植物乳杆菌菌株WKA86在制备护肝/抗氧化/防治酒精性肝损伤药物方面的用途

技术领域

本发明涉及微生物领域，具体涉及植物乳杆菌菌株WKA86在制备护肝/抗氧化/防治酒精性肝损伤药物方面的用途。

背景技术

酒精性肝损伤（ALD）主要是由于长期大量饮酒而引发的一系列肝脏损伤性病变，ALD的范围包括脂肪肝、肝炎症和坏死、进而发展成肝纤维化和肝细胞坏死，肝功能衰竭。持续高水平的酒精摄入会导致酒精性肝病，在世界范围内，ALD是严重危害公众健康的常见疾病之一，并呈逐年上升趋势。在我国，人均酒精消耗量日益增加，酒精导致的肝脏损伤性疾病已经上升成为仅次于病毒性肝炎之后的第二大肝脏疾病。

益生菌可以在肠道中发酵，产生乳酸、过氧化氢与抗菌素等，对预防和治疗胃肠道疾病有明显效果；维持阴道低pH环境，阻止外源病原体的入侵；起到预防癌症、延缓衰老等益生作用。益生菌通过对肠道菌群的调节，肠道屏障的保护作用，及免疫功能已被广泛报道。最近有研究表明，一些益生菌可以通过改善肠道通透性，调节肠道菌群等途径改善肝损伤，具有保肝作用。而益生菌在产品生产和胃肠道中常遇到各种环境压力，在酒精性肝损伤患者中，乙醇胁迫是其存活的重要挑战之一。乙醇渗入细胞膜中可以改变膜结构、破坏膜完整性，从而抑制膜功能，可能造成菌体特异性黏附能力降低，影响其发挥益生功能。

因此，本领域需要开发更多耐乙醇的新菌株。

发明内容

未解决上述技术问题，本发明发现了保藏编号为CCTCC NO：M 2022193的一株植物乳杆菌（

本发明的技术方案如下：

保藏编号为CCTCC NO：M 2022193的一株植物乳杆菌（

所述护肝指：降低Kupffer细胞中TNF-α含量。

所述抗氧化指：产生抗氧化酶；

优选地，所述抗氧化酶选自超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、乙醛脱氢酶中的一种或两种或三种。

所述防治酒精性肝损伤选自：抑制乙醇诱导的Kupffer细胞中TNF-α的表达水平、降低饮酒小鼠体内的转氨酶含量和TG含量、降低饮酒小鼠体内的炎症因子水平、提高饮酒小鼠体内的抗氧化酶含量；

优选地，所述转氨酶选自：丙氨酸转氨酶和/或天冬氨酸转氨酶；

优选地，所述炎症因子选自：IL-6，IL-17，IL-1β，TNF-α中的一种或一种以上；

优选地，所述抗氧化酶选自：超氧化物歧化酶和/或谷胱甘肽过氧化物酶。

所述药物包括药效成分；以保藏编号为CCTCC NO：M 2022193的一株植物乳杆菌（

优选地，所述药物选自：护肝药、抗氧化药、防治酒精性肝损伤药物中的一种或两种或两种以上

优选地，所述药物还包括：药用辅料；

优选地，所述药物的剂型选自：粉剂、片剂、液体剂、胶囊剂中的一种或一种以上。

保藏编号为CCTCC NO：M 2022193的一株植物乳杆菌（

所述食品包括活性成分；以保藏编号为CCTCC NO：M 2022193的一株植物乳杆菌（

优选地，所述食品还包括：食用辅料；

优选地，所述食品选自：保健食品、发酵乳制品、发酵豆制品、发酵果蔬制品、发酵肉制品、发酵饮料、益生菌发酵剂、益生菌固体饮料、发酵酒制品、发酵醋制品中的一种或两种或两种以上。

所述护肝指：降低Kupffer细胞中TNF-α含量；

优选地，所述抗氧化指：产生抗氧化酶；

优选地，所述防治酒精性肝损伤选自：抑制乙醇诱导的Kupffer细胞中TNF-α的表达水平、降低饮酒小鼠体内的转氨酶含量和TG含量、降低饮酒小鼠体内的炎症因子水平、提高饮酒小鼠体内的抗氧化酶含量；

优选地，所述抗氧化酶选自超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、乙醛脱氢酶中的一种或两种或三种。

所述抗氧化指：产生抗氧化酶；

优选地，所述抗氧化酶选自超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、乙醛脱氢酶中的一种或两种或三种。

