一种甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的测定方法

技术领域

本发明涉及药物分析技术领域，尤其涉及一种甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的测定方法。

背景技术

甲磺酸二氢麦角碱(Dihydroergotoxine Methanesulfonate，又名二氢麦角碱甲磺酸盐，CAS登记号为8067-24-1)，具有抑制ATP酶和腺苷酸环化酶、阻断α-受体、缓解血管痉挛、降低血管阻力、改善脑电波异常等多种药理活性。临床上，甲磺酸二氢麦角碱常常被制成片剂、胶囊、注射液等多种剂型，用来治疗急慢性脑血管病后遗的功能和/或智力减退的症状以及轻中度血管性痴呆等。

缓释制剂，是指口服后在规定释放介质中，按要求缓慢地非恒速释放药物的制剂，与相应普通制剂比较，缓释制剂给药频率减少，且能显著增加患者的顺应性或降低药物的副作用。甲磺酸二氢麦角碱的药理作用主要针对慢性病症，需长期用药，将其制成缓释剂型具有非常高的临床应用价值。

现有的甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度测定采用小杯法，小杯法非国际通用方法，且甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度测定需要采用内层镀聚四氟乙烯膜的玻璃溶出杯，溶出杯材质要求特殊。同时采用小杯法进行释放度测试时，释放度测定在0到2小时这一时间段，片剂有粘附在浆轴或溶出杯底部的风险，对释放度检测有很大影响。

现有的甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的测定，采用液相色谱法进行测定，检测过程中，还经常出现色谱柱使用寿命短、分离度变差等现象，故实际生产过程中需要投入较高的检验成本。

另外在制备甲磺酸二氢麦角碱对照品溶液时，采用稀盐酸溶液作为介质直接进行溶解，需要长时间振摇，存在不能完全溶解的风险。

本发明人经过大量的测试条件的筛选研究测定，改变释放度测定和检测方法，克服现有技术存在的问题，开发出一种专属性强、耐受性好的测定方法，有效提高检测准确度，并有效的缩减了检测成本。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的测定方法，其具备准确度、精确度高，专属性、耐受性好，具备整体操作简单、普遍适用的优点。

为了彻底解决上述问题，本发明人改用往复筒装置对本品的释放度进行测定。此装置可有效评估缓控释制剂的产品质量，它几乎没有流体动力学死区；药物制剂会一直保留在往复内筒中且不会粘附在内筒的侧面，另外，未溶解的物料也不会聚集在溶出杯的底部，避免了堆积效应对溶出的影响。同时经检索文献，可能与本品所含辅料卡波姆有关，卡波姆在pH6-12时形成水凝胶结构，较为粘稠，现行释放度高效液相色谱测定法的流动相为0.005mol/L磷酸氢二铵溶液-甲醇(25:75)，水相pH值约等于8，碱性条件下生成的卡波姆凝胶体可能会堵塞色谱柱填料的孔隙，造成色谱柱柱效差、柱压高、使用寿命短等问题。同时采用多批次产品进行检验评估，测定结果平行性良好，可有效满足后续日常生产样品质量放行的需求。同时对高效液相色谱的色谱条件进行优化，重新开发出了专属性强、耐受性好的测定方法。

基于上述目的，本发明提供了一种甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的测定方法，包括以下步骤：

(1)采用往复筒装置进行释放度测试，取甲磺酸二氢麦角碱缓释片，放置在往复筒玻璃套管内，玻璃套管底部安装下筛网，置于释放介质进行释放，得到释放溶液；

(2)取甲磺酸二氢麦角碱对照品2.5mg，加甲醇使甲磺酸二氢麦角碱对照品溶解，再用所述步骤(1)中的释放介质稀释制成每1mL含10μg甲磺酸二氢麦角碱对照品的溶液，作为对照品溶液；

