一种分离检测缬沙坦氨氯地平药物组合物中对映异构体的方法

技术领域

本发明属于药物分析领域，具体涉及一种分离检测缬沙坦氨氯地平药物组合物中对映异构体的方法。

背景技术

缬沙坦氨氯地平片为缬沙坦和苯磺酸氨氯地平的复方制剂，适用于治疗原发性高血压，主要用于那些单独采用氨氯地平或缬沙坦等药物治疗后效果不佳的高血压患者；缬沙坦为N-(1-戊酰基)-N-[4-[2-(1H-四氮唑-5-基)苯基]苄基]-L-缬氨酸，缬沙坦中含有1个手性中心，存在1对对映异构体，由于R-对映体药物活性远低于S-对映体，故需要控制R-对映体(缬沙坦对映异构体)的限度。

现有技术中，《中国药典》2020年版四部中是以α-酸性糖蛋白柱(AGP)为色谱柱，pH7.0磷酸盐缓冲液-异丙醇(98:2)为流动相，在波长为227nm下分离检测缬沙坦原料中的对映异构体；该方法存在AGP柱使用条件严苛，且使用寿命短等问题。

公开号为CN114689731A的中国专利文献公开了一种缬沙坦对映异构体的检测方法，检测条件为：OD色谱柱，以正已烷为流动相A，含0.1％三氟乙酸的乙醇为流动相B，流速0.5～1.0mL/min，柱温20～40℃，检测波长为210～270nm；该方法为正相液相色谱法，OD色谱柱价格昂贵，对杂质承受能力低，使用寿命短，且利用梯度洗脱，方法较为复杂，同时基于手性色谱柱的HPLC法重复性差，实验室间的方法学转移难度大。

公开号为CN115248262A的中国专利文献公开了一种缬沙坦及对映异构体的分离检测方法，该发明采用CHIRALPAK IA色谱柱，流动相为正相混合溶剂正己烷-异丙醇，在流速为0.8～1.2mL/min，色谱柱温度为33～37℃，检测波长为227nm的条件下进行分离检测。CHIRALPAK IA色谱柱是将淀粉-3,5-二甲苯基氨基甲酸酯键合在硅胶表面作为填料，价格昂贵，且该方法仅适用于单独缬沙坦中对映异构体的检测。

为了克服上述现有技术的不足，有必要开发一种易于实施、抗干扰能力强、方法简单、重复性高、实验室之间易于进行方法学转移的基于C18反相色谱柱的HPLC法用于分离检测缬沙坦氨氯地平药物组合物中的对映异构体。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了一种基于C18反相色谱柱的分离检测缬沙坦氨氯地平药物组合物中对映异构体的方法，该方法分离度高，操作简便易行，能够更好地控制缬沙坦氨氯地平药物组合物的产品质量。

具体采用的技术方案如下：

一种分离检测缬沙坦氨氯地平药物组合物中对映异构体的方法，使用C18为填料的反相色谱柱，以含有三乙醇胺的乙腈-水作为流动相，利用等度洗脱对缬沙坦氨氯地平药物组合物中的缬沙坦对映异构体进行HPLC分离测定。

与现有技术中使用的α-酸性糖蛋白柱或OD色谱柱等相比，C18色谱柱寿命长、通用性好，pH值耐受范围宽，本发明利用常见的、易于获得的C18色谱柱即可实现缬沙坦对映异构体的分离测定，且分离检测效果好，另外，本发明以含有三乙醇胺的乙腈-水为流动相，三乙醇胺能够与缬沙坦对映异构体通过氢键等非共价键结合形成可逆的非对映体配合物，从而实现缬沙坦和缬沙坦对映异构体的分离。

优选的，所述的C18为填料的反相色谱柱选用Welch Xtimate C18，150×4.6mm，3μm。上述型号的色谱柱的性能更好，可耐受的pH值范围更宽，达到1.0～12.5。

优选的，所述的流动相中乙腈和水的体积比为45～50：50～55。

进一步优选的，所述的流动相中，三乙醇胺的体积占乙腈和水的总体积的0.2-0.4％。当流动相中的三乙醇胺含量在上述范围时，检测效果好。

所述的HPLC的色谱条件包括：

流动相流速0.8～1.0mL/min；

色谱柱温度28～30℃；

检测器采用紫外检测器，检测波长为230nm。

进一步优选的，所述的HPLC的色谱条件包括：流动相流速0.8mL/min；色谱柱温度30℃。

取缬沙坦氨氯地平药物组合物适量，研细，使用流动相溶解后过滤，制备成缬沙坦浓度为0.4-0.6mg/mL的供试品溶液后，再进行HPLC分离测定。

优选的，供试品溶液的进样量为5～10μL。

进一步优选的，供试品溶液的进样量为10μL。

与现有技术相比，本发明的有益效果在于：

(1)本发明方法采用常见的、易于获得的C18色谱柱即可实现缬沙坦氨氯地平药物组合物中对映异构体的分离检测，且分离检测效果好，使用的反相色谱系统具有色谱介质性能稳定，pH值耐受范围宽，分离能力强，易于操作等优点，能够更加方便的实现缬沙坦氨氯地平药物组合物的质量控制。

