一种四氢异喹啉中L-酒石酸残留量的测定方法

技术领域

本申请涉及一种四氢异喹啉中L-酒石酸残留量的测定方法，属于药品分析技术领域。

背景技术

四氢异喹啉作为尿道解痉药琥珀酸索利那新的关键起始原料，是通过向游离的1-苯基-1,2,3,4,-四氢异喹啉中加入L-酒石酸水溶液旋光拆分制得，在此工艺中可能存在少量的酒石酸残留，通过高效液相色谱(HPLC)法对其残留量进行研究并控制，是药物质量控制的一种常用手段，要确保研究和控制的精准性，关键就在于对药品进行检测时，要保证检测方法的可靠与耐用，目前报道的检测酒石酸的方法主要有正相手性分离使用手性色谱柱，该方法操作相对复杂，成本较高，不利于日常检测。

发明内容

有鉴于此，本申请提供一种四氢异喹啉中酒石酸残留量的检测方法，具有很好的耐用性和重复性，系统适用性稳定，从而实现在四氢异喹啉中对手性拆分剂L-酒石酸进行研究并控制残留量。

具体地，本申请是通过以下方案实现的：

一种四氢异喹啉中L-酒石酸残留量的测定方法，采用高效液相色谱法，以十八烷基硅烷键合硅胶为色谱柱的填充剂实施分离，利用UV检测器进行定量分析，色谱条件为：流动相由流动相A和流动相B组成，所述流动相A为pH值为2.8～3.2的水相，占流动相总量的90～100％(V/V)；流动相B为乙腈，流动相进行梯度洗脱，流速为0.6～0.8mL/min；柱温为28～32℃；检测波长为205～210nm，溶解液为0.2％磷酸溶液-乙腈(95-5)；

所述梯度洗脱条件为：

上述方法以酒石酸在190-220nm有较强的紫外吸收，基于该特点，我们开发了反相色谱法紫外检测器的方法，考虑到检测灵敏度和流动相的截止波长最终选定210nm作为检测波长。十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，所形成的色谱柱为耐酸性色谱柱，以一定比例的水-有机相为流动相进行梯度度洗脱，从而有效研究并控制L-酒石酸的残留量，该方法具有操作简单、测试灵敏、结果准确可靠与重现性好等优点。

进一步的，作为优选：

所述柱温优选为30℃。

所述流速优选为0.7mL/min。

所述色谱柱的规格为：长度250mm，内径4.6mm，填料粒径3μm。

所述流动相A的pH值以磷酸调节，pH为3.0。

所述检测波长为210nm。

上述方案应用于四氢异喹啉中L-酒石酸残留量的测试，具有再现性好、系统适用性好等优点。

附图说明

图1为实施例1系统适用性试验系统适用性溶液HPLC检测图谱；

图2是实施例1线性关系图；

图3是实施例1重复性实验中供试品重复性试验HPLC检测图谱；

图4是实施例2系统适用性溶液HPLC检测图谱；

图5是实施例3系统适用性溶液HPLC检测图谱；

图6是实施例4系统适用性溶液HPLC检测图谱；

图7是实施例5系统适用性溶液HPLC检测图谱；

图8是实施例6系统适用性溶液HPLC检测图谱；

图9是实施例7系统适用性溶液HPLC检测图谱。

具体实施方式

下面结合具体实施例进一步阐述本发明，但不限于本实施的范围。在以下各实施例中，未详细描述的各种过程和方法是本领域中公知的常规方法，所用试剂未标明来源和规格的均为市售分析纯或色谱纯。

实施例1

仪器：采用高效液相色谱法，安捷伦1260；电子天平，梅特勒XSR 105；pH计，梅特勒FE28。

试剂：磷酸(分析纯)，国药集团；乙腈(色谱纯)，Merck。

色谱条件：流动相A为水(磷酸调pH至3.0)；流动相B为乙腈；色谱柱WatersAtlantistT3 4.6×250mm，5μm；柱温30℃；检测波长210nm；进样量20μl；流速0.7ml/min；溶剂：0.2％磷酸溶液：乙腈＝95:5(v/v)。

所述流动相A和流动相B按照如下梯度程序进行梯度洗脱：

实验步骤：

(1)杂质贮备液：精密称取L-酒石酸适量至容量瓶中，用溶剂溶解并稀释成0.2mg/ml的杂质贮备液。

(2)杂质对照溶液：精密移取杂质贮备液1.0ml至20ml容量瓶中，用溶剂溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

