一种光慈菇自动检测一体机及检测方法

技术领域

本发明涉及光慈菇检测技术领域，具体为光慈菇自动检测一体机。

背景技术

光慈菇(Tulipa edulis)隶属于百合科(Liliaceae)，是多年生草本植物老鸦瓣(Amana edulis)除去膜质皮及绒毛后的的干燥鳞茎，是我国传统的中药材，主要分布于我国长江流域。光慈菇味甘、性寒，具备清热解毒、化瘀散结的功效，主要用于咽喉肿痛，瘰疬，治疗疮、溃疡、产后瘀血等疾病。近几年研究发现光慈菇在癌症治疗上的卓有成效，尤其在乳腺癌的治疗上，很大程度上增加了对光慈菇药材的需求量。但目前光慈菇的来源大多是野外，资源的过度开采加剧了野生光慈菇的减少，市场上出现了很多混伪品，给用药的准确性与相关研究的有序开展带来了威胁，如何对光慈菇及混伪品进行快速鉴别，成为亟待解决的问题。

目前，关于光慈菇及其混伪品的鉴别方法主要依据传统的鉴定方法，如理化鉴别、显微鉴别和性状鉴别以及通过形态学特征的方法进行鉴别。但是上述方法有些不仅分辨力不高，并且费时费力不适宜推广。我国中药材种类繁多，而又缺乏整理和归类，防止药物的混用、滥用，杜绝以次充好迫在眉睫。

本研究采用ITS条形码序列作为DNA条形码的分子标记。ITS条形码序列是常用的分子标记。ITS是指18S和16S基因之间的转录间隔区internal transcribed spacer，简称ITS。它的长度和序列差异很大，通过序列分析，可以进行物种之间的比较。这种方法弥补传统鉴别方法的不足，且结果不受外界环境、物种来源、品质形态的影响，还可用于区分关系非常近的物种，应用广泛，结果准确，因此用ITS序列对光慈菇及其混伪品进行分子鉴定。

为了避免伪造的光慈菇药材流入市场对患者造成伤害，一般的需要对光慈菇药材进行检测，但是在现有对管刺骨药材进行检测的时候，其过程和步骤较为繁琐，缺少一种可以辅助检测人员快速对光慈菇药材进行检测的一体机。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种光慈菇自动检测一体机，通过集成了所有的检测方法，快速的可以测定出是否为光慈姑，解决了市场上检测方法繁杂，需要的人力物力较多的问题，一键辨别真伪，方便各大药店使用。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：光慈菇自动检测一体机，包括机箱，所述机箱为前表面和顶部均开口的中空长方体结构，且所述机箱的顶部开口的内部拆卸连接有盖板，所述盖板的上表面固定有粉碎罐，所述粉碎罐的顶部拆卸连接有罐盖，所述罐盖的上表面中心处固定有电机，且所述罐盖的下表面中心处转动连接有竖轴，所述竖轴的外侧壁均匀固定有多个粉碎刀片，且所述竖轴的顶端与所述电机的输出端固定连接，所述粉碎罐的内部两侧位于所述竖轴的下方均转动连接有挡板，且所述粉碎罐的内部两侧位于所述挡板的下方均转动连接有电动伸缩杆，两个所述电动伸缩杆的顶端分别与两个所述挡板的下表面转动连接，所述粉碎罐的输出口贯穿所述盖板，且位于所述机箱的内部，所述粉碎罐的底部输出口的外侧壁套设有第一试管，所述第一试管的外侧壁固定有水浴套，所述水浴套的内部填充有水分，且所述水浴套的内部下表面固定有加热板，所述水浴套的顶部固定有温度传感器，且所述水浴套的外侧壁固定有PLC控制器，所述温度传感器和所述加热板均与所述PLC控制器电性连接，所述机箱的内部位于所述第一试管的下方一体成型有第一隔板，所述第一隔板的上表面对比固定有第一高速电机，两个所述第一高速电机的输出轴顶端均固定有第一传动盘，两个所述第一传动盘的外侧壁与所述水浴套的外侧壁相贴合，所述第一隔板的底部对称固定有连接头，两个所述连接头的外侧壁底部分别套设有第二试管和第三试管，所述第一隔板的下表面位于两个所述连接头之间一体成型有第一竖板，所述机箱的内部位于所述第一隔板的下方一体成型有第二隔板，所述第二隔板的上表面与所述第一竖板的底部固定连接，且所述第二隔板的上表面位于所述第一竖板的左侧对称固定有第二高速电机，两个所述第二高速电机的输出轴顶端均固定有第二传动盘，两个所述第二传动盘的外侧壁均与所述第二试管的外侧壁相贴合，所述第二隔板的上表面位于所述第一竖板的右侧对称固定有第三高速电机，两个所述第三高速电机的输出轴顶端均固定有第三传动盘，两个所述第三传动盘的外侧壁均与所述第三试管的外侧壁相贴合，所述机箱的右侧固定有半导体制冷片，所述第二隔板的底部一体成型有第二竖板，所述机箱的内部下表面位于所述第二竖板的左侧固定有PCR扩增仪，且所述机箱的内部下表面位于所述第二竖板的右侧固定有底座，所述底座的上表面从左到右等距开设有多个竖孔，所述第二隔板的下表面位于所述第二竖板的右侧固定有电动推杆，所述电动推杆的底端固定有连接板，所述连接板的底部从左到右等距固定有机盒，多个所述机盒的内部下表面均固定有振动电机，且多个所述机盒的底部均固定有振动棒，多个所述振动棒与多个所述竖孔一一对应。

