一种可用作双壳贝类饵料的大型海藻发酵产物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于水产贝类饲料技术领域，具体涉及一种可用作双壳贝 类饵料的大型海藻发酵产物及其制备方法和应用。

背景技术

贝类产业是我国渔业的重要组成部分，贝类养殖和采捕是遍布我 国沿海地区的一项重要活动，在某些偏远地区甚至是当地的主导产 业。健康发展的贝类产业，在保障国家粮食安全、丰富动物蛋白种类、 维持沿海地区稳定、拓宽就业渠道，增加渔农收入、扩大出口和赚取 外汇、传承传统文化、清洁海域水质和固碳汇碳等方面，都发挥着重 要甚至是不可替代的作用。

贝类主要以金藻、硅藻、小球藻等单胞藻作为饵料。然而在贝类 工厂化人工苗种繁育和池塘中间培育过程中，常出现单胞藻培养产量 低、培养条件苛刻，成本高等问题，尤其在北方夏季高温时期单胞藻 更是难以培养，导致贝类苗种饵料供给困难，造成贝类苗种存活率低， 产量下降，制约了贝类产业可持续发展。

大型海藻含有类胡萝卜素、蛋白质、维生素、P、碘、Ca等，尤 其是多糖不饱和酸等是陆生植物所不具有的营养成分，可满足海洋贝 类的生长发育。但由于大型海藻粉碎颗粒大，细胞壁厚等问题，使大 型海藻难以作为供贝类高效利用的人工饲料。目前，国内适于贝类苗 种摄食的海藻类饲料研发尚属空白。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种可用作双壳贝类饵料的大 型海藻发酵产物及其制备方法和应用。本发明提供的大型海藻发酵产 物可用作双壳贝类的饵料，填补了国内适用于贝类苗种摄食的大型海 藻类饲料的空白。

为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

本发明提供了一种可用作双壳贝类饵料的大型海藻发酵产物，所 述大型海藻发酵产物由大型海藻和海水贝类肠道微生物发酵得到。

优选的，所述大型海藻的种类包括石莼、萱藻、孔石莼、角叉菜、 石花菜、鼠尾藻、海带、裙带菜、海黍子、海蒿子、小珊瑚藻、鸭毛 藻、海萝、铜藻和羊栖中的一种或多种。

优选的，所述海水贝类的种类包括菲律宾蛤仔、太平洋牡蛎和海 湾扇贝中的一种或多种。

优选的，所述发酵的时间为5～10d，所述发酵的温度为20～25℃。

本发明提供了上述技术方案中所述的大型海藻发酵产物的制备 方法，包括如下步骤：制备海水贝类肠道微生物悬液；将大型海藻磨 碎液、海水贝类肠道微生物悬液和海水混合，进行发酵，得到所述大 型海藻发酵产物；

所述海水贝类肠道微生物悬液中微生物的活菌数不低于1000 CFU/mL；

所述大型海藻磨碎液、海水贝类肠道微生物悬液和海水的体积比 为(80～120)：(7.5～12.5)：(80～120)。

优选的，所述海水贝类肠道微生物悬液的制备方法包括如下步 骤：将海水贝类肠道用无菌海水冲洗，收集冲洗后的悬液，匀浆，得 到所述海水贝类肠道微生物悬液。

优选的，所述海水贝类肠道微生物悬液中的优势菌包括变形菌 门、厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门、蓝细菌和疣微菌门的细菌。

优选的，所述大型海藻磨碎液的粒径为200～300目。

优选的，还包括将发酵后的发酵液进行过滤，所述过滤包括粗滤 和精滤，所述粗滤过10～20目筛，所述精滤过200～300目筛。

本发明提供了上述技术方案中所述的大型海藻发酵产物或上述 技术方案中所述的制备方法得到的大型海藻发酵产物在饲喂双壳贝 类苗种中的应用，所述双壳贝类的种类包括菲律宾蛤仔、贻贝、蚶、 扇贝和牡蛎。

有益效果：

本发明提供了一种可用作双壳贝类饵料的大型海藻发酵产物，所 述大型海藻发酵产物由大型海藻和海水贝类肠道微生物发酵得到。本 发明提供的大型海藻发酵产物适口性良好，可显著促进双壳贝类生 长，可以用作双壳贝类的饵料。实施例的结果表明：将本发明的大型 海藻发酵产物投喂菲律宾蛤仔，蛤仔壳长的增长值显著高于无投喂组 和投喂常规饲料组，本发明的大型海藻发酵产物可以用作双壳贝类的 饵料。

