一种高血糖血脂的血液核酸提取试剂盒

技术领域

本发明属于分子生物学技术领域，具体涉及一种高血糖血脂的血液核酸提取试剂盒。

背景技术

血液样本是临床研究和检测中最易获取最常用的样本类型，常用来进行各类生化检测及分子检测。分子检测包括遗传病检测、肿瘤早期筛查等，要保证下游分子检测实验的顺利进行，前提获取高纯度的核酸。血液样本成分较复杂，含有大量蛋白、脂类、糖类成分，尤其是高血糖高血脂患者的血液，这些成分给核酸的提纯带来了困难。现有的核酸提取试剂盒能在一定程度上去除血液样本中的糖类与脂类杂质，但是去除并不完全，尤其是针对血糖及血脂含量极高的样本

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种高血糖血脂的血液核酸提取试剂盒。本发明的目的还在于提供所述的高血糖血脂的血液核酸提取试剂盒的使用方法。

本发明的目的通过下述技术方案实现：

一种高血糖血脂的血液核酸提取试剂盒，包含裂解液、洗涤液1、洗涤液2、洗涤液3，洗脱液。所述的裂解液成分为：30-50mM Tris-醋酸、pH 7.0-9.0，2-4％吐温20，10-30mMEDTA，3-6M异硫氰酸胍；所述的洗涤液1成分为：30-50mM Tris-醋酸、pH 7.0-9.0，2-4％吐温20，1-2M异硫氰酸胍；所述的洗涤液2成分为：30-50mM Tris-醋酸、pH 7.0-9.0，1-3M盐酸胍；所述的洗涤液3成分为：20-30mM Tris-醋酸、pH 7.0-9.0，1-3mM EDTA，75-85％乙醇；所述的洗脱液成分为：10-50mM Tris-醋酸、pH 8.0-9.0，2-6mM EDTA。所述的高血糖血脂的血液核酸提取试剂盒还包含磁珠悬浮液。

优选的，所述的裂解液成分为：40mM Tris-醋酸、pH 7.5，4％吐温20，20mM EDTA，4M异硫氰酸胍；所述的洗涤液1成分为：40mM Tris-醋酸、pH 7.5，3％吐温20，1.6M异硫氰酸胍；所述的洗涤液2成分为：40mM Tris-醋酸、pH 7.5，1.8M盐酸胍；所述的洗涤液3成分为：30mM Tris-醋酸、pH 7.9，2mM EDTA，70％乙醇；所述的洗脱液成分为：40mM Tris-醋酸、pH8.7，5mM EDTA。

所述的高血糖血脂的血液核酸提取试剂盒的使用方法，包括如下步骤：

(1)取200μL全血，加入600-800μL裂解液，混匀后室温放置15-30分钟；

(2)加入30-50μL磁珠悬浮液，震荡混匀，室温放置15-30分钟；

(3)弃掉上清液，向磁珠中加入600-800μL洗涤液1，震荡混匀，丢弃上清；

(4)向磁珠中加入600-800μL洗涤液2，震荡混匀，丢弃上清，丢弃上清；

(5)向磁珠中加入600-800μL洗涤液3，震荡混匀，丢弃上清，丢弃上清；

(6)向磁珠中加入30-60μL洗脱液，震荡混匀，65℃孵育5-10分钟，丢弃磁珠，将上清转移至另一干净的离心管中，即得到提取的核酸。

本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：与现有技术相比，本发明试剂盒中的成分能针对性地去除血液中的糖类和脂类物质，尤其适合高血糖血脂患者的血液样本核酸提取，提取的核酸纯度高，有利于下游检测的顺利开展。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

一种高血糖血脂的血液核酸提取试剂盒，包括6种成分，分别为裂解液、磁珠悬浮液、洗涤液1、洗涤液2、洗涤液3，洗脱液。所述的裂解液成分为：40mM Tris-醋酸、pH 7.5，4％吐温20，20mM EDTA，4M异硫氰酸胍；所述的洗涤液1成分为：40mM Tris-醋酸、pH7.5，3％吐温20，1.6M异硫氰酸胍；所述的洗涤液2成分为：40mM Tris-醋酸、pH 7.5，1.8M盐酸胍；所述的洗涤液3成分为：30mM Tris-醋酸、pH 7.9，2mM EDTA，70％乙醇；所述的洗脱液成分为：40mM Tris-醋酸、pH 8.7，5mM EDTA。

上述试剂原料均从上海阿拉丁公司采购，按以下步骤进行配制：

(1)配制100mL所述裂解液：

称取0.48g Tris、4mL吐温20、2mL 1M EDTA母液、47.2g异硫氰酸胍，加去离子水至70mL，加醋酸调节pH至7.5，然后加去离子水定容到100mL。

(2)配制100mL所述洗涤液1：

称取0.48g Tris、3mL吐温20、18.88g异硫氰酸胍，加去离子水至70mL，加醋酸调节pH至7.5，然后加去离子水定容到100mL。

(3)配制100mL所述洗涤液2：

称取0.48g Tris、17.19g盐酸胍、加去离子水至70mL，加醋酸调节pH至7.5，然后加去离子水定容到100mL。

(4)配制100mL所述洗涤液3：

称取0.36g Tris、0.2mL 1M EDTA母液，加去离子水至70mL，加醋酸调节pH至7.9，然后加去离子水定容到100mL；取上述溶液30mL，加入70mL无水乙醇混匀。

(5)配制100mL所述洗脱液：

称取0.48g Tris、0.5mL 1M EDTA母液，加去离子水至70mL，加醋酸调节至pH至8.7，然后加去离子水定容到100mL。

使用上述配制好的溶液按如下步骤对高血糖血脂血样进行核酸提取：

(1)取200μL高糖高脂全血，加入750μL裂解液，混匀后室温放置20分钟；

(2)加入35μL磁珠悬浮液，震荡混匀，室温放置15分钟；

(3)弃掉上清液，向磁珠中加入750μL洗涤液1，震荡混匀，丢弃上清；

(4)向磁珠中加入750μL洗涤液2，震荡混匀，丢弃上清，丢弃上清；

(5)向磁珠中加入750μL洗涤液3，震荡混匀，丢弃上清，丢弃上清；

(6)向磁珠中加入45μL洗脱液，震荡混匀，65℃孵育8分钟，丢弃磁珠，将上清转移至另一干净的离心管中，得到提取的核酸。

将得到的核酸用Thermo Fisher的超微量分光光度计进行分析，比较浓度及纯度，如表1所示；相比商品化试剂盒，其OD 260nm/280nm在1.7-1.9之间，表示核酸纯度更高。

表1不同试剂提取的高糖高脂全血核酸浓度及纯度比较

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。