能够与AAV1-13结合的抗体
文献发布时间:2023-06-19 09:23:00
技术领域
本发明涉及免疫学领域,具体而言,涉及一种能够与AAV1-13结合的抗体。
背景技术
腺相关病毒(Adeno-associated Virus,AAV)属于细小病毒科(parvoviridae),是一类无法自主复制、无包膜的二十面体微小病毒,直径约为20-26nm,单链线状DNA结构。经过改造的rAAV病毒工具已被广泛的应用在动物水平的基因表达、基因操作和基因治疗。目前AAV有13种血清型(即AAV1-13),不同的血清型对组织或器官有着不同的亲和性,其中AAV2、AAV3、AAV9源自人类本身,是迄今研究最为彻底、应用最为广泛的腺相关病毒载体。AAV是简单的非致病性单链DNA病毒,需要辅助病毒参与生活周期,辅助病毒通常为腺病毒(Ad)或者单纯疱疹病毒(HSV)。基因组两端为末端反向重复序列(ITR),中间基因组编码两个蛋白:Cap和Rep。Cap基因编码三个衣壳蛋白质VP1、VP2和VP3。
目前AAV的纯化使用的是碘克沙醇密度梯度离心,如果使用离子交换层析包括反向离子交换层析(包括阳离子和阴离子层析)的纯化方法,虽然纯度高,但是回收效率低,且条件苛刻。
发明内容
本发明涉及一种抗体,其包含氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1~3所示的重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3,以及氨基酸序列依次如SEQ ID NO:4~6所示的轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。
本发明还涉及用于表达生产所述抗体的核酸、载体及宿主细胞。
本发明还涉及所述抗体的生成方法。
本发明还涉及用于分离或鉴定腺相关病毒或腺相关病毒片段的试剂、试纸条或试剂盒,其包含如上所述的抗体。
本发明还涉及用于分离腺相关病毒或腺相关病毒片段的层析介质,所述层析介质包括基体支持物和固定于所述基体支持物上的如上所述的抗体。
本发明的有益效果为:
能够识别AAV1-13全部血清型的VP蛋白(VP1、VP2和VP3蛋白),且亲和力高,特异性好,由于VP蛋白位于腺相关病毒表面,因而可以更方便地用于腺相关病毒的分离及鉴定。
附图说明
为了更清楚地说明本发明具体实施方式或现有技术中的技术方案,下面将对具体实施方式或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍,显而易见地,下面描述中的附图是本发明的一些实施方式,对于本领域普通技术人员来讲,在不付出创造性劳动的前提下,还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明一个实施例中构建得到的包含抗原的表达载体;
图2为本发明一个实施例中抗原蛋白表达后的电泳图;
图3为本发明一个实施例中抗原蛋白经纯化后的电泳图;1和2泳道为目的蛋白条带所在泳道;
图4为本发明一个实施例中对所得抗体的Western Blot检测结果图;其中图4A为本发明请求保护的抗体,图4B~图4E为对照抗体;各电泳图的泳道依次为Marker、AAV1~13;
图5为本发明一个实施例中通过ELISA检测所得抗体的效价;
图6为本发明一个实施例中对所得抗体亲和层析应用的验证;其中图6A为AAV1~AAV6洗脱后的电泳结果;图6B为AAV7~AAV13洗脱后的电泳结果。
具体实施方式
现将详细地提供本发明实施方式的参考,其一个或多个实例描述于下文。提供每一实例作为解释而非限制本发明。实际上,对本领域技术人员而言,显而易见的是,可以对本发明进行多种修改和变化而不背离本发明的范围或精神。例如,作为一个实施方式的部分而说明或描述的特征可以用于另一实施方式中,来产生更进一步的实施方式。
因此,旨在本发明覆盖落入所附权利要求的范围及其等同范围中的此类修改和变化。本发明的其它对象、特征和方面公开于以下详细描述中或从中是显而易见的。本领域普通技术人员应理解本讨论仅是示例性实施方式的描述,而非意在限制本发明更广阔的方面。
本发明涉及一种抗体,其包含氨基酸序列依次如SEQ ID NO:1~3所示的重链互补决定区H-CDR1、H-CDR2、H-CDR3,以及氨基酸序列依次如SEQ ID NO:4~6所示的轻链互补决定区L-CDR1、L-CDR2、L-CDR3。
该抗体能够特异性识别VP1、VP2、VP3的重叠区域,并且能够识别AAV1-13任意一种或多种(例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或13种),因而可广泛地用于AAV的富集/检测,特别适用于待处理样本中AAV的血清型未知或含有多种AAV血清型的情况。
