3-四氢吡喃-2-基氧基-异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(5.25g)。

向2-(4-氟-3-四氢吡喃-2-基氧基-异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(5.48g，18.19mmol，1当量)在二氯甲烷(20mL)、四氢呋喃(5mL)和水(5mL)中的混合物中的溶液中添加盐酸/二噁烷(4M，30.00mL，6.60当量)。将该混合物在20℃下搅拌20小时。将反应混合物倒入饱和碳酸钠溶液(300mL)中，然后用甲基叔丁基醚(100mL)萃取三次。通过添加盐酸溶液(3M)直至pH＝2来调节水层pH。将水层用氯仿(150mL)萃取三次，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物。通过半制备型反相(色谱柱：Kromasil 250*50mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN)-ACN]；B％：21ACN％-51ACN％，29min，79％min)纯化残余物。得到呈白色固体的化合物2-(4-氟-3-羟基-异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(1.27g，5.86mmol，32％产率)。

将2-(4-氟-3-羟基-异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(0.5g，2.30mmol，1当量)、2-溴-1,1-二乙氧基-乙烷(907mg，4.60mmol，0.69mL，2当量)和碳酸钾(636mg，4.60mmol，2当量)溶于微波管中的二甲亚砜(8mL)中。将密封管在微波辐射下在80℃下加热2小时。LCMS显示起始材料料仍然残留后，将密封管在微波辐射下于80℃再加热2小时。将混合物过滤并真空浓缩。通过半制备型反相(色谱柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：40％70％，9min)纯化残余物。得到呈黄色油状物的化合物2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-氟-异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(266mg，0.80mmol，35％产率)，并且回收了46mg 2-(4-氟-3-羟基-异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯。

使用类似于上述用于示例性化合物76的方法，将2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)-4-氟-异噁唑-5-基]-3-甲基丁酸甲酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物198、208、209、269和270。

向(2R)-2-氨基-2-(4-溴苯基)乙醇(1.74g，6.89mmol，1当量，盐酸盐)在四氢呋喃(25mL)中的溶液中添加三乙胺(2.79g，27.56mmol，3.84mL，4当量)和碳酸叔丁氧羰基叔丁酯(1.80g，8.27mmol，1.90mL，1.2当量)。将该混合物在30℃下搅拌12小时。减压浓缩反应混合物，以去除四氢呋喃。用乙酸乙酯(50mL x 2)萃取残余物。将合并的有机层用盐水溶液(40mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。将粗产物用石油醚/乙酸乙酯(22mL，v∶v＝10∶1)研磨。得到呈白色固体的化合物N-[(1R)-1-(4-溴苯基)-2-羟基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(2g，6.33mmol，91％产率)。

将N-[(1R)-1-(4-溴苯基)-2-羟基-乙基]氨基甲酸叔丁酯(2.0g，6.33mmol，1当量)、4-甲基噻唑(1.25g，12.65mmol，1.15mL，2当量)、乙酸钾(1.24g，12.65mmol，2当量)和乙酸钯(142mg，0.63mmol，0.1当量)在二甲基乙酰胺(40mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫3次，然后将混合物于100℃在氮气气氛下搅拌12小时。减压浓缩反应混合物，以去除二甲基乙酰胺。将残余物用乙酸乙酯(40mL x 2)萃取，并用饱和盐水(40mL x 2)洗涤。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩。通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝5/1至1/2)纯化残余物。得到呈黄色油状物的化合物N-[(1R)-2-羟基-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.45g，3.98mmol，63％产率)。

使用类似于上述用于示例性化合物180的方法，将N-[(1R)-2-羟基-1-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]乙基]氨基甲酸叔丁酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物199、158和100。

向1-(4-溴-2-羟基-苯基)乙酮(10g，46.50mmol，1.0当量)在二甲基甲酰胺(50mL)中的溶液中添加碳酸钾(9.64g，69.75mmol，1.5当量)。然后在0℃下向混合物中添加碘甲烷(13.20g，93.00mmol，2.0当量)。然后将混合物在20℃下搅拌12小时。将混合物用水(200mL)稀释，用乙酸乙酯(100ml x 3)萃取，用盐水(50ml x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。得到呈黄色固体的1-(4-溴-2-甲氧基-苯基)乙酮(10.5g，45.84mmol，98％产率)。

向1-(4-溴-2-甲氧基-苯基)乙酮(10g，43.65mmol，1.18当量)在四氢呋喃(50mL)中的溶液中添加四乙醇钛(16.94g，74.26mmol，2.0当量)。然后将2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4.5g，37.13mmol，1.0当量)添加到混合物中，并将混合物用N

在0℃下，向((R,E)-N-(1-(4-溴-2-甲氧基苯基)亚乙基)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(9g，27.09mmol，1.0当量)在四氢呋喃(90mL)中的溶液中添加三仲丁基硼氢化锂(1M，81.26mL，3.0当量)。然后将混合物在20℃下搅拌2小时。将混合物用水(100mL)淬灭，用水(20mL)稀释，用乙酸乙酯(300ml x 3)萃取，用盐水(200mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，然后浓缩。通过硅胶柱色谱(石油醚:乙酸乙酯＝20:1至1:1)纯化残余物。得到呈黄色油状物的N-[(1S)-1-(4-溴-2-甲氧基-苯基)乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(5.5g，16.45mmol，60％产率)。

向N-[(1S)-1-(4-溴-2-甲氧基-苯基)乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺(4.7g，14.06mmol，1.0当量)和4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂戊硼烷(5.36g，21.09mmol，1.5当量)在二噁烷(12mL)中的溶液中添加[1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(ii)(1.03g，1.41mmol，0.1当量)和乙酸钾(2.76g，28.12mmol，2.0当量)。然后将混合物用N

根据以下方案，将N-[(1S)-1-[2-甲氧基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯基]乙基]-2-甲基-丙烷-2-亚磺酰胺转化为(S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙-1-胺。

使用类似于上述用于其他实施例(例如，示例性化合物64)的方法，将(S)-1-(2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙-1-胺转化为最终化合物。

使用类似于上述那些的方法制备示例性化合物201。

向N-[(1S)-1-(4-溴苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(2g，6.66mmol，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(20mL)中的溶液中添加四三苯基苯基膦钯(770mg，0.67mmol，0.1当量)和氰化锌(782mg，6.66mmol，0.4mL，1当量)。将反应溶液在80℃下搅拌14小时。将溶液用水(80ml)淬灭，并用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。用盐水(20mL x 3)洗涤合并的有机层。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1至3∶1)纯化残余物，得到产物。得到呈无色胶状物的N-[(1S)-1-(4-氰基苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.6g，6.50mmol，97.50％产率)。

使用上述方法，将N-[(1S)-1-(4-氰基苯基)乙基]氨基甲酸叔丁酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物204。

在100mL圆底烧瓶中置入1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-羧酸叔丁酯(3.5g，13.7mmol，1.0当量)和TEA(4.1g，0.1mmol，3.0当量)的DCM(8mL)溶液，向其中缓慢添加CbzCl(2.8g，0.1mmol，1.2当量)。将所得混合物在室温下搅拌12小时。然后通过添加20mL水将反应混合物淬灭，并用DCM(20mL x 2)萃取。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:0)洗脱的硅胶柱上。得到4.0g(75％)呈白色油状物的1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4,9-二羧酸4-苄基9-叔丁酯。

在100mL圆底烧瓶中置入1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4,9-二羧酸4-苄基9-叔丁酯(4.0g，10.2mmol，1.0当量)的二噁烷(15mL)溶液，然后添加氯化氢的1,4-二噁烷溶液(4.0M，4mL)。将所得混合物在室温下搅拌3小时，然后减压浓缩。得到2.9g(87％)呈固体的1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-羧酸苄酯盐酸盐。

在30mL密封管中置入1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-羧酸苄酯盐酸盐(2.9g，8.9mmol，1.0当量)、4-溴-6-氯哒嗪-3-胺(2.1g，0.1mmol)和DIEA(3.9g，0.1mmol)的DMSO(8mL)溶液。将所得溶液在130℃下在油浴中搅拌12小时。然后通过添加20mL水/冰来淬灭反应混合物。用乙酸乙酯(20mL x 2)萃取所得混合物。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:0)洗脱的硅胶柱上。得到3.1g(84％)呈黄色固体的9-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-羧酸苄酯。

在30-mL密封管中置入9-(3-氨基-6-氯哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-羧酸苄酯(3.1g，7.4mmol，1.0当量)、[2-(甲氧基甲氧基)苯基]硼酸(2.7g，0.1mmol，2.0当量)、Pd(PPh

