一种用于护肤品的鲜花有效物质提取工艺

技术领域

本发明属于鲜花有效物质提取领域，具体涉及一种用于护肤品的鲜花有效物质提取工艺。

背景技术

一些花朵中含有丰富的生理活性成分，比如黄酮类有很好的抗氧化功能、酚、醇、酯、维生素、蛋白质及酶等等，有很好的天然护肤价值或者食用价值。但其提取液往往因为提取技术局限了本来鲜花中有效成分的多样性。作为花朵化妆品原料提取方法常用蒸馏法，制作纯露，该方法虽然可得到芳香油等易挥发成分，但不易挥发的成分比如黄酮类、苷类、维生素、蛋白质类高温易失去活性，无法获得，而这些成分有很好的抗氧化等等活性功能，值得保留。

超声提取是近年来常用的另一种提取方法，但单一使用超声提取，要得到比较高提取率需要比较长的时间，而较长的超声时间会使多酚、黄酮、酶这些抗氧化性物质随着时间的延长光照、受热等的影响会被氧化，从而不利于抗氧化物质的提取。单纯的超声提取要得到高提取率的有效物质就需要超声较长时间，容易破坏植物中生物大分子的活性。因此，需要一种新的超声提取技术，以解决上述问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题便是针对上述现有技术的不足，提供一种用于护肤品的鲜花有效物质提取工艺，较好的保留了鲜花的生物活性大分子和功效小分子混合的有效成分，作为天然植物护肤品原料应用。

本发明所采用的技术方案是：一种用于护肤品的鲜花有效物质提取工艺，包括以下步骤：

步骤10、冻存：在-20℃的环境下冻存经筛选和清洗后的新鲜花瓣，得到冻存花瓣；

步骤20、冷冻干燥：将步骤10中得到的冻存花瓣进行真空冷冻干燥，得到干燥花瓣；

步骤30、低温粉碎：将步骤20中得到的干燥花瓣在氮气保护下用粉碎机低温粉碎，得到花瓣粉；

步骤40、筛选:将步骤30中得到的花瓣粉过18目筛后备用；

步骤50、一次提取：将步骤40中筛选后的花瓣粉以脱气纯化水为溶媒进行超声提取，溶媒与粉碎花瓣的重量比为1：20-60，超声提取时间为20分钟-60分钟，超声提取温度为30℃-60℃，提取后过滤得到一次滤液；

步骤60、二次提取：将步骤50中筛选后的花瓣粉以脱气纯化水为溶媒进行超声提取，溶媒与粉碎花瓣的重量比为1：20-60，超声提取时间为20分钟-60分钟，超声提取温度为30℃-60℃，提取后过滤得到二次滤液；

步骤70、滤液混合：将步骤50中得到的一次滤液和步骤60中得到的二次滤液混合后，得到用于护肤品的鲜花有效物质。

其中一个实施例中，步骤10中，冻存时间为12小时-16小时。

其中一个实施例中，步骤20中，冷冻温度为-45℃～-55℃。

其中一个实施例中，步骤30中，粉碎温度＜40℃。

其中一个实施例中，步骤60中，溶媒与粉碎花瓣的重量比为1：60，超声提取时间为40分钟，超声提取温度为30℃。

其中一个实施例中，还包括有效成分浓缩检测步骤，如检测的成分为总黄酮，具体如下：

将步骤70中得到的用于护肤品的鲜花有效物质用电热恒温鼓风干燥箱浓缩至10ml，无水乙醇定容至25ml，得到样品提取液；

将得到的样品提取液摇匀后，取10ml于离心管，以4000r/min的速度离心5min；

吸取离心后的样品提取液2.00ml,置于25ml容量瓶中,加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml,摇匀，静置6min,加10%的硝酸铝溶液0.30ml, 摇匀，静置6min,再加4%的NaOH溶液4ml,用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12min；

