一种脑脊液自动分样检测盘

技术领域

本发明涉及一种脑脊液自动分样检测盘，属于微生物检测领域。

背景技术

临床上，常见因细菌感染引发的化脓性脑膜炎、脑脓肿等感染性神经系统疾病，其诊断方式为脑脊液培养。医生在采集脑脊液标本后，一般需要经过增菌培养、分离纯化过程，最终凭借菌落形态、生化鉴定、药敏试验、免疫学方法等手段来进行诊断与鉴别诊断，该脑脊液培养方式为目前感染性神经系统疾病诊断的“金标准”。然而，脑脊液培养的检测过程复杂，诊断周期较长，一般需要一周。在急性神经系统感染的情况下，诊断明显滞后于临床治疗，不利于患者预后。根据临床病例数据统计以及文献分析，目前常见的中枢神经系统感染病原体包括金黄色葡萄球菌、肠球菌、表皮葡萄球菌、脑膜炎奈瑟菌、肺炎克雷伯菌、绿脓杆菌和鲍曼不动杆菌，占所有感染性神经系统疾病患者的70％-80％。然而，无论是传统的脑脊液培养或是其他检测方法，都无法一次性检测多种病原微生物。同时，因为检测周期较长，过程中标本的保存和处理都会极大地影响检测结果，造成误诊或漏诊的风险。此外，检测过程耗时耗力也不利于提高医疗服务效率。因此，研制出一种能够快速、简便且准确进行脑脊液感染常见微生物检测具有重要的临床价值。

发明内容

鉴于上述的分析，本发明旨在提供一种脑脊液自动分样检测盘，用以解决现有脑脊液检测周期长，操作步骤复杂，且无法一次性检测多种微生物的问题。

本发明的目的主要是通过以下技术方案实现的：

本发明技术方案中，一种脑脊液自动分样检测盘，包括：中央收集区以及用于检测脑脊液细菌感染的集合胶体金试纸。集合胶体金试纸以中央收集区为圆心环型排列，各单元胶体金扇形试纸相互隔离。

本发明技术方案中，集合胶体金试纸包括8个单元胶体金扇形试纸，分别为单元胶体金扇形试纸A，单元胶体金扇形试纸B，单元胶体金扇形试纸C，单元胶体金扇形试纸D，单元胶体金扇形试纸E，单元胶体金扇形试纸F，单元胶体金扇形试纸G，单元胶体金扇形试纸H。

本发明技术方案中，各单元胶体金扇形试纸设置有底衬、样品垫、结合垫、检测垫和吸水垫。检测垫贴附于底衬，结合垫位于检测垫上部与其部分重叠，吸液垫位于检测垫上部与其部分重叠，样品垫位于结合垫上部与其部分重叠。

本发明技术方案中，底衬为PVC板，样品垫和结合垫为玻璃纤维素膜，检测垫为NC膜，吸液垫为纯棉绒浆滤纸。结合垫上设置有纳米金标记的的每种细菌的单克隆抗体，检测垫上设置有弧形通用探针的质控线和检测线。

本发明技术方案中，单元胶体金扇形试纸A的所述检测垫上设置有金黄色葡萄球菌单克隆抗体的检测线，单元胶体金扇形试纸B的所述检测垫上设置有肠球菌单克隆抗体的检测线，单元胶体金扇形试纸C的所述检测垫上设置有表皮葡萄球菌单克隆抗体的检测线，单元胶体金扇形试纸D所述检测垫上设置有脑膜炎奈瑟菌单克隆抗体的检测线，单元胶体金扇形试纸E所述检测垫上设置有大肠杆菌单克隆抗体的检测线，单元胶体金扇形试纸F所述检测垫上设置有肺炎克雷伯菌单克隆抗体的检测线，单元胶体金扇形试纸G所述检测垫上设置有绿脓杆菌单克隆抗体的检测线，单元胶体金扇形试纸H所述检测垫上设置有鲍曼不动杆菌单克隆抗体的检测线。