在氮气气氛下，在100ml圆底烧瓶中，向9-[3-氨基-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-4-基]-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-羧酸苄酯(3.2g，6.2mmol，1.0当量)在甲醇(10mL)中的溶液中添加Pd(OH)

在250-mL圆底烧瓶中置入丁-2-炔-1,4-二醇(2.58g，30.00mmol，1.00当量)、氧化银(10.35g，45.00mmol，1.50当量)和碘化钾(498mg，3.00mmol，0.10当量)在二氯甲烷(80mL)中的溶液。然后添加4-甲基苯磺酰氯(5.70g，30.00mmol，1.00当量)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。滤出不溶性固体，并将滤液浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:2)洗脱的硅胶柱上。得到6.13g(85％)呈黄色油状物的4-甲基苯磺酸4-羟基丁-2-炔-1-基酯。

在250-mL圆底烧瓶中置入4-甲基苯磺酸4-羟基丁-2-炔-1-基酯(6.13g，25.54mmol，1.10当量)、哌嗪-1-羧酸苄酯(5.11g，23.22mmol，1.00当量)和碳酸钾(12.82g，92.88mmol，4.00当量)在DMF(40mL)中的溶液。将所得混合物在室温下搅拌过夜。然后将反应混合物用水(400mL)淬灭，并且用乙酸乙酯(200mL x 2)萃取。将合并的有机相经硫酸钠干燥并浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱的硅胶柱上。得到2.01g(30％)呈黄色油状物的4-(4-羟基丁-2-炔-1-基)哌嗪-1-羧酸苄酯。

在250-mL圆底烧瓶中置入4-(4-羟基丁-2-炔-1-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(2.01g，6.98mmol，1.00当量)和氢氧化钾(3.91g，69.80mmol，10.00当量)在二乙醚(100mL)中的溶液。然后添加4-甲基苯磺酰氯(1.99g，10.47mmol，1.50当量)。将反应混合物在室温下搅拌过夜。滤出不溶性固体。将滤液用水(100mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并真空浓缩。得到1.80g(59％)呈黄色油状物的4-(4-(甲苯磺酰氧基)丁-2-炔-1-基)哌嗪-1-羧酸苄酯。

在250-mL圆底烧瓶中置入4-(4-(甲苯磺酰氧基)丁-2-炔-1-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1.80g，4.07mmol，2.50当量)、6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-4-(1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哒嗪-3-胺(627mg，1.63mmol，1.00当量)、碘化钠(366mg，2.44mmol，1.50当量)、碳酸钾(900mg，6.52mmol，4.0当量)在乙腈(70mL)中的溶液。将所得混合物在70℃下搅拌过夜。将反应混合物用水(100mL)稀释，用乙酸乙酯(200mL x 2)萃取。浓缩合并的有机相，并将残余物施加到使用甲醇/二氯甲烷(1:10)洗脱的硅胶柱上。得到180mg(17％)呈棕色固体的4-(4-(9-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)丁-2-炔-1-基)哌嗪-1-羧酸苄酯。

在氮气气氛下，在100-mL圆底烧瓶中，向4-(4-(9-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)丁-2-炔-1-基)哌嗪-1-羧酸苄酯(1.60g，2.44mmol，1.00当量)在甲醇(40mL)中的溶液中添加二氧化铂(221.8mg，0.98mmol，0.40当量)。将烧瓶抽真空并用氢气冲洗。使用氢气球，于室温在氢气气氛下，将反应混合物氢化4小时。通过硅藻土垫过滤混合物，并减压浓缩滤液。将残余物施加到使用甲醇/二氯甲烷(1:10)洗脱的硅胶柱上。得到444.0mg(28％)呈棕色固体的4-(4-(9-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)丁基)哌嗪-1-羧酸苄酯。

在100-mL圆底烧瓶中置入4-(4-(9-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)丁基)哌嗪-1-羧酸苄酯(444mg，0.67mmol，1.00当量)在THF(8mL)中的溶液，向其中添加三乙基硼氢化锂在THF(1.0M，8mL)中的溶液。将所得溶液在室温下搅拌3小时。将反应混合物用饱和NH

根据以下方案使用类似于上述用于其他实施例的方法，将6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)-4-(4-(4-(哌嗪-1-基)丁基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-9-基)哒嗪-3-胺转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物205。

根据以下方案使用类似于上述用于示例性化合物91的方法制备。

使用类似的方法制备示例性化合物187。

根据以下方案使用针对其他实施例所述的方法以及对本领域技术人员显而易见的方法，制备4-(2-((1r,3r)-3-(2-(9-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)乙氧基)环丁氧基)乙基)哌嗪-1-羧酸苄酯。

使用类似于针对示例性化合物91所述的方法，将4-(2-((1r,3r)-3-(2-(9-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)哒嗪-4-基)-1-氧杂-4,9-二氮杂螺[5.5]十一烷-4-基)乙氧基)环丁氧基)乙基)哌嗪-1-羧酸苄酯转化为最终化合物。

使用类似于示例化合物117的步骤1和步骤2中所述的方法，然后使用示例性化合物180所述的步骤中所述的方法制备。

根据以下方案使用对本领域技术人员显而易见的标准方法，制备(2S,4R)-4-羟基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯。

使用上述用于其他实施例的标准方法，将(2S,4R)-4-羟基-2-((2-甲氧基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苄基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯转化为最终化合物。

向3-羟基环丁烷羧酸甲酯(14.2g，109.11mmol，1.00当量)在DMF(150mL)中的溶液中添加氢化钠(5.24g，130.93mmol，60％纯度，1.20当量)，并将混合物在0℃下搅拌0.5小时。随后，添加苄基溴(20.53g，120.02mmol，14.26mL，1.1当量)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在25℃下用饱和氯化铵溶液(200mL)淬灭，然后用水(100mL)稀释并用乙酸乙酯(80mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(150mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过快速硅胶色谱(0～20％乙酸乙酯/石油醚梯度)纯化残余物。得到呈浅黄色油状物的3-苄氧基环丁烷羧酸甲酯(8.9g，40.41mmol，37％产率)。

在0℃下，向氢化铝锂(1.53g，40.41mmol，1.00当量)在四氢呋喃(80mL)中的溶液中添加3-苄氧基环丁烷羧酸甲酯(8.90g，40.41mmol，1.00当量)，并将混合物在25℃下搅拌2小时。将反应混合物在25℃下用水(1mL)、氢氧化钠溶液(15％，2mL)和水(3mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(80mL)稀释并用乙酸乙酯(15mL×3)萃取。将合并的有机层用盐水(50mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过快速硅胶色谱(0～50％乙酸乙酯/石油醚)纯化残余物。得到呈无色油状物的化合物(3-苄氧基环丁基)甲醇(7.4g，38.5mmol，95％产率)。

向(3-苄氧基环丁基)甲醇(7.4g，38.49mmol，1.00当量)和3,4-二氢-2H-吡喃(16.19g，192.5mmol，17.6mL，5.00当量)在二氯甲烷(125mL)中的溶液中添加对甲苯磺酸吡啶鎓(967mg，3.85mmol，0.10当量)，并将该混合物在25℃下搅拌12小时。向混合物中添加水(200mL)，并用二氯甲烷(100mL×2)萃取所得混合物。然后将合并的有机层用盐水(150mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过柱色谱(SiO2，石油醚:乙酸乙酯＝1:0至20:1)纯化残余物。得到呈无色油状物的化合物2-[(3-苄氧基环丁基)甲氧基]四氢吡喃(10.20g，36.9mmol，95％产率)。

在氮气下，向2-[(3-苄氧基环丁基)甲氧基]四氢吡喃(10.20g，36.9mmol，1.00当量)在甲醇(100mL)中的溶液中添加10％碳载钯(2g，36.91mmol)。将悬浮液真空脱气并用氢气吹扫数次。将混合物在氢气(15psi)下在25℃下搅拌16小时。将反应过滤并减压浓缩，得到残余物。得到呈无色油状物的化合物3-(四氢吡喃-2-基氧基甲基)环丁醇(6.28g，33.7mmol，91％产率)。

于0℃在氮气下，向吡啶-4-醇(4g，42.06mmol，1当量)、3-(四氢吡喃-2-基氧基甲基)环丁醇(8.62g，46.27mmol，1.1当量)和三苯膦(33.10g，126.18mmol，3当量)在甲苯(40mL)中的溶液中滴加偶氮二羧酸二异丙酯(25.52g，126.18mmol，24.5mL，3当量)的甲苯(20mL)溶液。将反应混合物在100℃下搅拌12小时。将混合物真空浓缩以去除大部分甲苯。向混合物中添加水(150mL)和乙酸乙酯(100mL)，向混合物中添加盐酸溶液(2M)以将pH调节至约3，然后用乙酸乙酯(100mL x 2)萃取所得混合物。向水相添加饱和碳酸氢钠以将pH调节至约8，并用乙酸乙酯(150mL x 5)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型HPLC纯化粗产物(色谱柱：KromasilEternity XT 250*80mm*10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-ACN]；B％：5％-30％，31min)。得到呈浅黄色油状物的((1r,3r)-3-(吡啶-4-基氧基)环丁基)甲醇(4.2g，23.0mmol，54％产率)。

