一种肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法和药物筛选方法及应用

技术领域

本公开涉及生物技术领域，具体地，涉及一种肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法、该方法构建的肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型、药物筛选方法及应用。

背景技术

膝骨关节炎（Knee osteoarthritis，KOA）是一种慢性退行性疾病，是最常见的关节炎类型。KOA的主要病理特征是关节软骨退变、软骨下骨硬化、滑膜炎症等，常表现为膝关节疼痛、畸形、肌肉无力、功能障碍等，致残率达53%。从中医角度讲，KOA归属于“痹症”范畴，依据病因病机，多将KOA分为肝肾亏虚、湿热痹阻、气滞血瘀、寒湿痹阻、气血虚弱5个证型，其中，仅肝肾亏虚证（Liver-kidney deficiency，LKD）即占总患病数的40.4%，远超第二位的湿热痹阻证（17.9%），是该病的核心证候。

高血压（Hypertension）是一种以动脉血压持续升高为主要表现的心脑血管疾病，诊断标准为收缩压大于≥140 mmHg或舒张压≥90 mmHg。据统计，70%的老年人患有高血压。高血压在中医中属于“眩晕”、“头痛”等范畴，分为肝肾亏虚、气血两虚、阴阳两虚、肝火上炎、痰浊上蒙、瘀血阻窍6个证型，其中，老年患者亦以肝肾亏虚为其临床最常见的核心证候，70岁及以上患者占总患病数的21.7%，且随着年龄增长，肝肾亏虚证呈上升趋势，80岁及以上患者占总患病数的26.2%。

临床研究表明，膝骨关节炎患者常伴随高血压并发症，两者的共病率为84.5%。西医认为两病有年龄、肥胖、炎症、激素等共同致病因素，中医认为老年人素体虚弱，多肝肾亏虚，筋骨失养，导致软骨的退行性病变；同时，肝风内动、肾精亏损，引起虚火上炎，易感高血压病眩晕症，即两病均以肝肾亏虚为本。但是，目前尚未见膝骨关节炎合并高血压动物模型的报道，更未见以肝肾亏虚型结合上述两种病症的模型。因此，亟需一种构建一种肝肾亏虚型膝骨关节炎合并高血压动物模型。

发明内容

本公开的目的是提供一种肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法、该方法构建的肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型、药物筛选方法及应用，该模型的共病和证候表征均与临床观察结果相一致，能够为肝肾亏虚型膝骨关节炎与高血压共病的创新药物研发、上市品种再评价和作用机制研究提供可靠的实验载体。

为了实现上述目的，本公开第一方面提供一种膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法，所述方法包括如下步骤：

S1、使自发性高血压大鼠的左后肢和/或右后肢的前交叉韧带断离，若前交叉韧带断离后的大鼠与膝骨关节炎假手术合并高血压组的大鼠相比，膝骨关节炎指标的差异具有统计学意义，则得到膝骨关节炎结合高血压病症的大鼠；

S2、向膝骨关节炎结合高血压病症的大鼠的患侧肢肌肉内注射氢化可的松注射液以进行肝肾亏虚证诱导，注射剂量为每天5-100mg/kg，连续注射5-30天，若肝肾亏虚证诱导的大鼠与膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的大鼠相比，肝肾亏虚证指标的差异具有统计学意义，则得到肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型。

可选地，所述自发性高血压大鼠为5-20周龄、160-200g的SPF级自发性高血压雄性大鼠。

可选地，所述自发性高血压大鼠的收缩压为160-180mmHg，舒张压为120-140mmHg，平均血压为140-160mmHg，心率为380-420bmp。

可选地，所述膝骨关节炎指标包括：TNF-α含量、IL-1β含量、患侧肢足底机械痛、双后肢负重差、患侧肢关节肿胀度、患侧肢摆动时间、患侧肢摆动速度、患侧肢步幅、患侧肢站立时间、患侧肢最大接触面积、患侧肢足印面积、患侧肢与健侧肢足印面积比、患侧肢最大强度、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数和骨小梁分离度。

