一种齐墩果酸类衍生物及其制备方法和在抗肿瘤中的应用

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种齐墩果酸类衍生物及其制备方法和在抗肿瘤中的应用。

背景技术

肝癌在全球发病率中排名第五，2020年，原发性肝癌死亡83万例，而我国已经成为肝细胞癌的高危地区(CA CANCER J CLIN 2021,71:209-249)。目前，对HCC患者的化疗方案主要为靶向疗法、免疫疗法以及联合疗法，肝功能A、B级患者常用治疗策略有：索拉非尼、阿替利珠单抗联合贝伐珠单抗或以奥沙利铂为主的系统化疗等(中国临床肿瘤学会(CSCO)原发性肝癌诊疗指南2020)。迄今为止，奥沙利铂广泛用于多种癌症的治疗(Drugs,2000,60:895-924)，但在肝癌的应用中却不尽如人意(临床肝胆病杂志,2020,36:194-197)。因而，开发一种能够与奥沙利铂协同治疗肝癌的药物迫在眉睫。

齐墩果酸(oleanolic acid,OA)是一种五环三萜类天然产物，广泛存在于食物、医学草本植物和其他植物中，具有多种药理学活性，如：保肝、降糖、降血脂、抗溃疡、抗HIV和抗肿瘤的特性。齐墩果酸的抗癌作用几乎贯穿肿瘤发展的各个阶段，Hsu等人体外实验证明OA可抑制肿瘤生长(Cancer letters,1997,111:7-13)；Ii J等人研究发现OA通过阻断肿瘤细胞的细胞周期而抑制肿瘤细胞的增殖(World J Gastroenterol,2002,8:493-499)。研究表明，肉桂酸类似物咖啡酸能够靶向选择抑制肝癌细胞的增殖，并通过诱导细胞凋亡来减少细胞数量(Biochemical and biophysical research communications,2018,505:612-617)。

OA由于生物利用度低的限制，所具有的生物活性并未得到充分广泛的应用。因此制备OA衍生物是解决生物利用度低、扩展和提高OA临床疗效的重要途径。国内外合成的OA衍生物分别显示出良好的抗癌活性(Molecules,2021,26:4957；Cancer letters,2014,346:206-216；Molecules,2021,26:772.)。但目前仍然需要开发出更多不同种类的OA衍生物来进行深入研究。

发明内容

鉴于治疗肝癌的临床现有药物表现不佳，本发明的目的在于提供一种齐墩果酸类衍生物及其制备方法和在抗肿瘤中的应用。

为实现上述目的，本发明通过下述技术方案为：

一种齐墩果酸类衍生物，齐墩果酸类衍生物为式一所示化合物，

式中，R为未取代或被至少一个相同或不同的取代基取代的肉桂酰基或苯甲酰基，其中取代基为-OMe或-OH。

优选，所述齐墩果酸类衍生物中，R为被至少一个相同或不同的取代基取代的肉桂酰基或苯甲酰基，其中取代基为-OMe或-OH。

进一步优选，所述齐墩果酸类衍生物中，R为1-3个相同或不同的取代基取代的肉桂酰基或苯甲酰基，其中取代基为-OMe或-OH。

所述齐墩果酸类衍生物的化学结构式如下所示：

上述齐墩果酸类衍生物的制备方法，包括以下步骤：

(1)向齐墩果酸(1)的二氯甲烷溶液中，依次加入TBDMSCl、三乙胺和DMAP，42℃下加热搅拌反应4h，甲醇重结晶得到羧基保护的齐墩果酸(2)。

(2)将取代的肉桂酸或取代的苯甲酸加入到二氯甲烷中，于0℃条件下加入DCC、DMAP，搅拌反应；再加入羧基保护的齐墩果酸，室温搅拌反应7h，得到成酯产物。

(3)将上一步得到的成酯产物与四丁基氟化铵在四氢呋喃中室温搅拌反应3h，提纯得到A类和B类齐墩果酸衍生物。

步骤(2)所述取代肉桂酸结构，采用如下路线合成：在吡啶溶剂和哌啶催化下，甲氧基取代的苯甲醛(3)与丙二酸反应得到甲氧基取代的肉桂酸(4)；中间体4在低温条件下经BBr

