富含EPA的不同极性的微藻油脂及其制备方法

技术领域

本发明涉及微藻油脂制备领域，具体地涉及富含EPA的不同极性的微 藻油脂及其制备方法。

背景技术

EPA，即二十碳五烯酸(Eicosapntemacnioc Acid)，属于Ω-3系列多不饱 和脂肪酸，其分子中含有20个碳原子和5个双键，首个双键位于甲基端的 第三个碳原子上，是人体自身不能合成的脂肪酸，大量研究证明，EPA具有 多种生理功能。

近年来，针对微藻油脂和其中的EPA的萃取，逐渐兴起多项萃取技术： 1)有机溶剂萃取法，操作简单易行，主要溶剂有甲醇、乙醇、丙酮、乙酸 乙酯、乙醚和正己烷等；2)超临界萃取法，具有操作方便易行、使用夹带 剂以及一定的选择性的特点，但缺点是萃取时间长、压力高，对设备要求高， 难以规模化生产；3)微波萃取法，具有萃取温度低、时间短以及靶向萃取 等特点，常用乙醇作为萃取溶剂，但缺点是在萃取过程中萃取物质易发生降 解反应；4)超声波萃取法，具有外场介入强化，增强溶剂穿透能力，提高 萃取效率的特点，但缺点是萃取过程中萃取物易发生氧化等化学反应；5) 加速溶剂萃取法，具有萃取时间短、溶剂使用量少的特点，但缺点是温度和 压力非常高，对设备要求高，萃取过程中萃取易发生异构化、氧化等化学反 应；6)酶辅助萃取法，具有萃取效率高、溶剂使用量少，抗氧化活性得以 保持，但缺点是酶的活性难以保持、常用二甲醚作为萃取溶剂、萃取成本高。 在如上的方法中，有机溶剂萃取法基本不存在如上2)-6)中存在的问题， 可以用于实现含EPA微藻油脂规模化生产，最具有工业应用前景。

但是，现有有机溶剂萃取法主要得到的是物化性质和分子结构极其复杂 的脂类混合物，再经过复杂的分离纯化工艺才能进一步提高微藻油脂中EPA 的含量，改善品质。此外，由于所得到的微藻油脂中含有的是物化性质和分 子结构不同的脂类化合物的混合物，这样不但没有充分发挥不同类型脂类化 合物的功能，而且工艺路线复杂，难以实现工业化生产。

发明内容

本发明的目的是为了克服上述现有技术存在的问题，提供了一种富含 EPA的不同极性微藻油脂的制备方法，该方法能够获得富含EPA的不同极 性的微藻油脂。

为了实现上述目的，本发明一方面提供了一种富含EPA的不同极性的 微藻油脂的制备方法，该方法包括：对微藻生物质进行至少两次有机溶剂萃 取，并对每次萃取后的物料进行分离，得到每次萃取后的微藻油脂和萃余物；

其中，第1+n次有机溶剂萃取以第n次有机溶剂萃取后分离得到的萃余 物为原料，且每次萃取使用的有机溶剂的介电常数依次增加；

其中，n为≥1的整数。

优选地，该方法进一步包括：

1)向微藻生物质中加入非极性有机溶剂，进行第一萃取，并分离得到 微藻油脂I和萃余物I；

2)向所述萃余物I中加入极性有机溶剂I，进行第二萃取，并分离得到 微藻油脂II和萃余物II；

3)向所述萃余物II中加入极性有机溶剂II，进行第三萃取，并分离得 到微藻油脂III和萃余物III；

其中，所述极性有机溶剂I的极性小于所述极性有机溶剂II的介电常数。

优选地，对每次萃取后得到的微藻油脂分别使用吸附剂进行吸附处理；

其中，对每次萃取后得到的微藻油脂进行吸附所使用的吸附剂彼此相同 或不同。

本发明另一方面提供了上述方法制备的富含EPA的不同极性的微藻油 脂。

采用本发明所述的技术方案还具有以下技术优势：

(1)在萃取过程中，因为使用极性等物化性质不同的有机溶剂进行分 步萃取，可选择性地将不同类型脂类物质萃取出来，与溶剂物化性质差异较 大的其他成分只是部分萃取或不萃取，每次萃取均得到了EPA含量较高的 微藻油脂。而且获得的至少两种微藻油脂的物化性质、分子结构及生物活性 存在差异，可以满足不同生物学需求，从而可进行选择性应用。