在本发明中,“抗体”此技术术语是结合特定抗原的蛋白,其泛指包含互补决定区(CDR区)的一切蛋白及蛋白片段,特别是全长抗体或抗体功能片段。“全长抗体”此用语包括多克隆抗体及单克隆抗体,术语“抗体功能片段”是包含抗体CDR的一部分或全部的物质,其缺乏至少一些存在于全长链中的氨基酸但仍能够特异性结合至抗原。此类片段具生物活性,因为其结合至靶抗原,且可与其他抗原结合分子(包括完整抗体)竞争结合至给定表位。在一些实施方式中,抗体或抗体功能片段具有特异性识别并结合AAV1-13任意一种的作用。在一些实施方式中,抗体或抗体功能片段是与AAV1-13任意一种的VP蛋白片段结合。这种结合通常是特异性的。在一个方面中,此类片段将包含单个重链和单个轻链,或其部分。所述片段可通过重组核酸技术产生,或可通过抗原结合分子(包括完整抗体)的酶裂解或化学裂解产生。
术语“互补性决定区”或“CDR”是指免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区,如Kabat等人所定义(Kabat等人,Sequences of proteins of immunological interest,5thEd"US Department of Health and Human Services,NIH,1991,和后来的版本)。有三种重链CDR和三种轻链CDR。此处,取决于情况,术语“CDR”用于指包含一种或多种或者甚至全部的对抗体与其识别的抗原或表位的结合亲和力起作用的主要氨基酸残基的区域。在另一具体实施方式中,CDR区或CDR是指IMGT定义的免疫球蛋白的重链和轻链的高度可变区。
术语“特异性结合”、“选择性结合”、“选择性地结合”和“特异性地结合”是指抗体对预先确定的抗原上的表位的结合。通常,抗体以大约小于10
抗体的变体也在本发明所请求保护的范围内,例如各自与本发明所述的各个CDR或FR、或可变区VL和/或VH、或抗体全长的氨基酸或核苷酸序列具有至少70%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、98%、99%或高于99%同一性的序列。在一些情况下,抗体的变体至少包括上述6个CDR;在一些情况下,抗体的变体至少包括一个重链和一个轻链,而在其他情况下,变体形式含有两个相同的轻链和两个相同的重链(或其子部分)。在一些情况下,抗体的变体是在本发明所提供的抗体序列上发生保守修饰或保守置换或取代所得到的。“保守修饰”或“保守置换或取代”是指具有类似特征(例如电荷、侧链大小、疏水性/亲水性、主链构象和刚性等)的其它氨基酸置换蛋白中的氨基酸,使得可频繁进行改变而不改变蛋白的生物学活性。本领域技术人员知晓,一般而言,多肽的非必需区域中的单个氨基酸置换基本上不改变生物学活性(参见例如Watson等(1987)MolecularBiology of the Gene,The Benjamin/Cummings Pub.Co.,第224页,(第4版))。另外,结构或功能类似的氨基酸的置换不大可能破环生物学活性。
在一些实施方式中,抗体还包含序列依次如SEQ ID NO:7~10所示的重链骨架区H-FR1、H-FR2、H-FR3及H-FR4;和/或;序列依次如SEQ ID NO:11~14所示的轻链骨架区L-FR1、L-FR2、L-FR3及L-FR4。
在一些实施方式中,所述抗体具有恒定区,重链恒定区序列选自IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgM、IgE、IgD任意一种的恒定区序列;轻链恒定区为κ或λ链。
在一些实施方式中,所述恒定区的种属来源选自牛、马、乳牛、猪、绵羊、山羊、大鼠、小鼠、狗、猫、兔、骆驼、驴、鹿、貂、鸡、鸭、鹅、火鸡、斗鸡或人。
本发明还涉及核酸,其编码如上所述的抗体。
核酸通常是RNA或DNA,鉴于抗体为膜蛋白,所以核酸通常带有信号肽序列。
本发明还涉及载体,其包含如上所述的核酸。
术语“载体(vector)”是指,可将多聚核苷酸插入其中的一种核酸运载工具。当载体能使插入的多核苷酸编码的蛋白获得表达时,载体称为表达载体。载体可以通过转化,转导或者转染导入宿主细胞,使其携带的遗传物质元件在宿主细胞中获得表达。载体是本领域技术人员公知的,包括但不限于:质粒;噬菌粒;柯斯质粒;人工染色体,例如酵母人工染色体(YAC)、细菌人工染色体(BAC)或P1来源的人工染色体(PAC);噬菌体如λ噬菌体或M13噬菌体及动物病毒等。可用作载体的动物病毒包括但不限于,逆转录酶病毒(包括慢病毒)、腺病毒、腺相关病毒、疱疹病毒(如单纯疱疹病毒)、痘病毒、杆状病毒、乳头瘤病毒、乳头多瘤空泡病毒(如SV40)。在一些实施方式中,本发明所述载体中包含基因工程中常用的调控元件,例如增强子、启动子、内部核糖体进入位点(IRES)和其他表达控制元件(例如转录终止信号,或者多腺苷酸化信号和多聚U序列等)。