反应式如下：

步骤(2)所述取代的苯甲酸，采用如下路线合成：甲氧基取代的苯甲酸在低温条件下经BBr

反应式如下：

上述的齐墩果酸类衍生物及其与奥沙利铂联用时分别对肝癌细胞存活率的应用。

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

本发明的衍生物中以OA为关键母核单元，通过对天然产物进行结构修饰，以酯键对其进行修饰合成了一系列的OA衍生物。本发明获得OA衍生物在单用时能对肝癌细胞的增殖显示出显著的抑制作用。同时所得部分OA衍生物与临床药物奥沙利铂联用时在肝细胞癌的增殖抑制活性测试中表现出协同作用。本发明内容为后续肝癌治疗药物的研发提供了具有可行性的新思路，也为肝癌的治疗提供了新方向，在医药领域具有良好的应用前景。

附图说明

图1为本发明实施例所得齐墩果酸类衍生物及其与奥沙利铂联用对Hep G2细胞存活率影响柱状图；

图2为本发明实施例所得的齐墩果酸类衍生物及其与奥沙利铂联用对Hep G2细胞存活率影响柱状图。

图3为本发明实施例所得的齐墩果酸类衍生物及其与奥沙利铂联用对Hep 3B细胞存活率影响柱状图。

图4为本发明实施例所得的齐墩果酸类衍生物及其与奥沙利铂联用对Hep 3B细胞存活率影响柱状图。

具体实施方式

联系如下实施例，将更好地理解本发明的化合物及其制备，这些实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。

本发明通过合成一系列齐墩果酸类衍生物并发现其在肿瘤，特别是肝癌治疗中的单独采用所得衍生物和将衍生物与奥沙利铂的联合应用，本发明所合成得到的OA衍生物对Hep G2细胞株及Hep 3B细胞株表现出了良好的生存抑制活性。其中，进一步化合物A1-1、A1-3、B1-1与奥沙利铂联用均有明显抑制肝癌细胞的活性。此外，A1-3与奥沙利铂联用可以完全抑制肝癌细胞存活，由于其抑制作用显著，因此具有广阔的应用前景。

实施例1：3β-O-(3,5-二羟基肉桂酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(A1-1)

称取齐墩果酸(1)(5.00g,10.9mmol)加入250mL茄形瓶中，加入50mL二氯甲烷搅拌溶解，然后再加入叔丁基二甲基氯硅烷(2.00g,13.27mmol)和三乙胺(2mL,14.39mmol)，在42℃下回流反应4h。待反应完全，减压蒸干溶剂至大量固体析出，热甲醇溶解，低温重结晶，抽滤，甲醇反复多次洗涤滤饼，干燥，得5.06g化合物2，收率80.95％。

将原料3,5-二甲氧基苯甲醛(11)(2.00g,12.04mmol)和丙二酸(2.51g,24.08mmol)溶于15mL吡啶，再加哌啶3mL，升温至110℃回流反应3h，冷却至室温，加入50mL水，饱和碳酸钾溶液调节pH至9-10，甲苯(10mL×5)反复萃取至甲苯层无色，稀盐酸调节水层pH 3-4，有大量固体析出，抽滤，干燥得2.35g白色固体化合物(12)，收率93.78％。

将上步所得白色固体化合物(12)(2.00g,9.61mmol)溶于40mL二氯甲烷。N

将上步所得淡黄色固体化合物(13)(1.5g,8.33mmol)溶于50mL二氯甲烷中，依次加入叔丁基二甲基氯硅烷(5.02g,33.30mmol)，三乙胺(6.37ml,45.79mmol)，DMAP(0.01g,0.1mmol)，于42℃下回流反应24h。冷却至室温，减压浓缩得大量固体，加入50mL石油醚搅拌溶解，抽滤，石油醚反复洗涤滤饼，取滤液，减压浓缩，得油状初产物，溶于20mL甲醇中。称取1.5g碳酸钾，溶于等体积的水中，室温下混合搅拌1h，加入3％w/w的盐酸溶液淬灭，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂，柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝30:1，v/v)，得2.43g白色固体化合物(14)，收率71.41％。