(3)采用高效液相色谱法，测定释放溶液在2h、6h和10h的甲磺酸二氢麦角碱的释放量。

优选的，所述步骤(1)中往复筒的往复速率为每分钟10-20次，下筛网为30-45目。

优选的，所述步骤(1)中释放介质体积为200-250mL，浸润时间为15-20秒。

优选的，所述步骤(1)所述释放介质为盐酸溶液，所述盐酸溶液为每1000mL含有6mL盐酸。

优选的，所述步骤(2)中每2.5mg甲磺酸二氢麦角碱对照品加入10mL甲醇。

优选的，所述步骤(3)中高效液相色谱法的具体过程为：将释放溶液进行离心处理后，精密量取50μL，注入高效液相色谱中，记录色谱图；

优选的，所述离心处理条件为：相对离心力不小于15000g，离心时间5min；

优选的，所述高效液相色谱条件为：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；

流动相：包括A相和B相，A相为磷酸氢二铵溶液，B相为甲醇，A相和B相的体积占比为50:50；

流速：1.2mL/min；

检测波长：280mm；

柱温：30℃。

优选的，所述A相的pH值不大于3或不小于12。

优选的，所述磷酸氢二铵溶液浓度为0.02mol/L。

本发明的有益效果：

本发明使用的甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的测定方法，采用往复筒装置，使得甲磺酸二氢麦角碱缓释片一直保留在往复内筒中，不会粘附在内筒的侧面，另外，未溶解的物料也不会聚集在溶出杯的底部，避免了堆积效应对溶出测定结果的影响。

本发明加入甲醇对甲磺酸二氢麦角碱对照品进行助溶，减少直接使用盐酸介质溶解时存在的溶解时间长且存在不能完全溶解的风险。

本发明变更高效液相色谱条件，减少甲磺酸二氢麦角碱缓释片中的卡波姆在碱性条件下形成凝胶的情况，减少色谱柱的损坏率，提高检测效率，降低生产成本。

综上所述，本发明建立的甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的检测方法准确度、精确度高，专属性、耐受性好，具备整体操作简单、普遍适用的优点，可用于甲磺酸二氢麦角碱缓释片的质量研究，并对类似品种具有借鉴价值。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进一步详细说明。

实施例1

一种甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的测定方法，包括以下步骤：

(1)采用往复筒装置进行释放度测试，取甲磺酸二氢麦角碱缓释片，放置在往复筒玻璃套管内，玻璃套管底部安装下筛网，往复筒的往复速率为每分钟10次，下筛网为30目，置于盐酸溶液中进行释放，所述盐酸溶液体积为200mL，浸润时间为15秒，所述盐酸溶液为每1000mL含有6mL盐酸，得到释放溶液；

(2)取甲磺酸二氢麦角碱对照品2.5mg，加10mL甲醇使甲磺酸二氢麦角碱对照品溶解，再用所述步骤(1)中的盐酸溶液稀释制成每1mL含10μg甲磺酸二氢麦角碱对照品的溶液，作为对照品溶液；

(3)采用高效液相色谱法，测定释放溶液在2h、6h和10h的甲磺酸二氢麦角碱的释放量。

采用高效液相色谱法进行甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的检测，具体过程为：将释放溶液进行离心处理后，精密量取50μL，注入高效液相色谱中，记录色谱图；

离心处理条件为：

相对离心力为15500×g，离心时间5分钟

高效液相色谱条件为：

色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂

流动相：包括A相和B相，A相为0.02mol/L磷酸氢二铵溶液，B相为甲醇，A相和B相的体积占比为50:50；A相的pH值为2.5

流速：1.2mL/min

检测波长：280mm

柱温：30℃

测量标准：

本品每片在2小时、6小时和10小时的释放量应分别相当于标示量的10％-30％、25％-70％和60％以上，均应符合规定。

计算公式

其中：K为校正因子，

Wr：对照品的重量；

Ar：对照品的峰面积；

As：供试品的峰面积；

T：对照品的含量(％)；

f：对照品的水分；

V：释放介质体积。

对近期连续生产的三个批次：批次1、批次2、批次3的甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度进行测定。

具体操作为：

取甲磺酸二氢麦角碱缓释片，分别投入各往复筒内玻璃套管中，依法操作，分别在各取样时间点从往复筒内取出释放溶液2mL，离心，取上清液作为供试品溶液，并即时在操作容器中补充相同温度、相同体积的释放介质。

精密量取对照品溶液和供试溶液各50μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，用外标法以总峰面积计算每片在不同时间的释放量。本品每片在2小时、6小时和10小时的释放量应分别相当于标示量的10％-30％、25％-70％和60％以上。