所述防治酒精性肝损伤选自：抑制乙醇诱导的Kupffer细胞中TNF-α的表达水平、降低饮酒小鼠体内的转氨酶含量和TG含量、降低饮酒小鼠体内的炎症因子水平、提高饮酒小鼠体内的抗氧化酶含量；

优选地，所述转氨酶选自：丙氨酸转氨酶和/或天冬氨酸转氨酶；

所述炎症因子选自：IL-6，IL-17，IL-1β，TNF-α中的一种或一种以上；

所述抗氧化酶选自：超氧化物歧化酶和/或谷胱甘肽过氧化物酶。

在一些国家或地区的专利法允许的前提下，本发明还请求保护保藏编号为CCTCCNO：M 2022193的一株植物乳杆菌（

本发明的目的是提供一株耐乙醇植物乳杆菌，该菌株保藏在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号为：CCTCC NO：M 2022193

本发明提供一种高乙醇耐受性菌剂，该植物乳杆菌在17%乙醇浓度中能良好存活，有较高乙醇耐受性。

本发明提供一种产乙醛脱氢酶的植物乳杆菌，酶活为58.34U/ml。

本发明提供一种具有抗氧化能力的植物乳杆菌，其中超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽（GSH）含量分别为：122.76U/ml和145.66U/ml。

本发明提供一种显著降低乙醇诱导炎症因子含量的菌剂，其特征在于所述的植物乳杆菌显著抑制乙醇诱导的Kupper细胞产生TNF-α。

本发明提供一种改善酒精性肝损伤的植物乳杆菌及其应用，显著增强饮酒小鼠抗氧化能力，显著降低血清中ALT，AST含量，以及肝脏中甘油三脂含量。

所述植物乳杆菌能显著提高饮酒小鼠抗氧化因子SOD和GSH-Px水平。

所述植物乳杆菌能显著降低饮酒小鼠肝脏中IL-6、IL-17、TNF-α、IL-1β含量。

本发明提供一种具有较高耐乙醇能力的植物乳杆菌，及其在改善酒精性肝损伤方面的应用。该菌株具有较强的产乙醛脱氢酶能力，胃肠道耐受性，以及肠上皮细胞黏附能力，可降低乙醇诱导Kupper细胞的炎症反应，降低饮酒小鼠肝脏中炎症因子含量，显著改善酒精导致的肝损伤，具有保肝护肝功能，可广泛应用于保健食品，保健品，或药品中。

本发明的植物乳杆菌（

保藏编号：CCTCC NO：M 2022193；

分类命名：植物乳杆菌；

拉丁名：

保藏单位：中国典型培养物保藏中心；

保藏单位地址：中国、武汉、武汉大学；

保藏日期：2022年3月4日。

附图说明

图1为本发明实验例1不同乳杆菌对酒精耐受能力图。

图2为本发明实验例1植物乳杆菌对不同浓度酒精的耐受能力图，其中，A为酒精浓度12%的各菌株生长OD值，B为酒精浓度17%的各菌株生长OD值，C为酒精浓度19%的各菌株生长OD值，D为酒精浓度21%的各菌株生长OD值。

图3为本发明实验例1的A4菌株在含不同浓度酒精的MRS培养基上的生长情况；从左至右分别为酒精浓度12%、17%、19%、21%；培养基照片中阴影部分表示有菌株生长，阴影覆盖越多，表明长得菌越密集，OD值越高。

图4为本发明实验例5植物乳杆菌对胆盐耐受性影响图。

具体实施方式

下面结合具体实施例和实验例对本发明的内容和效果做进一步的详细描述，但并不以此限制本发明的保护范围。

实验例7使用的Kupffer细胞从小鼠肝脏中提取获得。

实验例7和8使用的小鼠购自华中农业大学动物中心。

第1组实施例、本发明菌株WKA86的制药用途

保藏编号为CCTCC NO：M 2022193的一株植物乳杆菌（

在一些实施例中，所述护肝指：降低Kupffer细胞中TNF-α含量。

在具体的实施例中，所述抗氧化指：产生抗氧化酶；

优选地，所述抗氧化酶选自超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、乙醛脱氢酶中的一种或两种或三种。

在具体的实施例中，所述防治酒精性肝损伤选自：抑制乙醇诱导的Kupffer细胞中TNF-α的表达水平、降低饮酒小鼠体内的转氨酶含量和TG含量、降低饮酒小鼠体内的炎症因子水平、提高饮酒小鼠体内的抗氧化酶含量；