(2)本发明选用含有三乙醇胺的乙腈-水作为流动相，其中三乙醇胺能与缬沙坦对映异构体通过氢键等非共价键结合形成可逆的非对映体配合物，使缬沙坦和缬沙坦对映异构体在固定相的保留时间和分配不同而得到分离，本发明检测方法定量限为0.1467μg/mL，检测限为0.0734μg/mL，专属性良好、准确度良好、且对仪器设备要求低、灵敏度良好、进样精密度和重复性好，实际检测效果良好。

附图说明

图1为实施例1中系统适用性溶液的色谱图。

图2为实施例1中供试品溶液的色谱图。

图3为对比例1中系统适用性溶液的色谱图。

图4为对比例2中系统适用性溶液的色谱图。

具体实施方式

下面结合实施例与附图，进一步阐明本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明，而不用于限制本发明的范围。

在以下实施例中，高效液相色谱仪选用Agilent 1260，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

1.供试品

2.对照品

3.标准规定

(1)系统适用性

系统适用性溶液色谱图中，缬沙坦峰与缬沙坦对映异构体峰的分离度应不低于2.0。

(2)供试品溶液中对映异构体含量的计算公式：

式中：W

W

A

A

D

D

C

实施例1

(1)溶液配制

稀释液：乙腈-水(45:55)，1L的乙腈-水中加入4mL的三乙醇胺；

供试品溶液：取缬沙坦氨氯地平药物组合物，研细后精密称取细粉111.83mg，置于100mL量瓶中，加稀释液适量，超声15min使主成分溶解，放冷至室温，而后加稀释液至刻度，摇匀过滤制成供试品溶液，供试品溶液中缬沙坦浓度约为0.52mg/mL；

对照品贮备液：取缬沙坦对映异构体对照品10.12mg，置于50mL量瓶中，加稀释液适量，超声使溶解，放冷至室温，而后加稀释液至刻度，摇匀制成对照品贮备液；

对照品溶液：精密量取对照品贮备液0.5mL，置于20mL量瓶中，加稀释液至刻度，摇匀制成对照品溶液；

系统适用性溶液：称取缬沙坦对照品和苯磺酸氨氯地平对照品各10.41mg，置20mL量瓶中，加稀释液适量使溶解，加入对照品贮备液0.5mL，加稀释液至刻度，摇匀制成系统适用性溶液。

(2)色谱条件

色谱柱：Welch Xtimate C18，150×4.6mm，3μm；

流动相：乙腈-水(45:55)，1L的乙腈-水中加入4mL的三乙醇胺；

柱温：30℃；

流速：0.8mL/min；

采用紫外检测器于波长230nm下检测；

(3)样品测试

精密量取系统适用性溶液10μL注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件进行HPLC检测，记录色谱图(图1)；

精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μL注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件分别进行HPLC检测，再计算供试品中缬沙坦对映异构体的含量。

(4)实验结果(4.1)系统适用性

结合系统适用性溶液色谱图和上表结果可知，缬沙坦峰与缬沙坦对映异构体峰的分离度大于2.0，说明本发明方法可用于缬沙坦氨氯地平药物组合物中对映异构体的分离检测。

(4.2)供试品溶液和对照品溶液的色谱图

供试品溶液的色谱图如图2所示，缬沙坦与缬沙坦对映异构体依次出峰且分离度良好，计算得到供试品溶液中对映异构体的含量为0.15％，说明供试品溶液中的对映异构体符合企业内控标准。

实施例2

(1)溶液配制

稀释液：乙腈-水(50:50)，1L的乙腈-水中加入2mL的三乙醇胺；

供试品溶液：取缬沙坦氨氯地平药物组合物，研细后精密称取细粉111.69mg，置于100mL量瓶中，加稀释液适量，超声15min使主成分溶解，放冷至室温，而后加稀释液至刻度，摇匀过滤制成供试品溶液，供试品溶液中缬沙坦浓度约为0.49mg/mL；

采用与实施例1相同的对照品贮备液和对照品溶液。

(2)色谱条件

色谱柱：Welch Xtimate C18，150×4.6mm，3μm；

流动相：乙腈-水(50:50)，1L的乙腈-水中加入2mL的三乙醇胺；

柱温：28℃；

流速：1.0mL/min；

采用紫外检测器于波长230nm下检测；

(3)样品测试

精密量取供试品溶液和对照品溶液各5μL注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件分别进行HPLC检测，再计算供试品中缬沙坦对映异构体的含量。

