磺胺类药物残留的净化填料及前处理方法

技术领域

本发明涉及药物残留检测领域，更具体地，本发明涉及一种净化填料及相应的前处理方法。

背景技术

磺胺类药物(Sulfonamides，SAs)是一类人工合成的具有对氨基苯磺酰胺结构的抗生素，能够抑制细菌的生长繁殖，具有较强的抗菌作用，因其具有化学性质稳定、抗菌谱广、价廉、使用方便等优异特点，被广泛用于预防和治疗畜牧疾病。然而，磺胺类药物滥用、误用及不遵守休药期规定，会造成动物源食品中的磺胺类残留超标，磺胺类药物不易代谢，因此会在人体内蓄积，对人体造成各种潜在危害。而且磺胺类药物还存在严重副作用和潜在的致癌性，其耐药性问题也日益严重。因此，我国以及欧盟、美国等大多数国家对食品中磺胺类药物的最高残留量均有明确规定，我国和欧盟规定所有食用动物的肌肉、脂肪、肝、肾食品中磺胺类药物的最大残留量为0.1mg/kg。

磺胺类药物残留问题越来越受社会的关注，其检测方法主要有酶联免疫法、高效液相色谱法、超高效液相色谱-串联质谱法、电化学检测法等。其中高效液相色谱同时检测的种类有限、电化学传感器存在设备昂贵、不方便携带以及不稳定的缺点。而免疫学技术主要用于现场检测和筛查，不能用于确证。超高效液相色谱-质谱/质谱具有专一可靠、灵敏度高以及高通量的特点，现已成为国内外确证测定的黄金方法。

为了保证准确度和灵敏度，检测前的样本前处理尤其重要。动物源食品包括鸡肉、猪肉、牛羊肉、牛奶、蜂蜜、鱼、虾等，含有脂肪、蛋白、糖类、磷脂等多种成分，由于样本的多样及复杂性，如何选择合适的前处理方法，在去除杂质的同时充分提取磺胺类药物，保证检测的准确性以及灵敏度是食品安全检测领域的一大难点。

目前，磺胺类药物残留检测的前处理方法有传统的液液萃取、固相萃取(SPE)、固相微萃取(SPME)、磁性固相萃取(MSPE)、基质分散固相萃取(MSPD)、分子印迹技术(MIPs)、分散液液微萃取(DLLME)、QuEChERS、免疫亲和色谱法、超声辅助萃取、微波辅助萃取等技术。传统的液液萃取是磺胺类药物确证检测的常见前处理方法，我国食品安全国家标准GB/T 20759-2006《畜禽肉中十六种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》以及农业部1077号公告-1-2008都采用液液萃取的方式，先用乙腈或酸化乙腈进行提取，再用正己烷萃取除脂，然后上机检测。同时，固相萃取是应用比较多和高效的前处理方法，例如，我国食品安全国家标准GB29694-2013《动物性食品中13种磺胺类药物多残留的测定高效液相色谱法》采用MCX为固相萃取柱进行固相萃取，样本经过乙酸乙酯提取、正己烷除油脂后的提取液过MCX，经过吸附、洗脱得到洗脱液，氮吹吹干后复溶使用高效液相色谱法测定磺胺类药物残留量。国家标准GB/T 22966-2008《牛奶和奶粉中16种磺胺类药物残留量的测定液相色谱-串联质谱法》采用高氯酸溶液先沉淀乳制品中的蛋白，再采用HLB固相萃取柱净化，甲醇洗脱，液相色谱-串联质谱测定。国家标准GB/T 21316-2007《动物源性食品中磺胺类药物残留量的测定液相色谱-质谱/质谱法》将样本直接与C18填料混合均匀，加入乙腈-水提取液在微波辐照辅助下提取，再用乙腈饱和的正己烷液液分配净化，用液相色谱-质谱/质谱测定。综合来看，我国国家标准针对磺胺类药物测定主要采用溶剂提取、正己烷液液萃取除脂与固相萃取技术相结合，固相萃取柱主要采用HLB或MCX柱，采用吸附洗脱模式，尽量减少基质效应对测试的影响。综合所述前处理方法，除了有机溶剂萃取、分散液液萃取外，固相萃取、基质固相萃取、分散固相萃取等都需要采用吸附和洗脱，QuEChERS虽然省去了吸附和洗脱两个步骤，但需要额外增加一步离心。