将上步所得白色固体化合物(14)(2.00g,4.89mmol)溶于30mL二氯甲烷中，再分别称取DCC(1.26g,6.12mmol)和DMAP(0.45g,3.67mmol)并溶于二氯甲烷，于0℃下滴入反应液，室温反应1h，加入化合物2(0.70g,1.22mmol)，室温反应7h。反应结束后，过滤，减压浓缩，所得淡黄色油状液体加入热正己烷溶解，置于低温环境冷却过夜，过滤，减压浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝50:1，v/v)，得700mg白色固体。将上述白色固体溶于15mL四氢呋喃，加入0.1mL乙酸搅拌均匀，缓慢滴加TBAF(2mL,1mol/L)的四氢呋喃溶液，室温反应3h，停止反应，缓慢加入20mL5％稀盐酸，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机层，依次经5％稀盐酸洗涤、水洗、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂，得淡黄色油状液体粗品450mg。柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1，v/v)，得130mg白色固体A1-1，收率为17.23％。

ESI-MS m/z：616.9[M-H]

1

实施例2：3β-O-(2-羟基肉桂酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(A1-2)

与实施例1中不同之处在于：将实施例1中原料3,5-二甲氧基苯甲醛以2-甲氧基苯甲醛(2.00g,14.69mmol)进行替换按照上述步骤制备获得2-甲氧基苯丙烯酸(2.30g,12.91mmol)，收率87.87％；而后经过BBr

ESI-MS m/z：601.0[M-H]

1

实施例3：3β-O-(3-羟基肉桂酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(A1-3)

与实施例1中不同之处在于：将实施例1中原料3,5-二甲氧基苯甲醛以3-甲氧基苯甲醛(2.00g,14.69mmol)进行替换按照上述步骤制备获得3-甲氧基苯丙烯酸(2.25g,12.63mmol)，收率85.96％；而后经过BBr

ESI-MS m/z：601.1[M-H]

1

实施例4：3β-O-(4-羟基肉桂酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(A1-4)

与实施例1中不同之处在于：将实施例1中原料3,5-二甲氧基苯甲醛以4-甲氧基苯甲醛(2.00g,14.69mmol)进行替换按照上述步骤制备获得4-甲氧基苯丙烯酸(2.18g,12.23mmol)，收率83.29％；经过BBr

ESI-MS m/z：601.1[M-H]

1

实施例5：3β-O-(2,5-二羟基肉桂酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(A1-5)

与实施例1中不同之处在于：将实施例1中原料3,5-二甲氧基苯甲醛以2,5-二甲氧基苯甲醛(2.00g,14.69mmol)进行替换按照上述步骤制备获得2,5-二甲氧基苯丙烯酸(2.08g,9.99mmol)，收率83.00％；经过BBr

ESI-MS m/z：617.1[M-H]

1

实施例6：3β-O-(3,4-二羟基肉桂酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(A1-6)

与实施例1中不同之处在于：将实施例1中原料3,5-二甲氧基苯甲醛以3,4-二甲氧基苯甲醛(2.00g,14.69mmol)进行替换按照上述步骤制备获得3,4-二甲氧基苯丙烯酸(2.00g,9.61mmol)，收率79.81％；经过BBr

ESI-MS m/z：616.9[M-H]

1

实施例7：3β-O-(2-甲氧基肉桂酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(A2-1)

将原料2-甲氧基苯甲醛(15)(2.00g,14.7mmol)和丙二酸(3.06g,29.38mmol)溶于15mL吡啶，滴加哌啶3mL，升温至110℃回流反应3h，冷却至室温，加入50mL水，饱和碳酸钾溶液调节pH至9-10，甲苯(10mL×5)反复萃取至甲苯层无色，稀盐酸调节水层pH 3-4，有大量固体析出，抽滤，干燥得2.35g白色固体化合物(16)，收率89.78％。