(4)实验结果(4.1)供试品溶液和对照品溶液的色谱图

通过上述数据计算得到供试品溶液中对映异构体的含量为0.16％，说明供试品溶液中的对映异构体符合企业内控标准。

实施例3

(1)溶液配制

稀释液：乙腈-水(50:50)，1L的乙腈-水中加入3mL的三乙醇胺；

供试品溶液：取缬沙坦氨氯地平药物组合物，研细后精密称取细粉113.75mg，置于100mL量瓶中，加稀释液适量，超声15min使主成分溶解，放冷至室温，而后加稀释液至刻度，摇匀过滤制成供试品溶液，供试品溶液中缬沙坦浓度约为0.56mg/mL；

采用与实施例1相同的对照品贮备液和对照品溶液。

(2)色谱条件

色谱柱：Welch Xtimate C18，150×4.6mm，3μm；

流动相：乙腈-水(50:50)，1L的乙腈-水中加入3mL的三乙醇胺；

柱温：30℃；

流速：1.0mL/min；

采用紫外检测器于波长230nm下检测；

(3)样品测试

精密量取供试品溶液和对照品溶液各10μL注入高效液相色谱仪，按照上述色谱条件分别进行HPLC检测，再计算供试品中缬沙坦对映异构体的含量。

(4)实验结果(4.1)供试品溶液和对照品溶液的色谱图

通过上述数据计算得到供试品溶液中对映异构体的含量为0.12％，说明供试品溶液中的对映异构体符合企业内控标准。

对比例1

对比例1的检测方法与实施例1相同，区别仅在于：

(1)稀释液和流动相中未在乙腈-水中加入三乙醇胺；

(2)未制备供试品溶液和对照品溶液，但增加苯磺酸氨氯地平定位溶液和缬沙坦定位溶液：分别称取苯磺酸氨氯地平对照品和缬沙坦对照品约10mg，按照制备对照品溶液的方法制备苯磺酸氨氯地平定位溶液和缬沙坦定位溶液；

(3)测试样品溶液不同，本对比例中主要对苯磺酸氨氯地平定位溶液、缬沙坦定位溶液、对照品贮备液和系统适用性溶液进行检测；

其他步骤与检测条件和对比例1相同。

本对比例的实验结果如下：

从上表结果以及图3可以看出，采用此方法，各物质出峰较早，且系统适用性溶液中缬沙坦对映异构体峰与缬沙坦峰无法有效分离，证明了流动相中添加三乙醇胺的必要性，该色谱条件不适用。

对比例2

对比例2的检测方法与对比例1相同，区别仅在于：稀释液和流动相为甲醇-水(42:58)，1L的甲醇-水中加入4mL的三乙醇胺；其他步骤与检测条件和对比例1相同。

本对比例的实验结果如下：

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从上表结果以及图4可以看出，采用此方法，各物质出峰较早，且系统适用性溶液中缬沙坦对映异构体峰与缬沙坦峰无法有效分离，该色谱条件不适用。

方法分析

为了验证本发明的缬沙坦氨氯地平药物组合物中对映异构体的分离检测方法，进行系统的方法验证，包含精密度、准确度、重复性和定量限等，其验证结果如下：

(1)中间精密度：采用向供试品溶液中定量添加杂质的考察方式，6份供试品溶液中，对映异构体含量的RSD为1.7％，小于10％，说明该方法中间精密度良好。

(2)准确度：3个浓度9份供试品溶液中对映异构体的回收率及平均值均在90％～108％之间，RSD小于5.0％，表明方法准确度良好，适合缬沙坦氨氯地平药物组合物中对映异构体检测。

(3)重复性：采用向供试品溶液中定量添加杂质的考察方式，6份供试品溶液中，对映异构体含量的RSD为0.8％，小于10％，说明该方法重复性良好。

(4)定量限：缬沙坦对映异构体定量限溶液连续进样6次，保留时间的RSD小于1.0％，峰面积的RSD小于5.0％，表明灵敏度良好，能够保证对映异构体的准确测定。

综上，通过系统适用性、精密度、准确度、重复性和定量限等系统的方法验证结果表明，本发明的缬沙坦氨氯地平药物组合物中对映异构体的分离检测方法满足本品对映异构体检测要求，可以有效评价本品质量。

以上所述的实施例对本发明的技术方案进行了详细说明，应理解的是以上所述的仅为本发明的具体实施例，并不用于限制本发明，凡在本发明的原则范围内所做的任何修改、补充或类似方式替代等，均应包含在本发明的保护范围之内。