一种苯烯莫德杂质及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及药物合成技术领域，具体涉及一种苯烯莫德杂质及其制备方法和用途。

背景技术

苯烯莫德是从土壤线虫共生菌的代谢产物中发现、分离得到的一个非激素类的低毒小分子化合物(mw＝254)，具有独特的淋巴酶抑制生物学活性，可用于治疗多种重大自身免疫性疾病，如牛皮癣、湿疹、发浓性结肠炎和多种过敏性疾病。苯烯莫德的化学名称为5-[(E)-2-苯乙烯基]-2-异丙基-1,3-苯二酚，其结构如式I所示：

影响药品质量的主要因素之一是药品杂质，杂质研究作为药物研究的重要组成部分，杂质能否得到合理有效的控制，直接关系到药物的质量可控性和安全性。因此，苯烯莫德杂质的控制对于保证苯烯莫德药物的效能，降低药物的不良反应具有关键作用。药物杂质研究的首要条件是获得杂质对照样品，然而，目前关于苯烯莫德杂质及其制备工艺的报道较少，因此需开发苯烯莫德相关杂质及其制备方法，用于苯烯莫德原料和制剂的质量控制。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处而提供一种苯烯莫德杂质及其制备方法和用途，以使该杂质应用于检测苯烯莫德原料药或其制剂样品的质量，分析苯烯莫德中的杂质，完善苯烯莫德原料药或其制剂的质量标准。

为实现上述目的，本发明采取的技术方案如下：

一种苯烯莫德杂质，其结构如式Ⅱ所示：

发明人在制备苯烯莫德(为5-[(E)-2-苯乙烯基]-2-异丙基-1,3-苯二酚)的过程中，发现了一种杂质6-甲基-5-[(E)-2-苯乙烯基]-2-异丙基-1,3-苯二酚(以下简称BZ07杂质)，该杂质尚未有文献报道，是一种新的苯烯莫德杂质。

发明人通过高分辨质谱和核磁共振波谱等数据对该杂质进行结构表征，确认BZ07杂质结构如式Ⅱ所示，参数描述如下：

HRMS(ESI)：m/z 269.15[M+H]

本发明还提供了如式Ⅱ所示的苯烯莫德杂质的制备方法，包括以下步骤：以E-1,3-二甲氧基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯与去甲基试剂进行脱甲基反应，得到所述杂质6-甲基-5-[(E)-2-苯乙烯基]-2-异丙基-1,3-苯二酚，具体路线如下：

作为本发明所述的苯烯莫德杂质的制备方法的优选实施方式，包括以下步骤：

(1)取E-1,3-二甲氧基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯与去甲基试剂进行脱甲基反应，反应温度为140℃～220℃，反应时间为2～20h；

(2)将步骤(1)的反应产物通过有机溶剂萃取、酸水洗和结晶处理，收集含有目标产物的滤液；

(3)将步骤(2)获得的滤液浓缩、富集、纯化，得到所述杂质。

作为本发明所述的苯烯莫德杂质的制备方法的优选实施方式，所述去甲基试剂为三氯化铝、三溴化硼或吡啶盐酸盐。

作为本发明所述的苯烯莫德杂质的制备方法的优选实施方式，所述步骤(2)中，有机溶剂为四氢呋喃、甲基叔丁基醚或乙酸乙酯。

作为本发明所述的苯烯莫德杂质的制备方法的优选实施方式，所述步骤(2)中，酸为盐酸、硫酸或乙酸。

作为本发明所述的苯烯莫德杂质的制备方法的优选实施方式，所述步骤(2)中，采用甲醇、正己烷、甲苯或二氯甲烷作为结晶溶剂。

作为本发明所述的苯烯莫德杂质的制备方法的优选实施方式，所述步骤(3)中，将滤液进行浓缩后，经过柱层析分离处理，获得目标产物，采用柱层析硅胶的规格为200～400目，洗脱溶剂为正己烷与乙酸乙酯混合物。

作为本发明所述的苯烯莫德杂质的制备方法的优选实施方式，所述步骤(3)中，将柱层析分离得到的目标产物，进一步采用制备液相分离处理得到纯化后的所述苯烯莫德杂质，制备液相的流动相以乙腈和水为流动相。