(2)经过选择性萃取得到的微藻油脂中的杂质也基本都具有与使用的 有机溶剂相似或相近的物化性质，在优选经一步简单的脱色纯化过程，即可 将叶绿素等色素和其他杂质脱除，也即提高了杂质的去除率，进一步提高微 藻油脂中EPA的含量，而不需要针对不同杂质的性质采用多个不同的除杂 方法。

(3)与现有技术相比，处理同样的微藻样品，本发明得到的至少两种 微藻油脂中重金属等污染物含量更低，能够满足相关领域(比如，食品领域) 国家标准中的要求，能满足不同健康领域的需求。

(4)本发明所述的制备方法具有处理时间短、制备温度低、有机溶剂 消耗低等优点，降低了生产成本。

(5)本发明能适用于各种微藻，适用范围广，易于实现规模化。

本发明的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

具体实施方式

以下对本发明的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描 述的具体实施方式仅用于说明和解释本发明，并不用于限制本发明。

在本发明中，术语“极性”在化学中是指一根共价键或一个共价分子中 电荷分布的不均匀性。如果电荷分布得不均匀，则称该键或分子为极性；如 果均匀，则称为非极性。根据溶剂的介电常数可以判别溶剂的极性大小，介 电常数越大，极性越大。

在本发明中，本发明的发明人发现，EPA在各类脂质化合物(如游离脂 肪酸、脂肪酸甘油酯、糖脂、磷脂、膜脂等)中均有不同含量的分布，可以 理解的是这些物化性质和分子结构不同的脂类化合物本身具有不同的生物 活性。

本发明一方面提供了一种富含EPA的不同极性的微藻油脂的制备方法， 该方法包括：对微藻生物质进行至少两次有机溶剂萃取，并对每次萃取后的 物料进行分离，得到每次萃取后的微藻油脂和萃余物；

其中，第1+n次有机溶剂萃取以第n次有机溶剂萃取后分离得到的萃余 物为原料，且每次萃取使用的有机溶剂的介电常数依次增加；

其中，n为≥1的整数。

可以理解的是，所述萃取的次数可以根据实际需要选择，比如可以萃取 2次、3次、4次、5次或更多，每次萃取使用的有机溶剂的介电常数依次增 加。比如，在萃取次数为2次时，第二次萃取使用的有机溶剂的介电常数大 于第一次萃取使用的有机溶剂的介电常数。又如，在萃取次数为3次时，第 一次萃取使用的有机溶剂的介电常数小于第二次萃取使用的有机溶剂的介 电常数，第二次萃取使用的有机溶剂的介电常数小于第三次萃取使用的有机 溶剂的介电常数。其他萃取次数时，按照同样的规律进行有机溶剂的选择， 以完成微藻油脂的萃取。

可以理解的是，萃取次数较少时，最后一次萃取所得萃余物中可能会残 留一定量的微藻油脂和EPA，随着萃取次数的增加，最后一次萃取所得萃余 物中微藻油脂和EPA的残留量会减少甚至极少残留，但是会导致有机溶剂 用量增加、处理步骤增加等情况，还可能会存在提取出的微藻油脂和EPA 的量很少的情况。因此，本领域技术人员可以根据实际需要确定合适的萃取 次数，优选为2-4次。

根据本发明一种优选的实施方式，所述萃取的次数为3次，具体的，所 述微藻油脂的制备方法可以包括：

1)向微藻生物质中加入非极性有机溶剂，进行第一萃取，并分离得到 微藻油脂I和萃余物I；

2)向所述萃余物I中加入极性有机溶剂I，进行第二萃取，并分离得到 微藻油脂II和萃余物II；

3)向所述萃余物II中加入极性有机溶剂II，进行第三萃取，并分离得 到微藻油脂III和萃余物III。

可以理解的是，其中，所述非极性有机溶剂的介电常数小于所述极性有 机溶剂I的介电常数，所述极性有机溶剂I的介电常数进一步小于所述极性 有机溶剂II的介电常数。

在本发明中，所述非极性有机溶剂可以是本领域常规使用的非极性有机 溶剂。在本发明中限定所述非极性有机溶剂的介电常数优选在4.5以下，所 述非极性有机溶剂优选为正己烷和/或乙醚。根据相似相溶原理，采用非极性 有机溶剂萃取出来的微藻油脂I中大部分组分的极性较低，即与所述非极性 有机溶剂的极性较为接近。从理论上讲，所述微藻油脂I中的主要组分为甘 油三酯。

