一种私密修护精华液及其制备方法

技术领域

本发明涉及健康卫生用品技术领域，具体而言，涉及一种私密修护精华液及其制备方法。

背景技术

近年来，我国宫颈癌每年新发13.5万余人，而且宫颈癌的发病率不断提高，严重威胁着女性的健康。70～80％的女性一生都感染过HPV，其中10％的女性面临持续性HPV感染的危险状态。HPV感染通常没有任何症状，无法被自己察觉。目前临床上二价疫苗供应量有限，副作用有待观察，且仅仅针对预防高危阳性病毒HPV16、HPV18的表达，对已经感染上的无能为力，且当宫颈炎症恶化时没有抗炎能力。注射干扰素效果不明确，周期长，副作用明显，不经济。市场上针对HPV病毒的产品机理也各不相同。

因此，提供一种能够预防HPV病毒感染的精华液是一种新的解决方案。

发明内容

针对上述问题，本发明旨在提供一种私密修护的精华液及其制备方法。

其中，一种私密修护精华液，包括以下组分：裂裥菌素(纯粉末，95％纯度)；生物叶黄素(1％含量，卵磷脂包裹)；金丝桃苷；藻蓝蛋白；毕赤酵母提取物；增稠剂。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.01-1份；生物叶黄素0.01-5份；金丝桃苷0.05-0.3份；藻蓝蛋白0.01-1份；毕赤酵母提取物1-20份；增稠剂0.1-1份；水71.7-98.82份。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.01-0.1份；生物叶黄素0.01-0.05份；金丝桃苷0.05-0.08份；藻蓝蛋白0.01-0.05份；毕赤酵母提取物1-3份；增稠剂0.1-0.2份；水96.52-98.82份。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.2-0.4份；生物叶黄素0.1-1份；金丝桃苷0.12-0.17份；藻蓝蛋白0.2-0.4份；毕赤酵母提取物8-10份；增稠剂0.4-0.6份；水87.43-90.98份。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.6-0.8份；生物叶黄素2-4份；金丝桃苷0.21-0.26份；藻蓝蛋白0.6-0.8份；毕赤酵母提取物12-17份；增稠剂0.7-0.9份；水76.24-83.89份。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.4-1份；生物叶黄素1-5份；金丝桃苷0.7-0.3份；藻蓝蛋白0.4-1份；毕赤酵母提取物10-20份；增稠剂0.6-1份；水71.7-87.43份。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素(粉末，95％的含量)0.3份；生物叶黄素0.5份；金丝桃苷0.1份；藻蓝蛋白0.3份；毕赤酵母提取物5份；增稠剂0.5份；水93.3份。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.7份；生物叶黄素3份；金丝桃苷0.2份；藻蓝蛋白0.7份；毕赤酵母提取物15份；增稠剂0.8份；水79.6份。

另一方面，精华液的制备方法，包括以下步骤：获取裂裥菌素；生物叶黄素；金丝桃苷；藻蓝蛋白；毕赤酵母提取物；增稠剂；去离子水；混合均匀得到精华液。

基于现有技术中疫苗稀缺，本发明旨在提供一种抗HPV粘附的修护精华液，阻止病毒内吞和影响病毒对细胞的受体结合，进而防止病毒侵染上皮细胞；同时改善私密部位的炎症压力(如果合并宫颈、阴道的炎症，自我清除概率就会减少，容易形成持续性感染，它们之间互相作用，私密环境会变差，分泌物也容易变多)，防止浸润，提高宫颈免疫能力从而提高自我清除病毒能力；激活P53诱导细胞凋亡，从影响细胞骨架蛋白着手进而抑制胞内病毒快速复制转运出细胞侵染其它健康细胞，以及降低病毒的载量；还可以降低HPV高危病毒基因E6、E7的表达，预防HPV引起的宫颈癌等癌症。因此本发明可作为预防HPV病毒感染的一种补充选择。

本发明提供的精华液针对宫颈癌变的HPV和HSV2病毒都有一定的清除和防止粘附的效果，同时具有抑制HPV高危病毒基因E6、E7的表达，促进其感染病毒的细胞凋亡，防止其侵染正常的细胞，增强人体清除病毒的能力，修复受损黏膜防止病毒持续感染，可应用于由HPV病毒引起的宫颈癌的预防及辅助治疗。

