一种用于治疗肺炎湿热疫毒袭肺证的双黄连制剂及其制法

技术领域

本发明属于中药制剂的技术领域，具体涉及一种用于治疗肺炎湿热疫毒袭肺证的双黄连制剂及其制法。

背景技术

我国传统医学早已认知到了病毒、细菌等微生物的存在，并谓之“疫毒”。《素问·刺法论》言：“五疫之至，皆相染易，无问大小，病状相似。”吴有性的《温疫论》明确指出：“瘟疫之为病，非风、非寒、非暑、非湿，乃天地间别有一种异气所感。”中医认为，病毒性肺炎归属于中医学“温病”范畴，其病因主要为感受温邪。温邪最易侵犯肺系，引起呼吸系统疾病。冬春季节肺卫功能易于失职，为风热病邪的入侵提供了条件，此时若气候发生变化，如应寒而反暖，或温风过暖，腠理开疏，风热病邪容易侵入肺卫，发生风温。当侵染疫毒后感受温邪，病机纠缠后形成肺炎湿热疫毒袭肺证。

症见肺炎湿热疫毒袭肺证的患者日益增多，然而由于传统医学并未记载疫毒与风温结合后的治疗手段，目前常规的治疗意见为将疫毒和风温作为独立的病因，分别对两者进行单独的治疗及用药，这不符合中医整体辨治的观点，使得中药的治疗效果大打折扣。

幸而《柴银颗粒对人冠状病毒肺炎湿热疫毒袭肺小鼠病证结合模型治疗及作用机制研究》 (赵荣华等)一文对柴银颗粒治疗肺炎湿热疫毒袭肺证的药理药效关系进行了研究，为现代治疗肺炎湿热疫毒袭肺证提供了强有力的治疗手段。然而目前针对肺炎湿热疫毒袭肺证有效的治疗手段太少，长期单一使用同一种药物容易引起人体的耐药性，现亟需新的可用于治疗肺炎湿热疫毒袭肺证的药物制剂。

发明内容

为了解决上述技术问题，本发明提供了双黄连方在制备治疗肺炎湿热疫毒袭肺证的药物上的应用，以及一种用于治疗肺炎湿热疫毒袭肺证的双黄连制剂及其制法，该双黄连制剂对肺炎湿热疫毒袭肺证具有优异的治疗效果，能为治疗肺炎湿热疫毒袭肺证提供了新的用药选择。

第一方面，本发明提供一种双黄连方在制备治疗肺炎湿热疫毒袭肺证的药物上的应用。

优选的，可依据双黄连方制成双黄连雾化吸入溶液制剂。

进一步的，可依据双黄连方制成双黄连雾滴。

根据本发明，双黄连方作为治疗肺炎湿热疫毒袭肺证用药物的主方之一。

药效试验证明，依据双黄连方所制得的制剂对治疗肺炎湿热疫毒袭肺证具有一定效果。且相比于双黄连注射液，双黄连雾滴对治疗肺炎湿热疫毒袭肺证的疗效更优。

第二方面，本发明提供一种用于治疗肺炎湿热疫毒袭肺证的双黄连制剂，所述双黄连制剂为空气动力学粒径小于3.9μm的双黄连雾滴，所述双黄连雾滴由黄芩有效成分、金银花有效成分、连翘有效成分、pH调节剂、渗透压调节剂和水组成。