用试剂空白作参比，在500nm波长下测定吸光度,计算得出每g粉碎花瓣中总黄酮含量。

其中一个实施例中，还包括有效成分浓缩检测步骤，如检测的成分为氨基酸，具体如下：

将步骤70中得到的用于护肤品的鲜花有效物质用电热恒温鼓风干燥箱浓缩至10ml，无水乙醇定容至25ml，得到样品提取液；

取样品液1.00ml，置于25ml容量瓶，加pH=5的醋酸缓冲液和2%的茚三酮溶液2.00ml，摇匀后置于100℃水浴锅中水浴20min，冷却10min，以水定容至25ml；

用试剂空白作参比，于570nm波长处比色测定，计算得出每g粉碎花瓣中氨基酸含量。

其中一个实施例中，还包括有效成分浓缩检测步骤，如检测的成分为蛋白酶，具体如下：

将步骤70中得到的用于护肤品的鲜花有效物质用电热恒温鼓风干燥箱浓缩至10ml，无水乙醇定容至25ml，得到样品提取液；

取恒温水浴锅预先加热到40℃，将1%的酪蛋白溶液置于其中预热5min，取试管A和试管B并分别加入2.00ml样品液，将试管A和试管B放入40℃恒温水浴锅中保持2分钟；

试管A内加入0.4M的三氯乙酸4.00ml，同时向试管B中加1%酪蛋白2.00ml；

试管A和试管B在40℃恒温水浴锅中同时保持10分钟后，向试管A中加入1%酪蛋白2.00ml，同时向试管B加0.4M的三氯乙酸4.00ml摇匀，取出静置10分钟；

过滤，取滤液在275nm波长处用石英比色管比色测定，计算得出每g粉碎花瓣中蛋白酶含量。

本发明的有益效果在于：以鲜花冷冻干燥、氮气保护低温粉碎与脱气纯化水超声提取结合的方式得到花瓣的有效物质，并通过检测比较标志性有效成分的含量确定具体的超声提取工艺参数，较好的保留了鲜花的生物活性大分子和功效小分子混合的有效成分，作为天然植物护肤品原料应用。

具体实施方式

下面将结合具体实施例对本发明作进一步详细说明。

本发明公开了一种用于护肤品的鲜花有效物质提取工艺，包括以下步骤：

步骤10、冻存：在-20℃的环境下冻存经筛选和清洗后的新鲜花瓣，得到冻存花瓣；

步骤20、冷冻干燥：将步骤10中得到的冻存花瓣进行真空冷冻干燥，得到干燥花瓣；

步骤30、低温粉碎：将步骤20中得到的干燥花瓣在氮气保护下用粉碎机低温粉碎，得到花瓣粉；

步骤40、筛选:将步骤30中得到的花瓣粉过18目筛后备用；

步骤50、一次提取：将步骤40中筛选后的花瓣粉以脱气纯化水为溶媒进行超声提取，溶媒与粉碎花瓣的重量比为1：20-60，超声提取时间为20分钟-60分钟，超声提取温度为30℃-60℃，提取后过滤得到一次滤液；

步骤60、二次提取：将步骤50中筛选后的花瓣粉以脱气纯化水为溶媒进行超声提取，溶媒与粉碎花瓣的重量比为1：20-60，超声提取时间为20分钟-60分钟，超声提取温度为30℃-60℃，提取后过滤得到二次滤液；

步骤70、滤液混合：将步骤50中得到的一次滤液和步骤60中得到的二次滤液混合后，得到用于护肤品的鲜花有效物质。

本实施例中，步骤10中，冻存时间为12小时-16小时。

本实施例中，步骤20中，冷冻温度为-45℃～-55℃。

本实施例中，步骤30中，粉碎温度＜40℃。

本实施例中，步骤60中，溶媒与粉碎花瓣的重量比为1：60，超声提取时间为40分钟，超声提取温度为30℃。

本实施例中，还包括有效成分浓缩检测步骤，如检测的成分为总黄酮，具体如下：

将步骤70中得到的用于护肤品的鲜花有效物质用电热恒温鼓风干燥箱浓缩至10ml，无水乙醇定容至25ml，得到样品提取液；

将得到的样品提取液摇匀后，取10ml于离心管，以4000r/min的速度离心5min；

吸取离心后的样品提取液2.00ml,置于25ml容量瓶中,加入5%亚硝酸钠溶液0.30ml,摇匀，静置6min,加10%的硝酸铝溶液0.30ml, 摇匀，静置6min,再加4%的NaOH溶液4ml,用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12min；