其中，术语“甘油三酯”又称脂酰甘油，是脂质的组成成分，是甘油和 3个脂肪酸所形成的脂。

在本发明中，所述极性有机溶剂可以是本领域常规使用的极性有机溶剂。 在本发明中，将极性有机溶剂按照其介电常数的大小分为两大类，也即，有 机溶剂1和有机溶剂II，其中，有机溶剂I的介电常数低于有机溶剂II的介 电常数，可以理解的是，有机溶剂1和有机溶剂II的介电常数的分界点可以 是任意一个数值，比如可以为5、10、15、20、25、30、40、50、60甚至更 高的数值以及任意两个值之间的任意值。

在本发明中，所述极性有机溶剂I优选是介电常数大于4.5且小于15范 围内的任意有机溶剂。所述极性有机溶剂I优选为乙酸乙酯和/或氯仿。根据 相似相溶原理，采用极性有机溶剂I萃取出来的微藻油脂II中大部分组分的 极性相对微藻油脂I中的大部分组分较高。从理论上讲，所述微藻油脂II中 的主要组分为糖脂。

其中，术语“糖脂”是指含有糖基配体的脂类化合物。

在本发明中，所述极性有机溶剂II优选是介电常数在15以上的任意有 机溶剂。所述极性有机溶剂II优选地选自乙醇、丙酮和甲醇中的至少一种。 根据相似相溶原理，采用极性有机溶剂II萃取出来的微藻油脂III中大部分 组分的极性最高。从理论上讲，所述微藻油脂III中的主要组分为磷脂类。

其中，术语“磷脂”是指含有磷酸的脂类。

在本发明中，每次萃取使用的有机溶剂均可以为不同溶剂的混合溶剂， 也可以为单独一种溶剂，优选使用单独一种溶剂，即每次萃取均使用一种有 机溶剂。在这种优选情况下，可以实现溶剂的回收再利用，以减少有机溶剂 的损耗，节省生产成本。

在本发明一个优选地实施方式中，所述萃取的次数为3次，具体的，所 述微藻油脂的制备方法可以包括：1)向微藻生物质中加入正己烷，进行第 一萃取，并分离得到微藻油脂I和萃余物I；2)向所述萃余物I中加入乙酸 乙酯，进行第二萃取，并分离得到微藻油脂II和萃余物II；3)向所述萃余 物II中加入乙醇，进行第三萃取，并分离得到微藻油脂III和萃余物III。在 这样的情况下，能够获得多种不同物化性质的EPA含量较高的微藻油脂， 在每次萃取过程中均能够实现较高的油脂提取率和较高的EPA总量。

在本发明中，在所述至少两次有机溶剂萃取中，每次萃取的方法不受特 别限制，比如可以为水浴加热萃取、油浴加热萃取或空气浴加热萃取等；优 选地，每次有机溶剂萃取各自独立地为水浴加热萃取。

在本发明中，在所述至少两次有机溶剂萃取中，每次萃取过程的液料比 不受特别的限制，本领域技术人员可以根据有机溶剂和微藻的性质进行确定。 在优选地情况下，在所述至少两次有机溶剂萃取中，每次萃取使用的有机溶 剂与微藻生物质的液料比各自独立地为2-40mL/g，优选为3-10mL/g，能够 进一步提高微藻油脂的提取率。应当理解的是，所述微藻生物质以最初加入 的微藻生物质的干重计，而非提取过程中萃余物的干重。