目前现有技术中的前处理方法具有以下缺点：(1)传统的液液萃取去除杂质效果有限，导致后续液相色谱-串联质谱的基质效应较高，对结果准确性有一定干扰，同时会对仪器造成一定程度的损害；(2)液液萃取需多步提取，有机溶剂使用比例高，有一定的毒性，且需要旋蒸，步骤复杂；(3)固相萃取需要活化、上样、淋洗、洗脱等步骤，操作复杂；(4)分散固相萃取需要额外的步骤-离心，而且不存在理论塔板效应，对杂质吸附有限。

因此，本领域亟需一种用于动物源食品中磺胺类药物检测的新净化填料，所述净化填料可以选择性吸附蛋白质、色素、脂质等杂质，而不吸附被测目标物，使用新净化填料的前处理方法可以简单、快速地完成高效净化，无需旋蒸以及有机溶剂萃取，操作简便，具有适用基质广、回收率高、净化速度快以及可批量处理等优点。

发明内容

如上所述，现有的磺胺类药物残留的前处理方法仍存在多种不足。因此，本领域亟需一种用于动物源食品中磺胺类药物检测的新净化填料及前处理方法。

因此，在第一方面，本发明提供了一种净化填料，其中，所述净化填料包含按照质量比1：(0.5-5)：(0.5-5)混合的硅胶、氧化铝和亲水亲脂平衡聚合物。

在第二方面，本发明提供了一种固相净化柱，其中，所述固相净化柱包括柱管和柱塞，所述柱管内从上而下依次包含上筛板、填料、下筛板，所述填料为本发明第一方面所述的净化填料。

在第三方面，本发明提供了一种固相净化系统，其中，所述固相净化系统包括本发明第二方面所述的固相净化柱和配套试管，所述固相净化柱的柱塞与所述配套试管的内壁紧密贴合并形成上下活动的活塞结构。

在第四方面，本发明提供了一种用于磺胺类药物残留检测的前处理方法，包括：(1)使用本发明第一方面所述的净化填料、本发明第二方面所述的固相净化柱、或者本发明第三方面所述的固相净化系统对样本提取液进行净化处理。

在第五方面，本发明提供了一种磺胺类药物残留的检测方法，所述方法包括：

(1)使用本发明第四方面所述的前处理方法来对样本提取液进行前处理，由此获得经前处理的样本提取液；

(2)任选地使用滤膜过滤所述经前处理的样本提取液；

(3)对所述经前处理的样本提取液中的磺胺类药物残留进行检测。

本发明的有益效果：使用本发明新净化填料的前处理方法，可以简单地(单步骤)、快速地去除样本中的杂质，而不吸附被测目标物，也无需旋蒸以及有机溶剂萃取，能够简单、快速地完成高效净化，操作简便。此外，本发明方法可以同时分析和检测多达20种磺胺类药物，具有适用基质广、回收率高等优点。并且，在无需基质标准曲线校准的情况下也能够确保获得稳定性好、回收率高的检测结果。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的实施方案。

图1为本发明的固相净化柱的结构示意图，其中，1为柱管，2为柱塞，3为滤芯，4为下筛板，5为填料，6为上筛板。

图2为本发明的磺胺类药物残留的检测方法的流程示意图。

图3猪肉提取液经不同前处理方式的紫外吸收检测结果对比图。

具体实施方式

下面将结合本发明的实施方案和附图，对本发明进行清楚、完整的描述。显然，所描述的实施方案仅仅是本发明的一部分实施方案，而不是全部的实施方案。基于本发明中的实施方案，本领域普通技术人员可以获得的所有其他实施方案，都属于本发明保护的范围。

如上所述，目前现有技术中的磺胺类药物残留检测的前处理方法存在去除杂质效果有限、实验时间长、操作步骤复杂等问题，并且导致后续检测中基质效应较高、检测结果不够准确。本发明旨在提供一种用于动物源食品中磺胺类药物检测的新净化填料，所述净化填料可以选择性吸附样本提取液中的蛋白质、色素、脂质等杂质，而不吸附被测目标物(磺胺类药物残留)。此外，使用新净化填料的前处理方法可以仅通过一个步骤在30秒内去除样本中的杂质，能够简单、快速地完成高效净化，从而确保获得稳定性好、准确性高的检测结果。

