一种胃镜下检测幽门螺杆菌球形体和螺旋体的检验试剂及其应用

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种胃镜下检测幽门螺杆菌螺旋体和球形体的检验试剂及其应用。

背景技术

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori)是胃内重要的致病菌，幽门螺杆菌可导致十二指肠溃疡、慢性活动性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃黏膜组织相关淋巴瘤和胃癌。因此，简单便捷地诊断有无幽门螺杆菌感染，并判别幽门螺杆菌感染与胃内疾病的关系十分必要。

幽门螺杆菌在正常情况下的活力状态是螺杆体形态，导致幽门螺杆菌相关疾病。在体内外各种不利因素作用下，幽门螺杆菌的形态发生变异，由螺旋体形态转变为球形体。幽门螺杆菌球形体仍具有生命力，且对外界不利环境有较强抵抗力，条件允许球形体恢复成螺杆体形态。已有研究证实，幽门螺杆菌球形体可在小鼠胃内定植、繁殖并引起胃炎。幽门螺杆菌球形体是导致幽门螺杆菌在人群中传播和导致幽门螺杆菌治疗失败复燃的重要因素。

现行检测幽门螺杆菌的方法有形态学检测、功能性检测和免疫检测。幽门螺杆菌形态学检测包括对胃黏膜活检组织进行HE染色、W-S银染色、Giemsa染色和亚甲蓝染色显示幽门螺杆菌的形态，以及进行细菌培养。幽门螺杆菌功能性检测方法利用幽门螺杆菌具有尿素酶活性能将尿素分解成氨(NH

实施这些检测方法的手段包括侵入性检查方法和非入侵性检查方法。非侵入性幽门螺杆菌检查方法包括呼气实验、血液抗体检测和粪便抗体检测，侵入性检查方法需做胃镜检查在胃镜下取得胃黏膜的活检组织进行幽门螺杆菌检测，包括快速尿素酶检测、组织切片染色检测和细菌培养。

呼气实验检测幽门螺杆菌具有敏感性高的优点，但其缺点在于呼气实验只能判断有无幽门螺杆菌感染，不确定幽门螺杆菌导致胃内发生何种疾患；幽门螺杆菌抗体检测方法只能判断是否感染过幽门螺杆菌，不能判定当下体内是否还存在幽门螺杆菌感染。快速尿素酶检测、组织切片染色检测和细菌培养具有特异性好的优点，但存在以下缺点，在检查时需要取出胃黏膜的活检组织来检测有无幽门螺杆菌，因为幽门螺杆菌在胃内呈灶性分布时，如果活检没有取到幽门螺杆菌感染部位导致假阴性而漏诊。

现有利用幽门螺杆菌生物酶活性检测幽门螺杆菌的技术，包括快速尿素酶方法和呼气实验方法，是利用幽门螺杆菌具有尿素酶活性能将尿素分解成氨(NH

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种在胃镜下直接检测幽门螺杆菌球形体的检验试剂，根据幽门螺杆菌球形体具有过氧化氢酶活性，通过作用底物过氧化氢使幽门螺杆菌周围pH值升高，根据pH值指示剂的颜色变化实现检测胃黏膜上幽门螺杆菌球形体的目的。

本发明提供了一种检测幽门螺杆菌球形体的检验试剂，包括pH值指示剂花青素或花青素衍生物和过氧化氢。

优选的，所述过氧化氢和花青素的质量比为(0.5～1.5)：(0.5～1.5)。

优选的，还包括水；

所述过氧化氢的工作浓度为3.33％～10％；

所述花青素的工作浓度为3.33％～10％。

本发明提供了一种同时检测幽门螺杆菌球形体和螺旋体的检验试剂，包括所述检验试剂和用于检测螺旋体的底物尿素。

优选的，所述尿素、过氧化氢和花青素的质量比为(1～3)：(0.5～1.5)：(0.5～1.5)。

优选的，所述尿素的工作浓度为6.67％～20％。

优选的，所述花青素的结构如式I所示：

其中R

本发明提供了所述检验试剂在制备检测幽门螺杆菌幽门螺杆菌球形体的产品中的应用。

本发明提供了所述检验试剂在制备评估幽门螺杆菌治疗效果的产品中的应用。

本发明提供了所述检验试剂在制备筛查与幽门螺杆菌感染相关的胃疾病的产品中的应用；

所述胃相关疾病包括以下至少一种：十二指肠溃疡、慢性活动性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃黏膜组织相关淋巴瘤和胃癌。