向((1r,3r)-3-(吡啶-4-基氧基)环丁基)甲醇(4.2g，23.44mmol，1当量)在甲苯(40mL)中的溶液中添加苄基溴(4.41g，25.78mmol，3.1mL，1.1当量)。将反应混合物在80℃下搅拌4小时。真空浓缩混合物。将残余物用石油醚和乙酸乙酯(40mL，V/V＝1/1)研磨。得到呈白色固体的1-苄基-4-((1r,3r)-3-(羟甲基)环丁氧基)吡啶-1-鎓(8g，22.8mmol，97％产率)。

在0℃下，向1-苄基-4-((1r,3r)-3-(羟甲基)环丁氧基)吡啶-1-鎓(8g，22.84mmol，1当量)在乙醇(100mL)中的溶液中添加硼氢化钠(1.73g，45.68mmol，2当量)。将反应混合物在20℃下搅拌4小时。向混合物中添加水(100mL)以淬灭反应。用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝50:1至0:1)纯化残余物。得到呈浅黄色油状物的((1r,3r)-3-((1-苄基-1,2,3,6-四氢吡啶-4-基)氧基)环丁基)甲醇(5.2g，19.02mmol，83％产率)。

在氮气下，向[3-[(1-苄基-3,6-二氢-2H-吡啶-4-基)氧基]环丁基]甲醇(5.2g，19.02mmol，1当量)和二碳酸二叔丁酯(8.30g，38.04mmol，8.7mL，2当量)在甲醇(100mL)中的溶液中添加活性炭载10％钯催化剂(0.7g)和碳载20％氢氧化钯(0.7g)。将反应混合物于40℃在氢气(50psi)下搅拌16小时。通过硅藻土垫过滤混合物，并浓缩滤液，得到粗产物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝100∶1至0∶1)纯化残余物。得到呈无色油状物的4-((1r,3r)-3-(羟甲基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(4.5g，15.77mmol，83％产率)。

在0℃下，向4-((1r,3r)-3-(羟甲基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.5g，8.76mmol，1当量)在二氯甲烷(25mL)中的溶液中添加戴斯-马丁过碘烷(4.46g，10.51mmol，1.2当量)。将反应混合物在20℃下搅拌2小时。过滤混合物，并向混合物中添加饱和碳酸氢钠(50mL)。用乙酸乙酯(50mL x3)萃取水相。将合并的有机相用盐水(80mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1∶0至5∶1)纯化残余物。得到呈无色油状物的4-((1r,3r)-3-甲酰基环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.0g，7.06mmol，80％产率)。

在0℃下，向4-((1r,3r)-3-甲酰基环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.0g，7.06mmol，1当量)在甲醇(20mL)中的溶液中添加碳酸钾(1.95g，14.12mmol，2当量)和1-重氮-1-二甲氧基磷酰基-丙烷-2-酮(1.42g，7.41mmol，1.05当量)。将反应混合物在20℃下搅拌12小时。向混合物中添加水(100mL)，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1∶0至20∶1)纯化残余物。得到呈无色油状物的4-((1r,3r)-3-乙炔基环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.3g，4.65mmol，66％产率)。

在-78℃下，向4-((1r,3r)-3-乙炔基环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.7g，6.09mmol，1当量)在四氢呋喃(17mL)中的溶液中添加正丁基锂(2.5M，3.6mL，1.5当量)。将混合物在-78℃下搅拌0.5小时。然后向混合物中添加氯甲酸异丁酯(1.66g，12.17mmol，1.6mL，2当量)，并将反应混合物在-78℃下搅拌0.5小时，并在20℃下搅拌1小时。向混合物中添加饱和氯化铵(80mL)，并用乙酸乙酯(80mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(100mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1∶0至5∶1)纯化残余物。得到呈浅黄色油状物的4-((1r,3r)-3-(3-异丁氧基-3-氧代丙-1-炔-1-基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g，5.27mmol，86％产率)。

在-78℃下，向4-[3-(3-异丁氧基-3-氧代-丙-1-炔基)环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(2g，5.27mmol，1当量)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中滴加二异丁基氢化铝的DCM(1M，6.3mL，1.2当量)溶液。将反应混合物在-78℃下搅拌1小时。向混合物中添加饱和碳酸氢钠(10mL)，并向混合物中添加乙酸乙酯(100mL)。将混合物通过硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取。将合并的有机相用盐水(70mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1∶0至5∶1)纯化残余物。得到呈无色油状物的4-((1r,3r)-3-(3-氧代丙-1-炔-1-基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.2g，3.90mmol，74％产率)。

在0℃下，向4-[3-(3-氧代丙-1-炔基)环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.2g，3.90mmol，1当量)在乙醇(10mL)中的溶液中分三份添加硼氢化钠(177mg，4.68mmol，1.2当量)。将反应混合物在20℃下搅拌1小时。向混合物中添加水(100mL)，并用乙酸乙酯(50mL x3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝50∶1至1∶1)纯化残余物。得到呈无色油状物的4-((1r,3r)-3-(3-羟基丙-1-炔-1-基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.06g，3.43mmol，87％产率)。

在0℃下，向4-((1r,3r)-3-(3-羟基丙-1-炔-1-基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.06g，3.43mmol，1当量)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中添加三苯基膦(1.08g，4.11mmol，1.2当量)和四溴化碳(1.36g，4.11mmol，1.2当量)。将反应混合物在20℃下搅拌3小时。真空浓缩混合物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1∶0至20∶1)纯化残余物。得到呈浅黄色油状物的4-[3-(3-溴丙-1-炔基)环丁氧基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(1g，2.69mmol，78％产率)。

根据以下方案使用上述用于其他实施例的方法，将4-((1r,3r)-3-(3-羟基丙-1-炔-1-基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯转化为最终化合物。

将2-溴-4-氟-吡啶(310mg，1.76mmol，1.2当量)、4-(3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基)-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺(500mg，1.46mmol，1当量)和二异丙基乙胺(2.27g，17.57mmol，3mL，12当量)在二甲亚砜(30mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫三次，然后将混合物于130℃在氮气气氛下搅拌5小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(50mL)萃取三次。将合并的有机层经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物。通过半制备型反相色谱(色谱柱：Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：15％-45％，10min)纯化残余物。得到呈黄色固体的4-[8-(2-溴-4-吡啶基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺(562mg，1.13mmol，77％产率)。

将4-[8-(2-溴-4-吡啶基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]-6-[2-(甲氧基甲氧基)苯基]哒嗪-3-胺(568mg，1.14mmol，1当量)、4-((1r,3r)-3-乙炔基环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(479mg，1.71mmol，1.5当量)、二氯二(三苯基膦)钯(II)(80mg，0.1mmol，0.1当量)、碘化亚铜(22mg，0.1mmol，0.1当量)和N-异丙基丙-2-胺(8.13g，80.38mmol，11.36mL，70.39当量)在二甲基甲酰胺(35mL)中的混合物脱气并用氮气吹扫三次，然后将混合物于75℃在氮气气氛下搅拌12小时。将反应混合物用水(30mL)稀释，并用乙酸乙酯(60mL)萃取三次。将合并的有机层用盐水(50mL)洗涤两次，经无水硫酸钠干燥并浓缩，得到粗产物。通过半制备型反相色谱纯化残余物(色谱柱：Phenomenex luna C18 250*50mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：15％-45％，25min)。得到呈黄色固体的4-((1r,3r)-3-((4-(3-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)乙炔基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(581mg，0.8mmol，73％产率)。

如上文其他实施例所述，将4-((1r,3r)-3-((4-(3-(3-氨基-6-(2-(甲氧基甲氧基)苯基)哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)乙炔基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯转化为最终化合物。

在20℃下，向2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基-丁酸甲酯(500mg，2.51mmol，1当量)和3-溴丙烷-1-醇(523mg，3.77mmol，0.34mL，1.5当量)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中添加碳酸钾(693mg，5.02mmol，2当量)，并将混合物在80℃下搅拌4小时。将反应混合物用水(20mL)淬灭，然后用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过硅胶柱色谱(石油醚/乙酸乙酯＝20:1至4:1)纯化残余物。得到呈无色油状物的2-[3-(3-羟基丙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(370mg，1.44mmol，57％产率)。