本发明技术方案中，采用双抗体夹心法检测脑脊液样本中是否存在待测细菌抗原，适用于检测以细菌抗原为代表的大分子物质。如果脑脊液样本中存在待测细菌抗原，其会在扩散过程中先与结合垫上的细菌单克隆抗体一-胶体金标记物反应，形成抗原-单克隆抗体一-胶体金标记复合物，并在虹吸作用下继续向前移动到达检测垫，此时该复合物将与待测细菌的单克隆抗体二相结合，形成单克隆抗体二-抗原-单克隆抗体一-胶体金复合物，因检测线中包埋大量待测细菌的单克隆抗体二，所以众多抗原-单克隆抗体一-胶体金标记复合物在此处被捕获，胶体金在检测线大量聚集而显色，多余的抗原-单克隆抗体一-胶体金标记复合物将继续向前流动到达质控线，质控线中包埋的抗金标抗体将与抗原-单克隆抗体一-胶体金标记复合物中的胶体金颗粒结合，大量积聚后显色。如果样本中不存在待测细菌抗原，在脑脊液样本流经结合垫时，细菌单克隆抗体一-胶体金标记物仍会跟随扩散的液体移动到达结合垫，然而由于不含有待测细菌抗原，因此在检测线处细菌单克隆抗体一-胶体金标记物无法与待测细菌单克隆抗体二反应而显色，在液体流动至质控线时，由于存在大量未结合抗原的细菌单克隆抗体一-胶体金标记物，因此能够被质控线中包埋的抗金标抗体捕获，形成抗金标抗体-单克隆抗体一-胶体金标记复合物而显色。

本发明技术方案中，如果出现阳性结果，即质控线显色，且检测线显色，则表明脑脊液中存在对应细菌感染；如果出现阴性结果，即质控线显色，且检测线不显色，则表明脑脊液中不存在对应细菌；如果出现无效结果1，即质控线不显色，且检测线也不显色，或出现无效结果2，即质控线不显色，且检测线显色，则表明样品并未充分，结果无效，需进行第二次检测。

本发明技术方案中，集合胶体金试纸中的8个单元胶体金扇形试纸之间通过PVC底板上带有的隔板结构进行分隔，在完成脑脊液加样后，各单元胶体金扇形试纸中结合垫、检测垫和吸水垫上的液体不会交叉污染，影响检测结果。

本发明技术方案中，脑脊液在成功收集后如无大量红细胞悬浮即可用于进行检测，用移液枪吸取50-100μL样品加至中央收集区的样品垫上，通过玻璃纤维素膜的虹吸效应以中央收集区为圆心向四周均匀扩散，到达各待测细菌对应的结合垫上，与对应的单克隆抗体一-胶体金标记物相遇，并继续在玻璃纤维素膜的结合垫上前进，流至硝酸纤维素膜的检测垫上，分别与检测线上的待测细菌单克隆抗体二和质控线上的抗金标抗体反应，多余液体被检测盘四周的吸水垫吸收。

本发明技术方案中，包括一种制备一种脑脊液自动分样检测盘的方法，其步骤包括：

1、用柠檬酸三钠与氯金酸反应制备胶体金；

2、将各待测细菌对应的单克隆抗体一加入步骤1中制备的胶体金中，得到细菌单克隆抗体-胶体金标记物；

3、将制备的细菌单克隆抗体一-胶体金标记物包被在结合垫上；

4、将各待测细菌的单克隆抗体二包被在检测垫的硝酸纤维素膜上构成检测线；

5、将抗金标抗体包被在检测垫的硝酸纤维素膜上构成质控线；

6、按检测垫、结合垫、吸液垫和样品垫的顺序依次在PVC底板上进行粘贴，制备完成一种脑脊液自动分样检测盘。

本发明技术方案至少能够实现以下效果之一：

1、本发明的脑脊液自动分样检测盘，通过中央收集区的统一点样，脑脊液样本能够通过毛细效应在8个单元胶体金扇形试纸区域同时进行检测，解决了现有脑脊液检测方式效率较低的问题；

2、本发明的使用方式中，脑脊液样本在进行检测前无需进行特殊处理，完成收集后即可进行加样，操作简便快捷，实现脑脊液细菌感染的床旁快速检测；

3、本发明装置设计结构灵巧简单，易于制备，各单元胶体金扇形试纸之间存在PVC隔板分隔的设计在保证一次性检测多种细菌的同时，防止不同抗原-抗体结合物之间的交叉污染，提高检测结果的可信度；