在本发明中，在所述至少两次有机溶剂萃取中，每次萃取的时间可以不 受特别的限制，例如，每次萃取的时间可以各自独立地为10-60min。

在本发明中，在所述至少两次有机溶剂萃取中，每次萃取的温度可以不 受特别的限制，例如，每次萃取的温度可以各自独立地为25-40℃。

在本发明中，为了提高萃取效率，每次萃取可以结合其他本领域常规使 用的方法，比如搅拌、震荡、研磨、超声或微波等，本领域技术人员可根据 实际情况进行选择。

在本发明中，每次萃取结束后，可按照本领域常规使用的技术手段进行 后处理。例如，可以通过离心的方法将每次萃取后的物料分离成含有微藻油 脂的有机溶剂相和萃余物相，可以理解的是，所述有机溶剂相含有萃取得到 的含有EPA的微藻油脂。所述离心的参数不受特别的限制，可以根据实际 情况进行调整。

在本发明中，可以使用本领域常规使用的技术手段(比如，可以使用氮 吹仪进行吹扫)将所述有机溶剂相中的有机溶剂分离出来，并对分离得到的 微藻油脂进行干燥处理。

其中，使用氮吹仪进行吹扫进行分离的条件可以在较宽的范围内进行选 择，例如，所述氮吹仪中所述氮气的流速可以为0.5-5.0mL/min，工作温度 可以为30-60℃，当所述有机溶剂相的体积不再有明显的变化时结束氮吹。

其中，所述干燥的条件可以在较宽的范围内进行选择，只要基本不破坏 微藻油脂尤其是EPA的活性即可，优选的，所述干燥在真空条件下进行室 温(20-40℃)干燥，所述干燥的程度优选使得微藻油脂恒重为止。

在本发明中，按照上述方法进行微藻生物质中微藻油脂的萃取，能够获 得多种不同物化性质的EPA含量较高的微藻油脂，在每次萃取过程中均能 够实现较高的油脂提取率和较高的EPA总量；优选地，为了进一步提高每 次萃取后得到的微藻油脂中EPA的含量，该方法还可以包括对每次萃取后 得到的微藻油脂分别使用吸附剂进行吸附处理。经过吸附处理，可以将微藻 油脂中的色素、蛋白、多糖等杂质去除，从而提高微藻油脂中EPA的含量。

在本发明中，所述吸附剂可以以直接添加至微藻油脂中或以吸附柱的形 式存在。优选地，以吸附柱的形式进行吸附处理。使用吸附柱进行吸附处理 的步骤可以包括装柱、上样、洗脱和收集操作。当所述吸附柱为通过商购获 得的吸附柱时，可以直接进行上样、洗脱和收集操作。

在本发明中，所述吸附剂的种类不受特别的限制，例如可以为硅酸镁、 硅胶、活性炭、硅藻土、活性白土和树脂中的一种或多种，用于对每次萃取 后得到的微藻油脂进行吸附所使用的吸附剂彼此可以相同或不同。

在本发明的一个优选的实施方式中，该方法还包括：使用吸附剂I对微 藻油脂I进行吸附处理，所述吸附剂I选自硅胶、硅藻土和活性白土中的至 少一种；使用吸附剂II对微藻油脂II进行吸附处理，所述吸附剂II选自硅 胶和树脂中的至少一种；使用吸附剂III对微藻油脂III进行吸附处理，所述 吸附剂III选自活性炭和硅酸镁中的至少一种。

在本发明的一个优选的实施方式中，该方法还包括：1)向微藻生物质 中加入非极性有机溶剂，进行第一萃取，并分离得到微藻油脂I和萃余物I， 然后使用吸附剂I对所述微藻油脂I进行吸附处理；

2)向所述萃余物I中加入极性有机溶剂I，进行第二萃取，并分离得到 微藻油脂II和萃余物II，然后使用吸附剂II对所述微藻油脂II进行吸附处 理；

3)向所述萃余物II中加入极性有机溶剂II，进行第三萃取，并分离得 到微藻油脂III和萃余物III，然后使用吸附剂III对所述微藻油脂III进行吸 附处理；

其中，所述极性有机溶剂I的介电常数小于所述极性有机溶剂II的介电 常数；所述吸附剂I选自硅胶、硅藻土和活性白土中的至少一种；所述吸附 剂II选自硅胶和树脂中的至少一种；所述吸附剂III选自活性炭和硅酸镁中 的至少一种。

在本发明的一个更优选的实施方式中，所述吸附剂I为硅胶，所述吸附 剂II为硅胶，所述吸附剂III为活性炭，在这样的条件下，能够增加微藻油 脂I、微藻油脂II和微藻油脂III中色素等杂质的去除量，从而进一步提高微 藻油脂中EPA的含量。