本发明提供了一种检测幽门螺杆菌球形体的检验试剂，以花青素作为pH值指示剂，还包括底物过氧化氢。幽门螺杆菌球形体具有过氧化氢酶活性，过氧化氢酶能将过氧化氢分解为水(H

同时本发明还提供了一种同时检测幽门螺杆菌球形体和螺旋体的检验试剂，基于幽门螺杆菌球形体具有过氧化氢酶活性，而幽门螺杆菌螺旋体具有尿素酶活性，能将尿素分解成氨(NH

花青素作为pH值指示剂加底物过氧化氢和花青素作为pH值指示剂加底物尿素，则可分别显示幽门螺杆菌球形体和螺旋体的存在和分布。可见，本发明提供的检测试剂不仅能够对正在感染的幽门螺杆菌实现准确检测，还能够对幽门螺杆菌的不同形态(螺旋体和球形体)进行准确判断，本发明提供的检测具有特异性好和敏感性高的特点，且成本低廉，操作简便，为幽门螺杆菌不同形态的检测提供了极大便利，适合临床推广应用。

附图说明

图1为幽门螺杆菌阴性患者胃镜检测结果；

图2为幽门螺杆菌感染的慢性胃炎的患者喷洒检测试剂前胃镜检测结果；

图3为幽门螺杆菌感染的慢性胃炎的患者喷洒检测试剂后胃镜检测结果；

图4为幽门螺杆菌球形体感染的患者胃镜检测结果；

图5为胃黏膜相关组织淋巴瘤患者胃镜检测结果；

图6为胃癌患者喷洒检测试剂前胃镜检测结果；

图7为胃癌患者在胃黏膜上喷洒检测试剂后胃镜检测结果。

具体实施方式

本发明提供了一种在胃镜下检测幽门螺杆菌球形体的检验试剂，包括pH值指示剂花青素或花青素衍生物和底物过氧化氢。

在本发明中，所述过氧化氢为幽门螺杆菌球形体产生的过氧化氢酶的催化底物，过氧化氢在过氧化氢酶的催化作用下分解为水(H

在本发明中，所述花青素作为pH值指示剂使用。所述花青素的结构如式I所示：

其中R

本发明还提供了一种同时检测幽门螺杆菌球形体的检验试剂，包括pH值指示剂花青素或花青素衍生物和底物过氧化氢、尿素。

在本发明中，所述尿素为幽门螺杆菌螺旋体产生的尿素酶的催化底物，尿素在尿素酶的作用下分解为成氨(NH

在本发明中，所述检测试剂用于胃镜检查时，利用通过胃镜活检钳道的喷洒管将试剂喷洒到胃黏膜表面。所述检测试剂的喷洒剂量为30～60ml/次。

本发明提供了所述检测幽门螺杆菌螺旋体和球形体的检验试剂在制备检测幽门螺杆菌螺旋体和/或幽门螺杆菌球形体的产品中的应用。

在本发明中，所述产品优选包括试剂盒。

在本发明中，所述检测幽门螺杆菌球形体的方法，优选包括以下步骤：

将过氧化氢与花青素和水混合配制成工作浓度，得到幽门螺杆菌球形体检测试剂；

将所述幽门螺杆菌球形体检测试剂喷洒在与上述相同来源的待测胃黏膜表面，当胃黏膜表面试剂颜色没有变化，说明胃黏膜没有幽门螺杆菌球形体的感染；当胃黏膜表面试剂颜色由淡红色变为蓝色，说明胃黏膜有幽门螺杆菌球形体的感染。