附图说明

图1为本发明实施例提供的精华液抑制HSV2病毒的活性的实验结果。

图2为本发明实施例提供的精华液抑制HSV2病毒粘附的实验结果。

图3为PsV16和PsV18假病毒的luciferase活性。

图4为本发明实施例提供的精华液和peptide对PsV16，PsV18感染的影响。

图5为本发明实施例提供的精华液对HPV18、HPV16的E6和E7转录的影响。

图6为本发明实施例提供的精华液对HPV18、HPV16 E6和E7转录的影响。

图7为本发明实施例提供的精华液处理HeLa和CaSki 48小时对p53的影响。

图8为本发明实施提供的精华液中的生物叶黄素成分对已经感染病毒的细胞的细胞骨架的影响。

图9为本发明实施提供的修护精华液对炎性转录因子NF-Kb的抑制试验。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更为明显易懂，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

近年来，我国宫颈癌每年新发13.5万余人，而且宫颈癌的发病率不断提高，严重威胁着女性的健康。70～80％的女性一生都感染过HPV，其中10％的女性面临持续性HPV感染的危险状态。HPV感染通常没有任何症状，无法被自己察觉。宫颈的癌变与高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)持续性感染密切相关，所有的侵袭性宫颈癌及95％的宫颈上皮内瘤变、原位癌病理组织中均可检测出HPV。HPV病毒粒子约为50nm，无包膜，病毒由360个衣壳蛋白L1和72个衣壳蛋白L2组成二十面体结构，其中L1为主要的衣壳蛋白，L2为次要衣壳蛋白。流行情况调查显示健康人群中的HPV携带率高达68.9％，其中皮肤感染率61.3％，阴道感染率41.5％，口腔感染率30％，大肠感染率17.3％。这其中约60％的人没有症状，14％的人表现出亚临床感染/隐性感染，1％的人有明显的临床症状。HPV可通过破损皮肤或者伤口感染人皮肤上皮细胞和粘膜上皮细胞，感染的途径主要为接触感染(儿童通过皮肤与皮肤或者皮肤与粘膜的直接接触感染HPV，并在12至16岁间感染率最高，而成人通过皮肤感染HPV的概率则很低)。在已经发现的200多种HPV中，约有40种通过性行为传播，这些病毒具有高度的传染性，通常无症状且不被注意。人体对HPV感染的免疫反应是微弱的，并且一般仅针对特定的HPV类型，所以一个人可能同时或者依次获得多种不同类型HPV的感染，但不同类型HPV的并发感染被认为不会互相影响。正常情况下机体对HPV病毒的清除速度是很快的，一般在感染后1年内即被清除，感染持续2年才被清除的情况并不常见的，如果不能有效清除并持续长时间感染时，诱发癌变发生的概率将极大增加，100％宫颈癌、43％外阴癌、88％肛门癌、50％阴茎癌、70％阴道癌和27％口咽癌可归因于HPV的感染，并且近些年有发现皮肤感染HPV且紫外线辐射过多可诱发皮肤癌。通常，要么病毒被完全从组织中清除，要么被细胞的免疫监视抑制到敏感的DNA测试也检测不到的低水平。