上述技术方案通过柱层析和液相分离处理，进一步提高BZ07杂质的纯度。

本发明还提供了上述苯烯莫德杂质在苯烯莫德原料药或制剂的质量控制中作为杂质检测的对照品的用途。

发明人经过试验发现，BZ07杂质存在于苯烯莫德的最终产品中，因此，在制备苯烯莫德过程中，如不控制BZ07杂质的生成，缺乏对其含量的控制，可能导致最终产品质量不合格，从而对人体健康产生影响，因此，应对苯烯莫德BZ07杂质进行质量控制。对苯烯莫德原料和制剂的质量控制，必须有质量合格的杂质对照品。本发明提供的苯烯莫德新杂质，能够作为杂质对照品对苯烯莫德原料药或制剂进行质量控制。

与现有技术相比，本发明的有益效果为：

本发明制备了高纯度的苯烯莫德杂质6-甲基-5-[(E)-2-苯乙烯基]-2-异丙基-1,3-苯二酚，可作为苯烯莫德原料或制剂检测中的杂质的对照品，提高苯烯莫德的生产质量控制中对杂质6-甲基-5-[(E)-2-苯乙烯基]-2-异丙基-1,3-苯二酚的准确定位和定性，有利于加强对该杂质的控制，提高苯烯莫德制剂质量，从而保证苯烯莫德制剂临床使用的安全性和有效性。

附图说明

图1为实施例1制备的BZ07杂质的色谱图。

图2为BZ07杂质的LC-MS谱图(A为TIC图；B为UV图)。

图3为BZ07杂质的高分辨质谱图。

图4为BZ07杂质的核磁共振氢谱图。

图5为BZ07杂质的核磁共振碳谱图。

图6为BZ07对照品的色谱图。

具体实施方式

为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例中，所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法，所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。

实施例1

作为本发明所述的苯烯莫德杂质的制备方法的一种实施例，本实施例所述苯烯莫德杂质的制备方法包括以下步骤：

(1)取E-1,3-二甲氧基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯1kg与吡啶盐酸盐2.0kg，置于反应容器中，加热，保持200℃温度，搅拌反应，HPLC监控，至E-1,3-二甲氧基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯反应完全，停止反应；

(2)取13.0L乙酸乙酯、9.0L饮用水和0.28L盐酸，置萃取容器中，搅拌，将步骤(2)中反应液趁热转移至萃取容器中，搅拌，静置，弃去下层水相；加入8.5L饮用水和0.14L盐酸，搅拌，静置，弃去下层水相；加入4.0L饮用水，搅拌，静置，弃去下层水相，减压浓缩去除乙酸乙酯，得含有式II化合物的BZ07粗品；

(3)取BZ07粗品，加入甲苯，BZ07粗品与甲苯的混合比例为1kg:5.0L，加热至70℃使其全部溶解后，降温，析出结晶后，过滤，收集滤液，得含有式II的BZ07粗品母液，减压浓缩；

(4)取浓缩后BZ07粗品母液11.2g，以正己烷-乙酸乙酯(5:1)溶液为洗脱剂，300-400目柱层析硅胶为填充剂，进行柱层析纯化，收集含BZ07浓度较高的洗脱液，减压浓缩，获得BZ07粗品；

(5)制备液相分离：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水和甲醇为流动相，取步骤(4)得到的BZ07粗品，制备液相进行梯度洗脱分离，收集BZ07分离溶液，减压浓缩干燥，得所述苯烯莫德杂质BZ07(式II)363mg，色谱图如图1所示，测得纯度为98.84％，收率3.2％。

本发明中BZ07的纯度检测方法如下：

(1)用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈和水为流动相，紫外检测器检测波长220nm，流速1.0mL/min，柱温25℃，进行梯度洗脱检测；

梯度洗脱比例如表1所示：

表1

(2)样品溶液的配制：取BZ07适量，以水-乙腈(50:50)作为稀释液，配制成约0.1mg/mL溶液；

(3)检测：精密吸取样品溶液10μL，注入高效液相色谱仪，按照面积归一法计算得到BZ07的含量。

实施例2

作为本发明所述的苯烯莫德杂质的制备方法的一种实施例，本实施例所述苯烯莫德杂质的制备方法包括以下步骤：

(1)取E-1,3-二甲氧基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯Akg与吡啶盐酸盐2.0Akg，置于反应容器中，加热，保持140℃温度，搅拌反应，HPLC监控，至E-1,3-二甲氧基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯反应完全，反应时间为20h停止反应；

(2)取13.0AL四氢呋喃、9.0AL饮用水和0.28L硫酸，置萃取容器中，搅拌，将将步骤(2)中的反应液趁热转移至萃取容器中，搅拌，静置，弃去下层水相；加入8.5A L饮用水和0.14A L硫酸，搅拌，静置，弃去下层水相；加入4.0A L饮用水，搅拌，静置，弃去下层水相，减压浓缩去除乙酸乙酯，得含有式II的BZ07粗品B；