药效实验证明，质量中值空气动力学粒径(MMAD)小于3.9μm的双黄连雾化颗粒对治疗肺炎湿热疫毒袭肺证具有极其优异的效果，肺指数抑制率高达74.62％。

优选的，所述双黄连雾滴的空气动力学粒径为3.2μm～3.9μm。

进一步优选的，所述双黄连雾滴的空气动力学粒径为3.3μm～3.7μm。

第三方面，本发明提供上述双黄连制剂的制备方法，包括以下步骤：

S1、分别从黄芩、金银花和连翘中提取得到黄芩提取物、金银花和连翘提取物；

S2、取所述黄芩提取物，加热水和强碱使溶解后，加入所述金银花和连翘提取物，搅拌均匀，滤过，得到溶液A；

S3、向所述溶液A中加入渗透压调节剂，滤过，得到双黄连雾化吸入溶液；

S4、雾化所述双黄连雾化吸入溶液，得到双黄连雾滴；

其中，所述步骤S2中的热水的温度为70～90℃。

优选的，所述步骤S2中的热水的温度为80℃。

可选的，所述步骤S2中的强碱选自氢氧化钠、氢氧化钾中的一种或多种。

本发明的有益效果在于：

(1)本发明公开的双黄连制剂为治疗肺炎湿热疫毒袭肺证提供了一种新的用药选择，提高了用药多样性，能有效缓解患者产生耐药性的问题。

(2)本发明公开的双黄连雾滴的空气动力学粒径小于3.9μm，使得双黄连雾滴对肺炎湿热疫毒袭肺证产生了优于双黄连注射液和α-干扰素的突出的治疗效果。

(3)本发明公开的双黄连制剂的制备方法简便快捷，具有广泛应用性。

具体实施方式

为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将结合具体实施例对本发明的技术方案做更进一步的详细说明。应当理解，下列实施例仅为示例性地说明和解释本发明，而不应被解释为对本发明保护范围的限制。凡基于本发明上述内容所实现的技术均涵盖在本发明旨在保护的范围内。

除非另有说明，以下实施例中使用的原料和试剂均为市售商品，或者可以通过已知方法制备。

实施例1制备双黄连雾化吸入溶液

一种双黄连雾化吸入溶液，由以下步骤制备而得：

S1、制备黄芩提取物

S1.1、取黄芩250g，加水煎煮二次，每次1小时，分次滤过，合并滤液，滤液用盐酸溶液调pH至1.9，在80℃保温30分钟，静置24小时，滤过，收集沉淀A。

S1.2、沉淀A加8倍量水，搅拌，用40％氢氧化钠溶液调pH至7.0后，加乙醇使含醇量达50％，搅拌使溶，滤过，滤液用盐酸溶液调pH至2.0，60℃保温30分钟，静置12小时，滤过，收集沉淀B。

S1.3、沉淀B用乙醇洗至pH值至4.0，加10倍量水，搅拌，用40％氢氧化钠溶液调pH至6.0，加入0.5％活性炭，充分搅拌，50℃保温30分钟，加入1倍量乙醇搅拌均匀，立即滤过，滤液用盐酸溶液调pH至2.0，60℃保温30分钟，静置12小时，滤过，收集沉淀C。

S1.4、沉淀C用少量乙醇洗涤后，于60℃干燥，得到黄芩提取物。

S2、制备金银花和连翘提取物

取金银花250g、连翘500g加水浸渍30分钟，煎煮二次，每次1小时，分次滤过，合并滤液，浓缩至70℃相对密度为1.20，放冷至40℃，缓缓加乙醇使含醇量达75％，充分搅拌，静置12 小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，加入4倍量水，调pH至7.0，充分搅拌并加热至沸，静置48小时，滤取上清液，浓缩至70℃相对密度约为1.13，放冷至40℃，加入乙醇使含醇量达85％，静置12小时，滤取上清液，回收乙醇至无醇味，得金银花和连翘提取物。

S3、制备双黄连雾化吸入溶液

取黄芩提取物，加80℃的热水适量，加氢氧化钠溶液使溶解，加入金银花提取物，加水至1000ml，加入活性炭适量，加热微沸，冷却，滤过，冷藏静置，滤过，超滤，加水至1000ml，加氯化钠适量，滤过，得双黄连雾化吸入溶液。

实施例2双黄连雾化溶液批间均一性试验

制备四批不同批次的双黄连雾化吸入溶液，样品编号分别为CP-201025-01、 CP-201210-01、CP-201210-02、CP-201210-03。使用不同雾化器与雾化杯的组合，测定对应双黄连雾滴的空气动力学粒径。

a、PARI TURBOBOY雾化器和LC SPRINT红芯雾化杯

采用PARI TURBOBOY雾化器和LC SPRINT红芯雾化杯对上述四批双黄连雾化吸入溶液进行雾化，测定其递送速率、递送总量以及微细粒子属性，测定结果见表1～3。

表1以酚酸类计四批中试样品测定结果(n＝2)

表2以连翘苷计四批中试样品测定结果(n＝2)

表3以黄芩苷计四批中试样品测定结果(n＝2)

