一种检测头孢丙烯中戊二醛残留量的气相色谱-质谱联用法

技术领域

本发明涉及分析化学领域，具体涉及一种气相色谱-质谱联用法检测头孢丙烯中戊二醛的残留量。

背景技术

头孢丙烯是第二代口服β-内酰胺类抗生素，由于其抗菌谱广、疗效高、毒副作用少而广泛应用于临床。目前，头孢丙烯可以通过化学合成法和酶法来制备，相比较而言，酶法制备法具有工艺条件温和、绿色环保、成本低质量优等特点，逐渐被一些大的制药公司所青睐。戊二醛是酶法制备头孢丙烯工艺中青霉素G酰化酶的固化剂，因结构中含有2个活泼的醛基，对眼睛、皮肤和黏膜均有强烈的刺激性并且具有细胞毒性警示结构的化合物，根据《中国药典》2020年版四部、ICH Q3C(R7)残留溶剂指导原则、ICH M7(R1)《评估和控制药物中DNA反应性(致突变)杂质以限制潜在致癌风险》的规定等，属潜在的基因毒杂质，在药物合成过程中若去除不完全，将严重影响药物的纯度和质量，引发临床用药的安全性。《中国药典》2020年版四部通则3204戊二醛残留量测定法不适用于头孢丙烯中痕量戊二醛的检测方法，需采用灵敏度更高的方法来严格控制以保证头孢丙烯的质量，这对于提高临床用药安全性具有重要的现实意义。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种检测限低、专属性强、灵敏度高、重现性好，可准确定性或定量检测出头孢丙烯中基因毒杂质戊二醛，从而实现对头孢丙烯中戊二醛含量的控制，以保证有效控制头孢丙烯终产品的质量，提高临床用药的安全性。

为了实现上述技术目的，本发明技术方案如下：

一种气相色谱-质谱联用法检测头孢丙烯中戊二醛的残留量，采用气相色谱-质谱联用法检测，包括以下步骤：

(1)取头孢丙烯2g，置25ml量瓶中，精密加入乙腈20ml，密封，称重，超声提取5分钟，补足乙腈，混匀，以每分钟9000转离心10分钟，取上清液作为供试品溶液。

(2)对照品溶液配制：精密量取戊二醛水溶液1.0ml，置50ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照贮备液5.0ml，置50ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取10.0ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：

本发明采用气相色谱-质谱联用法，选用甲基聚硅氧烷类中等极性毛细管色谱柱，能够有效地分离测定头孢丙烯中戊二醛的含量。本发明解决了头孢丙烯中戊二醛的定性和定量检测问题，实现了头孢丙烯的质量可控，提高了临床用药的安全性。

附图说明

图1为实施例2中空白溶剂的图谱；

图2为实施例2中对照品溶液的图谱；

图3为实施例2中供试品溶液的图谱；

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围，凡基于本发明所述内容实现的技术均属于本发明的范围。

实施例1

仪器与条件

色谱仪：气相色谱-质谱联用仪

色谱柱：Thermo TG-1701MS(0.25μm，0.250mm×30m)

程序升温：起始温度为50℃，维持7分钟，以8℃/min的速率升温至240℃，维持6分钟；

载气：氦气；

恒压模式：150KPa；

进样体积：1.0μl；

进样口温度：240℃；

扫描模式：SIM；

离子源温度：240℃；

电离方式：EI源；

检测器温度：240℃；

质谱传输线温度：240℃；

扫描离子：72；

时间窗：18.4min±1min。

实施步骤(1)取头孢丙烯2g，置25ml量瓶中，精密加入乙腈20ml，密封，称重，超声提取5分钟，补足乙腈，混匀，以每分钟9000转离心10分钟，取上清液作为供试品溶液。

(2)对照品溶液配制：精密量取戊二醛水溶液1.0ml，置50ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照贮备液5.0ml，置50ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取10.0ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