在本发明中，所述检测幽门螺杆菌球形体和螺旋体的方法优选包括以下步骤：

将尿素、过氧化氢、花青素和水混合配制成工作浓度，得到幽门螺杆菌螺旋体和/或球形体检测试剂工作液；

将所述检测试剂工作液喷洒在待测胃黏膜表面，观察胃黏膜表面颜色变化，当胃黏膜表面试剂颜色呈红色没有变化，说明胃黏膜没有幽门螺杆菌螺旋体和/或幽门螺杆菌球形体的感染；当胃黏膜表面试剂颜色由红色变为蓝色，说明胃黏膜有幽门螺杆菌的感染；

为了进一步判读感染的幽门螺杆菌是螺旋体形态还是球形体形态，进一步配制检测试剂：

将尿素与花青素和水混合配制成工作浓度，得到幽门螺杆菌螺旋体检测试剂；

将所述幽门螺杆菌螺旋体检测试剂喷洒在与上述相同来源的待测胃黏膜表面，当胃黏膜表面试剂颜色没有变化，说明胃黏膜没有幽门螺杆菌螺旋体的感染；当胃黏膜表面试剂颜色由红色变为蓝色，说明胃黏膜有幽门螺杆菌螺旋体的感染；

将过氧化氢与花青素和水混合配制成工作浓度，得到幽门螺杆菌球形体检测试剂；

将所述幽门螺杆菌球形体检测试剂喷洒在与上述相同来源的待测胃黏膜表面，当胃黏膜表面试剂颜色没有变化，说明胃黏膜没有幽门螺杆菌球形体的感染；当胃黏膜表面试剂颜色由淡红色变为蓝色，说明胃黏膜有幽门螺杆菌球形体的感染。

在本发明中，所述检测试剂能利用胃镜观察时对幽门螺杆菌感染与否进行实时检测，还能对变色部位胃黏膜取活检组织进行其他相关检测，具有极大的操作便利性，且安全无副作用。

由于幽门螺杆菌球形体是影响幽门螺杆菌在人群中传播的重要因素，也是幽门螺杆菌治疗后没有得到根治而复燃的重要因素，因此，本发明提供了所述同时检测幽门螺杆菌螺旋体和球形体的检验试剂在制备评估幽门螺杆菌治疗效果和/或幽门螺杆菌传播性的产品中的应用。

在本发明中，采用上述检测方法进行评估幽门螺杆菌治疗效果，具体利用幽门螺杆菌螺旋体检测试剂工作液喷洒在待测胃黏膜表面，出现阴性检测结果(胃黏膜表面试剂颜色呈红色不变化)，再次利用幽门螺杆菌球形体检测试剂喷洒相同来源胃黏膜检测，当出现所述阳性检测结果(胃黏膜表面试剂颜色由红色变成蓝紫色)时，说明待测患者胃黏膜的幽门螺杆菌发生了球形变，幽门螺杆菌没有被根除，有复燃的可能。

由于幽门螺杆菌是胃的重要致病菌，可导致多种胃病的发生和发展，本发明提供了所述同时检测幽门螺杆菌螺旋体和球形体的检验试剂在制备筛查与幽门螺杆菌感染相关的胃疾病的产品中的应用。

在本发明中，所述与幽门螺杆菌感染相关的胃疾病优选包括以下至少一种：十二指肠溃疡、慢性活动性胃炎、慢性萎缩性胃炎、胃黏膜组织相关淋巴瘤和胃癌。在本发明实施例中，通过筛查与幽门螺杆菌感染相关的胃疾病的诱因，明确幽门螺杆菌在各种胃病中的感染状态，从而为后续胃病的治疗提供方向。

下面结合实施例对本发明提供的一种在胃镜下检测幽门螺杆菌螺旋体和球形体的检验试剂及其应用进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