可选地，所述注射剂量为每天25mg/kg，连续注射15天。

可选地，所述肝肾亏虚证的指标包括：TSH含量、ACTH含量、CORT含量、T含量、肾脏指数、脾脏指数和胸腺指数。

本公开第二方面第一方面所述的构建方法构建的动物模型的药物筛选方法，包括以下步骤：向动物模型的大鼠给予候选药物，并对给予药物的大鼠进行药效检测和比较；其中，所述动物模型包括：膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型和/或肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型。

本公开第三方面提供第一方面所述的构建方法构建的动物模型在筛选治疗或改善肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症药物的动物模型方面的应用。

本公开第四方面提供第一方面所述的构建方法构建的动物模型在筛选治疗或改善肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的药物方面的应用。

本公开第五方面提供第一方面所述的构建方法构建的动物模型在非诊断或治疗目的肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的发病机理的研究和药效评价方面的应用。

通过上述技术方案，本公开提供一种肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法、该方法构建的肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型及药物筛选方法，该模型的共病和证候表征均与临床观察结果相一致，能够为肝肾亏虚型膝骨关节炎与高血压共病的创新药物研发、上市品种再评价和作用机制研究提供可靠的实验载体。

本公开的其他特征和优点将在随后的具体实施方式部分予以详细说明。

附图说明

附图是用来提供对本公开的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与下面的具体实施方式一起用于解释本公开，但并不构成对本公开的限制。在附图中：

图1是本公开一种实施方式中WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组的大鼠的高血压指标检测数据图。

图2是本公开一种实施方式中WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组的大鼠的体重和肛温的测量数据图。

图3是本公开一种实施方式中SHR+KOA+LKD组的大鼠的体征状态变化图。

图4是本公开一种实施方式中WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠血清中TSH含量、ACTH含量、T含量和CORT含量数据图。

图5是本公开一种实施方式中WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠肝脏指数、肾脏指数、脾脏指数和胸腺指数数据图。

图6是本公开一种实施方式中WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠TNF-α含量和IL-1β含量数据图。

图7是本公开一种实施方式中WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠患侧肢足底机械痛、患侧肢及健侧肢负重差和患侧肢关节肿胀度数据图。

图8是本公开一种实施方式中WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠患侧肢摆动时间、摆动速度和步幅数据图。

图9是本公开一种实施方式中WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠患侧肢站立时间、最大接触面积、足印面积、患侧肢与健侧肢足印面积比、最大强度数据图。

图10是本公开一种实施方式中WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠右后肢（患侧肢）、右前肢、左后肢及左前肢的四肢支撑时相比数据图。

图11是本公开一种实施方式中WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠骨组织病理学结果图。

图12是本公开一种实施方式中WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数和骨小梁分离度的数据图。

具体实施方式

以下结合附图对本公开的具体实施方式进行详细说明。应当理解的是，此处所描述的具体实施方式仅用于说明和解释本公开，并不用于限制本公开。

本公开第一方面提供一种膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的构建方法，所述方法包括如下步骤：

S1、使自发性高血压大鼠的左后肢和/或右后肢的前交叉韧带断离，若前交叉韧带断离后的大鼠与膝骨关节炎假手术合并高血压组的大鼠相比，膝骨关节炎指标的差异具有统计学意义，则得到膝骨关节炎结合高血压病症的大鼠；

S2、向膝骨关节炎结合高血压病症的大鼠的患侧肢肌肉内注射氢化可的松注射液以进行肝肾亏虚证诱导，注射剂量为每天5-100mg/kg，连续注射5-30天，若肝肾亏虚证诱导的大鼠与膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的大鼠相比，肝肾亏虚证指标的差异具有统计学意义，则得到肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型。