因此，在第一方面，本发明提供了一种净化填料，其中，所述净化填料包含按照质量比1：(0.5-5)：(0.5-5)混合的硅胶、氧化铝和亲水亲脂平衡聚合物。

发明人通过多次实验对填料的组成和比例进行探索，发现将硅胶、氧化铝和亲水亲脂平衡聚合物混合形成的复合净化填料可选择性吸附样本提取液中的蛋白质、色素、脂质等杂质，对磺胺类药物没有吸附作用，并且产生的净化效果明显优于单一填料或其他组成的填料。

作为净化填料成分的亲水亲脂平衡(HLB)聚合物，所述HLB聚合物同时具有亲水性基团和疏水性基团，因此对非极性、极性化合物均有很好的保留作用，其应用领域覆盖了非极性、弱极性化合物，克服了C18吸附剂对极性化合物保留较差的缺点。此外，HLB聚合物还具有更高的稳定性、更宽的pH值适用范围和更高的吸附容量。在一个实施方案中，所述HLB聚合物可以为二乙烯基苯和N-乙烯基吡咯烷酮的共聚物。

发明人在实验过程中发现净化填料中不同成分的比例的对净化效果有显著的影响，因此，在一些实施方案中，所述硅胶、氧化铝和亲水亲脂平衡聚合物的质量比为1：(0.5-3)：(0.5-2)，其中，氧化铝相对于硅胶的质量比可以为0.5、0.6、0.8、1、1.2、1.4、1.6、1.8、2、2.5、2.8和3；亲水亲脂平衡聚合物相对于硅胶的质量比可以为0.5、0.6、0.8、1、1.2、1.4、1.6、1.8和2。

此外，净化填料中不同组分粒径的选择也对净化效果影响显著，如果填料的粒径过小，会导致柱压过大，从而使样本提取液无法过柱或者过柱速度过慢；如果填料的粒径过大，则会导致样本提取液中杂质与填料的作用不够充分，从而无法得到理想的净化效果。在一个实施方案中，所述硅胶的粒径范围为30μm至100μm，优选为30μm至80μm，所述氧化铝的粒径范围为20μm至100μm，优选为30μm至80μm，所述亲水亲脂平衡聚合物填料HLB的粒径为20μm至100μm，优选为30μm至80μm。

如上文所述，本发明的净化填料可以选择性地吸附样本提取液中的蛋白质、色素、脂质等杂质，而对磺胺类药物没有吸附，因此磺胺类药物可以保留在样本提取液中，用于后续检测而不再有杂质的干扰。

在第二方面，本发明提供了一种固相净化柱，其中，所述固相净化柱包括柱管和柱塞，所述柱管内从上而下依次包含上筛板、填料、下筛板，所述填料为本发明第一方面所述的净化填料。

在一个实施方案中，所述柱管和所述柱塞之间为过盈配合，以防止所述柱塞从所述柱管内脱落。

在一个优选实施方案中，所述固相净化柱还包括滤芯和任选的垫片，其中所述滤芯置于所述柱塞中，所述垫片位于所述管柱内或者所述管塞内。作为示例，所述滤芯和所述柱塞之间可以为过盈配合，以防止所述滤芯从所述柱塞内脱落。此外，所述垫片可以在不影响样本提取液通过的情况下为固相净化柱内的填料提供额外的支撑。

所述柱管可以采用任何不影响所述填料的吸附效果的材料制成，例如塑料或玻璃。在一个实施方案中，所述上筛板、下筛板和滤芯由多孔材料制成。在一个具体实施方案中，所述上筛板、下筛板和滤芯可以由聚乙烯、聚丙烯、聚醚砜、聚酰胺等材质制成，用于制造所述上筛板、下筛板和滤芯的多孔材料的孔径为5μm至20μm。本领域的技术人员应当理解，所述固相净化柱的直径和高度可以根据需要处理的样本提取液量以及相应所需的填料量进行选择和调整以获得最佳的净化效果。

在第三方面，本发明提供了一种固相净化系统，其中，所述固相净化系统包括本发明第二方面所述的固相净化柱和配套试管，所述固相净化柱的柱塞与所述配套试管的内壁紧密贴合并形成上下活动的活塞结构。