可以理解的是，本发明所述的方法还可以用于富含其他活性物质的微藻 油脂的提取，其中，其他活性物质可以为微藻色素、单不饱和脂肪酸和其它 多不饱和脂肪酸等。

在本发明中，微藻生物质的形态不进行特别的限定，可以是含有微藻细 胞的任意形态，比如浆液、藻泥或藻粉。在本发明中，任意形态的微藻生物 质均可以通过上述方法萃取得到微藻油脂，优选地，所述微藻生物质为藻粉， 在该优选情况下能够不进行任何处理而直接进行萃取过程。

本发明的方法可适用于各种微藻中富含EPA的不同极性的微藻油脂的 提取，即对微藻的种类没有特别的限制，优选为EPA含量和油脂含量均丰 富的微藻，例如，可以选自微拟球藻、硅藻、黄丝藻、扁藻、紫球藻和卵囊 藻等中的至少一种。本领域技术人员可以根据目标EPA或油脂含量选择目 标藻种。

本发明提出的萃取方法可以获得不同物化性质和分子结构的EPA微藻 油脂，以满足多种生活需求。可以理解，所述微藻油脂可以应用于人类膳食、 畜禽饲料、水产品饲料，也可以经过进一步的加工用于保健品、化妆品或药 品中。

本发明另一方面提供了上述方法制备的富含EPA的不同极性的微藻油 脂。

以下将通过实施例对本发明进行详细描述。以下实施例和对比例中：

所述微藻为三角褐指藻(Phaeodactrylumtricornutum GT6)为国投生物 科技投资有限公司国投微藻生物科技中心自有藻种。

EPA含量的测定方法为：使用安捷伦气相色谱仪(7890B)，使用火焰 离子化检测器(FID)进行定量分析，色谱柱为DB-23(Agilent，货号：122-2361)。

重金属的测定方法为：使用安捷伦电感耦合等离子体质谱仪(ICP-MS 7700X)进行定性定量分析。

微藻油脂含量的测定方法为：称重法进行测定。

所述硅胶为购自青岛海洋化工有限公司的200目的硅胶。

所述树脂为购自天津浩聚树脂科技有限公司的60-160目的树脂。

所述硅藻土为购自济南金旭缘新材料有限公司的食品级硅藻土。

所述活性炭为购自河北科技嵩山有限公司的食品级脱色活性炭。

如无特殊说明，以下实施例和对比例中所用试剂和材料均为常规型号。

以下实施例和对比例中，每个实验进行五次平行实验。使用spss对实验 所得数据进行分析，其中，以下数据均是具有显著性差异的(即p＜0.05)， 在表1中不在体现。

实施例1

本实施例用于说明本发明提供的微藻油脂的提取方法

1)称取200mg三角褐指藻藻粉于锥形反应管中。

2)第一萃取：按照液料比6mL/g加入正己烷，涡旋混合均匀后置于预 热水浴中进行加热，加热温度为30℃、搅拌150rpm，开始第一次萃取，同 时开始计时。30min后，在4℃下，3000rpm离心5min。用滴管吸取含有微 藻油脂I的有机溶剂层，并用棕色样品瓶收集，萃余物I进行下次提取。

3)第二萃取：按照第一萃取同样的工艺萃取萃余物I，其中，所述有机 溶剂为乙酸乙酯。用滴管吸取含有微藻油脂II的有机溶剂层，并用棕色样品 瓶收集，萃余物II进行下次提取。

4)第三萃取：按照第一萃取同样的工艺萃取萃余物II，其中，所述有 机溶剂为乙醇。用滴管吸取含有微藻油脂III的有机溶剂层，并用棕色样品 瓶收集，萃余物III弃置。

5)上述含有微藻油脂I的有机溶剂层、含有微藻油脂II的有机溶剂层 和含有微藻油脂III的有机溶剂层分别使用氮吹仪消除有机溶剂，消除温度 为30℃，真空干燥箱室温干燥至恒重后分别得到微藻油脂I、微藻油脂II和 微藻油脂III。称重，计算得到微藻油脂重量，并测定EPA含量，结果见表 1中的A1组。

