一种利用钩虾进行土壤综合毒性检测的方法

技术领域

本发明涉及针对土壤滞留功能的土壤生物综合毒性检测方法领域，具体涉及一种利用钩虾进行土壤综合毒性检测的方法。

背景技术

场地土壤的污染诊断作为场地管理决策的重要依据。现阶段，我国的土壤污染诊断主要基于污染物浓度分析，检测成本高、操作繁琐，而且也无法反映复杂多组分污染物的综合毒性。与传统化学分析方法仅能分析有限种类的污染物相比，基于综合毒性的生物测试方法利用敏感生物直接反映污染场地的综合毒性效应，可以表征土壤样品对生物个体和种群产生综合的毒性影响，不仅具有简便经济、易于操作的优点，且能对多批量、多种类、不同浓度的污染土壤进行筛选。针对土壤滞留功能，ISO制订了基于发光菌、大型溞、鱼类等水生生物的土壤综合毒性诊断方法。欧美发达国家已建立了成套生物综合毒性测试方法体系，配套出台了相应的管理政策。

钩虾种群隶属于节肢动物门(Arthropoda)甲壳纲(Crustacea)端足目(Amphipoda)钩虾亚目(Gammaridea)，是分布最广、数量最多的底栖动物之一。它在水生态系统的碎屑降解循环中扮演着重要角色，此外还是次级消费者的食物，因此钩虾种群对维持水生态系统功能完整性起着重要的作用。此外，有文献表明，钩虾科对有机污染物和重金属污染非常敏感。因此，建立基于钩虾急性毒性的土壤综合毒性检测方法，可以进一步丰富针对土壤滞留功能的生物毒性检测方法。

发明内容

针对现有技术中存在的准确、全面选择检测指标进行污染物测定，极容易漏测污染物，缺乏标准值难以判断风险，并且局限于检测单一污染物毒性，无法测定污染物的复合污染效应等问题，本发明提供一种利用钩虾进行土壤综合毒性检测的方法。通过CaCl

所述方法包括以下步骤：

步骤一、受试生物预养。野外清洁水体采集或者商业机构购买的钩虾在18℃±1℃的条件下驯养14后，隔离雌性个体，24h内收集的钩虾幼虫用于试验。

步骤二、对土壤样品进行预处理：在待检测场地采集土壤样品后，将土样混合均匀，在室温下阴凉处风干，去除砂砾、植物残根，磨碎后于室温避光保存备用；

步骤三、对土壤样品进行浸提，制备试验溶液：称取步骤一制备的土样，用0.001mol/L CaCl

表1稀释水贮备液配方

各取以上四种贮备液25mL混合，稀释至1L即为稀释水。

步骤四、浸提液的毒性检测：用玻璃器皿盛装步骤四配制的试验溶液，每个浓度若干平行。取步骤一准备的钩虾幼虫加入试验溶液，每个试验容器5只钩虾幼虫，承载量≤10mL/只钩虾幼虫。每天观察并记录钩虾幼虫的死亡与胁迫情况(变色、异常行为、不活动、撞容器壁等)，96h后统计不同浓度组的钩虾幼虫死亡率。

样品毒性的表达：存活抑制率＝(对照组存活率-样品存活率)/对照组存活率×100％。

最低无效应稀释倍数(LID)：当用逐级稀释的方法检测浸提液时，稀释倍数D，是没有抑制作用的最高试验浓度，或仅观察到不超过测试特异性变化的轻微影响，被表示为最低无效应稀释倍数(LID)。

通过存活抑制率或最低无效应稀释倍数(LID)，来表征土壤的综合毒性水平。最高浓度的存活抑制率≥10％，或LID≥4，表明土壤有毒。

本发明的有益之处在于：本方法首次建立了利用钩虾进行土壤综合毒性检测的方法，填补了现有方法体系缺乏代表性底栖生物的空白，灵敏度高，与摇蚊、带丝蚓等沉积物生物的测试方法相比，钩虾个体相对较大，操作方便简单，易于观察。

附图说明

图1本发明所述检测方法的流程图。

具体实施方式

为了使本技术领域的人员更好地理解本发明，并使本发明的上述优点能够更加明显易懂，下面结合附图及具体实施例对本发明作进一步详细的说明。

实施例1

一种利用钩虾进行土壤综合毒性检测的方法，方法流程参照图1，所述方法包括以下步骤：

(1)受试生物预养：受试生物为出生时间<24h的1～2龄钩虾幼虫。野外清洁水体采集或者商业机构购买的钩虾，在18℃±1℃的条件下驯养14后。隔离雌性个体，24h内收集钩虾幼虫用于试验。

(2)土壤样品预处理：按照环境土壤质量监测规范等相关规范流程采集土壤样品，将土样混合均匀，置于布制土壤袋，防止样品中毒性物质的损失；样品经室温下阴凉处风干，去除砂砾、植物残根，磨碎，磨碎后于室温避光保存备用。

(3)样品浸提液制备：称取100g已预处理的土样置于2.5L烧杯中，加入0.001mol/LCaCl

(4)毒性试验溶液制备：将浸提液按照表2比例与稀释水混合，制备不同浓度的毒性检测试验溶液。稀释水的配方见表1。

表2试验溶液的制备

(5)浸提液的毒性检测：用烧杯、培养皿等玻璃器皿盛装毒性检测试验溶液，每个浓度4个平行，每个试验容器5只钩虾幼虫。承载量≤10mL/只钩虾幼虫。其他试验参数如下：

光周期：光暗比12:12；

光照强度：≤1080Lux；

试验温度：18℃±1℃；

饲喂：试验期间不饲喂；

试验时间：96h；

有效性标准：试验结束时，对照组表现出生病、胁迫(如变色、异常行为、不活动)和/或死亡的钩虾数≤10％。

(6)样品毒性的表达：

某污染场地土样浸提液的测试结果如下：

根据以上数据，未经稀释的土壤浸提液对钩虾幼虫的存活抑制率为100％，高于土壤毒性标准值。LID＝4，符合LID≥4的土壤毒性标准值。因此，该土壤具有生物毒性。