本发明的固相净化系统在进行净化的过程中，所述固相净化柱的柱塞与所述配套试管的内壁紧密贴合并且可沿所述内壁上下活动，从而使样本提取液依次通过柱塞、下筛板、填料和上筛板进入所述固相净化柱中，而不会残留在所述固相净化柱与所述配套试管之间的空隙中。因此，在一个优选实施方案中，所述柱塞由弹性材料制成，例如橡胶。在一个具体实施方案中，所述配套试管为15mL的离心管。

在第四方面，本发明提供了一种用于磺胺类药物残留检测的前处理方法，包括：(1)使用本发明第一方面所述的净化填料、本发明第二方面所述的固相净化柱、或者本发明第三方面所述的固相净化系统对样本提取液进行净化处理。

在一个优选实施方案中，所述净化填料与样本提取液的质量体积比为(1.5-3):(4-6)，其中所述质量以克(g)计，所述体积以毫升(mL)计。

发明人在实验验证中采取了两种不同的样本提取液的进液方式：一种是将样本提取液直接加入本发明的固相净化柱中的上筛板之上，通过加压使样本提取液在柱管内从上往下以相对均匀的速度通过固相净化柱，收集滤出液作为经前处理的样本提取液；另一种是使用本发明第三方面所述的固相净化系统对样本提取液进行净化处理，包括：将所述样本提取液置于所述配套试管中，将所述固相净化柱插入所述配套试管中，通过向所述固相净化柱施压，将所述固相净化柱从上往下以相对均匀的速度推至所述配套试管的底部，获得位于所述固相净化柱的柱管内上筛板之上的上层液体作为经前处理的样本提取液。实验结果(未示出)表明，正向净化处理不如逆向净化处理。也就是说，采用本发明第三方面所述的固相净化系统对样本提取液进行净化处理的效果更好，后续检测中的回收率和重复性更高。

发明人进一步发现在样本提取液中加入含一定比例的硫酸盐和氯化钠的盐包，有利于去除复杂基质中的大分子物质，达到净化基质的效果。因此，在一个实施方案中，本发明采取了盐包和净化柱的双重前处理方法，所述前处理方法还包括：在步骤(1)之前，使用盐包来净化所述样本提取液，所述盐包包含质量比为1：(0.1-3)的硫酸盐(例如硫酸镁或硫酸钠)和氯化钠。在一个优选实施方案中，所述盐包与所述样本提取液的质量体积比为(0.2-1)：(4-6)，其中所述质量以克(g)计，所述体积以毫升(mL)计。

在一个实施方案中，本发明的前处理方法还包括使用含0％-5％甲酸的60％-90％乙腈水溶液作为样本提取剂来制备所述样本提取液；优选地，乙腈浓度为80％-90％，甲酸浓度为0.1％-0.5％，样本与样本提取剂的质量体积比为1:2至1:6，其中所述质量以克(g)计，所述体积以毫升(mL)计。

本发明的前处理方法在对取自不同动物源性食品的样本进行处理中都获得了比较好的效果，所述动物源性食品包括但不限于肌肉组织(例如猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、乌鸡肉、鸭肉)、水产品(例如鱼肉、虾肉)、鸡蛋、皮脂类(例如鸡皮、鸭皮)、内脏类(例如猪肝、猪腰)、乳制品(例如鲜牛奶、奶粉)。

在本发明中，所述磺胺类药物是指具有对氨基苯磺酰胺结构的药物，通常为抗生素。在一些具体的实施方案中，所述磺胺类药物包括但不限于磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺苯吡唑、磺胺二甲唑、磺胺异噁唑、苯酰磺胺、磺胺二甲异嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、甲氧苄氨嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪和磺胺甲噻二唑中的一种或者多种。

通过采用本发明的用于磺胺类药物残留检测的前处理方法，可以简单且快速地除去样本中干扰检测磺胺类药物的诸如蛋白质、色素、脂质等杂质，特别是在柱净化步骤和盐包处理步骤结合的情况下，在杂质的去除以及对于磺胺类药物的保留方面，效果尤其出色。