本发明还提供细胞,其包含如上所述的核酸或如上所述的载体。
优选的适用于表达本发明的抗体的宿主细胞包括:哺乳动物细胞诸如NS0、Sp2/0、CHO、COS、HEK、成纤维细胞和骨髓瘤细胞。可以使用人细胞,因而允许分子用人糖基化模式来修饰。或者,可以采用其他真核细胞系。
本发明还提供生产如上所述的抗体的方法,包括:
在合适的培养条件下培养如上所述的细胞;以及
从培养基中或从所培养的细胞中回收如此产生的抗体。
合适的培养条件可以为常用的适合所述细胞培养的培养基,并从培养基上清中分离抗体;
或者是将所述细胞转移到动物体内(优选裸鼠),并从动物腹水、血清或者脾脏等部位收集抗体。
根据本发明的再一方面,本发明还涉及用于分离或鉴定腺相关病毒或腺相关病毒片段的试剂、试纸条或试剂盒,其包含如上所述的抗体。
本发明还涉及用于分离腺相关病毒或腺相关病毒片段的层析介质,所述层析介质包括基体支持物和固定于所述基体支持物上的抗体,所述抗体为如上所述的抗体。
在一些实施方式中,所述基体支持物包括琼脂、琼脂糖、琼脂糖衍生物、磁珠、二氧化硅、二氧化钛、藻酸盐、纤维素、纤维素衍生物、葡聚糖、淀粉、环糊精、壳聚糖、角叉菜胶、瓜尔胶、阿拉伯胶、印度胶、黄蓍胶、刺梧桐树胶、槐豆胶、黄原胶、果胶、粘蛋白、肝硫酯、明胶、硅、陶瓷、玻璃(例如硼硅酸盐玻璃)、聚氨酯、聚苯乙烯、聚苯乙烯二乙烯基苯、聚甲基丙烯酸甲酯、聚丙烯酰胺、聚乙二醇对苯二甲酸酯、聚乙酸乙烯酯、聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯、聚乙烯吡咯烷酮中的任一种,或任意几种形成的共聚物。
基体支持物可以是任何形状,例如基本球形,基本立方体形等。
在一些实施方式中,所述基体支持物包括Sepharose 4Fast Flow或CNBr-Activated Sepharose 4Fast Flow。
在优选的实施方式中,基体支持物是多孔的。
本发明还涉及层析分离装置,其含有如上所述的层析介质。
层析分离装置种类较多,包括但不限于以下种类:SPE固相萃取柱,带分离膜的离心管,磁珠,分离膜(membranes),快速检测生物芯片(bio-chips),纤维束柱,层析分离装置优选为柱状,例如整体柱及常规分析级或制备级层析色谱柱。
根据本发明的再一方面,本发明还涉及如上所述的抗体,或如上所述的层析介质,或如上所述的层析分离装置用于从液相组合物中移出腺相关病毒或腺相关病毒片段的用途;
所述腺相关病毒选自AAV1~13中的任意1种或2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13种血清型。
在一些实施方式中,所述液相组合物为细胞或组织裂解液、血清、腹水或细胞培养液上清。
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述。
实施例1抗体的制备
通过以AAV8的VP1为基础,比对AAV1-13,去除大部分非同源序列以后获得VPx序列,构建到pET-21载体上,表达及纯化该代表后,作为抗原,获取小鼠单克隆抗体。
1.抗原过表达原核载体构建
(1)将质粒pET-21(a)+-P24用Nde1和Xho I进行双酶切。50μL酶切反应体系含pET-21(a)+-P24 10ug、10×Cutsmart(NEB)5μL、Nde1 1μL Xho I 1μL,用水补足至50μL,37℃酶切4h后进行1%琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下用刀片将大片段切下并进行回收纯化;
(2)合成VPx序列,并在上下游分别加上Nde1和Xho I的酶切位点,构建入puc19载体中,命名为puc19-VPx;
(3)将质粒puc19-VPx用Nde1和Xho I进行双酶切:50μL酶切反应体系含puc19-VP810ug、10×Cutsmart(NEB)5μL、BamHI 1μL,Hind III 1μL用水补足至50μL,37℃酶切4h后进行1%琼脂糖凝胶电泳,紫外灯下用刀片将1.7kb的片段切下并进行回收纯化;
