一种长效成纤维细胞生长因子凝胶

技术领域

本发明涉及成纤维细胞生长因子领域，特别是一种长效成纤维细胞生长因子凝胶。

背景技术

视神经损伤往往由外伤和一些病理状况,导致视神经损伤、萎缩，最终引起视力严重下降甚至失明。例如疾病或病理状况一般包括青光眼、视神经炎、视神经萎缩、视乳头玻璃膜疣、缺血性视神经病变；而外伤性视神经病则可能是直接损伤，即穿透性损伤，由眼眶和面中部骨折引起，或者是间接损伤，即损伤通过眼眶顶点和视神经管传导至视神经。为了修复损伤、萎缩的视神经，现有技术中有研究探讨碱性成纤维生长因子(bFGF)对视神经损伤的保护作用。但是这些研究都是通过肌肉注射bFGF相关药物的方式进行对照观察，然后统计获得相关的实验数据，证明bFGF对视神经损伤保护作用的潜在生物效应，实际的效果并不是十分理想。

发明内容

本发明所要达到的目的就是提供一种长效成纤维细胞生长因子凝胶，直接作用于视神经纤维，缓慢吸收，生物相容性较好，药物实现缓释，治疗效果更好。

为了达到上述目的，本发明采用如下技术方案：一种长效成纤维细胞生长因子凝胶，用于敷在视神经鞘膜切开后暴露的视神经纤维处并填充视神经鞘膜内腔，长效成纤维细胞生长因子凝胶通过聚乙二醇二丙烯酸酯和纯度99％以上的rhbFGF原液混合形成，长效成纤维细胞生长因子凝胶的浓度为500000IU/mL～550000IU/mL、粘度为45～55Pa·s。

进一步的，所述长效成纤维细胞生长因子凝胶的pH为6.5～7.0。

采用上述技术方案后，本发明具有如下优点：由于长效成纤维细胞生长因子凝胶直接作用于暴露的视神经纤维处，rhbFGF通过促进与创伤修复有关细胞的迅速增殖而推动创面的主动修复，能够提高愈合质量，减少瘢痕形成，可以缩短创面愈合时间，加快伤口愈合，而且具有良好的止血性和神经营养作用；长效成纤维细胞生长因子凝胶可水解为氨基酸被人体吸收，降解产物安全，同时降解周期为75天左右，填充效果明显好于明胶，更有利于损伤的视神经恢复。由于长效成纤维细胞生长因子凝胶通过聚乙二醇二丙烯酸酯和纯度99％以上的rhbFGF原液混合形成，纯度高，具有低抗原性，分子的抗原性很弱、生物相容性优异，在使用前，聚乙二醇二丙烯酸酯和rhbFGF原液均是呈水样的状态，分开保存，在使用时再按需混合，不仅容易存放，而且可以减少浪费，降低患者的用药成本。长效成纤维细胞生长因子凝胶的粘度控制在45～55Pa·s，一是考虑到长效成纤维细胞生长因子凝胶填充视神经鞘膜内腔后能够起支撑作用，对受损的视神经纤维进行良好地包裹，不仅有利于长时间地吸收，而且避免视神经纤维在恢复过程中受到二次损伤，二是考虑药物具有良好的缓释效果，能够有效保持局部药物浓度、延长作用时间、提高患者依从性。

附图说明

下面结合附图对本发明作进一步说明：

图1A为本发明中长效成纤维细胞生长因子凝胶的rhbFGF释放率随时间变化的示意图；

图1B为本发明中长效成纤维细胞生长因子凝胶的膨胀率随时间变化的示意图；

图2A为本发明中鼠A在实验开始15天后视神经的染色图；

图2B为本发明中鼠B在实验开始15天后视神经的染色图；

图2C为本发明中鼠C在实验开始15天后视神经的染色图；

图3A为本发明中鼠A在实验第15天的右眼与左眼的视觉电生理图；

图3B为本发明中鼠B在实验第15天的右眼与左眼的视觉电生理图；

图3C为本发明中鼠C在实验第15天的右眼与左眼的视觉电生理图；

图4A为本发明中羊A在实验第30天的左眼瞳孔反射检查图；

图4B为本发明中羊B在实验第30天的左眼瞳孔反射检查图；

图4C为本发明中羊C在实验第30天的左眼瞳孔反射检查图。

具体实施方式

本发明提供一种长效成纤维细胞生长因子凝胶，用于敷在视神经鞘膜切开后暴露的视神经纤维处并填充视神经鞘膜内腔，长效成纤维细胞生长因子凝胶通过聚乙二醇二丙烯酸酯和纯度99％以上的rhbFGF原液混合形成，长效成纤维细胞生长因子凝胶的浓度为500000IU/mL～550000IU/mL、粘度为45～55Pa·s。

