一种基于萃取提纯技术制备橄榄仁提取物的方法

技术领域

本发明涉及农产品深加工领域，具体涉及一种橄榄仁提取物提取工艺。

背景技术

橄榄仁，为橄榄科植物橄榄的种仁，约占橄榄鲜果重的6％，占果核重的25％。橄榄仁中除含有丰富的油脂和不饱和脂肪酸外，还富含蛋白质，蛋白质含量约在40％左右，该蛋白质涵盖了人体所需8种必须氨基酸。因橄榄仁具有润燥，醒酒，解毒的功效，具有很好的营养价值和药用价值。因此开发出一种可以高效提取橄榄仁的提取方法，并在橄榄产业链中加以利用，可实现橄榄深加工，提高橄榄的附加值，对增加农民的经济收入具有重要的经济和社会意义。目前国内对橄榄仁开发甚少，如专利CN201710483962.0通过碱提酸沉法制得橄榄仁蛋白，由于未能将不溶于水的蛋白质提取出来，所以其蛋白质提取量不高。因此，需开发出一种可同时提取出橄榄仁中可溶于水的蛋白质和可溶于有机溶剂的蛋白质，同时不增加生产成本的方法。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术中橄榄仁提取物中蛋白质含量不高的问题，以进一步提高橄榄的附加值。

本发明提供了一种橄榄仁提取物的制备方法，其特征在于，利用梯度萃取方法获得蛋白质含量大于60%的橄榄仁提取物。

进一步地，为得到蛋白质含量大于60%的橄榄仁提取物，其提取方法包括如下步骤：

步骤（1）：将橄榄仁粉碎至100目以下，得到橄榄仁粉末；

步骤（2）：在步骤（1）所述的橄榄仁粉末中按质量比加入5-10倍的乙醇，搅拌1-3小时，过滤后取滤饼，得到脱脂橄榄仁滤饼；

步骤（3）：在步骤（2）所述的脱脂橄榄仁滤饼中加入5-10倍的低温混合缓冲提取液，利用球磨机球磨2-3小时，经过超滤装置过滤后得到提取液；

步骤（4）：浓缩步骤（3）所述的提取液；

步骤（5）：依次用体积比为1:1的乙醇/正己烷、1:5的乙醇/正己烷、正己烷对步骤（4）所述的提取液进行梯度萃取，分离水相及有机相，将合并后的有机相减压蒸馏，并干燥后得到橄榄仁提取物。

进一步地，为了提高橄榄仁提取物中蛋白质的提取率，上述步骤（3）中的混合缓冲提取液组分为：β-巯基乙醇、硬脂酸钠、乙二胺四乙酸、Tris酸、酶抑制剂、氯化铵；优选地，上述混合缓冲提取液组分为：500mmol β-巯基乙醇、300mmol硬脂酸钠、50mmol乙二胺四乙酸、500mmol Tris酸、50mmol酶抑制剂、100mmol氯化铵。

进一步地，为了提高橄榄仁提取物中蛋白质的提取率，所述混合缓冲提取液配制时先将β-巯基乙醇、硬脂酸钠、乙二胺四乙酸、氯化铵混合后低温保存，使用时再将Tris酸、与酶抑制剂分散至其中。

进一步地，为了降低橄榄仁提取物中蛋白质的变性几率，上述与混合缓冲提取液有关的低温温度范围为0~5

进一步地，为了提高橄榄仁提取物的提取纯度，上述步骤（3）中的超滤装置由具有不同滤径的过滤器串联组成；优选地，上述超滤装置由0.45μm的过滤器与0.1μm的过滤器串联组成。

进一步地，橄榄仁提取物的干燥方法为电加热干燥、喷雾干燥、热空气干燥、冷冻干燥中的任意一种或几种组合；为了更好的保持橄榄仁提取物中蛋白质的特性，优选地，橄榄仁提取物的干燥方法为冷冻干燥或喷雾干燥中的一种。

本发明的有益效果：

本发明通过采用特定配方的混合缓冲提取液，增加了蛋白质在提取液中的溶解度，同时结合球磨技术，使得橄榄仁粉末与提取液充分接触与混合，大大提高了橄榄仁提取物的提取效率；同时本发明在橄榄仁提取物的后处理过程中，结合了超滤技术与萃取技术，首先通过超滤串联装置除去提取液中的机械微杂质，然后采用梯度萃取工艺对橄榄仁提取物进行萃取，不仅提高了橄榄仁提取物的提取度，同时增加了提取物的纯度。