在20℃下，向2-[3-(3-羟基丙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(370mg，1.44mmol，1当量)在二氯甲烷(5mL)中的溶液中依次添加三乙胺(291mg，2.88mmol，0.40mL，2当量)和对甲苯磺酰氯(411mg，2.16mmol，1.5当量)，然后在20℃下搅拌16h。浓缩反应混合物，得到残余物。通过制备型-TLC(石油醚/乙酸乙酯＝3/1)纯化残余物。得到呈无色油状物的3-甲基-2-[3-[3-(对甲苯磺酰氧基)丙氧基]异噁唑-5-基]丁酸甲酯(438mg，1.06mmol，74％产率)。

在20℃下，向3-甲基-2-[3-[3-(对甲苯磺酰氧基)丙氧基]异噁唑-5-基]丁酸甲酯(250mg，0.61mmol，1当量)和2-[6-氨基-5-[8-[2-[3-(4-哌啶基氧基)环丁氧基]-4-吡啶基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-基]哒嗪-3-基]苯酚(386mg，0.61mmol，1当量，2三氟乙酸盐)在二甲亚砜(3mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(314mg，2.43mmol，0.42mL，4当量)和碘化钾(10mg，0.06mmol，0.1当量)，并将混合物在80℃下搅拌12小时。将反应混合物用水(20mL)稀释，然后用乙酸乙酯(10mL x 3)萃取。将合并的有机层用盐水(10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并减压浓缩，得到残余物。通过硅胶柱色谱(二氯甲烷:甲醇＝10/1)纯化残余物。得到呈黄色油状物的2-[3-[3-[4-[3-[[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]氧基]环丁氧基]-1-哌啶基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(90mg，0.11mmol，17％产率)。

根据以下方案使用上述用于其他实施例的方法，将2-[3-[3-[4-[3-[[4-[3-[3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基]-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基]-2-吡啶基]氧基]环丁氧基]-1-哌啶基]丙氧基]异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯转化为最终化合物。

向2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(500mg，1.59mmol，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(10mL)中的溶液中添加N-氯代琥珀酰亚胺(423mg，3.17mmol，2当量)。将反应混合物在70℃下搅拌3小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(60mL x 3)萃取。用盐水(20mL x 2)洗涤合并的有机层。将有机层经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩，得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物(色谱柱：PhenomenexSynergi C18 150*25*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：65％-95％，9min)，得到呈无色油状物的2-[4-氯-3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(337mg，0.965mmol，61％产率)。

向2-[4-氯-3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸甲酯(377mg，1.08mmol，1当量)在甲醇(2mL)和水(1mL)中的溶液中添加氢氧化锂一水合物(181mg，4.31mmol，4当量)。将反应混合物在20℃下搅拌2小时。将该混合物冷却至0℃，并用1M氯化氢将pH调节至6，然后将该溶液真空浓缩，得到残余物。通过制备型HPLC纯化残余物(色谱柱：Phenomenex luna C18 150*25 10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：54％-74％，7.8min)，得到产物。得到呈白色固体的2-[4-氯-3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸(229mg，0.68mmol，63％产率)。

使用上述用于其他实施例的方法，将2-[4-氯-3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物222。

在氮气下，向5-溴-2-甲基-苄氰(5g，25.50mmol，1当量)在四氯化碳(50mL)中的溶液中添加N-溴代琥珀酰亚胺(4.77g，26.78mmol，1.05当量)和2,2-偶氮双(2-甲基丙氰)(419mg，2.55mmol，0.1当量)。将反应混合物在80℃下搅拌16小时。过滤该混合物，并将滤液真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:0至10:1)纯化残余物。得到呈浅黄色固体的5-溴-2-(溴甲基)苄氰(4.5g，16.37mmol，64％产率)。

向5-溴-2-(溴甲基)苄氰(4.4g，16.00mmol，1当量)和N-叔丁氧基羰基氨基甲酸叔丁酯(4.17g，19.20mmol，1.2当量)在乙腈中的溶液(50mL)中添加碳酸钾(4.42g，32.01mmol，2当量)。将反应混合物在50℃下搅拌12小时。LCMS显示大部分5-溴-2-(溴甲基)苄腈被消耗。向混合物中添加水(100mL)，并用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝100∶1至5∶1)纯化残余物。得到呈无色油状物的N-[(4-溴-2-氰基-苯基)甲基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(6.4g，15.56mmol，97％产率)。

在氮气下，向N-[(4-溴-2-氰基-苯基)甲基]-N-叔丁氧基羰基-氨基甲酸叔丁酯(2g，4.86mmol，1当量)、4,4,5,5-四甲基-2-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1,3,2-二氧杂戊硼烷(1.36g，5.35mmol，1.1当量)在二噁烷(20mL)中的溶液中添加乙酸钾(1.19g，12.16mmol，2.5当量)和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(II)(356mg，0.49mmol，0.1当量)。将反应混合物在90℃下搅拌12小时。通过硅藻土垫过滤混合物，并将滤液浓缩，得到呈黑色油状物的N-叔丁氧基羰基-N-[[2-氰基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(2.2g，粗品)。

在氮气下，向N-叔丁氧基羰基-N-[[2-氰基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(2.2g，4.80mmol，1当量)、5-溴-4-甲基-噻唑(940mg，5.28mmol，1.1当量)在二噁烷(20mL)和水(4mL)中的溶液中添加碳酸钾(1.66g，12.00mmol，2.5当量)和(1,1'-双(二苯基膦基)二茂铁)二氯化钯(II)(351mg，0.48mmol，0.1当量)。将反应混合物在100℃下搅拌12小时。向混合物中添加水(100mL)，用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(50mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝100:1至1:1)纯化残余物。得到呈浅黄色固体的N-叔丁氧基羰基-N-[[2-氰基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(1.7g，3.96mmol，82％产率)。

如上文其他实施例所述，将N-叔丁氧基羰基-N-[[2-氰基-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物224。

于15℃在氮气下，向3-氧代氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(25g，122mmol，1当量)和2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(14.8g，122mmol，1当量)在THF(250mL)中的混合物中一次性添加异丙醇钛(IV)(38.9g，171mmol，35.4mL，1.4当量)。将该混合物在60℃下搅拌2小时。将混合物倒入乙酸乙酯和冰水(1000mL)中，搅拌20分钟，过滤。用乙酸乙酯(500mL×3)萃取水相。将合并的有机相用盐水(200mL×3)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝30/1至8/1)纯化残余物，得到呈黄色固体的3-叔丁基亚磺酰基亚氨基氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(39g，粗品)。

于-70℃在氮气下，向1-溴-4-碘-苯(35.78g，126mmol，1当量)在THF(350mL)中的溶液中滴加正丁基锂(2.5M，50.6mL，1当量)，将混合物在该温度下搅拌30分钟。然后在氮气下滴加3-叔丁基亚磺酰基亚氨基氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(39g，126.46mmol，1当量)在THF(70mL)中的溶液。将反应混合物在-70℃下搅拌1小时。用冰水(200mL)淬灭该混合物。用乙酸乙酯(500mL x 3)萃取水相。将合并的有机相用盐水(200mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝3/1至1/1)纯化残余物。通过半制备型反相HPLC纯化粗产物(色谱柱：Phenomenex luna c18 250mm*100mm*10um；流动相：[水(0.1％TFA)-ACN]；B％：40ACN％-70ACN％，45min)，得到呈黄色油状物的3-(4-溴苯基)-3-(叔丁基亚磺酰基氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(4.62g，9.93mmol，7％产率)。另外，收集到4.16g呈黄色油状物的稍微不纯的产物(纯度86％)。

于20℃在氮气下，向3-(4-溴苯基)-3-(叔丁基亚磺酰基氨基)氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(4.62g，9.93mmol，1当量)、乙酸钾(1.95g，19.85mmol，2当量)和4-甲基噻唑(1.97g，19.85mmol，1.8mL，2当量)在二甲基乙酰胺(60mL)中的溶液中一次性添加乙酸钯(II)(223mg，0.99mmol，0.1当量)。将该混合物在100℃下搅拌16小时。将混合物冷却至20℃，倒入冰水(w/w＝1/1，100mL)中，并搅拌5分钟。用乙酸乙酯(50mL×4)萃取水相。将合并的有机相用盐水(30mL x 2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过半制备型反相HPLC纯化残余物(甲酸条件；色谱柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*50mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：45ACN％-75ACN％，29min)，得到呈黄色固体的3-(叔丁基亚磺酰基氨基)-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(2.3g，4.76mmol，48％产率)。