HPV根据进化分支分析，可分为α，β，μ等属，以L1基因DNA序列差异大于10％为依据认定不同的基因型，HPV的基因型按发现的顺序用数字命名。β属(HPV-5，HPV-8，HPV-1)可感染儿童皮肤，并无明显感染症状，但可以产生较低水平的病毒粒子，数年或者数十年持续存在。μ属(HPV-38)可感染手掌和足底上皮细胞，引发皮疣或良性肉瘤。α属HPV约40种，主要感染生殖道黏膜上皮细胞和呼吸道粘膜上皮细胞，有些不产生明显的临床症状，有些引起喉部或生殖器疣体，有些则有致癌的潜能。2008年诺贝尔生理学和医学奖得主发现宫颈癌的发生与HPV-16和HPV-18的感染相关。近期研究显示，宫颈癌的发生与HPV感染相关性极强，因此HPV-16和HPV-18被称为高危HPVs，同时宫颈癌患者HPV的检出率高达99.7％。女性HPV感染的高峰阶段为25岁和55岁。HPV感染后，大多数女性并不产生抗体，当下以HPV衣壳蛋白为抗原的免疫组化染色可特异性检测出HPV，虽然这种方法可能会对病变产生假阴性的结果，但是在宫颈癌筛查中发挥积极重要作用，尤其是E6、E7蛋白常用来表征癌症的开始。HPV的生活周期与宿主角质形成细胞的分化状态密切相关，在上皮细胞的不同部位进行不同的复制阶段。HPV并不感染无增殖能力的上皮组织的上层细胞，HPV通过伤口或者破损处到达上皮的基底层(病毒的衣壳蛋白L1与基底角质形成细胞膜上的硫酸肝素蛋白聚酶和层粘蛋白5结合，此结合会引起病毒衣壳的构象变化，基底层角质细胞膜上的分子伴侣环亲素B与衣壳蛋白L2结合，暴露出衣壳蛋白L2的氨基末端可被胞外弗林蛋白酶切割，病毒与细胞膜的结合进一步加强，然后内吞进入细胞)。基底层细胞是正常上皮中具有增殖和分化能力的细胞。在基底层细胞中，HPV基因组主要是以游离基因的形式存在于细胞中，并随细胞的分裂分配到子代细胞中，只有当上皮细胞分化时，病毒复制阶段才会被激活，使病毒的基因组扩增至上千个拷贝，组装成成熟的病毒粒子并释放。HPV会通过不同的机制破坏宿主细胞的活动周期，重新激活细胞周期，如病毒蛋白E7会影响细胞周期，使细胞进入S期，将胶质细胞永生化，促进肿瘤的发生；病毒蛋白E6介导P53的泛素化降解，抑制细胞凋亡，在HPV感染期间，E6发挥着多重作用，干扰多条细胞通路以便为病毒复制创造一个有利的环境。在HPV引起的宫颈癌等癌症发生发展过程中，病毒蛋白E6和E7存在协同作用，缺一不可。

单纯疱疹病毒2型(HSV2)主要感染生殖道，HSV2被认为在宫颈癌变中起重要的作用。有学者发现宫颈癌患者中HSV2抗体阳性率高达80％以上，而对照组仅为14.14％～57.14％，其抗原阳性率比正常对照组及慢性宫颈炎者远远高出。应用核酸原位杂交及HSV2DNA探针技术检测，发现宫颈癌组织中HSV2 DNA相关序列远较正常组织高。从宫颈癌患者宫颈刮取物中分离出HSV2病毒颗粒，并将分离的病毒株进行细胞感染及小鼠诱发宫颈癌的研究，均获阳性结果，且HSV2与宫颈浸润癌的相关性较宫颈上皮内瘤变(CIN)为强。宫颈癌变、浸润和糜烂等女性疾病都与病毒感染密切相关，因为女性特殊的生殖结构，病原体感染后不容易清除和控制，且容易反复。早期有效抑制HPV/HSV2病毒侵染粘附以及病毒蛋白E6、E7的表达同时加速HPV的清除成为预防宫颈癌的有效途径。至今HPV导致宫颈癌的机理尚未完全明确，但有大量研究证明蛋白激酶B(PKB)信号通路和转录因子(NF-κB)在宫颈癌发生和发展过程中起着关键性的作用。PKB基因序列与T细胞淋巴瘤中的逆转录病毒Akt8所表达的V-Akt蛋白同源，且与蛋白激酶A和激酶C同源。在静止细胞无外来刺激的情况下，PKB大多位于胞浆，其活化部位是在浆膜，活化后转位至胞液和胞核发挥调控作用。PKB的活化形式磷酸化PKB能够作用于下游关键的凋亡蛋白，如促凋亡因子Bad、GSK3。HPV16-E7蛋白通过PKB信号通路增强了角化细胞的转移。很多因素可以通过诱导NF-κB活化而调控相关基因的转录，包括肿瘤坏死因子、白介素-1、内毒素、活性氧、病毒感染和细胞因子等。病毒通常通过影响细胞内重要信号通路而转化细胞，如调控细胞周期、基因组稳定性以及端粒酶活性等。高危型HPV亚型产生E6和E7癌蛋白，是HPV的两个主要癌蛋白，与宿主细胞的抑癌基因P53和Rb相结合，导致细胞周期调控失常而发生癌变。有研究表明HPV E6以及E7可以增加NF-κB的活性。