优选的，所述第一试管、所述第二试管和所述第三试管均为透明度好，且耐高低温的塑料材质。

优选的，所述粉碎罐的底部输出口的外侧壁和两个所述连接头的外侧壁均对称固定有卡环，所述第一试管、所述第二试管和所述第三试管的内侧壁顶部均开设有环槽，所述卡环卡设于所述环槽的内部。

优选的，所述卡环和所述环槽的竖直截面均为圆弧形结构。

优选的，所述第一传动盘、所述第二传动盘和所述第三传动盘均为弹性好、柔软且摩擦系数高的橡胶材质。

优选的，所述机箱的左侧通过铰链转动连接有箱门，所述箱门的前表面开设有可视窗口，所述可视窗口的内部固定有特种玻璃。

优选的，所述箱门的前表面四周嵌设固定有金属条，所述机箱的前表面嵌设固定有电磁锁。

优选的，所述机箱的下表面四个拐角处均固定有带刹车的万向轮。

优选的，所述盖板的下表面固定有密封垫。

优选的，所述机箱的右侧固定有风扇，所述风扇与所述半导体制冷片相对应。

有益效果

本发明提供了光慈菇自动检测一体机，具备以下有益效果：

根据光慈菇及其混伪品的系统发育树可知，光慈菇与山慈菇(基源植物是杜鹃兰)这两种外形相似，不易区分的中草药是两个不同的单系，利用以ITS序列为基础研制的试剂盒能够从分子层面快速鉴别、区分二者，相较于往往需要专业人士鉴定的传统鉴别方法，试剂盒的出现能够使得光慈菇的鉴定更加便捷、高效、准确。本研究对试剂盒的性能进一步进行评估，表明了道地中药材光慈菇的特异性鉴别试剂盒拥有良好的稳定性、重复性、特异性和较小的检测限，适用于光慈菇的快速检测，核酸染液的应用更是大大缩减了光慈菇的检测时间，本发明为光慈菇特异性鉴别试剂盒的商业化奠定基础。

本发明在使用的时候，在对光慈菇药材进行监测的时候，直接通过该一体机即可完成对光慈菇药材的检测，可以避免检测人员通过多个器具以及多个步骤来对光慈菇药材进行检测，所带来的不便和繁琐，可以大大增加检测人员对光慈菇药材的检测效率，并且更加方便检测任玉环对光慈菇药材进行监测，极大方便了操作人员的操作使用。

附图说明

图1为本发明的结构示意图；

图2为本发明图1中A处放大结构示意图；

图3为本发明中水浴套的内部内部结构示意图。

图中：1、箱门；2、金属条；3、可视窗口；4、盖板；5、粉碎罐；6、粉碎刀片；7、罐盖；8、电机；9、竖轴；10、挡板；11、电动伸缩杆；12、密封垫；13、第一试管；14、水浴套；15、第一传动盘；16、第一高速电机；17、风扇；18、半导体制冷片；19、第三传动盘；20、第三高速电机；21、第三试管；22、电动推杆；23、连接板；24、底座；25、竖孔；26、万向轮；27、振动棒；28、机盒；29、振动电机；30、第二竖板；31、PCR扩增仪；32、机箱；33、电磁锁；34、第二隔板；35、第二传动盘；36、连接头；37、第一隔板；38、第二试管；39、第二高速电机；40、卡环；41、环槽；42、PLC控制器；43、温度传感器；44、加热板；45、第一竖板。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