具体实施方式

以下结合具体实施例对本发明作进一步详细描述，这些实施例不能理解为限制本发明所要求保护的范围。

实施例一

< 混合缓冲提取液配制 >

将乙二胺四乙酸、氯化铵、硬脂酸钠、β-巯基乙醇按摩尔比为1:2:6:10进行搅拌混合，混合均匀后放入0

使用时，向其中加入同样在0

< 橄榄仁提取物制备 >

一种基于萃取提纯技术制备橄榄仁提取物的方法，其提取方法为：

用清水冲洗收集的橄榄仁，以除去灰尘、泥土等杂质，然后过滤，并用清水冲洗3次，将冲洗好的橄榄仁放置于35

称取500g橄榄仁粉末，搅拌的条件下分批次加入4000g乙醇，继续搅拌3小时后过滤，得到脱脂橄榄仁滤饼；

在搅拌条件下向脱脂橄榄仁滤饼中分批次加入5000g低温混合缓冲提取液，利用球磨机球磨3小时，先后经过0.45μm的过滤器和0.1μm的过滤器，过滤后得到提取液；

通过减压蒸馏浓缩提取液；用体积比为1:1的乙醇/正己烷对提取液进行第一次萃取，分离水层与有机相层，收集有机相层；用体积比为1:5的乙醇/正己烷对第一次萃取后的水层进行第二次萃取，分离水层与有机相层，收集有机相层；用正己烷对第二次萃取后的水层进行第三次萃取，分离水层与有机相层，收集有机相层；将三次萃取后的有机相层合并，减压蒸馏后喷雾干燥，得到橄榄仁提取物，提取物为白色至类白色粉末。

< 橄榄仁提取物蛋白质含量测试 >

利用考马斯亮蓝法对橄榄仁提取物中的蛋白质含量进行测定，橄榄仁提取物中蛋白质含量为62.62%。

实施例二

与实施例一的区别在于，梯度萃取过程不同。

通过减压蒸馏浓缩提取液；用体积比为1:1的乙醇/正己烷对提取液进行第一次萃取，分离水层与有机相层，收集有机相层；用体积比为1:8的乙醇/正己烷对第一次萃取后的水层进行第二次萃取，分离水层与有机相层，收集有机相层；用正己烷对第二次萃取后的水层进行第三次萃取，分离水层与有机相层，收集有机相层；将三次萃取后的有机相层合并，减压蒸馏后喷雾干燥，得到橄榄仁提取物。橄榄仁提取物为白色至类白色粉末，其中蛋白质含量为60.07%。

实施例三

与实施例一的区别在于，梯度萃取过程不同。

梯度萃取过程为：通过减压蒸馏浓缩提取液；用体积比为1:1的乙醇/正己烷对提取液进行第一次萃取，分离水层与有机相层，收集有机相层；用正己烷对第一次萃取后的水层进行第二次萃取，分离水层与有机相层，收集有机相层；将两次萃取后的有机相层合并，减压蒸馏后喷雾干燥，得到橄榄仁提取物。橄榄仁提取物为白色至类白色粉末，其中蛋白质含量为52.13%。

实施例四

与实施例一的区别在于，混合缓冲提取液配制方式不同。

< 混合缓冲提取液配制 >

将乙二胺四乙酸、酶抑制剂、氯化铵、硬脂酸钠、β-巯基乙醇、Tris酸按摩尔比为1:1:2:6:10:10进行搅拌混合，混合均匀后放入0

橄榄仁提取物的提取方式与实施例一相同。制备得到的橄榄仁提取物为白色至类白色粉末，其中蛋白质含量为38.77%。

实施例五

与实施例一的区别在于，提取液未经超滤装置过滤。

< 橄榄仁提取物制备 >

一种基于萃取提纯技术制备橄榄仁提取物的方法，其提取方法为：

用清水冲洗收集的橄榄仁，以除去灰尘、泥土等杂质，然后过滤，并用清水冲洗3次，将冲洗好的橄榄仁放置于35

称取500g橄榄仁粉末，搅拌的条件下分批次加入4000g乙醇，继续搅拌3小时后过滤，得到脱脂橄榄仁滤饼；

在搅拌条件下向脱脂橄榄仁滤饼中分批次加入5000g低温混合缓冲提取液，利用球磨机球磨3小时，经普通滤纸过滤后得到提取液；

通过减压蒸馏浓缩提取液；用体积比为1:1的乙醇/正己烷对提取液进行第一次萃取，分离水层与有机相层，收集有机相层；用体积比为1:5的乙醇/正己烷对第一次萃取后的水层进行第二次萃取，分离水层与有机相层，收集有机相层；用正己烷对第二次萃取后的水层进行第三次萃取，分离水层与有机相层，收集有机相层；将三次萃取后的有机相层合并，减压蒸馏后喷雾干燥，得到橄榄仁提取物。橄榄仁提取物为淡黄色至黄色粉末，其中蛋白质含量为54.97%。

基于以上实验数据可以确定，本发明实施例方案，结合蛋白质混合缓冲提取液，采用梯度萃取工艺，可以明显提高橄榄仁提取物中的蛋白质含量，经过超滤装置后，可以除去提取物中的微机械杂质，提高提取物的纯度，保证橄榄仁提取物的色泽。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。