6)使用吸附剂I装填得到的吸附柱I对上述微藻油脂I进行吸附处理， 得到产品I；使用吸附剂II装填得到的吸附柱II对上述微藻油脂II进行吸附 处理，得到产品II；使用吸附剂III装填得到的吸附柱III对上述微藻油脂III 进行吸附处理，得到产品III。

其中，吸附剂I为硅胶，吸附剂II为硅胶，吸附剂III为活性炭。

对得到的产品I、产品II和产品III进行称重，得到产品I、产品II和产 品III的微藻油脂重量，并测定产品I、产品II和产品III中的EPA含量，结 果见表1中的T1组。

实施例2

本实施例用于说明本发明提供的微藻油脂的提取方法

1)称取200mg三角褐指藻藻粉于锥形反应管中。

2)第一萃取：按照液料比3mL/g加入乙醚，涡旋混合均匀后置于预热 水浴中进行加热，加热温度为25℃、搅拌50rpm，开始第一次萃取，同时开 始计时。60min后，在4℃下，5000rpm离心3min。用滴管吸取含有微藻油 脂I的有机溶剂层，并用棕色样品瓶收集，萃余物I进行下次提取。

3)第二萃取：按照第一萃取同样的工艺萃取萃余物I，其中，所述有机 溶剂为氯仿。用滴管吸取含有微藻油脂II的有机溶剂层，并用棕色样品瓶收 集，萃余物II进行下次提取。

4)第三萃取：按照第一萃取同样的工艺萃取萃余物II，其中，所述有 机溶剂为丙酮。用滴管吸取含有微藻油脂III的有机溶剂层，并用棕色样品 瓶收集，萃余物III弃置。

5)上述含有微藻油脂I的有机溶剂层、含有微藻油脂II的有机溶剂层 和含有微藻油脂III的有机溶剂层分别使用氮吹仪消除有机溶剂，消除温度 为30℃，真空干燥箱室温干燥后分别得到微藻油脂I、微藻油脂II和微藻油 脂III。称重，计算得到微藻油脂重量，并测定EPA含量，结果见表1中的 A2组。

6)使用吸附剂I装填得到的吸附柱I对上述微藻油脂I进行吸附处理， 得到产品I；使用吸附剂II装填得到的吸附柱II对上述微藻油脂II进行吸附 处理，得到产品II；使用吸附剂III装填得到的吸附柱III对上述微藻油脂III 进行吸附处理，得到产品III。

其中，吸附剂I为硅胶，吸附剂II为硅胶，吸附剂III为活性炭。

对得到的产品I、产品II和产品III进行称重，得到产品I、产品II和产 品III的微藻油脂重量，并测定产品I、产品II和产品III中的EPA含量，结 果见表1中的T2组。

实施例3

本实施例用于说明本发明提供的微藻油脂的提取方法

1)称取200mg三角褐指藻藻粉于锥形反应管中。

2)第一萃取：按照液料比10mL/g加入正己烷，涡旋混合均匀后置于预 热水浴中进行加热，加热温度为40℃、搅拌300rpm，开始第一次萃取，同 时开始计时。10min后，在4℃下，8000rpm离心2min。用滴管吸取含有微 藻油脂I的有机溶剂层，并用棕色样品瓶收集，萃余物I进行下次提取。

3)第二萃取：按照第一萃取同样的工艺萃取萃余物I，其中，所述有机 溶剂为氯仿。用滴管吸取含有微藻油脂II的有机溶剂层，并用棕色样品瓶收 集，萃余物II进行下次提取。

4)第三萃取：按照第一萃取同样的工艺萃取萃余物II，其中，所述有 机溶剂为甲醇。用滴管吸取含有微藻油脂III的有机溶剂层，并用棕色样品 瓶收集，萃余物III弃置。

5)上述含有微藻油脂I的有机溶剂层、含有微藻油脂II的有机溶剂层 和含有微藻油脂III的有机溶剂层分别使用氮吹仪消除有机溶剂，消除温度 为30℃，真空干燥箱室温干燥后分别得到微藻油脂I、微藻油脂II和微藻油 脂III。称重，计算得到微藻油脂重量，并测定EPA含量，结果见表1中的 A3组。

6)使用吸附剂I装填得到的吸附柱I对上述微藻油脂I进行吸附处理， 得到产品I；使用吸附剂II装填得到的吸附柱II对上述微藻油脂II进行吸附 处理，得到产品II；使用吸附剂III装填得到的吸附柱III对上述微藻油脂III 进行吸附处理，得到产品III。