如图1-3所示，本发明提供一种技术方案：光慈菇自动检测一体机，包括机箱32，机箱32为前表面和顶部均开口的中空长方体结构，且机箱32的顶部开口的内部拆卸连接有盖板4，盖板4的上表面固定有粉碎罐5，粉碎罐5的顶部拆卸连接有罐盖7，罐盖7的上表面中心处固定有电机8，且罐盖7的下表面中心处转动连接有竖轴9，竖轴9的外侧壁均匀固定有多个粉碎刀片6，且竖轴9的顶端与电机8的输出端固定连接，粉碎罐5的内部两侧位于竖轴9的下方均转动连接有挡板10，且粉碎罐5的内部两侧位于挡板10的下方均转动连接有电动伸缩杆11，两个电动伸缩杆11的顶端分别与两个挡板10的下表面转动连接，粉碎罐5的输出口贯穿盖板4，且位于机箱32的内部，粉碎罐5的底部输出口的外侧壁套设有第一试管13，第一试管13的外侧壁固定有水浴套14，水浴套14的内部填充有水分，且水浴套14的内部下表面固定有加热板14，水浴套14的顶部固定有温度传感器43，且水浴套14的外侧壁固定有PLC控制器42，温度传感器43和加热板44均与PLC控制器42电性连接，机箱32的内部位于第一试管13的下方一体成型有第一隔板37，第一隔板37的上表面对比固定有第一高速电机16，两个第一高速电机16的输出轴顶端均固定有第一传动盘15，两个第一传动盘15的外侧壁与水浴套14的外侧壁相贴合，第一隔板37的底部对称固定有连接头36，两个连接头36的外侧壁底部分别套设有第二试管38和第三试管21，第一隔板37的下表面位于两个连接头36之间一体成型有第一竖板45，机箱32的内部位于第一隔板37的下方一体成型有第二隔板34，第二隔板34的上表面与第一竖板45的底部固定连接，且第二隔板34的上表面位于第一竖板34的左侧对称固定有第二高速电机39，两个第二高速电机39的输出轴顶端均固定有第二传动盘35，两个第二传动盘35的外侧壁均与第二试管38的外侧壁相贴合，第二隔板34的上表面位于第一竖板45的右侧对称固定有第三高速电机20，两个第三高速电机20的输出轴顶端均固定有第三传动盘19，两个第三传动盘19的外侧壁均与第三试管21的外侧壁相贴合，机箱32的右侧固定有半导体制冷片18，第二隔板34的底部一体成型有第二竖板30，机箱32的内部下表面位于第二竖板30的左侧固定有PCR扩增仪31，且机箱32的内部下表面位于第二竖板30的右侧固定有底座24，底座24的上表面从左到右等距开设有多个竖孔25，第二隔板34的下表面位于第二竖板30的右侧固定有电动推杆22，电动推杆22的底端固定有连接板23，连接板23的底部从左到右等距固定有机盒28，多个机盒28的内部下表面均固定有振动电机29，且多个机盒28的底部均固定有振动棒27，多个振动棒27与多个竖孔25一一对应，在使用的时候，首先将干燥样品或者新鲜样品放置在粉碎罐5中，然后盖上罐盖7，启动电机8带动竖轴9以及其上的多个粉碎刀片6高速转动，从而可以将样品切碎，然后启动两个电动伸缩杆11带动两个挡板10转动，从而可以使粉碎的样品进入到第一试管13中，然后向第一试管13中加入试剂后，并通过水浴套14进行水浴加热一段时间，然后冷却至一定的温度后，再向第一试管13中加入试剂，并启动两个第一高速电机16带动第一试管13转动，进行离心操作，然后将第一试管13从粉碎罐5上的输出口上取下，并将上层清液注入到第二试管38中，同时向第二试管38中加入试剂，然后将第二试管38套设在连接头36上，启动两个第二高速电机39带动第二试管38转动离心，然后将第二试管38取下，并将上层清液注入到第三试管21中，同时向第三试管21中加入试剂，并启动半导体制冷片18，然后将三试管21套设在连接头36上，使第三试管21在低温环境下静置一段时间，然后启动第三高速电机20带动第三试管21高速转动离心，离心后将第三试管21从连接头36上取下，向其中加入试剂，并再次离心，然后加入试剂进行洗涤，并再次离心，最后一次离心将其中的乙醇挥发干净，然后加入适量的灭菌水，溶解DNA，作为样品模板，再将样品模板、阳性对照品、阴性对照品分别放置在扩增管中，然后放置到PCR扩增仪31进行扩增操作，扩增完成后，分别将盛放有样品模板、阳性对照品、阴性对照品的扩增管插入到底座24上的多个竖孔25中，并箱其中滴加检测试剂，然后启动电动推杆22，使多个振动棒27分别插入到扩增管中，然后启动振动电机29，使振动棒27振动，使样品和检测试剂混合均匀，然后置于紫外线灯管下照射，是否出现绿光，如果出现绿光则为光慈菇，反之则不是。