(4)酶切后的pET-21(a)+-P24载体1μL,片段VPx 3μL,1μL酶,1μL buffer,用水补足至10μL,16℃连接1h后置于冰上进行转化涂板;
(5)挑取单菌落,进行质粒小提及测序鉴定。经测序,表达载体(图1)构建成功。
2.重组蛋白表达筛选
2.1 质粒转化
2.2 接种
2.3表达培养:将过夜培养的种子液按照1:100(V:V)转入5ml LB培养中,37℃,250rpm至OD
2.4超声破碎:分别收集诱导后细菌,按照1:20(g/V)将收集的细菌重悬于冰浴的Lysis Buffer:50mM Tris-HCl,300mM NaCl,10%Glycerol,1mM PMSF,0.1%TritonX-100,pH 7.5,进行超声破碎(超2s,间3s,超声1min),12000rmp离心收集超声后上清和沉淀;
2.5表达检测:15%SDS-PAGE凝胶检测表达;结果如图2所示。
图2中的样本对应四组单菌落测试(每组均为未诱导对照组和诱导组)。
3放大表达、纯化
3.1大量表达;
3.2超声破碎,离心收集超声上清(超声条件:超5s,间10s,总计超声30min,冰浴);
3.3上柱:将超声上清按照1ml/min缓慢上到提前处理好的5ml Ni-NTA柱,收集上柱流穿;
3.4柱平衡:待样品上完后,用5CV的Buffer2:20mM PB,300mM NaCl,5%GlycerolpH7.4平衡柱子;
3.5梯度洗脱:依次用Buffer 3、Buffer4、Buffer5进行洗脱,分别收集洗脱峰:
Buffer3:20mM PB,300mM NaCl,5%Glycerol,20mM Imidazole pH7.4;
Buffer4:20mM PB,300mM NaCl,5%Glycerol,50mM Imidazole pH7.4;
Buffer5:20mM PB,300mM NaCl,5%Glycerol,200mM Imidazole pH7.4;
3.6纯度检测:15%SDS-PAGE进行纯度检测,将相同纯度样品进行合并;
3.7浓度检测:采用BCA法进行蛋白浓度检测。
4.两步透析
将从Ni-NTA柱上经200mM咪唑洗脱得到的目的蛋白合并后,按照1:100(V:V)透析在提前预冷的20mM PB,300mM NaCl,5%Glycerol,每隔2h更换一次透析液,总共更换三次;然后将上一步透析的样品继续转入预冷的PBS,pH7.4继续透析,每2h更换一次透析液,总共更换3次,最后一次透析过夜;透析后蛋白的电泳结果如图3所示。
5.单克隆抗体制备
5.1小鼠免疫:
BALB/c小鼠的免疫BALB/c小鼠的免疫按常规方法进行,二免后一个星期分别用断尾抽真空法采血200μL进行抗体检测,二免采血后让小鼠休息两周进行加强免疫,三天后融合。
5.2细胞融合:
用分子量为1450的50%PEG作融合剂进行细胞融合,细胞融合按常规方法进行,其操作步骤如下:
取1×10
5.3杂交瘤阳性克隆的筛选与克隆化:
融合后第7天,在倒置显微镜下对培养板进行观察,在有集落出现孔的培养板盖上方用记号笔打上小点,标明集落的位置,以便检测时取样以及原始孔的对号入座。
采用间接ELISA方法对有杂交瘤细胞生长的培养孔进行筛选。
5.4小鼠腹水法生产单克隆抗体:
阳性孔的扩大培养:在24孔细胞培养板加入饲养细胞,4滴/孔,将96孔板内的阳性细胞转到24孔细胞培养板进行扩大培养。
注射:待到细胞长满孔底将24孔板的细胞重悬,1200r/min,离心5min,细胞计数,用RPMI-1640基础培养液稀释成1×10
实施例2抗体的检测
实施例1中的制备得到的抗体,经过筛选后所得的抗体为VP-18抗体,经测序,其重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列分别如SEQ ID NO:15和16所示。
一.Western Blot对抗体进行检测
样品制备
取AAV1-13纯化后的病毒15μL,再加入loading buffer,按照1:4(loadingbuffer:细胞液)加入,混合,再95℃煮5min,摆放到干燥的冰盒上,然后4℃,12000g,离心5min。
SDS-PAGE凝胶制备:使用10%的分离胶和5%的浓缩胶。
SDS-PAGE凝胶电泳
a.将凝胶板固定到电泳装置内槽,将固定好的凝胶板放入外槽中,向外槽加入适量的1×SDS电泳缓冲液。并向内槽加入电泳缓冲液至刚好淹没凝胶加样孔;
b.小心拔出梳子,避免撕裂聚丙烯酰胺凝胶加样孔。拔出梳子后以1×SDS电泳缓冲液冲洗和充满加样孔;
c.上样并进行SDS-PAGE电泳。连接电源,先在80V电压下电泳30min至溴酚蓝染料从浓缩胶进入分离胶,再将电压调至120V继续电泳70min至溴酚蓝到达凝胶底部;