(3)取BZ07粗品，加入6.0B L正己烷，加热至70℃使其全部溶解后，降温，析出结晶后，过滤，收集滤液，得含有式II的BZ07粗品母液，减压浓缩；

(4)取浓缩后BZ07粗品母液11.2g，以正己烷-乙酸乙酯(5:1)溶液为洗脱剂，300-400目柱层析硅胶为填充剂，进行柱层析纯化，收集含BZ07浓度较高的洗脱液，减压浓缩，得BZ07粗品；

(5)制备液相分离：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水和甲醇为流动相，取步骤(4)得到的BZ07粗品，制备液相进行梯度洗脱分离，收集BZ07分离溶液，减压浓缩干燥，得所述苯烯莫德杂质BZ07(式II)363mg，收率3.2％。

实施例3

作为本发明所述的苯烯莫德杂质的制备方法的一种实施例，本实施例所述苯烯莫德杂质的制备方法包括以下步骤：

(1)取E-1,3-二甲氧基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯A kg与吡啶盐酸盐2.0Akg，置于反应容器中，加热，保持220℃温度，搅拌反应，HPLC监控，至E-1,3-二甲氧基-2-异丙基-5-(2-苯乙烯基)-苯反应完全，反应时间为2h，停止反应；

(2)取13.0A L甲基叔丁基醚、9.0A L饮用水和0.28L乙酸，置萃取容器中，搅拌，将将步骤(2)中反应液趁热转移至萃取容器中，搅拌，静置，弃去下层水相；加入8.5AL饮用水和0.14A L乙酸，搅拌，静置，弃去下层水相；加入4.0A L饮用水，搅拌，静置，弃去下层水相，减压浓缩去除乙酸乙酯，得含有式II的BZ07粗品B；

(3)取BZ07粗品，加入6.0B L甲醇，加热至70℃使其全部溶解后，降温，析出结晶后，过滤，收集滤液，得含有式II的BZ07粗品母液，减压浓缩；

(4)取浓缩后BZ07粗品母液11.2g，以正己烷-乙酸乙酯(5:1)溶液为洗脱剂，200-300目柱层析硅胶为填充剂，进行柱层析纯化，收集含BZ07浓度较高的洗脱液，减压浓缩，得BZ07粗品；

(5)制备液相分离：用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以水和甲醇为流动相，取步骤(4)得到的BZ07粗品，制备液相进行梯度洗脱分离，收集BZ07分离溶液，减压浓缩干燥，得所述苯烯莫德杂质BZ07(式II)363mg，收率3.2％。

本发明的制备方法还可以选用其它去甲基试剂代替吡啶盐酸盐，例如三氯化铝、三溴化硼。

本发明的制备方法还可以选用其它结晶试剂代替甲醇，例如二氯甲烷。

通过高分辨质谱、核磁共振氢谱和核磁共振碳谱分析方法，对本发明的BZ07杂质的结构进行表征。图2为BZ07杂质的LC-MS谱图(A为TIC图；B为UV图)。BZ07杂质的高分辨质谱图如图3所示，HRMS(ESI)：m/z 269.15[M+H]

实施例4

以本发明制备的BZ07作为杂质对照品用于对苯烯莫德原料或制剂进行分析检测的方法，包括如下步骤：

取苯烯莫德、BZ07杂质，精密称定，用水-乙腈(50:50)溶液溶解并稀释制成适宜的供试品溶液和对照品溶液。用辛烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以水为流动相A，以乙腈为流动相B；按表2进行梯度洗脱，检测波长为220nm，流速为每分钟1.0mL，柱温为25℃。供试品溶液的色谱图中如有BZ07杂质峰，按外标法计算BZ07含量。BZ07对照品的色谱图如图6所示。

表2

综上所述，本发明制备的苯烯莫德杂质6-甲基-5-[(E)-2-苯乙烯基]-2-异丙基-1,3-苯二酚，纯度高，可作为苯烯莫德原料或制剂检测中的杂质的对照品，提高苯烯莫德的生产质量控制中对杂质6-甲基-5-[(E)-2-苯乙烯基]-2-异丙基-1,3-苯二酚的准确定位和定性，有利于加强对该杂质的控制，提高苯烯莫德制剂质量，从而保证苯烯莫德制剂临床使用的安全性和有效性。

最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。