本公开提供的动物模型可以从肝肾亏虚证症状、血管收缩压和舒张压、膝关节功能、膝关节软骨和软骨下骨病理改变等多个维度，全面、客观评价其共病与证候表征，该动物模型能够为老年膝骨关节炎与高血压共病的创新药物研发、上市品种再评价和作用机制研究提供可靠的实验载体。在本公开中，“差异具有统计学意义”指的是

在本公开的一种实施方式中，在步骤S1中，所述自发性高血压大鼠为5-20周龄、160-200g的SPF级自发性高血压雄性大鼠；优选为8周龄。

在一种实施方式中，所述自发性高血压大鼠的收缩压为160-180mmHg，舒张压为120-140mmHg，平均血压为140-160mmHg，心率为380-420bmp。

根据本公开，所述膝骨关节炎指标包括：TNF-α含量、IL-1β含量、患侧肢足底机械痛、双后肢负重差、患侧肢关节肿胀度、患侧肢摆动时间、患侧肢摆动速度、患侧肢步幅、患侧肢站立时间、患侧肢最大接触面积、患侧肢足印面积、患侧肢与健侧肢足印面积比、患侧肢最大强度、骨体积分数、骨小梁厚度、骨小梁数和骨小梁分离度。在本公开中，患侧肢与健侧肢足印面积比中的“健侧肢”指的是前交叉韧带未断离的后肢。

在本公开的一种实施方式中，前交叉韧带断离后的大鼠与膝骨关节炎假手术合并高血压组的大鼠相比，TNF-α含量和IL-1β含量显著升高，患侧肢足底机械痛显著降低，双后肢负重差显著增加，患侧肢关节肿胀度显著升高，患侧肢摆动时间显著增加，患侧肢摆动速度、患侧肢步幅、患侧肢站立时间、患侧肢最大接触面积、患侧肢足印面积、患侧肢与健侧肢足印面积比和患侧肢最大强度均显著降低，骨体积分数、骨小梁厚度和骨小梁数显著降低，骨小梁分离度显著增加。

根据本公开，所述肝肾亏虚证的指标包括：TSH含量、ACTH含量、CORT含量、T含量、肾脏指数、脾脏指数和胸腺指数。

在本公开一种优选实施方式中，肝肾亏虚证诱导的大鼠与膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的大鼠相比，TSH含量、ACTH含量、CORT含量、T含量、肾脏指数、脾脏指数和胸腺指数均显著降低。如图2和3所示，对肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的大鼠进行观察以及体重和肛温的监测，该模型的大鼠的体征状态发生变化包括：体重降低、精神倦怠、活动减少、反应迟钝、肢尾冷、蜷曲拱背、皮毛无光泽、倾向于聚集、阴囊收缩以及躁动易怒。

在本公开的一种实施方式中，肝肾亏虚证诱导的大鼠与膝骨关节炎假手术合并高血压组的大鼠相比，TNF-α含量和IL-1β含量显著升高，患侧肢足底机械痛显著降低，双后肢负重差显著增加，患侧肢关节肿胀度显著升高，患侧肢摆动时间显著增加，患侧肢摆动速度、患侧肢步幅、患侧肢站立时间、患侧肢最大接触面积、患侧肢足印面积、患侧肢与健侧肢足印面积比和患侧肢最大强度均显著降低，骨体积分数、骨小梁厚度和骨小梁数显著降低，骨小梁分离度显著增加。

在本公开的一种实施方式中，如图11所示，对膝骨关节炎结合高血压病症的大鼠和肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型的大鼠的膝关节骨组织病理学的检测，这两个模型大鼠的膝关节骨组织病理学变化包括：大鼠软骨边界模糊且凹凸不平、边缘碎片化、软骨细胞排列混乱、软骨丢失、潮线残缺并呈放射状、软骨厚度不均匀、软骨边缘破碎、软骨层变薄、肌纤维增多、软骨骨化、膝关节关节面凹凸不平、皮质骨连续性中断以及骨小梁排列紊乱。

本公开第二方面第一方面所述的构建方法构建的动物模型的药物筛选方法，包括以下步骤：向动物模型的大鼠给予候选药物，并对给予药物的大鼠进行药效检测和比较；其中，所述动物模型包括：膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型和/或肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型。