优选地，所述转氨酶选自：丙氨酸转氨酶和/或天冬氨酸转氨酶；

优选地，所述炎症因子选自：IL-6，IL-17，IL-1β，TNF-α中的一种或一种以上；

优选地，所述抗氧化酶选自：超氧化物歧化酶和/或谷胱甘肽过氧化物酶。

在更具体的实施例中，所述药物包括药效成分；以保藏编号为CCTCC NO：M2022193的一株植物乳杆菌（

优选地，所述药物选自：护肝药、抗氧化药、防治酒精性肝损伤药物中的一种或两种或两种以上

优选地，所述药物还包括：药用辅料；

在更具体的实施例中，所述药用辅料选自：溶剂、抛射剂、增溶剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂、反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂等。

根据本发明的内容，出于实际生产应用中的不同需求，再结合药物制备领域的常规技术手段（例如，《制剂技术百科全书》、《药物制剂技术》等），本领域技术人员可对上述药用辅料进行选择和调配，并将CCTCC NO：M 2022193的植物乳杆菌（

优选地，所述药物的剂型选自：粉剂、片剂、液体剂、胶囊剂中的一种或一种以上。

第2组、菌株WKA86的食品用途

本组实施例提供保藏编号为CCTCC NO：M 2022193的一株植物乳杆菌（

在一些实施例中，所述食品包括活性成分；以保藏编号为CCTCC NO：M 2022193的一株植物乳杆菌（

优选地，所述食品还包括：食用辅料；

在另一些实施例中，所述食用辅料选自：漂白剂、防腐剂、抗氧化剂、着色剂、甜味剂、酸味剂、增味剂、护色剂等。

根据本发明的内容，出于实际生产应用中的不同需求，再结合食品生产加工工艺领域的常规技术手段（例如，《食品生产概论》、《食品与食品生产百科全书》、《食品加工技术》等），本领域技术人员可对上述食用辅料进行选择和调配，并将CCTCC NO：M 2022193的植物乳杆菌（

优选地，所述食品选自：保健食品、发酵乳制品、发酵豆制品、发酵果蔬制品、发酵肉制品、发酵饮料、益生菌发酵剂、益生菌固体饮料、发酵酒制品、发酵醋制品中的一种或两种或两种以上。

优选地，所述食品选自：保健食品、发酵乳制品、发酵豆制品、发酵果蔬制品、发酵肉制品、发酵饮料、益生菌发酵剂、益生菌固体饮料、发酵酒制品、发酵醋制品中的一种或两种或两种以上。

在具体的实施例中，所述护肝指：降低Kupffer细胞中TNF-α含量；

优选地，所述抗氧化指：产生抗氧化酶；

优选地，所述防治酒精性肝损伤选自：抑制乙醇诱导的Kupffer细胞中TNF-α的表达水平、降低饮酒小鼠体内的转氨酶含量和TG含量、降低饮酒小鼠体内的炎症因子水平、提高饮酒小鼠体内的抗氧化酶含量；

优选地，所述抗氧化酶选自超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、乙醛脱氢酶中的一种或两种或三种。

在另一些实施例中，所述抗氧化指：产生抗氧化酶；

优选地，所述抗氧化酶选自超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、乙醛脱氢酶中的一种或两种或三种。

在具体的实施例中，所述防治酒精性肝损伤选自：抑制乙醇诱导的Kupffer细胞中TNF-α的表达水平、降低饮酒小鼠体内的转氨酶含量和TG含量、降低饮酒小鼠体内的炎症因子水平、提高饮酒小鼠体内的抗氧化酶含量；

优选地，所述转氨酶选自：丙氨酸转氨酶和/或天冬氨酸转氨酶；

所述炎症因子选自：IL-6，IL-17，IL-1β，TNF-α中的一种或一种以上；

所述抗氧化酶选自：超氧化物歧化酶和/或谷胱甘肽过氧化物酶。

第3组、菌株WKA86的适应症用途

本组实施例提供保藏编号为CCTCC NO：M 2022193的一株植物乳杆菌（

在具体的实施例中，所述护肝指：降低Kupffer细胞中TNF-α含量；

优选地，所述抗氧化指：产生抗氧化酶；

优选地，所述防治酒精性肝损伤选自：抑制乙醇诱导的Kupffer细胞中TNF-α的表达水平、降低饮酒小鼠体内的转氨酶含量和TG含量、降低饮酒小鼠体内的炎症因子水平、提高饮酒小鼠体内的抗氧化酶含量；