针对HPV病毒的复制过程和癌变条件，本发明提供的技术方案以下靶向：

1)从提高上皮物理屏障角度上，降低炎症，抑制NF-κB，促进微损伤口的愈合，阻止病毒侵染；

2)从影响细胞骨架层面上，靶向微管，从而介导病毒衣壳蛋白在细胞质中的运输，防止病毒微粒沿着微管运输至细胞核，减少病毒扩散复制，降低病毒载量；

3)抑制E6、E7基因的表达；

4)从影响细胞内蛋白质的相互作用的角度，细胞内病毒转运作为靶点(在HPV感染中，逆向囊泡转运复合物retromer与病毒衣壳蛋白L2结合，病毒被运输到细胞核里，实现自我复制)，仿病毒衣壳蛋白L2的细胞穿膜肽(在人体中不容易失活，快速占位)与逆向囊泡转运复合物优先结合，这种与病毒竞争性或者有限性与逆向囊泡转运复合物结合的阻断，引起免疫警觉从而被免疫细胞清除，阻止病毒复制，且此阻断作用是不可逆的；

5)抑制病毒侵入细胞和胞内的信号通路，抑制酪氨酸蛋白激酶B从而影响细胞反应，进而诱导异常细胞凋亡；

6)促进细胞凋亡，防止细胞永生化，影响P53蛋白水平的表达。

因此，本发明提供一种私密修护精华液，包括以下组分：裂裥菌素；生物叶黄素；金丝桃苷；藻蓝蛋白；毕赤酵母提取物；增稠剂。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.01-1份；生物叶黄素0.01-5份；金丝桃苷0.05-0.3份；藻蓝蛋白0.01-1份；毕赤酵母提取物1-20份；增稠剂0.1-1份；水71.7-98.82份。

裂裥菌素0.01-0.1份；生物叶黄素0.01-0.05份；金丝桃苷0.05-0.08份；藻蓝蛋白0.01-0.05份；毕赤酵母提取物1-3份；增稠剂0.1-0.2份；水96.52-98.82份。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.2-0.4份；生物叶黄素0.1-1份；金丝桃苷0.12-0.17份；藻蓝蛋白0.2-0.4份；毕赤酵母提取物8-10份；增稠剂0.4-0.6份；水87.43-90.98份。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.6-0.8份；生物叶黄素2-4份；金丝桃苷0.21-0.26份；藻蓝蛋白0.6-0.8份；毕赤酵母提取物12-17份；增稠剂0.7-0.9份；水76.24-83.89份。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.4-1份；生物叶黄素1-5份；金丝桃苷0.7-0.3份；藻蓝蛋白0.4-1份；毕赤酵母提取物10-20份；增稠剂0.6-1份；水71.7-87.43份。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.3份；生物叶黄素0.5份；金丝桃苷0.1份；藻蓝蛋白0.3份；毕赤酵母提取物5份；增稠剂0.5份；水93.3份。

进一步的，精华液按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.7份；生物叶黄素3份；金丝桃苷0.2份；藻蓝蛋白0.7份；毕赤酵母提取物15份；增稠剂0.8份；水79.6份。