本公开第三方面提供第一方面所述的构建方法构建的动物模型在筛选治疗或改善肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症药物的动物模型方面的应用。

本公开第四方面提供第一方面所述的构建方法构建的动物模型在筛选治疗或改善肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的药物方面的应用。

本公开第五方面提供第一方面所述的构建方法构建的动物模型在非诊断或治疗目的肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的发病机理的研究和药效评价方面的应用。

下面通过实施例来进一步说明本公开，但是本公开并不因此而受到任何限制。

本公开实施例中涉及的原料、试剂、仪器和设备，如无特殊说明，均可通过购买获得。

本公开实施例中使用的大鼠来源如下：

SPF级自发性高血压雄性大鼠30只，8周龄，其体重范围为160-200g。SPF级Wistar-Kyoto雄性大鼠6只，8周龄，作为正常血压对照组，其体重范围为160-200g。

购自北京维通利华实验动物有限公司，实验动物生产许可证号：SCXK（京）2021-0006。

大鼠统一喂养在中国中医科学院中医基础理论研究所实验动物中心，动物室干净明亮，通风情况良好，饲养温度为18-22℃，湿度为45%-55%。

本公开实施例中使用的药物与试剂来源如下：

注射用氢化可的松琥珀酸钠（烟台东诚北方制药有限公司，国药准字H20084319）；

注射用青霉素钠（合肥中龙神力动物药业有限公司，兽药字120152659）；PBS缓冲液（武汉博士德生物工程有限公司，货号AR0030）；

白凡士林（南昌白云药业有限公司，登记号F20209990088）；

生理氯化钠溶液（石家庄四药有限公司，国药准字H20066533）；

促甲状腺激素（Thyroid stimulating hormone，TSH）、

促肾上腺皮质激素（Adrenocor ticotropic hormore，ACTH）、

睾酮（Testosterone，T）、

皮质酮（Corticosterone，CORT）、

肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）、

白细胞介素-1β（Interleukin-1β，IL-1β）

酶联免疫吸附试剂盒（上海酶联生物有限公司，货号分别为：YJ003045、YJ002875、YJ002868、YJ002893、YJ002859、YJ003057）。

络合碘（山东利尔康医疗科技股份有限公司，货号YZB/鲁青0044-2013）。

本公开实施例中使用的仪器：

CODA®-M1型小动物无创血压仪（美国KENT公司）；

NC12775型Von Frey纤维丝测痛仪（上海玉研科学仪器有限公司）；

BIO-SMALGO型爪压力测痛仪（法国BIOSEB公司）；

YLS-11A通道式鼠足支撑力测量仪（济南益延科技发展有限责任公司）；

Catwalk步态分析仪（荷兰Noldus公司）；

BMJ-1B型生物组织包埋机（天津天利航空机电有限公司）；

BS224S型电子天平（德国Sartorius公司）；

L500-A型低速自动平衡离心机（长沙湘仪离心机仪器有限公司）；

ECLIPSE Ts2型倒置光学显微镜（日本Nikon公司）；

MK3型全自动酶标仪（美国赛默飞公司）；

游标卡尺（桂林广陆数字测控有限公司）；

电子体温计（广东健奥科技有限公司）。

本公开使用SPSS 20.0软件进行数据处理，符合正态分布的计量资料以均值±标准差（s）描述，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD检验。不符合正态分布的数据用中位数（四分位间距）[MPP]描述方差齐则采用非参数检验。以

实施例1

本实施例用于说明构建肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型。

（1）动物分组和喂养：

10只SPF级Wistar-Kyoto大鼠作为正常对照组（记为：WKY），

30只SPF级SHR大鼠按照随机数字表法分为3组，每组10只，分别设置为：

膝骨关节炎假手术合并高血压组（记为：SHR+Sham KOA）、

膝骨关节炎合并高血压组（记为：SHR+KOA）、

肝肾亏虚型膝骨关节炎合并高血压组（记为：SHR+KOA+LKD），

将上述大鼠统一喂养在中国中医科学院中医基础理论研究所实验动物中心，动物室干净明亮，通风情况良好，饲养温度为18-22℃，湿度为45%-55%，喂养1周后开始造模。