优选地，所述抗氧化酶选自超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、乙醛脱氢酶中的一种或两种或三种。

在另一些实施例中，所述抗氧化指：产生抗氧化酶；

优选地，所述抗氧化酶选自超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、乙醛脱氢酶中的一种或两种或三种。

在具体的实施例中，所述防治酒精性肝损伤选自：抑制乙醇诱导的Kupffer细胞中TNF-α的表达水平、降低饮酒小鼠体内的转氨酶含量和TG含量、降低饮酒小鼠体内的炎症因子水平、提高饮酒小鼠体内的抗氧化酶含量；

优选地，所述转氨酶选自：丙氨酸转氨酶和/或天冬氨酸转氨酶；

所述炎症因子选自：IL-6，IL-17，IL-1β，TNF-α中的一种或一种以上；

所述抗氧化酶选自：超氧化物歧化酶和/或谷胱甘肽过氧化物酶。

实验例1、耐乙醇植物乳杆菌的筛选及鉴定

（1）采集健康大学生的粪便样本，取0.5g至4.5mL无菌生理盐水中，充分振荡分散样品，取100μL样品梯度稀释，选取合适梯度均匀涂布于MRS琼脂平板上，置于厌氧条件下，37℃培养36～48h后，挑选单菌落，进行革兰氏染色，镜检观察菌落形态特征，初步筛选疑似乳杆菌的菌株。菌株在MRS固体培养基上进行反复划线纯化培养，获得乳杆菌纯化菌株，将纯化菌株保藏在-80℃甘油管。

MRS培养基配方（g/L）：蛋白胨10、牛肉浸粉5、酵母粉5、葡萄糖20、无水乙酸钠5、柠檬酸氢二铵2、吐温80 1、K

（2）耐乙醇筛选实验

将植物乳杆菌接种到液体L-半光氨酸盐酸盐的MRS培养基中活化，培养到对数生长期，按2%的接种量接种到乙醇终浓度为7%含L-半光氨酸盐酸盐的MRS中，并取250ul培养基接入96孔板，37℃培养，实验使用Biosceen全自动生长曲线测定仪对植物乳杆菌生长曲线进行测定，实验结果见图1。

由图1可知，6种植物乳杆菌中，A1，A4，A5三株植物乳杆菌生长情况较好好，OD600nm分别达到3.79，5.05，4.31。表明A1，A4，A5对乙醇有较好的耐受性。

（3）植物乳杆菌对不同浓度酒精的耐受性

将植物乳杆菌接种到液体L-半光氨酸盐酸盐的MRS培养基中活化，培养到对数生长期，配制不同乙醇终浓度（7%，12%，17%，19%，21%）的含L-半光氨酸盐酸盐的MRS，并取250μL培养基接入96孔板，按照2%的接种量，接种A1，A4，A5三株植物乳杆菌，并在37℃下培养，实验使用Biosceen全自动生长曲线测定仪对植物乳杆菌生长曲线进行测定，实验结果见图2。实验以LGG为对照，LGG是公认的具有益生能力的商业菌株。

从图2可以看出，在酒精浓度为12%时，植物乳杆菌A4的生长OD值最高，达到3.26。在酒精浓度为17%时，A4，A5生长OD值均较好。在酒精浓度为19%，21%时，A4的生长OD值均较高于其余两株。酒精浓度为17%时，A4生长良好，OD值达到0.439；而在酒精浓度19%，21%时仅为0.26和0.23，虽然生长受到高乙醇浓度的抑制，但A4菌株在高浓度乙醇环境下仍能生长（图3）。

实验例2、本发明耐乙醇植物乳杆菌的16SrDNA鉴定实验

对筛选的目的菌株A4进行培养，收集菌体，提取基因组DNA，采用通用引物27F：AGAGTTTGATCCTGGCTCAG和1492R：GGTTACCTTGTTACGACTT扩增其16SrDNA片段，用琼脂糖凝胶电泳检测PCR扩增产物，并对PCR产物进行测序。其中PCR反应体系：10×buffer10μL，10mMdNTP2μL，上下引物各1μL，DNA模板2μL，Taq酶0.5μL，ddH

