一种腺苷的发酵菌株及其制备工艺优化

技术领域

本发明属于生物制药工艺领域，具体涉及一种腺苷的发酵制备工艺。

背景技术

腺苷又称腺嘌呤核苷，化学名为6-氨基-9-β-D-呋喃核糖嘌呤，其化学结构式为

腺苷是人体细胞中具有重要生理功能的内源性核苷，可直接进入心肌经磷酸化生成腺苷酸而参与心肌的能量代谢，同时还参与扩张动脉血管，增加血流量。腺苷对心血管系统和肌体的许多其他系统和组织均有生理作用。此外，腺苷还是用于合成三磷酸腺苷（ATP）、腺嘌呤、腺苷酸、阿糖腺苷的重要中间体。国内市场需求量很大，具有十分广阔的发展前景。生物发酵法制备腺苷相对于化学合成法来说，具有绿色环保，工艺路线简单，节约成本，效率高等优势。

发明内容

一株高产菌株

具体实施方式

实施例1

一、发酵

1.菌种培养

（1）种子培养基：葡萄糖15g/L，酵母浸粉6g/L，胰蛋白胨12g/L，氯化钠12g/L；

（2）用一次性无菌接种针沾取甘油菌接入含有100mL已灭菌的种子培养基中，33℃，220rpm摇床培养16h，制备种子液；

2.发酵培养

（1）发酵培养基：蔗糖50g/L，硫酸铵6g/L，酵母膏8g/L，谷氨酸钠5g/L，七水硫酸镁3g/L，磷酸二氢钾1g/L，一水硫酸锰100mg/L，七水硫酸亚铁50mg/L，豆油10mL/L，SP850大孔吸附树脂20g/L，pH为6.8；

（2）将种子液以10%接种量转接入含300mL的发酵培养基中，33℃，220rpm摇床培养48h，得发酵液；

二、提取

1.收集树脂：用100目滤网过滤发酵液，收集大孔吸附树脂，用纯水冲洗树脂表面，去除残留在树脂表面的发酵液；

2.洗脱除杂：将收集到的树脂装入层析柱中，先用10%乙醇洗脱除杂，洗脱体积为树脂柱体积的3倍；

3.收集洗脱液：再用60%乙醇洗脱，洗脱液体积为5倍的树脂柱体积，收集洗脱液；

三、精制

1.浓缩：将收集到的洗脱液真空旋蒸浓缩，旋蒸温度60℃；

2.脱色：加入浓缩液质量1%的活性炭进行脱色，脱色温度70℃，脱色时间30min；

3.结晶分离：脱色液继续浓缩至腺苷含量为100g/L~150g/L，温度降至4℃，保冷6h，使得腺苷结晶析出，然后过滤分离，得到纯度为96.5%的腺苷成品。

实施例2

一、发酵

1.菌种培养

（1）种子培养基：葡萄糖15g/L，酵母浸粉6g/L，胰蛋白胨12g/L，氯化钠12g/L；

（2）用一次性无菌接种针沾取甘油菌接入含有100mL已灭菌的种子培养基中，33℃，220rpm摇床培养16h，制备种子液；

2.发酵培养

（1）发酵培养基：蔗糖50g/L，硫酸铵6g/L，酵母膏8g/L，谷氨酸钠5g/L，七水硫酸镁3g/L，磷酸二氢钾1g/L，一水硫酸锰100mg/L，七水硫酸亚铁50mg/L，豆油10mL/L，SP850大孔吸附树脂20g/L，pH为6.8；

（2）将种子液以10%接种量转接入含300mL的发酵培养基中，33℃，220rpm摇床培养48h，得发酵液；

二、提取

1.收集树脂：用100目滤网过滤发酵液，收集大孔吸附树脂，用纯水冲洗树脂表面，去除残留在树脂表面的发酵液；

2.洗脱除杂：将收集到的树脂装入层析柱中，先用20%乙醇洗脱除杂，洗脱体积为树脂柱体积的2倍；

3.收集洗脱液：再用60%乙醇洗脱，洗脱液体积为5倍的树脂柱体积，收集洗脱液；

三、精制

1.浓缩：将收集到的洗脱液真空旋蒸浓缩，旋蒸温度60℃；

2.脱色：加入浓缩液质量2%的活性炭进行脱色，脱色温度80℃，脱色时间15min；

3.结晶分离：脱色液继续浓缩至腺苷含量为100g/L~150g/L，温度降至4℃，保冷6h，使得腺苷结晶析出，然后过滤分离，得到纯度为97.7%的腺苷成品。

实施例3

一、发酵

1.菌种培养

（1）种子培养基：葡萄糖15g/L，酵母浸粉6g/L，胰蛋白胨12g/L，氯化钠12g/L；

（2）用一次性无菌接种针沾取甘油菌接入含有100mL已灭菌的种子培养基中，33℃，220rpm摇床培养16h，制备种子液；

2.发酵培养

（1）发酵培养基：蔗糖50g/L，硫酸铵6g/L，酵母膏8g/L，谷氨酸钠5g/L，七水硫酸镁3g/L，磷酸二氢钾1g/L，一水硫酸锰100mg/L，七水硫酸亚铁50mg/L，豆油10mL/L，SP850大孔吸附树脂20g/L，pH为6.8；

（2）将种子液以10%接种量转接入含300mL的发酵培养基中，33℃，220rpm摇床培养48h，得发酵液；

二、提取

1.收集树脂：用100目滤网过滤发酵液，收集大孔吸附树脂，用纯水冲洗树脂表面，去除残留在树脂表面的发酵液；

2.洗脱除杂：将收集到的树脂装入层析柱中，先用20%乙醇洗脱除杂，洗脱体积为树脂柱体积的3倍；

3.收集洗脱液：再用70%乙醇洗脱，洗脱液体积为5倍的树脂柱体积，收集洗脱液；

三、精制

1.浓缩：将收集到的洗脱液真空旋蒸浓缩，旋蒸温度60℃；

2.脱色：加入浓缩液质量2%的活性炭进行脱色，脱色温度80℃，脱色时间20min；

3.结晶分离：脱色液继续浓缩至腺苷含量为100g/L~150g/L，温度降至4℃，保冷6h，使得腺苷结晶析出，然后过滤分离，得到纯度为96.2%的腺苷成品。

序列表

<110> 江苏阿尔法药业有限公司

<120> 一种腺苷的发酵菌株及其制备工艺优化

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<170> SIPOSequenceListing 1.0

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<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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<213> 人工序列(Artificial Sequence)

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