将3-(叔丁基亚磺酰基氨基)-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯(3.4g，7.03mmol，1当量)和盐酸/甲醇(4M，30mL，17.07当量)在二氯甲烷(5mL)中的溶液在25℃下搅拌2h。得到呈白色固体的化合物3-氨基-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯盐酸盐(3g，粗品)。

于15℃在氮气下，向3-氨基-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-1-羧酸苄酯盐酸盐(3g，7.21mmol，1当量)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N',N'-四甲基脲鎓六氟磷酸酯(4.11g，10.82mmol，1.5当量)和(2S,4R)-1-叔丁氧基羰基-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸(1.67g，7.21mmol，1当量)在N,N-二甲基甲酰胺(40mL)中的混合物中一次性添加三乙胺(2.19g，21.64mmol，3.0mL，3当量)。将该混合物在15℃下搅拌1小时。将混合物倒入冰水(w/w＝1/1，100mL)中，并搅拌5分钟。用乙酸乙酯(60mL×3)萃取水相。将合并的有机相用盐水(30mL×2)洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过半制备型反相HPLC(色谱柱：Phenomenex Synergi Max-RP 250*80mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：30％60％，30min)纯化残余物。得到呈白色固体的化合物(2S,4R)-2-[[1-苄氧基羰基-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酰基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(3.32g，5.60mmol，77％产率)。

于0℃在氮气下，向(2S,4R)-2-[[1-苄氧基羰基-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酰基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(1.1g，1.86mmol，1当量)和三乙胺(666mg，6.59mmol，0.9mL，3.55当量)在二氯甲烷(100mL)中的混合物中一次性添加氯化钯(ii)(329.10mg，1.86mmol，1当量)。添加三乙基硅烷(2.81g，24.13mmol，3.8mL，13当量)，并将反应混合物在20℃下搅拌2小时。向反应中添加三氟乙酸(4.23g，37.14mmol，2.75mL，20.01当量)，并将混合物在20℃下再搅拌1小时。将混合物过滤并在40℃下减压浓缩。通过半制备型反相HPLC纯化残余物(甲酸条件；色谱柱：Kromasil 250*50mm*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：26ACN％-56ACN％，28min)。得到呈白色固体的(2S,4R)-4-羟基-2-[[3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(336mg，0.73mmol，39％产率)。

将(2S,4R)-4-羟基-2-[[3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(390mg，0.85mmol，1当量)和甲醛(138mg，1.70mmol，0.1mL，37％纯度，2当量)在二氯甲烷(15mL)中的混合物在20℃下搅拌30分钟。添加乙酸(51mg，0.85mmol，1当量)和三乙酰氧基硼氢化钠(901mg，4.25mmol，5当量)，并将混合物在20℃下搅拌5小时。将混合物在40℃下减压浓缩。通过半制备型反相HPLC纯化残余物(甲酸条件；色谱柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：0％-30％，10min)。得到呈黄色油状物的(2S,4R)-4-羟基-2-[[1-甲基-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.63mmol，74％产率)。

使用类似于上述实施例的方法，将(2S,4R)-4-羟基-2-[[1-甲基-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物228。

根据以下方案使用类似于针对示例性化合物76和70所述的方法制备。

于25℃在氮气下，向(2S,4R)-4-羟基-2-[[3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酰基]吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(300mg，0.65mmol，1当量)和三乙胺(198mg，1.96mmol，3当量)在二氯甲烷(60mL)中的混合物中一次性添加乙酸酐(100.18mg，0.98mmol，91.9uL，1.5当量)。将该混合物在25℃下搅拌16小时。将混合物在45℃下减压浓缩。通过半制备型反相HPLC纯化残余物(碱性条件；色谱柱：Waters Xbridge 150*25 5um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-ACN]；B％：10％-40％，10min)。得到呈黄色油状物的粗产物(2S,4R)-2-[[1-乙酰基-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酰基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(232mg，0.46mmol，71％产率)。

使用上述实施例的方法，将(2S,4R)-2-[[1-乙酰基-3-[4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基]氮杂环丁烷-3-基]氨基甲酰基]-4-羟基-吡咯烷-1-羧酸叔丁酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物235。

根据以下方案使用类似于针对示例性化合物202所述的方法制备(S)-(1-(2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。

类似于其他实施例所述的方法，将(S)-(1-(2-氟-4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酸叔丁酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物239。

在-78℃下，向三氟乙酸乙酯(21.31g，150mmol，20.7mL，1.5当量)在四氢呋喃(300mL)中的溶液中添加双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂(1M，120mL，1.2当量)。将混合物在-78℃下搅拌1小时。然后在-78℃下将1-(6-溴-3-吡啶基)乙酮(20g，100mmol，1当量)的四氢呋喃(20mL)溶液滴加到该混合物中。将反应混合物在20℃下搅拌2小时。添加饱和氯化铵(200mL)以淬灭反应，向混合物中添加水(500mL)。用乙酸乙酯(300mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(500mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。将残余物用石油醚和乙酸乙酯(255mL，石油醚:乙酸乙酯＝50∶1)研磨，过滤，得到浅黄色固体。真空浓缩滤液。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝10:1至0:1)纯化残余物。得到呈黄色固体的1-(6-溴-3-吡啶基)-4,4,4-三氟-丁烷-1,3-二酮(28g，94.6mmol，94％产率)。

向1-(6-溴-3-吡啶基)-4,4,4-三氟-丁烷-1,3-二酮(15g，50.67mmol，1当量)在乙腈(150mL)中的溶液中添加1-(氯甲基)-4-氟-1,4-二氮杂双环[2.2.2]辛烷；二四氟硼酸酯(44.87g，126.7mmol，2.5当量)。将反应混合物在90℃下搅拌3小时。然后向混合物中添加水(1.83g，101.3mmol，1.8mL，2当量)，并将反应混合物在90℃下搅拌15分钟。然后在20℃下向混合物中添加三乙胺(25.64g，253.3mmol，35.2mL，5当量)，并将反应混合物在20℃下搅拌16小时。向混合物中添加水(300mL)。用乙酸乙酯(300mL x3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(500mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(二氯甲烷:甲醇＝1:0至10:1)纯化残余物。得到呈棕色油状物的1-(6-溴-3-吡啶基)-2,2-二氟-乙酮(7.9g，粗品)。

在0℃下，向1-(6-溴-3-吡啶基)-2,2-二氟-乙酮(7.9g，33.47mmol，1当量)在乙醇(80mL)中的溶液中分三份添加硼氢化钠(1.27g，33.47mmol，1当量)。将反应混合物在0℃下搅拌1小时。向混合物中添加水(200mL)，并用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(150mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝100:1至1:1)纯化残余物。得到呈浅黄色油状物的1-(6-溴-3-吡啶基)-2,2-二氟-乙醇(5.3g，21.20mmol，63％产率)。

于0℃在氮气下，向1-(6-溴-3-吡啶基)-2,2-二氟-乙醇(3.3g，13.86mmol，1当量)和异吲哚啉-1,3-二酮(2.45g，16.64mmol，1.2当量)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中添加三苯基膦(4.36g，16.64mmol，1.2当量)，然后滴加偶氮二羧酸二异丙酯(3.36g，16.64mmol，3.2mL，1.2当量)的四氢呋喃(5mL)溶液。将反应混合物在20℃下搅拌12小时。真空浓缩混合物。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝1:0至5:1)纯化残余物。得到呈浅黄色固体的2-[1-(6-溴-3-吡啶基)-2,2-二氟-乙基]异吲哚啉-1,3-二酮(2.8g，6.89mmol，49％产率)。

向2-[1-(6-溴-3-吡啶基)-2,2-二氟-乙基]异吲哚啉-1,3-二酮(2g，5.45mmol，1当量)在乙醇(20mL)中的溶液中添加水合肼(1.36g，27.24mmol，1.3mL，5当量)。将反应混合物在80℃下搅拌2小时。向混合物中添加乙醇(30mL)，过滤混合物，并真空浓缩滤液。将残余物直接用于下一步骤。得到呈浅黄色固体的1-(6-溴-3-吡啶基)-2,2-二氟-乙胺(1.2g，粗品)。

向1-(6-溴-3-吡啶基)-2,2-二氟-乙胺(1.2g，5.06mmol，1当量)和碳酸氢钠(850mg，10.12mmol，2当量)在四氢呋喃(5mL)和水(5mL)中的溶液中添加二碳酸二叔丁酯(2.21g，10.12mmol，2.3mL，2当量)。将反应混合物在20℃下搅拌2小时。向混合物中添加水(100mL)，并用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(60mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)纯化残余物。通过制备型高性能液体纯化粗产物(色谱柱：Phenomenex Gemini C18 250*50mm*10um；流动相：[水(0.05％氢氧化氨v/v)-ACN]；B％：40％-65％，22min)。得到呈浅黄色固体的N-[1-(6-溴-3-吡啶基)-2,2-二氟-乙基]氨基甲酸叔丁酯(1.4g，4.15mmol，82％产率)。