液相色谱法中的流动相包括A相和B相，A相为磷酸氢二铵溶液，B相为甲醇，A相和B相的体积占比为50:50。A相为0.02mol/L的磷酸氢二铵溶液，用10％磷酸溶液调节pH至2.5。液相色谱法中的色谱柱选取十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。液相色谱法中检测波长280mm，理论板数以第一个主峰计，应不低于2500，柱温30℃，流速为1.2mL/min，进样量为50μL，

实施例2

本实施例提供一种测定甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的测定方法，与实施例1的区别在于，是对近效期的三个批次：批次4、批次5、批次6的甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度进行测定。

往复筒装置的往复速率为每分钟20次、下筛网为45目、浸润时间为20秒，盐酸溶液体积为250mL。

实施例3

本实施例提供一种测定甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的测定方法，与实施例1的区别在于，A相的pH值为12.5，采用氢氧化钠溶液进行pH调节。

对比例1

本对比例提供常规的一种测定甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的测定方法，采用溶出度与释放度测定法第三法装置(采用内层镀聚四氟乙烯膜的玻璃溶出杯)，以盐酸溶液(每1000mL含有6mL盐酸)200mL为溶剂，转速为每分钟100转，依法测定，离心(每分钟3000转)，取上清液作为供试品溶液，精密称取甲磺酸二氢麦角碱对照品2.5mg，用溶剂稀释制成每1mL含10μg的溶液。

液相色谱法中的流动相包括A相和B相，A相为磷酸氢二铵溶液，B相为甲醇，A相和B相的体积占比为25:75。磷酸氢二铵溶液为0.005mol/L，A相pH值约等于8。液相色谱法中的色谱柱选取十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂。液相色谱法中检测波长280mm，理论板数以第一个主峰计，应不低于2500，流速为1.0mL/min进样量为50μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，用外标法以总峰面积计算每片在不同时间的释放量。

测量标准和计算公式同实施例1。

对近期连续生产的三个批次：批次1、批次2、批次3的甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度进行测定。

对比例2

本对比例提供一种测定甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度的测定方法，与对比例1的区别仅在于，是对近效期的三个批次：批次4、批次5、批次6的甲磺酸二氢麦角碱缓释片释放度进行测定。

f

其中n为取样时间点个数，R

对实施例1、实施例2、对比例1、对比例2分别进行测定，测定结果进行汇总，结果见表1-2。

表1实施例1和实施例2的测定结果

表2对比例1和对比例2的测试结果

比较实施例1和对比例1每个取样点的溶出量，计算得批次1、批次2、批次3的f

比较实施例2和对比例2每个取样点的溶出量，计算得批次4、批次5、批次6的f

研究结果表明，采用变更前的小杯法与本发明采用的往复筒法对甲磺酸二氢麦角碱缓释片的释放度进行测定，检测结果均符合限度要求。同一批次样品分别使用两种方法测定的释放度f

实施例1和对比例1中对照品溶液溶解数据：对比例1仅用介质溶解，未加甲醇，需要超声4小时；

实施例1先加甲醇，振摇即能溶解，再溶介质定容，整个步骤操作下来20分钟以内就能完成全部的配制；

通过加入甲醇助溶，简化了前期的操作进程及降低了可能存在的溶解不完全的风险。

对实施例1和实施例3分别进行测定，测定的结果见表3：

比较实施例1和实施例3每个取样点的溶出量，计算得批次1、批次2、批次3的f

研究结果表明，色谱柱中A相的pH值在不大于3和不小于12时，对相同批次的产品释放度测定结果相似，且释放度测定的结果均符合规定。

同时，发明人在大量的实验中证实，采用对比例1中色谱柱，即A相pH值在8时，色谱柱在进样100针左右会出现测定结果不准的情况，寿命极短。

而色谱柱中的A相pH值在不大于3和不小于12时，色谱柱可持续进样超过1000针，使用寿命长，对释放度的测定结果准确。

所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的，并非旨在暗示本发明的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可以以任意顺序实现，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为了简明它们没有在细节中提供。

本发明旨在涵盖落入所附权利要求的宽泛范围之内的所有这样的替换、修改和变型。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。