将上步所得白色固体化合物(16)(1.80g,10.10mmol)溶于30mL二氯甲烷中，再分别称取DCC(2.61g,12.63mmol)和DMAP(0.93g,7.58mmol)并溶于二氯甲烷，于0℃下滴加DCC的二氯甲烷溶液和DMAP的二氯甲烷溶液，滴毕，室温反应1h，加入化合物2(1.44g,2.53mmol)，室温反应7h。反应结束后，过滤，减压浓缩，所得淡黄色油状液体加入热正己烷溶解，有白色不溶物缓慢析出，置于低温环境冷却过夜，再过滤，减压浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝50:1，v/v)，得1.2g白色固体。溶于15mL四氢呋喃，加入0.1mL乙酸搅拌均匀，缓慢滴加TBAF(2mL,1mol/L)的四氢呋喃溶液，室温反应3h，停止反应，缓慢加入20mL 5％稀盐酸，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机层，依次经5％稀盐酸洗涤、水洗、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂，得淡黄色油状液体粗品450mg。柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1，v/v)，得300mg白色固体A2-1，收率19.22％。

ESI-MS m/z：615.0[M-H]

1

实施例8：3β-O-(4-甲氧基肉桂酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(A2-2)

与实施例7中不同之处在于：将实施例7中2-甲氧基苯甲醛以4-甲氧基苯甲醛(2.00g,14.7mmol)进行替换按照实施例7中记载制备获得4-甲氧基苯丙烯酸(2.28g,12.80mmol)，收率87.11％；1.8g 4-甲氧基苯丙烯酸与化合物2(1.44g,2.53mmol)进行酯缩合，最后以TBAF脱保护得250mg白色固体A2-2，收率16.02％。

ESI-MS m/z：615.0[M-H]

1

实施例9：3β-O-(2,4-甲氧基肉桂酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(A2-3)

与实施例7中不同之处在于：将实施例7中2-甲氧基苯甲醛以2,4-二甲氧基苯甲醛(2.00g,12.04mmol)进行替换按照实施例7中记载制备获得2,4-甲氧基苯丙烯酸(2.14g,10.28mmol)，收率85.40％；2.1g 2,4-甲氧基苯丙烯酸与化合物2(1.44g,2.53mmol)进行酯缩合，最后以TBAF脱保护得260mg白色固体A2-3，收率15.89％。

ESI-MS m/z：645.0[M-H]

1

实施例10：3β-O-(2,5-甲氧基肉桂酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(A2-4)

与实施例7中不同之处在于：将实施例7中2-甲氧基苯甲醛以2,5-二甲氧基苯甲醛(2.00g,12.04mmol)进行替换按照实施例7中记载制备获得2,5-甲氧基苯丙烯酸(2.28g,10.95mmol)，收率90.98％；2.1g 2,5-甲氧基苯丙烯酸与化合物2(1.44g,2.53mmol)进行酯缩合，最后以TBAF脱保护得190mg白色固体A2-4，收率11.61％。

ESI-MS m/z：645.1[M-H]

1

实施例11：3β-O-(2,3-甲氧基肉桂酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(A2-5)

与实施例7中不同之处在于：将实施例7中2-甲氧基苯甲醛以2,3-二甲氧基苯甲醛(2.00g,12.04mmol)进行替换按照实施例7中记载制备获得2,3-甲氧基苯丙烯酸(2.09g,10.04mmol)，收率83.40％；2.1g 2,3-甲氧基苯丙烯酸与化合物2(1.44g,2.53mmol)进行酯缩合，最后以TBAF脱保护得210mg白色固体A2-5，收率12.83％。

ESI-MS m/z：645.1[M-H]

1

实施例12：3β-O-(3-羟基苯甲酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(B1-1)

将原料3-甲氧基苯甲酸(17)(2.00g,13.15mmol)加入到40mL二氯甲烷中溶解。N

将上步所得淡黄色固体化合物(18)(2.00g,14.48mmol)溶于50mL二氯甲烷中，依次加入叔丁基二甲基氯硅烷(4.36g,28.96mmol)，三乙胺(5.03ml,36.20mmol)，DMAP(0.01g,0.1mmol)，于42℃下回流反应24h。冷却至室温，减压浓缩得大量固体，加入石油醚搅拌溶解，抽滤，石油醚反复洗涤滤饼，取滤液，减压浓缩，得油状初产物，溶于20mL甲醇中。称取2.0g碳酸钾，溶于等体积的水中，室温下混合搅拌1h，加入3％w/w的盐酸溶液淬灭，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，有机相用饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂，柱层析(石油醚:乙酸乙酯＝30:1，v/v)，得2.52g白色固体化合物(19)，收率68.96％。