在第五方面，本发明提供了一种磺胺类药物残留的检测方法，所述方法包括：

(1)使用本发明第四方面所述的前处理方法来对样本提取液进行前处理，由此获得经前处理的样本提取液；

(2)任选地使用滤膜过滤所述经前处理的样本提取液；

(3)对所述经前处理的样本提取液中的磺胺类药物残留进行检测。

经过本发明前处理方法处理的样本提取液，随后可以通过不同检测方法进行检测，所述检测方法包括，例如酶联免疫法、液相色谱法、液相色谱-串联质谱法、或电化学检测法，但不限于此。但超高效液相色谱-质谱/质谱以其专一可靠、灵敏度高以及高通量的特点，成为现有技术中确证测定的优选方法。因此，在一个优选实施方案中，在本发明的检测方法步骤(3)中，使用超高效液相色谱-串联质谱法来检测所述经前处理的样本提取液中的磺胺类药物残留。

此外，在现有的兽药残留检测技术中采用超高效液相色谱-质谱/质谱作为确证检测方法通常存在基质效应。复杂的样本提取基质成分和前处理方法引入的外来杂质会严重抑制或增强目标分析物在喷雾接口处的离子化，从而影响到检测的选择性和灵敏度，进而影响到分析结果的准确度和精密度。基质对分析方法准确测定分析物的能力的干扰称为基质效应。磺胺类药物的残留检测中通常存在较强的基质效应，特别是采用超高效液相色谱-质谱/质谱的多残留快速筛查。发明人在实验过程中发现，采用本发明的前处理方法处理后的样本提取液在进行超高效液相色谱-质谱/质谱检测后，通过标准曲线和基质标准曲线校准出来的检测结果相差很小，表明检测过程中的基质效应较小，净化效果好。因此，采用本发明的检测方法获得的检测结果，不需要经过基质标准曲线校准也可以得到准确的结果，更为方便和简便。

实施例

下面结合实施例对本发明进行更为具体和详细的描述。下述实施例中的试验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规化试剂商店购买所得。应注意，上文的发明内容部分以及下文的详细描述仅为具体阐释本发明之目的，无意于以任何方式对本发明进行限制。

实验方法：

(1)混合标准溶液的配制：向阴性样本加入20种磺胺类药物(磺胺吡啶、磺胺噻唑、磺胺甲嘧啶、磺胺邻二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉、磺胺苯吡唑、磺胺二甲唑、磺胺异噁唑、苯酰磺胺、磺胺二甲异嘧啶、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、甲氧苄氨嘧啶、磺胺甲噁唑、磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪和磺胺甲噻二唑)的混合标品，添加水平为5ppb、10ppb、20ppb、50ppb，每个添加水平重复6次。

(2)样本提取：称取5g已添加磺胺标准品的样本，加入20mL含0.2％甲酸的80％乙腈水溶液，高速涡旋3分钟，获得样本提取液。

(3)盐包处理(可选)：向通过步骤(2)获得样本提取液中加入盐包，再次高速涡旋3分钟，随后于4000rpm离心2分钟，取上清液备用，上清液即为经盐包处理的样本提取液。

(4)固相柱净化：首先装填净化柱，准确称取不同硅胶(阿拉丁试剂，货号：C116890(柱层析硅胶，230-400目，1kg))、氧化铝(阿拉丁试剂，货号：A100278(氧化铝，200-300目，500g))和亲水亲脂平衡聚合物(月旭科技，BRP填料，货号：00522-20018(粒径40μm至60μm，孔径：12nm，填料基体：二乙烯基苯和N-乙烯基吡咯烷酮的共聚物))，然后将多种填料充分混合均匀加入净化柱的柱管，每根净化柱填料总量为1.5g至2.5g。向15mL离心管中加入5mL样本提取液。将净化柱的柱塞从离心管顶端插入离心管中，并从上往下以相对均匀的速度(8mL/分钟至12mL/分钟)将净化柱压至离心管底端。将净化柱中的上筛板之上净化后的样本提取液倒出至样本瓶或样本管中。

(5)UPLC-MS/MS检测：取净化提取液经过一定比例的稀释或氮吹复溶，再通过0.22μm滤膜过滤，最后进行UPLC-MS/MS分析。UPLC-MS/MS的色谱及质谱条件

仪器：UPLC-MS/MS(Triple Quad TM 5500+)

a.色谱条件：色谱柱：Waters ACQUITY UPLC BEH C18柱(100*2.1mm，1.7μm)；流动相：A：0.1％甲酸水，B：甲醇；流速：0.35mL/(；柱温：40℃；进样量：10μL；洗脱方式：梯度洗脱(见表1)。