在氮气下，向N-[1-(6-溴-3-吡啶基)-2,2-二氟-乙基]氨基甲酸叔丁酯(2g，5.93mmol，1当量)、4-甲基-5-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)噻唑(3.34g，14.83mmol，2.5当量)在二噁烷(50mL)和水(10mL)中的溶液中添加碳酸钾(2.05g，14.83mmol，2.5当量)和(1,1'-双(二苯基phosphino)二茂铁)二氯化钯(II)(434mg，0.59mmol，0.1当量)。将反应混合物在100℃下搅拌12小时。向混合物中添加水(150mL)，并用乙酸乙酯(50mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(80mL)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过硅胶色谱(石油醚:乙酸乙酯＝100:1至1:1)纯化残余物。然后通过制备型HPLC再次纯化残余物(色谱柱：Phenomenex Synergi C18 150*30mm*4um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：35％-65％，10min)。得到呈浅黄色固体的N-[2,2-二氟-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)-3-吡啶基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(480mg，1.33mmol，22％产率)。

通过制备型-SFC纯化N-[2,2-二氟-1-[6-(4-甲基噻唑-5-基)-3-吡啶基]乙基]氨基甲酸叔丁酯(480mg，1.35mmol，1当量)(SFC色谱柱：DAICEL CHIRALPAK AY 250×50mm，I.D.，10um；流动相：乙醇的CO

在0℃下，向2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酸(400mg，1.33mmol，1当量)和(2S,4R)-4-羟基吡咯烷-2-羧酸甲酯(241mg，1.33mmol，1当量，盐酸盐)在N,N-二甲基甲酰胺(5mL)中的溶液中添加N,N-二异丙基乙胺(686mg，5.31mmol，0.9mL，4当量)和O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N’,N’-四甲基脲鎓六氟磷酸酯(605mg，1.59mmol，1.2当量)。将反应混合物在20℃下搅拌1小时。向混合物中添加水(50mL)，并用乙酸乙酯(20mL x 3)萃取所得混合物。将合并的有机相用盐水(30mL x 2)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤并真空浓缩。通过制备型HPLC(色谱柱：Phenomenex Synergi C18 150*25*10um；流动相：[水(0.225％FA)-ACN]；B％：36％-66％，10min)纯化残余物。得到呈无色油状物的(2S,4R)-1-[2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸甲酯(450mg，1.05mmol，78％产率)。

通过制备SFC纯化混合物(SFC色谱柱：DAICEL CHIRALPAK IC250×30mm，内径，10um；流动相：甲醇(0.1％NH

根据以下方案使用类似于上述用于其他实施例的方法，将(2S,4R)-1-[(2R)-2-[3-(2,2-二乙氧基乙氧基)异噁唑-5-基]-3-甲基-丁酰基]-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸甲酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物243。

在50-mL圆底烧瓶中置入(2R)-2-(4-溴苯基)-2-[[(叔丁氧基)羰基]氨基]乙酸(1g，3.029mmol，1当量)的DMF(15mL)溶液，向其中依次添加二异丙基乙胺(1.57g，12.115mmol，4当量)、N-甲基环丁胺盐酸盐(368mg，3.03mmol，1当量)和BOP(1.61g，3.63mmol，1.2当量)。将所得溶液在室温下搅拌2小时。然后，通过添加水(10mL)来淬灭该反应。用乙酸乙酯(4x30mL)萃取所得混合物，并将合并的有机层用盐水(2x10mL)洗涤，经无水硫酸钠干燥并浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1/1)洗脱的硅胶柱上。得到1.1g(91％)呈黄色固体的N-[(R)-(4-溴苯基)[环丁基(甲基)氨基甲酰基]甲基]氨基甲酸叔丁酯。

在氮气气氛下，在100-mL圆底烧瓶中置入N-[(R)-(4-溴苯基)[环丁基(甲基)氨基甲酰基]甲基]氨基甲酸叔丁酯(1g，2.52mmol，1当量)、K

使用类似于上述其他实施例的方法，将N-[(R)-[环丁基(甲基)氨基甲酰基][4-(4-甲基-1,3-噻唑-5-基)苯基]甲基]氨基甲酸叔丁酯转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物245。

在250-mL圆底烧瓶中置入4-(三氟甲基)苯甲醛(3.0g，17.2mmol，1.0当量)、(S)-2-甲基丙烷-2-亚磺酰胺(4.2g，0.035mmol，2.0当量)和异丙氧基钛(14.9g，0.052mmol，3.0当量)在THF(50mL)中的溶液。将所得溶液在80℃下在油浴中搅拌16小时。然后通过添加200mL水淬灭反应，并用乙酸乙酯(100mL x 3)萃取混合物。将合并的有机相用盐水洗涤，经硫酸钠干燥，并减压浓缩。将残余物施加到使用乙酸乙酯/石油醚(1:1)洗脱的硅胶柱上。得到3.1g(65％)呈黄色油状物的(S)-2-甲基-N-[[4-(三氟甲基)苯基]亚甲基]丙烷-2-亚磺酰胺。

于-48℃在氮气气氛下，在20分钟内向(S)-2-甲基-N-[[4-(三氟甲基)苯基]亚甲基]丙烷-2-亚磺酰胺(3.1g，11.2mmol，1.0当量)在DCM(20mL)中的溶液中滴加甲基氯化镁溶液(3.0M的乙醚溶液，5mL)。然后将所得混合物在室温下搅拌2小时。然后通过添加50mL饱和NH

在100mL圆底烧瓶中置入(S)-2-甲基-N-[(1S)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙基]丙烷-2-亚磺酰胺(1.8g，6.2mmol，1.0当量)的甲醇(10mL)溶液。然后添加氯化氢水溶液(37％，5mL)。将所得溶液在室温下搅拌2小时，然后减压浓缩。得到970mg(82％)呈白色固体的(1S)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙-1-胺。

使用类似于上述其他实施例的方法，将(1S)-1-[4-(三氟甲基)苯基]乙-1-胺转化为最终化合物。

使用类似的方法制备示例性化合物247。

如以上方案所示，在酸性条件下使4-((1R,3R)-3-((4-溴吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯脱保护，并使所得游离环胺与活化的异噁唑衍生物反应，形成3-甲基-2-(3-(((全氟丁基)磺酰基)氧基)异噁唑-5-基)丁酸甲酯作为偶联产物。产物中的吡啶基溴化物片段与3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯进行钯催化反应，然后使叔丁氧羰基(Boc)保护基裂解，得到游离胺，其在胺的存在下在DMSO中在加热下与4-溴-6-氯哒嗪-3-胺进行亲核偶联反应。哒嗪溴化物与(2-羟基苯基)硼酸的Suzuki偶联反应完成PTM结合部分的组装。酯水解，然后与(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺缩合，得到所需的最终产物，其为非对映异构体的混合物，通过超临界流体色谱法(SFC)分离。

如以上方案中所示，2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯与(1R,3R)-3-(苄氧基)环丁醇之间进行Mitsunobu反应，然后苄氧基裂解，得到2-(3-((1S,3S)-3-羟基环丁氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯。用三氟甲磺酸酐活化羟基，然后用包含W

如以上方案所示，将4-溴-6-氯哒嗪-3-胺转化为4-乙烯基衍生物，使其与4-((1R,3R)-3-((4-溴吡啶-2-基)氧基)环丁氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯进行Heck偶联反应，生成偶联产物。然后在Suzuki条件下，使产物中的6-氯哒嗪部分与(2-羟苯基)硼酸反应，组装W

如以上方案所示，将4-(2-羟乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯中的羟基基团用对甲苯磺酰氯活化，并将所得甲苯磺酸酯用2-(3-羟基异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯进行亲核置换。使产物中的Boc-基团裂解，并使游离环胺与3-(羟甲基)环丁酮和三乙酰氧基硼氢化钠反应，形成2-(3-(2-(1-(3-(羟甲基)环丁基)哌啶-4-基)乙氧基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酸甲酯。将羟基进行戴斯-马丁氧化，然后用螺-胺将所得醛还原胺化，得到偶联产物，该偶联产物将PTM结合部分和连接基团L结合。酯水解，然后与(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺缩合，得到所需的最终产物。