精密量取供试品溶液和对照品溶液1.0μl，注入气相色谱-质谱联用仪中，记录色谱图。

实施例2

本发明对所述气相色谱-质谱联用法检测头孢丙烯中戊二醛方法的以下项目进行了验证：

1专属性

溶剂空白：精密量取乙腈1.0μl，注入气相色谱-质谱联用仪中，记录色谱图。

供试品溶液：取头孢丙烯2g，置25ml量瓶中，精密加入乙腈20ml，密封，称重，超声提取5分钟，补足乙腈，混匀，以每分钟9000转离心10分钟，取上清液作为供试品溶液。

对照品溶液配制：精密量取戊二醛水溶液1.0ml，置50ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取1.0ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液。精密量取对照贮备液5.0ml，置50ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取10.0ml，置100ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

精密量取乙腈、供试品溶液和对照品溶液1.0μl，注入气相色谱-质谱联用仪中，记录色谱图。

结果表明，空白溶剂在戊二醛出峰处无干扰峰，不影响戊二醛的检测，本方法的专属性良好。

2线性与范围

精密量取对照品贮备液1ml，置10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，精密量取0.3ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml和1.5ml分别置10ml量瓶中，加乙腈稀释至刻度，摇匀，作为线性溶液1～6。分别精密量取1μl注入气相色谱-质谱联用仪中，记录色谱图。

以峰面积A为纵坐标，浓度(C)为横坐标，进行线性回归得回归方程为Y＝10289X+376.57、相关系数r为0.9995，结果见表1。

表1戊二醛检测的线性关系试验结果

由上述结果可知，戊二醛在0.3-1.5μg/ml浓度范围内，浓度与峰面积呈良好的线性关系。

3定量限和检测限

用信噪比法确定定量限和检测限，以戊二醛峰的信噪比(S/N)约为10：1，作为定量限溶液，戊二醛的定量限为0.3μg/ml；以戊二醛峰的信噪比(S/N)约为3：1，作为检测限溶液，戊二醛的检测限为0.09μg/ml。

4精密度

4.1进样精密度

取对照品溶液连续进样六次，记录色谱图，考察六次进样的精密度。以戊二醛的峰面积考察六次进样的精密度，结果见表2。

表2戊二醛检测的进样精密度试验结果

由上述结果可知，本方法的进样精密度良好。

4.2重复性

配制六份供试品溶液，分别精密量取1.0μl注入气相色谱-质谱联用仪中，记录色谱图。按外标法以峰面积计算供试品中戊二醛的含量，考察六份含量的精密度，结果见表3。

表3戊二醛检测的重复性试验结果

5准确度

取头孢丙烯2g，六份，精密称定，分置六个25ml量瓶中，分别精密加入对照品溶液20ml，密封，称重，超声提取5分钟，补足乙腈，混匀，以每分钟9000转离心10分钟，取上清液即得。分别精密量取1.0μl注入气相色谱-质谱联用仪中，记录色谱图。按外标法以峰面积计算戊二醛的含量，并与理论加入量进行比较计算回收率，具体结果见表4。

表4戊二醛检测的准确度试验结果

试验结果表明，本品的回收率均在98.60％以上，证实本法的准确度可靠。

6溶液稳定性

分别在0、2、4、6、8、10、12小时，精密量取对照品溶液1.0μl注入气相色谱-质谱联用仪中，记录色谱图，计算定量离子峰面积的RSD，考察对照品溶液的稳定性，结果见表5。

表5戊二醛检测的溶液稳定性试验结果

由上述结果可知，戊二醛对照品溶液在12小时内稳定。

7耐用性

根据色谱条件，确认戊二醛残留测定的耐用性验证范围，见下表：

按上表确认的耐用性试验范围，分别精密量取空白溶剂、对照品溶液和供试品溶液各1.0μL注入气相色谱-质谱联用仪中，记录色谱图，结果见表6。

表6戊二醛检测的耐用性试验结果

由上述结果可知，色谱条件的微小变动不影响戊二醛峰的检测，本方法具有可靠性。

8样品测定

按照上述试验确定的检测方法，对6批头孢丙烯原料中的戊二醛进行检测，结果见表7。

表7头孢丙烯原料中戊二醛检测结果

上述结果表明，6批头孢丙烯原料中均未检出戊二醛，符合规定。

上述实施例仅为本发明优选的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，凡在本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化等，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。