表1.梯度洗脱程序

b.质谱条件：离子源：ESI(电喷雾离子源)；扫描方式：正离子；检测方式：多反应监测；电喷雾电压：5500V；气帘气压力：0.241MPa；雾化器压力：0.379MPa；辅助气压力：0.379MPa；离子源温度：5500℃。

表2.不同磺胺类药物残留的定性、定量离子对、出峰时间、碰撞气能量以及去簇电压数据

判断标准：

根据磺胺类药物国家标准中的规定，若添加回收率范围在60％至120％，批次内RSD≤15％，批次间RSD≤20％，则回收方法被视为合格。

实施例1.猪肉样本中磺胺类药物残留的检测效果的验证

实施例1中采用添加了不同浓度标准品的猪肉作为样本，并且采用了0.5g盐包(硫酸钠：氯化钠(质量比)＝1:1)和由硅胶、氧化铝和HLB(质量比为1:2:0.5，填料总含量为2g)组成的固相净化柱。净化后的样本提取液用初始流动相稀释10倍，再通过0.22μm滤膜过滤，最后进行UPLC-MS/MS分析。

检测结果：在不同标准品浓度下，获得的回收率均值在70％至108％之间，RSD均小于15％(参见表3)。可见，该前处理方法是合格的磺胺类药物前处理方法。

表3.猪肉样本中磺胺类药物残留的回收准确度及精密度

实施例2.牛肉样本中磺胺类药物残留的检测效果的验证

实施例2中采用添加了不同浓度标准品的牛肉作为样本，并采用了1g盐包(硫酸钠：氯化钠(质量比)＝1:0.5)和由硅胶、氧化铝和HLB(质量比为1:3:1，填料总含量为2g)组成的固相净化柱。取净化后的样本提取液500μL氮吹吹干，用1mL初始流动相复溶，再通过0.22μm滤膜过滤，最后进行UPLC-MS/MS分析。

检测结果：在不同标准品浓度下，获得的回收率均值在73％至102％之间，RSD均小于15％(参见表4)，在磺胺类药物国家标准的规定范围内。可见，该前处理方法是合格的磺胺类药物前处理方法。

表4.牛肉样本中磺胺类药物残留的回收准确度及精密度

实施例3.鸡肉样本中磺胺类药物残留的检测效果的验证

实施例2中采用添加了不同浓度标准品的鸡肉作为样本，采用了0.2g盐包(硫酸钠：氯化钠(质量比)＝1:1)和由硅胶、氧化铝和HLB(质量比为1:0.5:0.5，填料总含量为1.5g)组成的固相净化柱。取净化后的样本提取液200μL氮吹吹干，用1mL初始流动相复溶，再通过0.22μm滤膜过滤，最后进行UPLC-MS/MS分析。

检测结果：在不同标准品浓度下，获得的回收率均值在81％至113％之间，RSD均小于15％(参见表5)，在磺胺类药物国家标准的规定范围内。可见，该前处理方法是合格的磺胺类药物前处理方法。

表5.鸡肉样本中磺胺类药物残留的回收准确度及精密度

实施例4.虾肉样本中磺胺类药物残留的检测效果的验证

实施例4中采用添加了不同浓度标准品的虾肉作为样本，并且采用了1g盐包(硫酸钠：氯化钠(质量比)＝1:2)和由硅胶、氧化铝和HLB(质量比为1:1:5，填料总含量为2g)组成的固相净化柱。取净化后的样本提取液200μL氮吹吹干，用1mL初始流动相复溶，再通过0.22μm滤膜过滤，最后进行UPLC-MS/MS分析。

检测结果：在不同标准品浓度下，获得的回收率均值在60％至85％之间，RSD均小于15％(参见表6)，在磺胺类药物国家标准的规定范围内。可见，该前处理方法是合格的磺胺类药物前处理方法。

表6.虾肉样本中磺胺类药物残留的回收准确度及精密度

实施例5.鸡蛋样本中磺胺类药物残留的检测效果的验证

实施例5中采用添加了不同浓度标准品的鸡蛋作为样本，并采用了1g盐包(硫酸钠：氯化钠(质量比)＝1:1)和由硅胶、氧化铝和HLB(质量比为：1:2:1，填料总含量为2g)组成的固相净化柱。取净化后的样本提取液200μL氮吹吹干，用1mL初始流动相复溶，再通过0.22μm滤膜过滤，最后进行UPLC-MS/MS分析。