d.关闭电源并撤去连接的导线,弃去电泳缓冲液,取出凝胶夹层。
转膜
a.电泳结束前,准备与凝胶同样大小的1张PVDF膜与6张滤纸。PVDF膜用甲醇活化5min,然后在缓冲液中平衡15min;滤纸在转移缓冲液中平衡15min;
b.在加有转移液的盘里放入转膜用的夹子、两块海绵垫、滤纸和浸过的膜;
c.将夹子打开使黑的一面保持水平。在上面垫一张海绵垫。在垫子上垫三层滤纸,去除其中的气泡;
d.撬去玻板,将浓缩胶轻轻刮去,凝胶在ddH
e.将夹子放入转移槽中,使夹的黑面对槽的黑面,夹的白面对槽的红面。电转移时产热,在槽的一边放一块冰降温。一般用300mA转移2h。
免疫反应
a.将膜移至含有含5%脱脂奶粉的TBST孵育盒中,室温下脱色摇床上摇动封闭1h;
b.将一抗用含5%脱脂奶粉的TBST稀释至适当浓度;从封闭液中取出膜,膜的蛋白面朝上放于抗体液面上,掀动膜四角以赶出残留气泡;4℃脱色摇床摇动孵育过夜;
c.用TBST在室温下脱色摇床上洗三次,每次10min;
d.同上方法稀释二抗(anti-mouse)并与膜接触,室温下孵育1~2h后,用TBST在室温下脱色摇床上洗三次,每次10min,进行化学发光反应。
化学发光
将A和B两种试剂等体积混合;将膜的蛋白面朝上放在白板上,将发光液滴加在膜上,充分覆盖膜表面,然后放入成像仪中拍照。
由于重组蛋白抗原片段中的抗原表位较多,经过筛选,申请人一共获得了40多株能够与多种腺相关病毒结合的单克隆,WB结果如图4所示,其中效果最好的本发明请求保护的抗体结果如图4A所示,可见其与AAV1-13均能结合;部分细胞株的结果如图4B~图4E所示。
二.ELISA检测VP-18抗体对不同血清型AAV的抗体效价
步骤与方法:
1.重组AAV(血清型1-13)用包被缓冲液(pH9.6,0.05mol/L碳酸盐缓冲液)稀释到5×10
2.丢弃上清,并用洗涤缓冲液(PBS)洗三遍,每次100μL;
3. 100μL,10%milk,包被缓冲液,37度封闭1小时;
4.重复洗涤3次;
5.细胞培养上清,100μL/WELL,37度1小时;
6.用洗涤缓冲液(PBS)洗涤三次;
7.HRP二抗,按照说明书稀释,用PBS加1%BSA,100μL,37度1小时;
8.用洗涤缓冲液(PBS)洗涤三次;
9.加显色底物TMB;
10. 37度15-30分钟,1M硫酸终止反应;
11.酶标仪检测OD
检测结果如图5所示。从图中可知VP-18抗体对不同血清型AAV均具有较高的抗体效价。
三.VP-18抗体在亲和层析中的应用
1.抗体偶联活化填料步骤
参考NHS-activated Sepharos 4Fast Flow使用手册,将AAV抗体偶联至Sepharose 4 Fast Flow,制备亲和填料。
2.填料对AAV的亲和纯化步骤
1)平衡:将装填好的层析柱使用5~10CV的10mM Tris-HCl,150mM NaCl,pH7.5溶液平衡。
2)上样:将分别包装AAV1~13的HEK293细胞冻融裂解和离心后,经过0.22μm过滤,然后上样至平衡好的层析柱,上样载量不超过1E+14vg/mL填料。
3)冲洗1:上样结束,用5~10CV的10mM Tris-HCl,150mM NaCl,pH7.5溶液平衡。
4)冲洗2:使用5~10CV的10mM Tris-HCl,1M NaCl,pH7.5溶液冲洗杂质。
5)冲洗2:用5~10CV的10mM Tris-HCl,150mM NaCl,pH7.5溶液再次平衡层析柱。
6)洗脱:使用100mM柠檬酸,pH3.5溶液洗脱层析柱,出峰后收集样品,并立刻用1MTris溶液调pH至中性。
7)再生:使用1M柠檬酸,pH1.5溶液再生层析柱,将残留杂质从层析柱上洗涤下来。
8)再平衡:用5~10CV的10mM Tris-HCl,150mM NaCl,pH7.5溶液平衡层析柱。
9)保存:使用5~10CV的20%乙醇溶液保存层析柱。
3.纯化结果:
洗脱样品经过SDS-PAGE电泳后进行考马斯亮蓝染色,结果见图6A和图6B。可见,VP-18抗体对不同血清型AAV均具有富集作用,载量较为理想,且VP-18抗体与HEK293细胞裂解液的其他组分几乎不产生非特异性地结合,抗体特异性好。
以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合,为使描述简洁,未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述,然而,只要这些技术特征的组合不存在矛盾,都应当认为是本说明书记载的范围。