表1～3显示，使用PARI TURBOBOY雾化器和LC SPRINT红芯雾化杯对双黄连雾化吸入溶液进行雾化时所得到的的双黄连雾滴的MMAD均在3.3～3.7μm。以平均值±10％为上下限制定限度，限度数值保留1位小数，得到MMAD的限度范围为3.2～3.9μm。将该限度范围设定为小粒径双黄连雾滴。

b、PARI TURBOBOY雾化器和PARI蓝芯雾化杯

采用PARI TURBOBOY雾化器和PARI蓝芯雾化杯对上述四批双黄连雾化吸入溶液进行雾化，测定其递送速率、递送总量以及微细粒子属性，测定结果见表4～6。

表4以酚酸类计四批中试样品测定结果(n＝2)

表5以连翘苷计四批中试样品测定结果(n＝2)

表6以黄芩苷计四批中试样品测定结果(n＝2)

表4～6显示，使用PARI TURBOBOY雾化器和PARI蓝芯雾化杯对双黄连雾化吸入溶液进行雾化时所得到的的双黄连雾滴的MMAD均在4.4～4.9μm，说明双黄连雾化吸入溶液雾化后形成的双黄连雾滴的物理特性稳定可控。以平均值±10％为上下限制定限度，限度数值保留1位小数，得到MMAD的限度范围为4.2～5.2μm。将该限度范围设定为大粒径双黄连雾滴。

实施例3双黄连对肺炎湿热疫毒袭肺证的药效学试验

a、建立小鼠模型

取ICR小鼠100只，SPF级，体重11±1g，雌雄各半，按体重等级随机分为正常对照组， HCoV-229E感染组(以下简称单纯感染组)，湿热对照组，冠状病毒肺炎湿热疫毒袭肺小鼠病证结合模型组(以下简称模型对照组)，α-干扰素对照组、双黄连注射液组、双黄连吸入溶液小粒径组高、中、低三个剂量组与双黄连吸入溶液中剂量大粒径组，每组10只。

除正常对照组和单纯感染组外，其余小鼠连续8天按如下操作进行湿热刺激：将小鼠置于 95±5％相对湿度、无风且温度为37±2℃的人工气候箱中，4小时刺激后取出。

除正常对照组和湿热对照组外，其余小鼠于湿热刺激第5天，用异氟烷轻度麻醉后，每只小鼠以45μL、100TCID

b、给药方法

双黄连吸入溶液小粒径组高、中、低三个剂量组在感染当天开始给药，均使用PARITURBOBOY雾化器和LC SPRINT红芯雾化杯进行雾化给药，给药时间分别为25min、20min、15min，每天1次，连续4天。三组模型小鼠所吸入的药物以吸入剂量计分别为0.22ml/kg、0.18ml/kg和0.13ml/kg，以生药量计分别为0.22g/kg、0.18g/kg和0.13g/kg。

双黄连吸入溶液大粒径组在感染当天开始给药，使用PARI TURBOBOY雾化器和PARI蓝芯雾化杯进行雾化给药，给药时间为20min，每天1次，连续4天。小鼠所吸入的药物以吸入剂量计为0.18ml/kg，以生药量计分别为0.18g/kg。

α-干扰素对照组在感染当天开始给药，使用α-干扰素注射液(市售，厂家：天津未名生物医药有限公司，批号：RC191201)雾化给药10min，每天1次，连续4天。

双黄连注射液组(市售，厂家：河南福森药业有限公司，批号：2002223)按照0.2ml/10g 体重腹腔注射给药，每天1次，连续4天。

正常对照组、湿热对照组、单纯感染组、模型对照组给予生理盐水，均使用PARITURBOBOY雾化器和LC SPRINT红芯雾化杯进行雾化给药，给药时间为20min，每天1次，连续4天。