进一步的，第一试管13、第二试管38和第三试管21均为透明度好，且耐高低温的塑料材质，便于操作人员可以看清试管内部的情况。

进一步的，粉碎罐5的底部输出口的外侧壁和两个连接头的外侧壁均对称固定有卡环40，第一试管13、第二试管38和第三试管21的内侧壁顶部均开设有环槽41，卡环40卡设于环槽41的内部，便于试管安装和拆卸。

进一步的，卡环40和环槽41的竖直截面均为圆弧形结构，便于试管安装和拆卸。

进一步的，第一传动盘15、第二传动盘35和第三传动盘19均为弹性好、柔软且摩擦系数高的橡胶材质，便于试管卡在传动盘之间，同时便于试管从两个传动盘之间拆卸下来。

进一步的，机箱32的左侧通过铰链转动连接有箱门1，箱门1的前表面开设有可视窗口3，可视窗口3的内部固定有特种玻璃，便于操作人员通过可视窗口3即可对内部的情况进行观看。

进一步的，箱门1的前表面四周嵌设固定有金属条2，机箱32的前表面嵌设固定有电磁锁33，通过电磁锁33和金属条2可以将箱门1牢固的固定在机箱32上。

进一步的，机箱32的下表面四个拐角处均固定有带刹车的万向轮26，便于移动该装置。

进一步的，盖板4的下表面固定有密封垫12，避免空气中的灰尘以及小颗粒杂质容易进入到箱体32中。

进一步的，机箱32的右侧固定有风扇17，风扇17与半导体制冷片18相对应，通过风扇17可以为半导体制冷片进行散热，使半导体制冷片可以更好的进行工作。

综上可得，本发明的工作流程：在使用的时候，首先将干燥样品或者新鲜样品放置在粉碎罐5中，然后盖上罐盖7，启动电机8带动竖轴9以及其上的多个粉碎刀片6高速转动，从而可以将样品切碎，然后启动两个电动伸缩杆11带动两个挡板10转动，从而可以使粉碎的样品进入到第一试管13中，然后向第一试管13中900μL的2％CTAB提取缓冲液及10μLβ-巯基乙醇和约0.02gPVP后，并通过水浴套14进行水浴加热到65℃，自动化反应30min，然后再停止加热，并冷却至45℃后，再向第一试管13中加入氯仿/异戊醇的混合液体(24：1，v/v)，并启动两个第一高速电机16带动第一试管13转动，实现了混合液的离心操作，然后将第一试管13从粉碎罐5上的输出口上取下，并将上层清液注入到第二试管38中，同时向第二试管38中加入330μL异丙醇，然后将第二试管38套设在连接头36上，启动两个第二高速电机39带动第二试管38转动离心，然后将第二试管38取下，并将上层清液注入到第三试管21中，同时向第三试管21中加入500μL70％乙醇，并启动半导体制冷片18，然后将三试管21套设在连接头36上，使第三试管21在-20℃的环境下冷却20～40min，然后启动第三高速电机20带动第三试管21高速转动离心，离心后将第三试管21从连接头36上取下，向其中加入试剂，并再次离心，然后加入无水乙醇进行洗涤，并再次离心，最后一次离心将其中的乙醇挥发干净，然后加入适量的灭菌水，溶解DNA，作为样品模板，再将样品模板、阳性对照品、阴性对照品分别放置在扩增管中，然后放置到PCR扩增仪31进行扩增操作，扩增完成后，分别将盛放有样品模板、阳性对照品、阴性对照品的扩增管插入到底座24上的多个竖孔25中，并箱其中滴加2μLP5(100×SYBR Green I染液)，然后启动电动推杆22，使多个振动棒27分别插入到扩增管中，然后启动振动电机29，使振动棒27振动，使样品和检测试剂混合均匀，然后置于紫外线灯管下照射，是否出现绿光，如果出现绿光则为光慈菇，反之则不是。

本发明首次提出了光慈姑自动检测设备，经过一系列的自动化反应后，仅仅需要紫外灯照射就可以准确的判断出是不是光慈姑，本发明使用非常简单，测定结果判断特征明显，省去了大量的预处理人工操作，是各大药店，采购商的必备检测设备。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。