该精华液的制备方法如下：获取裂裥菌素；生物叶黄素；金丝桃苷；藻蓝蛋白；毕赤酵母提取物；增稠剂；去离子水；混合均匀得到所述精华液。

生物叶黄素又称“植物黄体素”，是一种含氧的类胡萝卜素，是一种必需的天然抗氧化剂，皮肤无法合成。受损的细胞产生跟炎症相关的酶，如磷酸蛋白激酶B，内皮型一氧化氮合酶以及NF-κB等，生物叶黄素可以保护组织免受炎症伤害。众多医学研究表明：生物叶黄素在对抗慢性炎症相关疾病方面具有卓越的抗炎作用，可以抑制PKB活性，可以从源头减少炎症激活的相关因素从而减少炎性因子的释放，同时可以调节与微管形成相关的p70 S6致活酶的活性。细胞微管对于细胞的发育和向旁边的细胞扩散运输是必不可少的，影响微管的形成可以造成异常细胞凋亡。另外受病毒影响而异常的受损细胞上能表达生物叶黄素，而正常的细胞不表达，直接靶向异常细胞。

金丝桃苷是一种从天然植物贯叶连翘中提取出来的黄酮醇苷类化合物,其化学结构为槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷。金丝桃苷广泛存在于金丝桃科、蔷薇科、桔梗科、唇型科、葵科等植物中，是一种应用广泛的生物活性剂，包括加固细胞膜，抗氧化、清除自由基、抗病毒、抗发炎、血管舒张和抗菌等作用。特别是其4，7-OH及3’，4’邻位二羟基的存在，使其抗氧化能力优于一般的生物类黄酮，避免及减少皮肤受到内外毒素、微生物、病毒以及其它成分的损害。在本方案中，金丝桃苷能减少HSV2病毒黏附到皮肤细胞上。

裂裥菌素和藻蓝蛋白可以激活人体免疫细胞的生物表达，调节以及提高组织系统的免疫力，提高淋巴细胞活性，通过淋巴系统提高机体免疫力，增强机体防病抗病的能力增强对于内外界各种不利因素的抵抗能力。

毕赤酵母提取物的营养物质丰富，含有多种氨基酸、核苷酸、肽等。

增稠剂可以是纤维素胶。

对本发明提供的精华液进行相关的性能试验。

1.抑制HSV2病毒的活性

在Vero(肾上皮细胞)细胞培养液中，对抗精华液的抗HSV2病毒作用进行测试。把Vero细胞接种在培养皿中；把HSV2病毒细胞分别与不同浓度的私密精华液一起培养，然后添加到Vero细胞的培养皿中，最后用水晶紫染色；其中，水晶紫是一种只能对活的，未被感染的细胞进行染色的试剂。结果，被水晶紫染色的细胞形成紫色膜，这可以观察抗HSV2病毒活性。用这种方法可以评估私密精华液的抗病毒能力；不同浓度精华液的抗病毒实验结果参见图1。

2.抑制HSV2病毒在细胞上的黏附作用

将VERO细胞冷却下来，以减少其细胞壁的渗透性，然后将细胞分成两组。一组直接与病毒一起培养，作为对照组；另一组与稀释200倍的精华液预处理的病毒培养，作为实验组。培养结束后，将Vero进行冲洗，再用特异性抗体对病毒进行染色，以便研究病毒对细胞膜的吸附能力。

参见图2，显微镜分析表明，精华液对HSV2病毒在细胞上的黏附有很强的抑制作用，这意味着，有抗病毒作用，阻止病毒黏附在细胞上。图2中左图为对照组，可见病毒粘附在细胞的表面；右图为实验组，没有发现病毒粘附。

3.精华液对HPV16和HPV18 E6、E7转录的影响以及对P53蛋白水平的影响，以及阻止病毒侵染细胞的论证。精华液#1为本发明实施例提供的产品，对比精华#1仅含有列裥菌素和藻蓝蛋白的；对比精华#2仅含有生物叶黄素。对比精华#1和对比精华#2仅用于筛选原料以及对原料如何作用于病毒的判断。

3.1模型建立：HPV16假病毒PsV16和HPV18假病毒PsV18的包装和检测。

将从Addgene购买的pcLuf，p16Shell，p18Shell菌种，平板划线，挑取单个菌进行克隆并提取质粒送样测序。确定质粒正确后，摇菌并大提质粒。将p16Shell或p18Shell(16ug)与pcLuf(8ug)共转染至293FT细胞中，8h后换液，48h后收细胞，Brij 58裂解细胞并37℃孵育过夜，2000rpm离心10min，收取上清中假病毒。取部分病毒按照1：500，1：1000和1：2000的比例稀释后，取5μl感染HaCaT细胞，其余原液分装后-80℃保存备用。结果表明PsV16效价为1.3×109，PsV18效价为3.6×107(Luciferase activity/ml)。