c、指标检测

感染第5天称重后检测各组下列指标：

①眼眶采血检测全血CD4+T细胞、CD8+T淋巴细胞百分比；

②解剖取肺组织，称重后用于计算肺指数；右肺用于测定炎性因子含量。

取下丘脑用于相关因子检测，结果采用组间比较t检验进行统计学分析。

肺指数＝肺湿重(g)/体重(g)×100％

肺指数抑制率(％)＝(模型对照组肺重(g)-给药组肺重(g))/(模型对照组肺重(g)-正常对照组肺重(g))×100％

d、结果

表7双黄连吸入溶液对人冠状病毒229E感染小鼠肺炎湿热疫毒袭肺证模型外周血淋巴细胞比例的影响

注：与正常组比较##P<0.01,#P<0.05；与模型对照组比较**P<0.01,*P<0.05。

表8双黄连吸入溶液对人冠状病毒229E感染小鼠肺炎湿热疫毒袭肺证模型的治疗作用

注：与正常组比较##P<0.01；与模型对照组比较**P<0.01，*P<0.05。

表9双黄连吸入溶液对人冠状病毒229E感染小鼠肺炎湿热疫毒袭肺证模型肺组织中炎性因子的影响

注：与正常组比较##P<0.01；与模型对照组比较**P<0.01，*P<0.05。

表10双黄连吸入溶液对人冠状病毒229E感染小鼠肺炎湿热疫毒袭肺证模型肺组织中氧化应激因子含量的影响

注：与正常组比较##P<0.01；与模型对照组比较**P<0.01，*P<0.05。

表11双黄连吸入溶液对人冠状病毒229E感染小鼠肺炎湿热疫毒袭肺证模型肺组织中氧化应激因子含量的影响

注：与正常组比较##P<0.01；与模型对照组比较**P<0.01，*P<0.05。

表7的结果显示：采用湿热环境刺激小鼠合并人冠状病毒229E株感染小鼠后，小鼠外周血中CD8+T细胞比例明显降低，CD4/CD8比值明显升高，与正常对照组比较均具有显著性差异 (P<0.01)；感染当天开始给予双黄连雾化吸入溶液治疗4天后，小粒径中、低剂量组小鼠外周血中，CD8+T细胞比例明显升高，CD4/CD8比值明显降低，与模型对照组比较均具有显著性差异(P<0.01，P<0.05)，疗效优于双黄连注射液组。双黄连吸入溶液大粒径组CD8+T细胞比例低于小剂量组、CD4/CD8比值高于小粒径组，表明双黄连吸入溶液小粒径组疗效优于双黄连吸入溶液大粒径组。

表8的结果显示：模型对照组小鼠肺指数明显增高，与正常对照组比较具有显著性差异 (P<0.01)；感染当天开始给予双黄连吸入溶液治疗4天后，小粒径中剂量组和小粒径低剂量组均能明显降低肺指数，与模型对照组比较均具有显著性差异(P<0.01)，肺指数抑制率分别为74.62％和74.45％。小粒径中剂量组和小粒径低剂量组的剂量均低于双黄连注射液的剂量，且疗效显著优于双黄连注射液，略优于α-干扰素。双黄连吸入溶液小粒径中剂量组肺指数低于双黄连吸入溶液大粒径组，肺指数抑制率显著高于双黄连吸入溶液大粒径组，表明双黄连吸入溶液小粒径组疗效优于双黄连吸入溶液大粒径组。

表9的结果显示：模型对照组小鼠肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α含量均明显升高，与正常对照组比较均具有显著性差异(P<0.01)；感染当天开始给予双黄连吸入溶液治疗4天后，小粒径高、中、低剂量组均可以明显降低小鼠肺组织中IL-6、IL-10、TNF-α含量，与模型对照组比较均具有显著性差异(P<0.01，P<0.05)，且降低TNF-α含量的作用优于对照药双黄连注射液及α-干扰素。双黄连吸入溶液小粒径中剂量组IL-6、IL-10、TNF-α含量均低于双黄连吸入溶液大粒径组，表明双黄连吸入溶液在小粒径组疗效优于双黄连吸入溶液大粒径组。

表10和表11的结果显示：模型对照组小鼠肺组织中SOD、CD14、IL-1β含量均明显升高，与正常对照组比较均具有显著性差异(P<0.01)；感染当天开始给予双黄连吸入溶液治疗4天后，小粒径高、中、低剂量组均可以明显降低小鼠肺组织中CD14、IL-1β含量，与模型对照组比较均具有显著性差异(P<0.01，P<0.05)。双黄连吸入溶液小粒径中剂量组CD14、IL-1β含量均低于双黄连吸入溶液大粒径组，表明双黄连吸入溶液在小粒径组疗效优于双黄连吸入溶液大粒径组。

表7～11的结果说明，双黄连吸入溶液小粒径组对肺炎湿热疫毒袭肺证具有显著的治疗效果，而双黄连吸入溶液大粒径组对肺炎湿热疫毒袭肺证具有一定的治疗效果，但治疗效果并不理想。为了保证双黄连雾滴在治疗肺炎湿热疫毒袭肺证上的治疗效果，应保证双黄连雾滴的MMAD在3.2～3.9μm之间，优选为3.3～3.7μm。

以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。