（2）动物模型构建：

膝骨关节炎造模：麻醉大鼠，剪去SHR+KOA组和SHR+KOA+LKD组大鼠右后肢（患侧肢）膝关节周围1cm

肝肾亏虚证诱导：SHR+KOA+LKD组大鼠右后肢（患侧肢）连续15天肌内注射25mg·kg

实施例2

本实施例用于说明高血压指标：收缩压、舒张压、平均血压和心率的检测，每周检测一次。

将WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组的大鼠固定后放入37℃恒温箱内，持续加热10-15分钟，使其尾动脉完全扩张，随后将其尾部迅速插入加压脉套并使尾根部紧贴加压脉套，采用CODA®-M1大小鼠血压单通道实时监测仪器测量每只大鼠的收缩压（SBP）、舒张压（DBP）、平均血压（MAP）和心率（HR），重复测量三次，取平均值。

结果如图1所示：WKY组大鼠的收缩压（图1A）、舒张压（图1B）、平均血压（图1C）、心率（图1D）分别为130-150mmHg、80-100mmHg、100-120mmHg、330-350bmp；SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠的收缩压、舒张压、平均血压、心率分别为160-180mmHg、120-140 mmHg、140-160 mmHg、380-450 bmp，SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠的高血压指标显著高于WKY组（

实施例3

本实施例用于说明肝肾亏虚证诱导指标的检测，并证明肝肾亏虚证诱导成功。

（1）在SHR+KOA+LKD组大鼠注射氢化可的松之后，观察大鼠的体征状态变化，并对WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠进行体重测量和肛温测量，每周检测一次。

结果如图2和图3所示：SHR+KOA组大鼠活动自如、反应灵敏、毛发润泽；相反地，如图3，SHR+KOA+LKD组大鼠则表现体重降低、精神倦怠、活动减少、反应迟钝、肢尾冷、蜷曲拱背、皮毛无光泽、倾向于聚集、阴囊收缩以及躁动易怒，这些症状为肝肾亏虚证典型症状；如图2A，SHR+KOA+LKD组大鼠与SHR+KOA组大鼠相比，体重增长显著减缓（

（2）在SHR+KOA+LKD组大鼠最后一次注射氢化可的松后，于WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠的眼后静脉丛采血，4℃离心15min（3000r·min

结果如图4和图5所示：与SHR+KOA组相比，SHR+KOA+LKD组大鼠血清的TSH含量、ACTH含量、CORT含量、T含量均显著降低（

实施例4

本实施例用于说明膝骨关节炎指标的检测，并证明膝骨关节炎造模成功。

（1）在SHR+KOA+LKD组大鼠最后一次注射氢化可的松后，于WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠的眼后静脉丛采血，4℃离心15min（3000r·min

结果如图6所示：与SHR+Sham KOA组相比，SHR+KOA组与SHR+KOA+LKD组大鼠血清中TNF-α含量和IL-1β含量水平显著升高（

（2）每周测量WKY组、SHR+Sham KOA组、SHR+KOA和SHR+KOA+LKD组大鼠患侧肢足底机械痛、患侧肢及健侧肢负重差以及患侧肢关节肿胀度，并在取材前进行一次四足步态检测，每只动物重复检测3次，每次间隔5分钟。具体操作如下：采用Von frey纤维丝机械疼痛测试仪检测大鼠足底机械痛阈值，使用双通道电容传感器测量仪检测双后肢负重差，采用游标卡尺测量患侧肢关节肿胀度，采用动物步态分析系统（CatWalk XT）检测四足步态变化，操作流程严格遵循CatWalk XT说明。