如以上方案中所示，第一偶联片段的组装以4-乙酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯开始，其被还原为醇并转化为甲苯磺酸酯。用4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑置换甲苯磺酰基基团，并在Suzuki条件下将产物与4-溴-6-氯哒嗪-3-胺偶联，得到4-(1-(4-(3-氨基-6-(2-甲氧基甲氧基)苯基)哒嗪-4-基)-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-羧酸叔丁酯的外消旋混合物，其通过使用手性超临界流体色谱法(SFC)分离。随后进行Boc脱保护，得到对映体纯状态的所需第一偶联片段。

第二偶联片段的形成以3-亚甲基环丁烷腈开始，后者水解为羧酸并被保护为苄基酯。内型双键进行硼氢化反应，然后氧化，得到醇的非对映体混合物，其通过使用超临界流体色谱法(SFC)分离。用戴斯-马丁过碘烷氧化各个醇，得到所需的异构醛。

用硼氢化钠还原胺化第一偶联片段和第二偶联片段，然后碱水解，得到(1R,3S)-3-((4-((S)-1-(4-(3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基)-1H-吡唑-1-基)乙基)哌啶-1-基)甲基)环丁烷羧酸，其与(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-(2-(哌啶-4-基)乙氧基)异噁唑-5-基)丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺进行缩合，得到所需产物。通过使用具有适当立体化学的试剂和中间体，该方法可方便地用于合成所需产物的所有对映体纯的异构体。

如以上方案所示，将4-甲酰基哌啶-1-甲酸叔丁酯在Boc脱保护后用(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-(哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺和氰基硼氢化钠进行还原胺化，得到(2S,4R)-4-羟基-1-((S)-3-甲基-2-(3-(4-(哌啶-4-基甲基)哌嗪-1-基)异噁唑-5-基)丁酰基)-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺。随后在类似条件下用(1R,3R)-3-((4-(3-(3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基)-3，8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)环丁烷甲醛还原胺化所得化合物，得到所需的最终产物。

如以上方案所示，4-羟基吡啶和4-羟基哌啶-1-羧酸叔丁酯之间的Mitsunobu反应得到4-(吡啶-4-基氧基)哌啶-1-羧酸叔丁酯，通过用苄基溴将吡啶氮烷基化将其转化为盐。随后通过两步方法还原吡啶环以形成双哌啶衍生物，其与3-甲基-2-(3-(((全氟丁基)磺酰基)氧基)异噁唑-5-基)丁酸甲酯在杂芳族亲核取代条件下反应，形成偶联产物。酯水解，然后将所得酸与(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺缩合，得到非对映体最终产物，其通过超临界流体色谱法(SFC)分离。

如以上方案所示，PTM结合部分的合成以3-((4-甲氧基苄基)氧基)丙-1-醇开始，其用氢化钠处理以打开(S)-2-甲基环氧乙烷。将所得醇溴化，然后用衍生自2-(3-甲基异噁唑-5-基)乙酸甲酯的烯醇化物进行溴化物置换，得到(3R)-4-(3-羟基丙氧基)-3-甲基-2-(3-甲基异噁唑-5-基)丁酸甲酯。产物与4-溴吡啶-2-醇进行Mitsunobu反应，然后吡啶基溴化物部分与单-Boc-保护的3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷进行钯催化偶联，得到8-(2-(3-((2R)-4-甲氧基-2-甲基-3-(3-甲基异噁唑-5-基)-4-氧代丁氧基)丙氧基)吡啶-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-3-羧酸叔丁酯。随后Boc-基团裂解提供了游离胺，其通过在胺(DIEA)的存在下在质子惰性双极性溶剂(DMSO)中加热，与4-溴-6-氯哒嗪-3-胺进行亲核偶联反应。哒嗪溴化物与(2-羟基苯基)硼酸的Suzuki偶联反应完成PTM结合部分的组装。酯水解，然后与(2S,4R)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺缩合，得到所需的最终产物，其为非对映异构体的混合物，通过超临界流体色谱法(SFC)分离。

如以上方案所示，所需产物通过在氰基硼氢化钠的存在下用2-(6-氨基-5-(1-((R)-4-((1r,3R)-3-(哌啶-4-基氧基)环丁基)丁-3-炔-2-基)-1H-吡唑-4-基)哒嗪-3-基)苯酚还原胺化(2S,4R)-1-((R)-2-(3-(4-甲酰基哌啶-1-基)异噁唑-5-基)-3-甲基丁酰基)-4-羟基-N-((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)吡咯烷-2-甲酰胺而获得。通过使用具有适当立体化学的偶联对应物，该方法可方便地用于合成所需产物的所有对映体纯的异构体。

如以上方案所示，将4-(5-(1-((2S,4R)-4-羟基-2-(((S)-1-(4-(4-甲基噻唑-5-基)苯基)乙基)氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3-甲基-1-氧代丁-2-基)异噁唑-3-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯作为非对映体混合物分离为单独的异构体。然后，这些异构体中的每一种与(1R,3R)-3-((4-(3-(3-氨基-6-(2-羟苯基)哒嗪-4-基)-3,8-二氮杂双环[3.2.1]辛烷-8-基)吡啶-2-基)氧基)环丁烷甲醛反应，得到对映体纯形式的所需最终产物。通过使用具有适当立体化学的偶联对应物，该方法可方便地用于合成所需产物的所有对映体纯的异构体。

本说明书还提供了通过细胞控制蛋白质水平的方法。这基于使用如本文所述的化合物，已知所述化合物与特定靶蛋白相互作用，使得体内靶蛋白的降解将导致控制生物系统中蛋白质的量，优选地实现特定目标蛋白质治疗有益效果。

以下实施例用于帮助描述本公开，但不应视为以任何方式限制本公开。

本公开涵盖以下具体实施方案。如所指出的那些，以下这些实施方案可包括前述实施方案中所述的所有特征。当适用时，下述实施方案还可以包括在任何前述实施方案中包含或交替叙述的特征(例如，第八实施方案可以包括如所述的第一实施方案中所述的特征，和/或第二实施方案到第七实施方案中任一的特征)。

在某些实施方案中，本说明书提供了下述示例性SMARCA2(即，BRAHMA或BRM)PROTAC分子(表1A、表1B、表1C、表2A、表2B和表2C中的化合物1-535)，包括其盐、前药、多晶型物、类似物、衍生物和氘代形式。在某些实施方案中，本说明书提供了具有以下化学结构的双官能化合物：PTM-L-ULM或其药学上可接受的盐、对映体、立体异构体、溶剂化物、多晶型物或前药，其中：ULM是结合希佩尔-林道E3泛素连接酶的小分子E3泛素连接酶结合部分；L是连接ULM和PTM的键或化学连接部分；PTM是包含具有由式I、II、III、IVa或IVb表示的化学结构的SMARCA2蛋白质靶向部分的小分子：

其中：

在本文所述的实施方案的任何方面，PTM由式I表示：

或是其药学上可接受的盐，其中：

在本文所述的任何方面或实施方案中，PTM由下式表示：

或是其药学上可接受的盐，其中：

并且

在本文所述的任何方面或实施方案中，PTM由下式表示：

或是其药学上可接受的盐，其中：

在本文所述的任何方面或实施方案中，PTM由下式表示：

或是其药学上可接受的盐。

在本文所述的任何方面或实施方案中，PTM由式III表示：

或是其药学上可接受的盐，其中：

在本文所述的任何方面或实施方案中，PTM由式IVa或IVb表示：

或是其药学上可接受的盐，其中：

在本文所述的任何方面或实施方案中，PTM选自：

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM是由以下表示的化学结构：

其中：

每个R

o是0、1、2、3或4；

每个R

p是0、1、2、3或4，并且其中虚线指示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或者将至少一个PTM或ULM'或两者与ULM偶联的化学接头部分的附接位点。

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM具有选自以下的化学结构：

其中：

X是C、CH

虚线指示至少一个PTM、另一个ULM(ULM’)或者将至少一个PTM或ULM’或两者与所述ULM偶联的化学接头部分的附接位点。

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM包含根据以下化学结构的基团：

或其药学上可接受的盐，其中：

ULM-g的R

ULM-g的每个R″独立地是H或可任选被一个或两个羟基或至多三个卤素基团(优选氟)取代的C

ULM-g的R

ULM-g的X和X’各自独立地是C＝O、C＝S、-S(O)、S(O)