将上步所得白色固体化合物(19)(1.80g,7.14mmol)溶于30mL二氯甲烷中，再分别称取DCC(1.84g,8.92mmol)和DMAP(0.65g,5.35mmol)并溶于二氯甲烷，于0℃下滴入反应液，室温反应1h，加入化合物2(1.02g,1.78mmol)，室温反应7h。反应结束后，过滤，减压浓缩，所得淡黄色油状液体加入热正己烷溶解，置于低温环境冷却过夜，过滤，减压浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝50:1，v/v)，得900mg白色固体。溶于15mL四氢呋喃，加入0.1mL乙酸搅拌均匀，缓慢滴加TBAF(1.5mL,1mol/L)的四氢呋喃溶液，室温反应3h，停止反应，缓慢加入20mL 5％稀盐酸，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机层，依次经5％稀盐酸洗涤、水洗、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂，得淡黄色油状液体粗品450mg。柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝6:1，v/v)，得200mg白色固体B1-1，收率19.48％。

ESI-MS m/z：575.0[M-H]

1

实施例13：3β-O-(3,4-二羟基苯甲酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(B1-2)

与实施例12中不同之处在于：将实施例12中3-甲氧基苯甲酸以3,4-二甲氧基苯甲酸(2.00g,10.98mmol)进行替换按照实施例7中记载制备获得3,4-二羟基苯甲酸(1.49g,9.67mmol)，收率88.06％；经过TBDMSCl保护羟基得3,4-二叔丁基二甲基苯甲酸(1.89g,4.94mmol)，收率76.12％；2.72g 3,4-二叔丁基二甲基苯甲酸与化合物2(1.02g,1.78mmol)进行酯缩合，最后经TBAF脱保护得190mg白色固体B1-2，收率18.01％。

ESI-MS m/z：591.0[M-H]

1

实施例14：3β-O-(3,5-二羟基苯甲酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(B1-3)

与实施例12中不同之处在于：将实施例12中3-甲氧基苯甲酸以3,5-二甲氧基苯甲酸为原料(2.00g,10.98mmol)进行替换按照实施例7中记载制备获得3,5-二羟基苯甲酸(1.45g,9.41mmol)，收率85.70％；经过TBDMSCl保护羟基得3,5-二叔丁基二甲基苯甲酸(1.84g,4.81mmol)，收率74.11％；2.72g 3,4-二叔丁基二甲基苯甲酸与化合物2进行酯缩合，最后经TBAF脱保护得160mg白色固体B1-3，收率15.16％。

ESI-MS m/z：591.0[M-H]

1

实施例15：3β-O-(3,4-二甲氧基苯甲酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(B2-1)

将原料3,4-二甲氧基苯甲酸(1.00g,5.49mmol)溶于30mL二氯甲烷中，再分别称取DCC(1.42g,6.86mmol)和DMAP(0.5g,4.12mmol)并溶于二氯甲烷，于0℃下滴加至反应液中，室温反应1h，加入化合物2(0.78g,1.37mmol)，室温反应7h。反应结束后，过滤，减压浓缩，所得淡黄色油状液体加入热正己烷溶解，置于低温环境冷却过夜，再过滤，减压浓缩，柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝50:1，v/v)，得500mg白色固体。溶于15mL四氢呋喃，加入0.1mL乙酸搅拌均匀，缓慢滴加TBAF(1mL,1mol/L)的四氢呋喃溶液，室温反应3h，停止反应，缓慢加入20mL 5％稀盐酸，乙酸乙酯萃取(20mL×3)，合并有机层，依次经5％稀盐酸洗涤、水洗、饱和食盐水洗涤，无水硫酸镁干燥，过滤，蒸除溶剂，得淡黄色油状液体粗品300mg。柱层析(石油醚：乙酸乙酯＝10:1，v/v)，得120mg白色固体B2-1，收率14.12％。