用试剂空白作参比，在500nm波长下测定吸光度,计算得出每g粉碎花瓣中总黄酮含量。

本实施例中，还包括有效成分浓缩检测步骤，如检测的成分为氨基酸，具体如下：

将步骤70中得到的用于护肤品的鲜花有效物质用电热恒温鼓风干燥箱浓缩至10ml，无水乙醇定容至25ml，得到样品提取液；

取样品液1.00ml，置于25ml容量瓶，加pH=5的醋酸缓冲液和2%的茚三酮溶液2.00ml，摇匀后置于100℃水浴锅中水浴20min，冷却10min，以水定容至25ml；

用试剂空白作参比，于570nm波长处比色测定，计算得出每g粉碎花瓣中氨基酸含量。

本实施例中，还包括有效成分浓缩检测步骤，如检测的成分为蛋白酶，具体如下：

将步骤70中得到的用于护肤品的鲜花有效物质用电热恒温鼓风干燥箱浓缩至10ml，无水乙醇定容至25ml，得到样品提取液；

取恒温水浴锅预先加热到40℃，将1%的酪蛋白溶液置于其中预热5min，取试管A和试管B并分别加入2.00ml样品液，将试管A和试管B放入40℃恒温水浴锅中保持2分钟；

试管A内加入0.4M的三氯乙酸4.00ml，同时向试管B中加1%酪蛋白2.00ml；

试管A和试管B在40℃恒温水浴锅中同时保持10分钟后，向试管A中加入1%酪蛋白2.00ml，同时向试管B加0.4M的三氯乙酸4.00ml摇匀，取出静置10分钟；

过滤，取滤液在275nm波长处用石英比色管比色测定，计算得出每g粉碎花瓣中蛋白酶含量。

本发明涉及的冷冻干燥技术可以很好的保存植物的各种小分子及大分子活性成分，同时经冷冻干燥过后的花朵纤维组织易脆裂，细胞易破碎，再结合氮气保护低温粉碎机粉碎，用脱气纯化水超声提取，植物有效成分更容易从植物组织中溶出，因此可以缩短超声提取所需要的时间，更好的保存有效成分活性，同时避免被空气氧化破坏，从而保持高提取率。

以上述提取工艺且以槐花为例：通过上述步骤提取槐花中的有效物质，将提取液浓缩后检测，可以得到芦丁1.428 mg/g，氨基酸43 mg/g,蛋白酶活性62U/g。这些都是传统的蒸馏法提取的花瓣的纯露中提取不到的有效物质，却是天然护肤品原料中重要的有效成分。提取过程中，以总黄酮为例，通过调整料液比、提取温度和提取时间，可得到不同含量的总黄酮，具体如表1：

表1 超声提取参数及有效成分浓缩检测结果对照表

由表1可以看出，不同的超声提取参数最终得到的有效成分检测结果也是不同的，鲜槐花以此最佳优化条件，还可得到总氨基酸44μg/g（花瓣）， 总蛋白酶64.87U/g；可见，鲜花以此步骤得到丰富的非挥发性有效成分，是传统的蒸馏法不能得到的，以提升鲜花的使用价值。

本发明以鲜花冷冻干燥、氮气保护低温粉碎与脱气纯化水超声提取结合的方式得到花瓣的有效物质，并通过检测比较标志性有效成分的含量确定具体的超声提取工艺参数，较好的保留了鲜花的生物活性大分子和功效小分子混合的有效成分，作为天然植物护肤品原料应用。

以上所述实施例仅表达了本发明的具体实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对本发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。