保藏编号：CCTCC NO：M 2022193；

分类命名：植物乳杆菌；

拉丁名：

保藏单位：中国典型培养物保藏中心；

保藏单位地址：中国、武汉、武汉大学；

保藏日期：2022年3月4日。

实验例3、植物乳杆菌WKA86产乙醛脱氢酶能力及抗氧化能力测定

将植物乳杆菌按2%的接种量接入1%（V/V）乙醛的MRS培养基中，37℃培养12h，收集菌体，并用PBS洗涤2次，再用pH为7.4的BindingBuffer提取液重悬，利用超声破碎仪进行细胞破碎，再4℃，1000g离心20min，去除上清液后，按照乙醛脱氢酶试剂盒的步骤进行酶活性测定，实验使用酶标仪测定450nm处吸光度值。

将植物乳杆菌活化培养至对数生长期，离心收集菌体，用PBS洗涤两次后重悬，利用超声破碎仪进行细胞破碎，再4℃，1000g离心20min，去除上清液后，按照超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px）试剂盒的步骤进行处理，然后分别测定420nm，450nm处吸光度值，并计算菌株产SOD，GSH能力。

表1. 植物乳杆菌WKA86产乙醛脱氢酶、SOD和GSH-Px结果

乙醇在体内被氧化成乙醛，乙醛会对机体造成损伤，而乙醛通过乙醛脱氢酶会被氧化成无毒害的乙酸，大多数人在饮酒时，没有足够的乙醛脱氢酶来氧化乙醛，因此，上述的植物乳杆菌有很强的产乙醛脱氢酶能力，能缓解乙醛刺激导致的不适症状。乙醇代谢会诱导活性氧自由基（ROS）的激增，会促发肝脏氧化应激，引起肝细胞DNA、蛋白质的氧化损伤以及脂质的过氧化，从而使肝细胞受损。而SOD和CSH可以直接清除自由基，由上表可知，植物乳杆菌能大量产生SOD和CSH活性酶，能对自由基进行有效的清除。

实验例4、植物乳杆菌WKA86胃肠道耐受性测定

配制人工胃液：配制PBS溶液，加入0.3%胃蛋白酶，用1mol/LHCL调节pH值至2.5，然后充分溶解后用0.22μm微孔滤膜过滤除菌备用。

配制人工肠液：将0.1%胰蛋白酶溶解在配制好的PBS溶液中，再加入0.3%牛胆粉，用0.1mol/LNaOH调节pH值至8.0，充分溶解后用0.22μm微孔滤膜过滤除菌备用。

将待测菌株活化2代后调整菌液浓度为10

表2. 植物乳杆菌胃肠道耐受性测定

结果如表2所示，胃液消化3h，植物乳杆菌WKA86存活率为91.85%，肠液消化3h，植物乳杆菌存活率为93.85%，这表明植物乳杆菌WKA86有较强的耐胃酸和肠液的能力。

实验例5、植物乳杆菌WKA86胆盐耐受性测定

实验使用Biosceen全自动生长曲线测定仪对植物乳杆菌WKA86生长曲线进行测定，将含牛胆盐的含L-半光氨酸盐酸盐的MRS液体培养基（含0.2%巯基乙酸钠，0.1%牛胆盐），并取250ul培养基接入96孔板，培养周期末期的菌株按1%接种量接种，以不加牛胆盐的MRS液体培养基（含0.2%巯基乙酸钠）为空白对照。以延滞期长短作为菌株耐受胆盐能力的评价标准，延滞期是指实验组和空白组菌株吸光度增加0.3个单位所需时间的差值。

由图4所示，与LGG相比，在0.1%的牛胆盐中，植物乳杆菌延滞期远低于LGG，具有较好胆盐耐受能力。

实验例6、植物乳杆菌WKA86细胞黏附性实验测定

按2%接种量将植物乳杆菌WKA86接种于MRS液体培养基中，37℃培养12h，离心收集菌体，用PBS洗涤3次后，将菌体重悬于不含双抗的DMEM培养液中，调节菌悬液的浓度为10

将消化的HT-29细胞调整浓度到10

表3. 植物乳杆菌WKA86对HT-29黏附能力测定

由表3可知，以LGG为对照菌株，发现植物乳杆菌WKA86黏附能力较强，存在明显优势。

实验例7、植物乳杆菌WKA86对乙醇诱导的Kupffer细胞影响

Kupffer细胞培养：通过胶原酶灌注从小鼠肝脏中取出肝细胞，取肝细胞悬液（悬于含2mM谷氨酰胺和0.1mg/mL庆大霉素，不含血清的RPMI1640培养基中）在50g下离心2min，得到的上清液再300g离心10min，得到的沉淀重悬于RPMI1640培养基中，孵育2h，附着在壁上的细胞，即为Kupffer细胞。