参见图3，病毒感染HaCaT细胞48h后，收细胞并裂解，进行Luciferase报告基因检测。图3中，A和B分别显示PsV16和PsV18假病毒的luciferase活性，luf和pcLuf转染293FT细胞的样品作为阴性对照。

3.2验证构建的精华液对HPV16和HPV18假病毒感染的影响(筛选原料是否具有抑制病毒侵染的作用)。

通过假病毒感染实验分析精华液和peptide对PsV16，PsV18入侵的抑制作用，其中，peptide为合成的HPV入侵抑制多肽，peptide根据文献中公布的肽片段自己合成。

参见图4，将HaCaT细胞铺于24孔板，24小时后用peptide(15M)和使用浓度的对比精华#1处理HaCaT 1小时，1小时后用1:1000稀释后的PsV16(图4A)，PsV18(图4B)假病毒感染HaCaT细胞，感染16小时后换新鲜培养基，继续培养至48小时，收细胞并裂解，用Promegaluciferase检测试剂盒检测细胞内Luciferase活性。***表示P<0.001，NS表示nosignificance。对比精华#1对PsV16和PsV18假病毒的入侵均有极显著抑制作用，抑制率分别为85.8％和71.5％；证明列裥菌素和藻蓝蛋白这两种大分子可以阻止病毒的侵染，peptide对假病毒的入侵无抑制作用。

3.3对HPV16和HPV18 E6、E7转录的影响。

将对比精华#1和对比精华#2分别处理HeLa和CaSki细胞48小时后，收细胞并检测E6和E7的mRNA水平。E6和E7各设计三对qRT-PCR引物，根据检测结果选取溶解曲线和CT值较好的一对引物用于本实验。

参见图5；HeLa(A)和CaSki(B)细胞传代至6孔板中，加药处理时的细胞浓度为50％左右，使用浓度的对比精华#1和稀释至0.0156％的对比精华#2处理HeLa及CaSki 48小时，收细胞，TriZol提取总RNA，反转录试剂盒反转录为cDNA，通过qRT-PCR检测E6和E7的mRNA水平。***表示P<0.001，NS表示no significance。对比精华#1和对比精华#2处理HeLa和CaSki48小时对HPV18和HPV16的E6和E7的转录并无抑制作用，对比精华#1对HeLa中的E6和E7的转录有一定程度的促进作用。

参见图6，其为精华液#1，对比精华#1和对比精华#2对HPV18、HPV16E6和E7转录的影响。将HeLa和CaSki细胞传代至6孔板，使细胞密度达到50％，将精华液#1稀释5倍，对比精华#2稀释至0.0156％，对比精华#1为使用浓度，处理HeLa和CaSki细胞，8h后收细胞，提取总RNA，取3g总RNA反转录为cDNA，进行qRT-PCR实验。***表示P<0.001，NS表示nosignificance。

其中，精华液#1为本发明提供的私密修护精华液，对比精华#1为含有列裥菌素和藻蓝蛋白；对比精华#2仅含有生物叶黄素。从图中可见，对比精华#1和对比精华#2处理HeLa和CaSki 8小时对HPV18和HPV16的E6、E7的转录没有影响，精华液#1处理HeLa和CaSki 8小时可以显著抑制HPV18和HPV16的E6、E7的转录。

3.4精华液对p53蛋白水平的影响。

将精华液#1稀释5倍(使用浓度的情况下会造成细胞凋亡)，对比精华#2稀释至0.0156％，对比精华#1不稀释，处理HeLa和CaSki 8小时后，收取并裂解细胞，使用PCA蛋白定量试剂盒检测蛋白浓度，根据蛋白浓度进行WB检测精华液#1，对比精华#1，对比精华#2处理8小时后的细胞内p53的蛋白水平。结果显示精华液#1处理HeLa和CaSki 8小时后，细胞内p53水平略有降低(钝化P53，可以诱导被病毒感染的细胞凋亡和防止其迁移，进而降低病毒载量)，对比精华#1和对比精华#2处理后HeLa和CaSki胞内p53蛋白水平均无变化(目的是仅为了筛选出来的原料对P53蛋白水平的影响)。