由于长效成纤维细胞生长因子凝胶直接作用于暴露的视神经纤维处，rhbFGF通过促进与创伤修复有关细胞的迅速增殖而推动创面的主动修复，能够提高愈合质量，减少瘢痕形成，可以缩短创面愈合时间，加快伤口愈合，而且具有良好的止血性和神经营养作用；长效成纤维细胞生长因子凝胶可水解为氨基酸被人体吸收，降解产物安全，同时降解周期为75天左右，填充效果明显好于明胶，更有利于损伤的视神经恢复。由于长效成纤维细胞生长因子凝胶通过聚乙二醇二丙烯酸酯和纯度99％以上的rhbFGF原液混合形成，纯度高，具有低抗原性，分子的抗原性很弱、生物相容性优异，在使用前，聚乙二醇二丙烯酸酯和rhbFGF原液均是呈水样的状态，分开保存，在使用时再按需混合，不仅容易存放，而且可以减少浪费，降低患者的用药成本。成纤维细胞生长因子凝胶的粘度控制在45～55Pa·s，一是考虑到长效成纤维细胞生长因子凝胶填充视神经鞘膜内腔后能够起支撑作用，对受损的视神经纤维进行良好地包裹，不仅有利于长时间地吸收，而且避免视神经纤维在恢复过程中受到二次损伤，二是考虑药物具有良好的缓释效果，能够有效保持局部药物浓度、延长作用时间、提高患者依从性。如图1A所示，我们通过体外模拟释放实验可以获得长效成纤维细胞生长因子凝胶的释放率，可以明显看到，经过14天之后，长效成纤维细胞生长因子凝胶的rhbFGF释放率达到20％左右，缓释效果良好。

如图1B所示，经过实验观察，长效成纤维细胞生长因子凝胶具有低膨胀性，从第1天开始到第60天，仅有3％左右的膨胀率，虽然在60天之后，膨胀率增加较快，在第69～70天左右达到顶峰8％左右的膨胀率，之后开始接近直线下降，直到75天左右降解消失。由于长效成纤维细胞生长因子凝胶在人体中会被吸收，因此在人体中的膨胀率会更低，给病患的异样感觉会更弱，也不会导致视神经鞘膜的伤口在恢复过程中被撑破裂。

作为优选的，长效成纤维细胞生长因子凝胶的pH为6.5～7.0，比较适合视神经所在的体液环境，减少涂敷用药后对人体的影响。

我们设置三种实验条件，具体是：

A空白对照组：注射生理盐水1mL，损伤自愈；

B肌肉注射给药组：术后注射用溶媒溶解的rhbFGF冻干粉1mL，浓度与长效成纤维细胞生长因子凝胶的浓度一致；

C视神经纤维处涂敷给药组：在视神经鞘膜切开后暴露的视神经纤维处涂敷1mL长效成纤维细胞生长因子凝胶。

给药周期为一次性给药。

第一组实验动物为SD大鼠，右眼维持正常，左眼做损伤处理，采用视神经夹伤作为损伤模型，相应的实验组别可以分为鼠A、鼠B、鼠C。

15天后检测视神经染色和视觉电生理(FVEP)观察恢复情况：

如图2A所示，通过RGCs的染色观察鼠A的RGCs恢复情况，发现损伤持续，如图3A所示，左图为正常右眼的视觉电生理(FVEP)结果，右图为损伤左眼的视觉电生理(FVEP)结果，对比可以清楚视神经细胞基本无增长(荧光基本无增加)；

如图2B所示，通过RGCs的染色观察鼠B的RGCs恢复情况，发现恢复情况不佳，有损伤持续的情况，如图3B所示，左图为正常右眼的视觉电生理(FVEP)结果，右图为损伤左眼的视觉电生理(FVEP)结果，对比可以看到视神经细胞少量增长(荧光略有增多)；

如图2C所示，通过RGCs的染色观察鼠C的RGCs恢复情况，发现视神经细胞增长迁移，并有效帮助RGCs增长(荧光明显增多)，如图3C所示，左图为正常右眼的视觉电生理(FVEP)结果，右图为损伤左眼的视觉电生理(FVEP)结果，对比可以看到视神经细胞恢复增长，而且在右眼对电发光产生正常波动的情况下，可以明显观察到损伤的左眼恢复对光反应，恢复效果明显高于另外两组。

第二组实验动物为奶山羊，右眼维持正常，左眼做损伤处理，采用骨折枪气动敲击视神经作为损伤模型，相应的实验组别可以分为羊A、羊B、羊C。

30天后通过瞳孔反射检查观察恢复情况：

如图4A所示，羊A左眼的瞳孔无光感；

如图4B所示，羊B左眼的瞳孔有轻微光感；

如图4C所示，羊C左眼的光感恢复，瞳孔收缩恢复正常。

综上可见，通过在视神经鞘膜切开后暴露的视神经纤维处涂敷长效成纤维细胞生长因子凝胶，视神经的恢复效果明显优于肌肉注射的给药方式，因此视神经恢复能力强的部分病患，可以在3个月内完全恢复好，而大多数病患的恢复时间可以缩短到半年以内。

除上述优选实施例外，本发明还有其他的实施方式，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变和变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明权利要求书中所定义的范围。