其中，吸附剂I为硅胶，吸附剂II为硅胶，吸附剂III为活性炭。

对得到的产品I、产品II和产品III进行称重，得到产品I、产品II和产 品III的微藻油脂重量，并测定EPA含量，结果见表1中的T3组。

实施例4

本实施例用于说明本发明提供的微藻油脂的制备方法

按照实施例1的方法进行微藻油脂制备，不同之处在于，吸附剂I为硅 藻土，吸附剂II为树脂，吸附剂III为硅酸镁。

称量萃取步骤后得到微藻油脂I、微藻油脂II和微藻油脂III的重量，并 测定EPA含量，结果见表1中的A4组。

称量吸附步骤后得到的产品I、产品II和产物III的微藻油脂的重量，并 测定EPA含量，结果见表1中的T4组。

实施例5

本实施例用于说明本发明提供的微藻油脂的制备方法

按照实施例1的方法进行微藻油脂制备，不同之处在于，第一萃取中使 用的有机溶剂为乙醚，第二萃取中使用的有机溶剂为氯仿，第三萃取中使用 的有机溶剂为甲醇。

称量萃取步骤后得到微藻油脂I、微藻油脂II和微藻油脂III的重量，并 测定EPA含量，结果见表1中的A5组。

称量吸附步骤后得到的产品I、产品II和产物III的微藻油脂的重量，并 测定EPA含量，结果见表1中的T5组。

对比例1

本对比例用于说明参比的微藻油脂的制备方法

按照实施例1的方法进行微藻油脂制备，不同之处在于，第一萃取中使 用的有机溶剂为乙醇，第二萃取中使用的有机溶剂为乙酸乙酯，第三萃取中 使用的有机溶剂为正己烷。

称量萃取步骤后得到微藻油脂I、微藻油脂II和微藻油脂III的重量，并 测定EPA含量，结果见表1中的D1组。

称量吸附步骤后得到的产品I、产品II和产物III的微藻油脂的重量，并 测定EPA含量，结果见表1中的dt1组。

对比例2

本对比例用于说明参比的微藻油脂的制备方法

按照实施例1的方法进行微藻油脂制备，不同之处在于，第一萃取中使 用的有机溶剂为乙醇，第二萃取中使用的有机溶剂为乙醇，第三萃取中使用 的有机溶剂为乙醇。对得到的微藻油脂I、微藻油脂II和微藻油脂III。

称量萃取步骤后得到微藻油脂I、微藻油脂II和微藻油脂III的重量，并 测定EPA含量，结果见表1中的D2组。

称量吸附步骤后得到的产品I、产品II和产物III的微藻油脂的重量，并 测定EPA含量，结果见表1中的dt2组。

表1

使用本发明的技术方案得到了多种不同物化性质的微藻油脂，微藻油脂 的总量和EPA的总量相对较高，同时获得的微藻油脂中杂质去除率更高，从而保证了较高的EPA含量，在优选的条件下，还能够进一步地提高前述值。

发明人在研究时发现，本发明采用介电常数由低到高的有机溶剂能够实 现良好的提取效果，而当有机溶剂的介电常数的大小顺序相反时，无法很好 地将不同EPA油脂根据极性大小分开。而且，通过比较是实施例1和对比 例1的数据能够看出，当有机溶剂的介电常数由高到低变化时，所提取的油 脂中的EPA含量降低。

对比例2中，当有机溶剂均为同一溶剂，即本领域常规的提取方法时， 提取获得的为EPA脂类的混合物，无法有针对性获得EPA糖脂、EPA磷脂 和EPA中性脂。从表1中的数据可得出，对比例2中，相比于吸附处理前，吸附处理后的3个微藻油脂中EPA含量提高比例较低，说明杂质去除率较 低。

以上详细描述了本发明的优选实施方式，但是，本发明并不限于此。在 本发明的技术构思范围内，可以对本发明的技术方案进行多种简单变型。包 括各个具体技术特征以任何合适的方式进行组合。为了避免不必要的重复， 本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。但这些简单变型和组合同样应 当视为本发明所公开的内容，均属于本发明的保护范围。