(3)系统适用性溶液：精密称取四氢异喹啉适量，精密移取杂质贮备液1.0ml至同一容量瓶中摇匀。

(4)供试品溶液：精密称取四氢异喹啉约40mg，用20ml溶剂使其溶解。

(5)杂质定位溶液：精密称取L-酒石酸适量至容量瓶中，用溶剂溶解并稀释成1.0mg/ml。

1、系统适用性试验

取溶解液、杂质定位溶液、系统适用性溶液进样，记录四氢异喹啉和L-酒石酸保留时间、分离度及理论塔板数，结果如下表1和图1。

表1：各溶液中L-酒石酸保留时间

2、线性考察

为准确测定L-酒石酸，进行线性考察，即设计L-酒石酸在一定范围内峰面积与浓度之间的关系，各线性浓度均从定量限浓度开始试验，具体如下：取L-酒石酸适量，精密称定，分别加溶解液溶解并稀释制成一系列浓度的L-酒石酸溶液，照上述方法进行测定，记录色谱图，以各L-酒石酸溶液浓度为横坐标x，峰面积为纵坐标y，做线性回归曲线，结果见表2和图2。试验结果表明，L-酒石酸在浓度范围内，浓度与峰面积均呈良好的线性关系。

表2：L-酒石酸线性方程

。

3、重复性试验

平行配制六份供试品溶液，分别精密量取20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，试验结果见表3及图谱3。

表3：供试品重复性试验结果

平行试验6份样品的有关物质测定结果基本一致，L-酒石酸峰面积RSD值均小于15.0％。试验结果表明，该方法重复性好。

4、溶液稳定性试验

将供试品溶液、系统适用性溶液、对照溶液，在室温条件放置0h、2.5h、5h、12.5h、20h、27.5h、35h、51h、62.5h、4.9天后，精密量取20μl注入液相色谱仪，记录色谱图。试验结果见表4～表6。

表4：系统适用性溶液稳定性结果

表5：供试品溶液稳定性结果(杂质含量以面积归一化法计算)

表6：对照溶液稳定性结果

由表4～表6知对照品溶液，供试品溶液及系统适用性溶液均在4.9天内稳定，峰面积RSD值均＜10.0％。

实施例2

色谱条件：流速0.6ml/min。

其他色谱条件均同实施例1。

取系统适用性溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

系统适用性溶液有关物质检测结果见表7，所得HPLC图谱见图4，通过表7可以看出，所有的杂质峰有效分离，主峰与相邻杂质峰完全分离。

表7：系统适用性溶液有关物质检测结果

实施例3

色谱条件：流速0.8ml/min。

其他色谱条件均同实施例1。

取系统适用性溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

系统适用性溶液有关物质检测结果见表8，所得HPLC图谱见图5，通过表8可以看出，所有的杂质峰有效分离，主峰与相邻杂质峰完全分离。

表8：系统适用性溶液有关物质检测结果

实施例4

色谱条件：柱温28℃。

其他色谱条件均同实施例1。

取系统适用性溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

系统适用性溶液有关物质检测结果见表9，所得HPLC图谱见图6，通过表9可以看出，所有的杂质峰有效分离，主峰与相邻杂质峰完全分离。

表9：系统适用性溶液有关物质检测结果

实施例五

色谱条件：柱温32℃。

其他色谱条件均同实施例1。

取系统适用性溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

系统适用性溶液有关物质检测结果见表10，所得HPLC图谱见图7，通过表10可以看出，所有的杂质峰有效分离，主峰与相邻杂质峰完全分离。

表10：系统适用性溶液有关物质检测结果

实施例6

色谱条件：流动相A为水(磷酸调pH2.8)。

其他色谱条件均同实施例1。

取系统适用性溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

系统适用性溶液有关物质检测结果见表11，所得HPLC图谱见图8，通过表11可以看出，所有的杂质峰有效分离，主峰与相邻杂质峰完全分离。

表11：系统适用性溶液有关物质检测结果

实施例7

色谱条件：流动相A为水(磷酸调pH3.2)。

其他色谱条件均同实施例1。

取系统适用性溶液20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。

系统适用性溶液有关物质检测结果见表12，所得HPLC图谱见图9，通过表12可以看出，所有的杂质峰有效分离，主峰与相邻杂质峰完全分离。

表12：系统适用性溶液有关物质检测结果

上述方案运用在四氢异喹啉中，对四氢异喹啉的具体影响案例。

表13：采用本申请方法检测四氢异喹啉中酒石酸残留的效果汇总表

对比例1：常规L-酒石酸残留量的测定方法

目前报道的检测酒石酸的方法主要有正相手性分离使用手性色谱柱，该方法操作相对复杂，成本较高，不利于日常检测。

对比例2：四氢异喹啉的品质监测方式

四氢异喹啉作为琥珀酸索利那新中的起始物料，其质量关系到了琥珀酸索利那新的质量，故开发了起始物料四氢异喹啉中酒石酸的残留检测方法，该方法采用反相液相色谱法-UV检测，优点是仪器常见，使用广泛，不需要购买昂贵的正相色谱柱，检测灵敏度与正相一致。