以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式,其描述较为具体和详细,但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是,对于本领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明构思的前提下,还可以做出若干变形和改进,这些都属于本发明的保护范围。因此,本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。
序列表
<110> 和元生物技术(上海)股份有限公司
<120> 能够与AAV1-13结合的抗体
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<212> PRT
<213> artificial sequence
<400> 13
Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly
1 5 10 15
Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr Glu Asp Phe Gly
20 25 30
Met Tyr Phe Cys
35
<210> 14
<211> 10
<212> PRT
<213> artificial sequence
<400> 14
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 15
<211> 119
<212> PRT
<213> artificial sequence
<400> 15
Glu Val Lys Leu Val Glu Ser Gly Gly Asp Leu Val Lys Pro Gly Gly
1 5 10 15
Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Ser Tyr
20 25 30
Thr Met Ser Trp Val Arg Gln Thr Pro Glu Lys Arg Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Ser Ile Asn Val Gly Asp Asp Thr Ser Tyr Ser Asp Asn Leu Lys
50 55 60
Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Arg Asn Ile Leu Tyr Leu
65 70 75 80
Gln Met Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala
85 90 95
Arg Gly Arg Asp Gly Phe Tyr Val Val Phe Ala Tyr Trp Gly Gln Gly
100 105 110
Thr Leu Val Thr Val Ser Ala
115
<210> 16
<211> 107
<212> PRT
<213> artificial sequence
<400> 16
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly
1 5 10 15
Asp Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Ile Ser Asn Asn
20 25 30
Leu His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser His Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Lys Tyr Thr Ser Gln Ser Ile Ser Gly Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Ser Ile Asn Ser Val Glu Thr
65 70 75 80
Glu Asp Phe Gly Met Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Tyr Ser Trp Pro Trp
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys
100 105
- 能够与AAV1-13结合的抗体
- 能够与AAV1-13结合的抗体