检测结果：在不同标准品浓度下，获得的回收率均值在66％至94％之间，RSD均小于15％(参见表7)，在磺胺类药物国家标准的规定范围内。

表7.鸡蛋样本中磺胺类药物残留的回收准确度及精密度

实施例6.鸡皮样本中磺胺类药物残留的检测效果的验证

实施例6中采用添加了不同浓度标准品的鸡皮提取液作为样本，并且采用了0.2g盐包(硫酸镁：氯化钠(质量比)＝1:1)和由硅胶、氧化铝和HLB(质量比为1:0.5:0.5，填料总含量为2g)组成的固相净化柱。取净化后的样本提取液200μL氮吹吹干，用1mL初始流动相复溶，再通过0.22μm滤膜过滤，最后进行UPLC-MS/MS分析。

检测结果：在不同标准品浓度下，获得的回收率均值在80％至114％之间，RSD均小于15％(参见表8)，在磺胺类药物国家标准的规定范围内。可见，该前处理方法是合格的磺胺类药物前处理方法。

表8.鸡皮样本中磺胺类药物残留的回收准确度及精密度

实施例7.猪肝样本中磺胺类药物残留在不同前处理方法下的检测效果的验证

实施例7中采用添加了不同浓度标准品的猪肝提取液作为样本，将样本提取液分为两组，A组先后采用0.5g盐包(硫酸镁：氯化钠(质量比)＝1:2)和由硅胶、氧化铝和HLB(1:2:1，填料总含量为2.5g)组成的固相净化柱进行前处理，而B组仅采用固相净化柱进行前处理。取净化后的样本提取液200μL氮吹吹干，用1mL初始流动相复溶，再通过0.22μm滤膜过滤，最后进行UPLC-MS/MS分析。

检测结果：在不同标准品浓度下，A组获得的回收率均值在71％至116％之间，而B组获得的回收率均值在61％至86％之间，它们的RSD均小于15％(参见表9)，表明仅用固相净化柱进行前处理或采用盐包+固相净化柱的前处理方法获得的回收率都在磺胺类药物国家标准的规定范围内，但增加盐包处理明显提高了检测效果。

表9.不同前处理方法下猪肝样本中磺胺类药物残留的回收准确度及精密度

实施例8.猪肉样本中磺胺类药物残留在不同前处理方法下的紫外吸收检测结果

实施例8的实验方法和材料与实施例1中一致，发明人将样本提取液分为四组，分别为经盐包和固相净化柱先后处理的样本提取液(1)、仅经盐包处理的样本提取液(2)、仅经固相净化柱处理的样本提取液(3)、以及未经过任何前处理的样本提取液(4)。

检测结果如图3所示，线条4代表未做任何前处理的样本提取液，其各个波长的吸收值最高，代表杂质最多；线条2和3分别代表仅经盐包处理的样本提取液和仅经固相净化柱处理的样本提取液，两者相比于未做处理(线条4)，杂质明显减少；线条1代表经盐包和净化柱先后处理的样本提取液，从该线条中可见，明显吸收值比线条2-4都更低，表明净化效果最好。综合上述紫外吸收图谱的结果可以得知不同前处理方法的效果：盐包+净化柱＞净化柱＞盐包。

实施例9.不同净化填料对牛肉样本中磺胺类药物残留的检测效果的影响

实施例9中与实施例2的实验条件和步骤都相同，唯一的区别是实施例9中采用了由硅胶、氧化铝和乙二胺-N-丙基硅烷(PSA)(质量比为1:3:1，填料总含量为2g)组成的固相净化柱。

检测结果：在相同的实验条件下，实施例9中获得的每种磺胺类药物残留的回收率均值明显低于实施例2，不符合磺胺类药物国家标准中规定的添加回收率范围60％至120％(参见表10)。可见，该前处理方法不是合格的磺胺类药物前处理方法。

表10.牛肉样本中磺胺类药物残留的回收准确度及精密度

需要特别说明的是，本发明所有实施例中的回收率结果均是按照液质初始流动相配制的标准曲线计算的，未经过基质标准曲线校准，说明无明显基质干扰影响，净化效果好。