4、本发明装置8个单元胶体金扇形试纸区域的对称结构设计，利于脑脊液样本的均匀扩散，能有效避免因加样过多或过少导致对层析结果的影响，提高检测结果的准确性；

5、本发明采用双抗体夹心法检测待测细菌抗原，抗原与单克隆抗体一、抗体二分别结合，形成单克隆抗体二-抗原-单克隆抗体一复合物，特异性强，同时结合胶体金显色技术，显色稳定且易于保存，红色的显色结果易于肉眼判读。

本发明中，上述各技术方案之间还可以相互组合，以实现更多的优选组合方案。本发明的其他特征和优点将在随后的说明书中阐述，并且，部分优点可从说明书中变得显而易见，或者通过实施本发明而了解。本发明的目的和其他优点可通过说明书以及附图中所特别指出的内容中来实现和获得。

附图说明

附图仅用于示出具体实施例的目的，而并不认为是对本发明的限制，在整个附图中，相同的参考符号表示相同的部件。

图1为本发明实施例的结构俯视图；

图2为本发明实施例的检测结果示意图；

图3为本发明实施例的剖面图。

附图标记：

1-中央收集区，2-单元胶体金扇形试纸A，3-单元胶体金扇形试纸B，4-单元胶体金扇形试纸C，5-单元胶体金扇形试纸D，6-单元胶体金扇形试纸E，7-单元胶体金扇形试纸F，8-单元胶体金扇形试纸G，9-单元胶体金扇形试纸H，10-集合胶体金试纸，11-质控线，12-检测线，13-无效结果1，14-阴性结果，15-阳性结果，16-无效结果2，17-样品垫，18-结合垫，19-检测垫，20-吸水垫，21-底衬。

具体实施方式

下面结合附图来具体描述本发明的优选实施例，其中，附图构成本发明一部分，并与本发明的实施例一起用于阐释本发明的原理，并非用于限定本发明的范围。

在本发明实施例的描述中，需要说明的是，除非另有明确的规定和限定，术语“相连”应做广义理解，例如，可以是固定连接，也可以是可拆卸连接，或一体式连接。对于本领域的普通技术人员而言，可以根据具体情况理解上述术语在本发明中的具体含义。

全文中描述使用的术语“顶部”、“底部”、“在……上方”、“下”和“在……上”是相对于整体检测盘部件的相对位置，例如检测盘内部的顶部和底部衬底的相对位置，与它们在空间中的方位无关。

如图1至图3所示，本发明实施例提供了一种脑脊液自动分样检测盘，能够更高效便捷地进行脑脊液常见细菌感染的检测，包括中央收集区(1)及用于检测脑脊液细菌感染的集合胶体金试纸(10)。所述集合胶体金试纸(10)以中央收集区(1)为圆心环型排列，平均分为8个扇形单元胶体金扇形试纸，各单元胶体金扇形试纸相互隔离。每个单元依次设置有样品垫(17)、结合垫(18)、检测垫(19)和吸水垫(20)，结合垫(18)上设置有纳米金标记的的每种细菌的单克隆抗体，检测垫(19)上设置有弧形抗金标抗体的质控线(11)，以及设置有捕获抗原-单克隆抗体一-胶体金标记复合物的细菌单克隆抗体检测线(12)。中央收集区(1)、样品垫(17)、结合垫(18)和检测垫(19)均固定于底衬(21)上，样品垫(17)和结合垫(18)为玻璃纤维素膜，检测垫(19)为硝酸纤维素膜。检测垫(19)贴附于底衬(21)，结合垫(18)位于检测垫(19)上部与其部分重叠，吸液垫(20)位于检测垫(19)上部与其部分重叠，样品垫(17)位于结合垫(18)上部与其部分重叠。