实验使用0.4mM的乙醇溶液对Kupffer细胞(1×10

表4. 植物乳杆菌WKA86对Kupffer细胞中TNF-α的影响

乙醇处理显著诱导TNF-α的表达。然而，经植物乳杆菌WKA86干预后，Kupffer细胞中TNF-α含量显著降低。这表明，植物乳杆菌WKA86可显著抑制乙醇诱导的TNF-α的表达。

实验例8、植物乳杆菌WKA86对酒精诱导肝损伤小鼠的影响

（1）动物模型建立

取清洁级雄性ICR小鼠（6周龄，体重22g±2g），进行一周适应培养，然后分为4组进行实验，每组15只。每只小鼠进行标记，每天9点严格按照固定次序进行灌胃。酒精处理组先用200μLPBS灌胃，时间间隔1h，再用60%乙醇进行1次灌胃，每次200μL。空白组每天灌胃PBS缓冲液200μL，每天两次，间隔1h。植物乳杆菌WKA86干预酒精处理低剂量组：先灌胃1×10

（2）生理生化指标测定

将血样进行3500r/min，4℃离心10min，按照试剂盒说明书步骤测定小鼠血清中丙氨酸转氨酶（ALT），天冬氨酸转氨酶（AST）活性以及肝脏匀浆中SOD、GSH-Px氧化应激指标含量。取500μL肝脏匀浆液，充分混合于4mL氯仿-甲醇（体积比2∶1）脂质抽提缓冲液中，置于4℃过夜，8000r/min离心10min。将下层含脂质的有机相转至EP管中干燥，用甘油三酯（TG）检测试剂盒测定TG含量。

表5. 植物乳杆菌WKA86对饮酒小鼠体内ALT、AST、SOD、GSH-Px、TG的影响

ALT和AST主要存在于包括肝脏在内的多种组织中，当肝脏受损时，转氨酶便会进入血液，导致血清中ALT和AST水平升高。由上表可以看出，本发明中提供的植物乳杆菌WKA86在低剂量、中剂量、高剂量下，都能显著降低饮酒小鼠血清中AST、ALT水平，且呈剂量依赖性。灌胃高剂量植物乳杆菌WKA86时，血清中ALT和AST基本恢复正常水平，这说明植物乳杆菌WKA86具有显著的解酒，保护肝细胞，和减少酒精对肝细胞损伤功能。

乙醇及其代谢产物可产生大量的自由基而对肝脏等器官造成损伤，而本发明中，植物乳杆菌WKA86干预的饮酒小鼠，产生SOD、GSH-Px酶类活性物质，能有效清除自由基，从而达到解酒保肝的效果。酒精对肝脏的损害也反映在脂肪的积累上。酒精暴露使小鼠肝脏中TG水平的升高，导致小鼠体内脂肪堆积。植物乳杆菌WKA86干预后，饮酒小鼠肝脏中TG水平显著降低，起到降脂护肝的作用。

（3）小鼠肝脏中炎症因子指标测定

按照酶联免疫试剂盒说明书测定IL-6、IL-17、IL-1β，TNF-α的含量。取0.2g肝脏组织，加入PBS缓冲液匀浆化处理，然后在4℃条件下，12000rpm离心10min，分离肝脏组织上清液。

表6. 植物乳杆菌对小鼠肝脏细胞中炎症因子的影响

由上表6可知，过量饮酒会引起小鼠肝脏中炎症因子，包括IL-6，IL-17，IL-1β，TNF-α含量显著增加，表明慢性酒精暴露导致了小鼠肝脏炎症反应。而通过益生菌干预后，饮酒小鼠肝脏中高水平的IL-6，IL-17，IL-1β，TNF-α均显著降低（p<0.05），高剂量植物乳杆菌WKA86灌胃后，肝脏中的炎症因子水平基本恢复正常水平。

SEQUENCE LISTING

<110> 微康益生菌（苏州）股份有限公司

<120> 植物乳杆菌菌株WKA86在制备护肝/抗氧化/防治酒精性肝损伤药物方面的用途

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