结果如图7所示：与SHR+Sham KOA组相比，SHR+KOA组与SHR+KOA+LKD组大鼠的患侧肢足底机械痛显著降低（

大鼠四足步态的结果表明如图8和9所示：与SHR+Sham KOA组相比，SHR+KOA组与SHR+KOA+LKD组大鼠患侧肢的摆动时间（Swing）显著增加，患侧肢摆动速度（Swing speed）、患侧肢步幅（Stride length）等步态指标显著降低（

此外，如图10所示，KOA造模后大鼠右后肢的支撑时相比（Duty cycle）略低于SHR+Sham KOA组，但并未显示出显著差异性，不具有统计学意义。为进一步观察该指标，对大鼠剩余三足的支撑时相比进行整体的分析，结果显示KOA模型组大鼠的其余三足的支撑时相比显著高于SHR+Sham KOA组（

实施例5

本实施例用于说明骨组织病理学和骨微结构指标的检测。

将部分患侧肢膝关节在4%多聚甲醛中固定3天，石蜡包埋后切片，然后严格按照试剂盒说明书进行HE染色、番红固绿染色及Masson染色，并在光镜下观察和拍照。将剩余患侧肢膝关节固定好之后，采用Micro-CT扫描仪（15.6 μm、70 kV、114 μA、8 W）扫描胫骨软骨下骨，使用内置软件CTAn、CTvox、DataViewer计算骨体积分数（BV/TV）、骨小梁厚度（TB.Th）、骨小梁分离度（Tb.Sp）、骨小梁数（Tb.N）。

骨组织病理学结果如图11所示：HE染色、番红固绿染色及Masson染色结果显示，SHR+Sham KOA组软骨边界清晰圆润，软骨细胞排列整齐，潮线完整且清晰；SHR+KOA组和SHR+KOA+LKD组大鼠软骨边界模糊且凹凸不平，边缘碎片化，软骨细胞排列混乱，发生软骨丢失，潮线残缺并呈放射状（图11A）。SHR+Sham KOA组软骨厚度均匀；而SHR+KOA组和SHR+KOA+LKD组大鼠软骨厚度不均匀，软骨边缘破碎，软骨层变薄（图11B）。此外，SHR+Sham KOA组软骨中未见阳性信号；而SHR+KOA组和SHR+KOA+LKD组大鼠软骨中阳性信号很强，提示肌纤维增多，软骨骨化（图11C）。Micro-CT成像结果显示，SHR+Sham KOA组大鼠关节表面光滑，骨小梁排列规律；SHR+KOA组和SHR+KOA+LKD组大鼠膝关节关节面凹凸不平，皮质骨连续性中断，骨小梁排列紊乱（图11D）。

骨微结构指标如图12所示：骨小梁厚度（Trabecular thickness, Tb.Th）、骨小梁数（Trabecular number, Tb.N）、骨小梁分离度（Trabecular separation, Tb.Sp）是用来衡量骨组织中骨小梁结构的完整性和连通性的指标，在骨分解代谢大于骨合成代谢的情况下，Tb.N和Tb.Th数值减少，Tb.Sp数值增加。由图12可知，与SHR+Sham KOA组相比，SHR+KOA组和SHR+KOA+LKD组大鼠骨体积分数（BV/TV）、骨小梁厚度（Tb.Th）、骨小梁数（Tb.N）显著降低（

综上所述，本公开实施例2-5表明本公开成功构建肝肾亏虚型膝骨关节炎结合高血压病症的动物模型。且本公开的动物模型的共病和证候表征均与临床观察结果相一致，能够为膝骨关节炎与高血压共病的创新药物研发、上市品种再评价和作用机制研究提供可靠的实验载体。

以上结合附图详细描述了本公开的优选实施方式，但是，本公开并不限于上述实施方式中的具体细节，在本公开的技术构思范围内，可以对本公开的技术方案进行多种简单变型，这些简单变型均属于本公开的保护范围。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本公开对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本公开的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本公开的思想，其同样应当视为本公开所公开的内容。