ESI-MS m/z：619.0[M-H]

1

实施例16：3β-O-(4-甲氧基苯甲酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(B2-2)

与实施例15中不同之处在于：将实施例15中3,4-二甲氧基苯甲酸以4-甲氧基苯甲酸(0.83g,5.48mmol)进行替换按照实施例15中记载其与化合物2(0.78g,1.37mmol)进行酯缩合，最后再经TBAF脱保护得120mg白色固体B2-2，收率14.84％。

ESI-MS m/z：589.0[M-H]

1

实施例17：3β-O-(2,3-二甲氧基苯甲酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(B2-3)

与实施例15中不同之处在于：将实施例15中3,4-二甲氧基苯甲酸以2,3-二甲氧基苯甲酸为原料(1.00g,5.48mmol)进行替换按照实施例15中记载其与化合物2(0.78g,1.37mmol)进行酯缩合，最后再经TBAF脱保护得150mg白色固体B2-3，收率17.66％。

ESI-MS m/z：619.0[M-H]

1

实施例18：3β-O-(3,5-二甲氧基苯甲酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(B2-4)

与实施例15中不同之处在于：将实施例15中3,4-二甲氧基苯甲酸以3,5-二甲氧基苯甲酸为原料(1.00g,5.48mmol)进行替换按照实施例15中记载其与化合物2(0.78g,1.37mmol)进行酯缩合，最后再经TBAF脱保护得160mg白色固体B2-4，收率18.84％。

ESI-MS m/z：619.0[M-H]

1

实施例19：3β-O-(3-甲氧基苯甲酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(B2-5)

与实施例15中不同之处在于：将实施例15中3,4-二甲氧基苯甲酸以3-甲氧基苯甲酸(0.83g,5.48mmol)进行替换按照实施例15中记载其与化合物2(0.78g,1.37mmol)进行酯缩合，最后再经TBAF脱保护得160mg白色固体B2-5，收率19.78％。

ESI-MS m/z：589.1[M-H]

1

实施例20：3β-O-(2,4-二甲氧基苯甲酰基)齐墩果-12-烯-28-酸(B2-6)

与实施例15中不同之处在于：将实施例15中3,4-二甲氧基苯甲酸以2,4-二甲氧基苯甲酸为原料(1.00g,5.48mmol)进行替换按照实施例15中记载其与化合物2(0.78g,1.37mmol)进行酯缩合，最后再经TBAF脱保护得180mg白色固体B2-6，收率21.19％。

ESI-MS m/z：619.0[M-H]

1

本发明中化合物的药物活性测试实验方法如下。

将2mL的0.25％胰酶溶液预先在37℃水浴中加热，选取按照常规培养方式培养至对数期生长的Hep G2细胞和Hep 3B细胞并移除其培养液，加入消化液盖住细胞，静置，显微镜下观察待细胞间隙明显时，加入上述移除的培养液终止消化。轻轻吹打细胞至脱落，形成细胞悬液后转移至离心管内离心，除去上清，用含大约10mL血清培养基(高糖DMEM+10％胎牛血清+1％青霉素和链霉素的混合物)重悬后接种于细胞培养皿中，于37℃、5％CO

消化并稀释对数期生长的Hep G2细胞和Hep 3B细胞，将所得浓度为0.5×10

按照如下公式计算细胞存活率：

结果如表1-2中所示。

表1 OA衍生物对Hep G2细胞株的增殖抑制活性

表2 OA衍生物对Hep 3B细胞株的增殖抑制活性

由上述表1和2数据可见，部分合成化合物对Hep G2和Hep 3B细胞有很明显的抑制活性。同时，与奥沙利铂联用后抑制活性比奥沙利铂单用有明显提升。

当R为3-羟基肉桂酰基时，化合物A1-3对Hep 3B细胞显示良好的抑制活性，Hep 3B细胞的存活率为0.3942％。其与奥沙利铂联用后对Hep 3B细胞株达到了完全抑制的效果。