参见图7，其为精华液#1，对比精华#1和对比精华#2处理HeLa和CaSki48小时对p53的影响。HeLa和CaSki细胞传代至6孔板，使细胞密度达到50％，将精华液#1稀释5倍，对比精华#2稀释至0.0156％，对比精华#1为使用浓度(不稀释)，处理HeLa和CaSki 8小时，收细胞并裂解制备细胞裂解液，PCA测定裂解液蛋白浓度，根据蛋白浓度取等量蛋白上样SDS-PAGE，用p53、actin(内参)抗体检测HeLa及CaSki细胞内p53水平和actin水平。

4.针对对比精华#2在使用浓度下造成细胞凋亡的原因。

参见图8，细引起细胞凋亡是可以降低病毒载量，防止病毒侵染别的正常细胞。含有生物叶黄素的对比精华#2影响细胞的骨架，造成细胞死亡，靶向微管(微管对于细胞的发育和以及细胞中的病毒转运是不可少的)，通过调节微管相关的P70S6激活酶，微管蛋白抑制剂可以激活细胞内源性凋亡途径来发挥作用，用实验充分的证明了减少P70S6K的活性，可以证明限制病毒的转译和诱导细胞的凋亡，间接性证明减少了病毒的扩散。从而介导病毒在细胞质中的运输，防止病毒微粒沿着微管运输至细胞核，减少病毒扩散复制，降低病毒载量。

5.针对精华液#1对炎性转录因子NF-κB的抑制率的实验测试，选用IBMX.3一种广谱的磷酸二酯酶(PDE)抑制剂去激活已经被病毒侵染的细胞，然后再培养液中的一组加入本发明提供的精华液#1，一组不添加作为对照组，然后测量有活性的NF-Kb，结果参见图9。

实施例1

本实施例提供一种私密修护精华液，按照质量份包括以下组分：裂裥菌素1份；生物叶黄素5份；金丝桃苷0.3份；藻蓝蛋白1份；毕赤酵母提取物20份；增稠剂1份；水71.7份。

实施例2

本实施例提供一种私密修护精华液，按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.1份；生物叶黄素0.05份；金丝桃苷0.08份；藻蓝蛋白0.05份；毕赤酵母提取物3份；增稠剂0.2份；水96.52份。

实施例3

本实施例提供一种私密修护精华液，按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.2份；生物叶黄素0.1份；金丝桃苷0.12份；藻蓝蛋白0.2份；毕赤酵母提取物8份；增稠剂0.4份；水90.98份。

实施例4

本实施例提供一种私密修护精华液，按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.6份；生物叶黄素2份；金丝桃苷0.21份；藻蓝蛋白0.6份；毕赤酵母提取物12份；增稠剂0.7份；水83.89份。

实施例5

本实施例提供一种私密修护精华液，按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.4份；生物叶黄素1份；金丝桃苷0.7份；藻蓝蛋白0.4份；毕赤酵母提取物10份；增稠剂0.6份；水87.43份。

实施例6

本实施例提供一种私密修护精华液，按照质量份包括以下组分：裂裥菌素(粉末版，95％含量)0.3份；生物生物叶黄素(卵磷脂包裹，千分之一含量)0.5份；金丝桃苷0.1份；藻蓝蛋白0.3份；毕赤酵母提取物5份；增稠剂0.5份；水93.3份。

实施例7

本实施例提供一种私密修护精华液，按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.7份；生物叶黄素3份；金丝桃苷0.2份；藻蓝蛋白0.7份；毕赤酵母提取物15份；增稠剂0.8份；水79.6份。

实施例8

本实施例提供一种私密修护精华液，按照质量份包括以下组分：裂裥菌素0.8份；生物叶黄素4份；金丝桃苷0.26份；藻蓝蛋白0.8份；毕赤酵母提取物17份；增稠剂0.9份；水76.24份。

最后应说明的是：以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对其限制；尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明各实施例技术方案的精神和范围。