一种同时检测幽门螺杆菌螺旋体和球形体的检验试剂及其使用方法

1.试剂组成：固体尿素、固体过氧化氢和固体紫甘蓝色素；

2.试剂的配制：将固体尿素、固体过氧化氢和固体紫甘蓝色素分别称量4g、2g、2g混合，溶于30ml水中，得到检测试剂工作液。

3.检测试剂的使用方法

在胃镜检查时，通过胃镜活检钳管道吸除患者胃内液体，将30ml的检测试剂工作液抽入注射器中，将喷洒管从胃镜活检钳道中插入，将检测试剂工作液喷洒至胃黏膜表面，通过胃镜观察胃黏膜表面试剂颜色的变化情况：

幽门螺杆菌螺旋体具有尿素酶活性，能将尿素分解成氨(NH

没有幽门螺杆菌感染的人喷洒检测试剂后，胃黏膜表面试剂颜色呈红色与胃黏膜颜色一致不发生变化。存在幽门螺杆菌螺旋体或球形体感染的人喷洒检测试剂后，胃黏膜表面试剂颜色由红色变成蓝色。

为了确定幽门螺杆菌的形态，分别配制幽门螺杆菌螺旋体检测试剂(固体尿素4g、固体紫甘蓝色素2g，溶于30ml水)和幽门螺杆菌球形体检测试剂(固体过氧化氢2g、固体紫甘蓝色素2g，溶于30ml水)，分别再次喷洒胃黏膜进行检测，根据各自检测试剂的结果，可以判断患者感染的幽门螺杆菌是螺旋体还是幽门螺杆菌球形体。

实施例2

采用检测试剂对不同胃病患者检测的实验

检测幽门螺杆菌感染与慢性胃炎、胃癌、胃黏膜组织相关淋巴瘤的关系，对慢性胃炎患者、胃癌患者和胃淋巴瘤患者进行胃镜检测的同时，按照实施例1的检测试剂进行幽门螺杆菌螺旋体和球形体的检测，检测步骤同实施例1。

图1为幽门螺杆菌阴性患者胃镜检测结果，从图1中可以看出，胃黏膜表面光滑平整，喷洒检测试剂后没有颜色变化，说明患者既没有幽门螺杆菌螺旋体感染也没有幽门螺杆菌球形体感染。

图2为幽门螺杆菌感染的慢性胃炎的患者喷洒检测试剂前胃镜检测结果，从图2中可以看出，胃黏膜表面粗糙，散在糜烂灶。图3是喷洒检测试剂后的胃镜检测结果，从图3中可以看出，胃黏膜表面部分区域可以明显观察到呈现片状蓝紫色色变，说明患者目前感染了幽门螺杆菌。

图4为幽门螺杆菌球形体感染的患者胃镜检测结果，患者是幽门螺杆菌感染经药物治疗后呼气实验检测幽门螺杆菌阴性，来做胃镜复查。从图4中可以看出，患者胃黏膜肿胀，用幽门螺杆菌螺旋体检测试剂喷洒后颜色无变化，用幽门螺杆菌球形体检测试剂喷洒后，胃黏膜表明呈现淡淡的蓝色，说明该患者目前存在幽门螺杆菌球形体感染，存在复燃的可能。

图5为胃黏膜相关组织淋巴瘤患者胃镜检测结果，从图5中可以看出，该患者的胃黏膜肿胀粘膜皱襞消失，但粘膜表明完整。喷洒检测试剂后，胃黏膜上可以明显观察到蓝紫的颜色变化，说明该患者幽门螺杆菌阳性。

图6为胃癌患者喷洒检测试剂前胃镜检测结果，从图6中可以看出，在胃窦小弯处有一个明显的呈火山口形的溃疡型肿物，肿物周边粘膜，中心溃疡。喷洒检测试剂后，肿物周边呈淡淡蓝色，图7是在胃体小弯的胃黏膜上可以明显观察到蓝紫的线状颜色变化，说明该胃癌患者有幽门螺杆菌感染。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。