本发明中的集合胶体金试纸(10)由8个单元胶体金扇形试纸构成，分别为单元胶体金扇形试纸A(2)，单元胶体金扇形试纸B(3)，单元胶体金扇形试纸C(4)，单元胶体金扇形试纸D(5)，单元胶体金扇形试纸E(6)，单元胶体金扇形试纸F(7)，单元胶体金扇形试纸G(8)，单元胶体金扇形试纸H(9)。每个单元胶体金扇形试纸上均上设置有弧形羊抗兔IgG抗金标抗体的质控线(11)，以及设置有捕获抗原-单克隆抗体一-胶体金标记复合物的细菌单克隆抗体检测线(12)。单元胶体金扇形试纸A(2)用于检测金黄色葡萄球菌，其结合垫(18)上设置有兔抗SdrD-胶体金标记物，检测垫(19)上设置有包埋鼠抗金黄色葡萄球菌蛋白A单克隆抗体的检测线(12)。单元胶体金扇形试纸B(3)用于检测肠球菌，其结合垫(18)上设置有兔抗SagA-胶体金标记物，检测垫(19)上设置有包埋鼠抗肠球菌双杂聚糖DHG单克隆抗体的检测线(12)。单元胶体金扇形试纸C(4)用于检测表皮葡萄球菌，其结合垫(18)上设置有兔抗YycG-胶体金标记物，检测垫(19)上设置有包埋鼠抗表皮葡萄球菌聚集相关蛋白Aap单克隆抗体的检测线(12)。单元胶体金扇形试纸D(5)用于检测脑膜炎奈瑟菌，其结合垫(18)上设置有兔抗NhhA-胶体金标记物，检测垫(19)上设置有包埋鼠抗脑膜炎奈瑟菌外膜蛋白NspA单克隆抗体的检测线(12)。单元胶体金扇形试纸E(6)用于检测大肠杆菌，其结合垫(18)上设置有兔抗大肠杆菌O抗原-胶体金标记物，检测垫(19)上设置有包埋鼠抗大肠杆菌H抗原单克隆抗体的检测线(12)。单元胶体金扇形试纸F(7)用于检测肺炎克雷伯菌，其结合垫(18)上设置有兔抗FepA-胶体金标记物，检测垫(19)上设置有包埋鼠抗肺炎克雷伯菌特异性表面蛋白MltD单克隆抗体的检测线(12)。单元胶体金扇形试纸G(8)用于检测绿脓杆菌，其结合垫(18)上设置有兔抗OprF-胶体金标记物，检测垫(19)上设置有包埋鼠抗绿脓杆菌微孔蛋白F单克隆抗体的检测线(12)。单元胶体金扇形试纸H(9)用于检测鲍曼不动杆菌，其结合垫(18)上设置有兔抗OmpA-胶体金标记物，检测垫(19)上设置有包埋鼠抗鲍曼不动杆菌外膜蛋白W单克隆抗体的检测线(12)。

在中央收集区(1)对脑脊液样本进行加样后，脑脊液在样品垫(17)上以中央收集区(1)为圆心凭借虹吸效应向四周扩散，分别流入8个单元胶体金扇形试纸，到达各待测细菌对应的结合垫(18)上，与单克隆抗体一-胶体金标记物相遇，并继续在玻璃纤维素膜结合垫(18)上前进，流至硝酸纤维素膜检测垫(19)上，分别与检测线(12)上的待测细菌单克隆抗体二和质控线(11)上的羊抗兔IgG抗金标抗体反应，多余液体被检测盘四周的吸水垫(20)吸收，医生通过观察检测线(12)和质控线(11)的显色情况进行结果的判读和分析。

本发明实施例的使用方法为：

S1、从密封无菌包装中取出脑脊液自动分样检测盘；

S2、在中央收集区(1)滴加50-100μL脑脊液收集物；

S3、反应15分钟，待样品在集合胶体金试纸(10)上均匀扩散；

S4、根据质控线(11)和检测线(12)的显色情况判读结果；

S5、如果出现阳性结果(15)，即质控线(11)显色，且检测线(12)显色，则表明脑脊液中存在对应细菌感染；如果出现阴性结果(14)，即质控线(11)显色，且检测线(12)不显色，则表明脑脊液中不存在对应细菌；如果出现无效结果1(13)，即质控线(11)不显色，且检测线(12)也不显色，或出现无效结果2(16)，即质控线(11)不显色，且检测线(12)显色，则表明样品并未充分，结果无效，需进行第二次检测。

综上所述，本发明实施提供了一种脑脊液自动分样检测盘，通过在中央收集区的统一加样与同时检测8种细菌的单元胶体金扇形试纸的设计，实现脑脊液微生物感染检测的操作简化和效率提高；本发明检测的8种细菌为临床神经系统感染的常见病原微生物，约占所有感染性神经系统疾病患者的70％-80％，具有较高的临床应用价值；本发明采用双抗体夹心法结合胶体金显色技术进行检测，准确率高且显色稳定，不需要额外对脑脊液样本进行处理或依赖设备进行结果分析，且大幅度缩短检测所需时间，易于在各层级医院进行推广使用。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。