ULM-g的R

ULM-g的V是O、S或NR

ULM-g的每个R

ULM-g的X

ULM-g的每个m独立地是0、1、2、3、4、5、6；

ULM-g的每个m'独立地是0或1；

ULM-g的每个n独立地是0、1、2、3、4、5、6；

ULM-g的每个n'独立地是0或1；

ULM-g的每个u独立地是0或1；

ULM-g的每个v独立地是0或1；

ULM-g的每个w独立地是0或1；并且

当PTM不是ULM’时，ULM-g的R

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM具有式：

或是其药学上可接受的盐，其中：

每个R

o是0、1或2。

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM具有式：

其中：

q是1、2、3或4；

在本文所述的任何方面或实施方案中，R

或是其药学上可接受的盐，其中ULM-q和ULM-r的R

在本文所述的任何方面或实施方案中，R

其中q是1或2。

在本文所述的任何方面或实施方案中，R

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM根据下式：

其中：

X是CH或N；

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM根据下式：

或是其药学上可接受的盐，其中R

在本文所述的任何方面或实施方案中，ULM是如表1A、表1B、表1C、表2A、表2B或表2C中提供的ULM。

在本文所述的任何方面或实施方案中，所述化合物包括如本文所述的接头(L)。

在本文所述的任何方面或实施方案中，接头(L)是包含1至10个乙二醇单元的任选被芳基或苯基取代的聚乙烯氧基基团。

在本文所述的任何方面或实施方案中，所述化合物选自表1A、表1B、表1C、表2A、表2B和表2C的化合物(例如，选自化合物1-535)。

在本文所述的任何方面或实施方案中，所述化合物的D

在另一方面，本说明书提供了一种组合物，其包含有效量的如本文所述的双官能化合物和药学上可接受的载体。

在本文所述的任何方面或实施方案中，如本文所述的组合物还包含权利要求1-32中任一项的另外的生物活性剂或另一种双官能化合物中的至少一种。

在本文所述的任何方面或实施方案中，所述另外的生物活性剂是抗癌剂。

在本文所述的任何方面或实施方案中，如本文所述的组合物包含药学上可接受的载体和有效量的如本文所述的至少一种化合物，该组合物用于治疗受试者的疾病或病症，方法包括将该组合物施用于有此需要的受试者，其中所述化合物能够有效治疗或改善所述疾病或病症的至少一种症状。

在本文所述的任何方面或实施方案中，所述疾病或病症与SMARCA1、BRAHMA或BRM的累积和聚集有关。在本文所述的任何方面或实施方案中，所述疾病或病症是癌症。在本文所述的任何方面或实施方案中，所述癌症是SWI/SNF相关癌症或具有SMARCA4突变的癌症(例如，肺癌或非小细胞肺癌)。在本文所述的任何方面或实施方案中，所述癌症是SMARCA4缺陷性癌症或SMARCA4表达相对于正常SMARCA4表达降低(例如，相对于具有野生型SMARCA4的类似位置的非癌细胞中的非突变SMARCA4或SMARCA4的表达)的癌症，诸如肺癌或非小细胞肺癌。

测定和降解数据

SW1573细胞中BRM降解的Western印记筛选

为了评估BRM降解(D

为了裂解，将所粘附的细胞用100L DPBS洗涤一次。将细胞在冰上40L 1X RIPA+HALT蛋白酶抑制剂中裂解10分钟，然后冷冻直至在-80C使用。解冻的裂解物通过在1.2m滤板中过滤来清洁，或者在4C下以2300g旋转清洁30分钟。

对于印迹，对于每个Western样品，将30L裂解物添加到10L4X LDS样品缓冲液中，然后在热循环仪中于95C变性5分钟并置于冰上。将样品上样于4％-15％Tris/甘氨酸凝胶上，并在1X Tris/甘氨酸缓冲液中以250恒压运行25分钟，其中对于每个印迹，上样4L梯和12L每个样品。使用Turbo/midi默认程序，使用BioRad Turbo干转移单元将蛋白质从凝胶转移到NC。将所有印迹用ddH2O冲洗，并在室温下在含5％BSA的TBST(0.1％)中在振荡器上封闭1小时。在4C下，在振荡器(对于BRM(Cell Signaling Tech，目录号11966)为1:1000，并且对于α-微管蛋白(Cell Signaling Tech，目录号3873)(一种对照蛋白)为1:2000)上，将印迹暴露于5％BSA的TBST(0.1％)溶液中的一抗过夜。在室温下在振荡器上用TBST(0.1％)将印迹洗涤三次，每次5分钟。添加第二抗体，并在室温下在振荡器上将印迹与5％BSA的TBST(0.1％)溶液中的1:18,000抗兔-HRP和/或抗小鼠-HRP温育1小时。在室温下在振荡器上将印迹用TBST(0.1％)洗涤三次，每次5分钟。使用Femto Maximum Sensitivity底物将Signal显影4分钟，并在ChemiDoc上读取印迹。

SW1573细胞中BRM降解的细胞内Western筛选

为了评估BRM降解(D

为了进行处理，将板从培养箱中取出，除去培养基，然后立即向所有孔中添加200μL冷(4C)DPBS。然后除去DPBS，并向所有孔中添加50μL 4％多聚甲醛(PFA)的DPBS(4C)溶液，并将板在室温下温育20分钟。然后除去PFA，并向所有孔中添加200μL含0.5％Triton X-100的TBS-T，并将板在室温下温育30分钟。然后除去含有0.5％Triton X-100的TBS-T，添加50μL Li-Cor封闭溶液，并将板在室温下温育至少一小时。除去封闭溶液，并添加50μL含一抗混合物的Li-Cor封闭溶液(对于BRM(Cell Signaling Tech，目录号11966)为1:1000，并且对于α-微管蛋白(Sigma，目录号T6074)(一种对照蛋白)为1:2000)。然后将板置于冷室中直至第二天。

第二天，将板用TBS-T洗涤三次，每孔200L。将五十(50)L第二抗体混合物的LI-COR封闭溶液(抗兔_800nm和抗小鼠_680nm)添加到所有孔中(按1:5000稀释)。将板在室温下温育至少一小时，同时避光。将板用TBS-T洗涤两次，每孔200L。

为了读取每个板，除去TBS-T，并将每个板倒扣在纸巾上轻拍。在LI-COR Odyssey上读取板，两个通道的默认强度设置为5.0。使用Image Studio Lite的单元内Western特征分析LI-COR图像。

以下化合物在上述条件下测试时证明了靶蛋白质降解：

表1A.本公开的示例性双官能降解化合物

表1B.本公开的示例性双官能降解化合物

表1C.本公开的示例性双官能降解化合物

表2A.通过表1A的示例性双官能降解化合物的靶蛋白降解

*DC50(nM)

A<2.5

2.5≤B<10

10≤C<30

D≥30

**Dmax(降解％)

A>75

C≤50

表2B.通过表1B的示例性双官能降解化合物的靶蛋白降解

*DC50(nM)

A<2.5

2.5≤B<10

10≤C<30

D≥30

NA未计算/未曲线拟合

**Dmax(降解％)

A>75

C≤50

NA未计算/未曲线拟合

表2C.通过表1C的示例性双官能降解化合物的靶蛋白降解

*DC50(nM)

A<2.5

2.5≤B<10

10≤C<30

D≥30

NA未计算/未曲线拟合

**Dmax(降解％)

A>75

C≤50

NA未计算/未曲线拟合

描述了通过PROTAC技术含有SMARCA2、BRAHMA或BRM蛋白质募集部分和E3连接酶募集部分的新型双官能分子。本公开的双官能分子主动降解SMARCA2，导致强大的细胞增殖抑制和凋亡诱导。PROTAC介导的蛋白质降解为通过传统方法靶向“无成药性”病理蛋白质提供了有效策略。

本申请中通篇引用的所有参考文献、专利、待决专利申请和已公布专利的内容以引用方式明确并入本文。

本领域技术人员将认识到或只使用常规实验便能够确定本文所述的本公开的具体实施方案的许多等同物。此类等效物旨在被所附权利要求书涵盖。应当理解，本文所述的详细实施例和实施方案仅为了举例说明目的而给出，且决不视为对本公开的限制。根据其的各种修改或变化将被所属领域的技术人员考虑到，并且包含在本申请的实质和范围内且被视为在所附权利要求书的范围内。例如，可以改变成分的相对数量以优化所期望的效应，可以添加其他成分，且/或可以用类似成分取代一种或多种所述成分。与本公开的系统、方法和工艺相关的其他有利特点和功能从所附权利要求书将显而易见。此外，所属领域的技术人员仅使用常规实验就认识到或能够确定本文所述的本公开的特定实施方案的许多等效物。此类等效物旨在被所附权利要求书涵盖。

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该技术已申请专利。仅供学习研究，如用于商业用途，请联系技术所有人。
专利发明人：安德鲁·P·克鲁;J·王;迈克尔·贝尔林;彼得·德拉戈维奇;陈慧芬;利安娜·施塔本;
专利申请人：阿尔维纳斯运营股份有限公司;健泰科生物技术公司;