附图说明

图1为实施例4各处理对蛤仔壳长和壳高的影响。

具体实施方式

本发明提供了一种可用作双壳贝类饵料的大型海藻发酵产物，所 述大型海藻发酵产物由大型海藻和海水贝类肠道微生物发酵得到。在 本发明中，所述大型海藻的种类优选包括石莼、萱藻、孔石莼、角叉 菜、石花菜、鼠尾藻、海带、裙带菜、海黍子、海蒿子、小珊瑚藻、 鸭毛藻、海萝、铜藻和羊栖中的一种或多种；进一步优选为石莼、萱 藻、孔石莼和角叉菜中的一种或多种；更进一步优选为石莼或萱藻； 更进一步优选为石莼，本发明通过选择特定的大型海藻的种类，使发 酵得到的发酵产物适口性更好，更利于促进双壳贝类苗种的生长。在 本发明中，所述海水贝类的种类优选包括菲律宾蛤仔、太平洋牡蛎和 海湾扇贝中的一种或多种；进一步优选为菲律宾蛤仔，本发明选择特 定的海水贝类的种类，其肠道内特定的优势门微生物可以有效地将大 型海藻粉碎后的大颗粒分解成单细胞颗粒，经过海水贝类肠道微生物 发酵后得到的大型海藻发酵产物，不仅适口性好，而且利于双壳贝类觅食，解决了大型海藻难以作为贝类高效利用的人工饲料的难题，填 补了国内适用于贝类苗种摄食的大型海藻类饲料的空白。在本发明 中，所述发酵的时间优选为5～10d，进一步优选为7d；所述发酵的 温度优选为20～25℃，进一步优选为25℃。本发明特定的发酵条件非 常适合发酵微生物的生长，显著提高了对大型海藻分解成单细胞的效 率，且发酵过程简单，室温发酵一周即可完成，可操作性强。

本发明通过贝类肠道微生物对大型海藻进行发酵，提供了一种适 口性好，可显著促进双壳贝类生长的饲料，促进了贝类产业的可持续 发展。

本发明提供了上述技术方案中所述的大型海藻发酵产物的制备 方法，包括如下步骤：制备海水贝类肠道微生物悬液；将大型海藻磨 碎液、海水贝类肠道微生物悬液和海水混合，进行发酵，得到所述大 型海藻发酵产物；

所述海水贝类肠道微生物悬液中微生物的活菌数不低于1000 CFU/mL；

所述大型海藻磨碎液、海水贝类肠道微生物悬液和海水的体积比 为(80mL～120)：(7.5mL～12.5)：(80mL～120)。

本发明制备海水贝类肠道微生物悬液。在本发明中，所述海水贝 类肠道微生物悬液的制备方法优选包括如下步骤：将海水贝类肠道内 侧用无菌海水冲洗，收集冲洗后的悬液，匀浆，得到所述海水贝类肠 道微生物悬液。本发明对冲洗的方法和匀浆的步骤没有特殊要求，采 用本领域技术人员常规方法即可。在本发明中，所述海水贝类肠道微 生物悬液中微生物的活菌数不低于1000CFU/mL，进一步优选为1000 CFU/mL。本发明所述海水贝类肠道微生物悬液中的优势菌优选包括 变形菌门、厚壁菌门、拟杆菌门、放线菌门、蓝细菌和疣微菌门的细 菌。本发明利用多样的肠道优势细菌为消化大型海藻磨碎液提供丰富 菌种资源，保证了大型海藻在投喂蛤仔前进行了预消化，便于蛤仔消 化利用。本发明海水贝类肠道微生物悬液主要用于大型海藻磨碎液的 发酵，使大型海藻磨碎液中的大颗粒分解，得到单细胞颗粒，便于双 壳贝类觅食。

得到海水贝类肠道微生物悬液后，本发明将大型海藻磨碎液、海 水贝类肠道微生物悬液和海水混合，进行发酵，得到所述大型海藻发 酵产物。在本发明中，所述大型海藻磨碎液的粒径优选为200～300目； 进一步优选为300目，对大型藻类进行磨碎处理，可以提高发酵效率。 本发明对大型海藻磨碎液的制备方法没有特殊要求，采用本领域技术 人员熟知的磨碎方法即可。本发明将大型海藻磨碎液、海水贝类肠道 微生物悬液和海水混合；所述大型海藻磨碎液、海水贝类肠道微生物 悬液和海水的体积比优选为(80～120)：(7.5～12.5)：(80～120)； 进一步优选为10：1：10。本发明通过进一步选择特定的发酵比例， 可使大型海藻充分发酵。本发明将大型海藻磨碎液、海水贝类肠道微 生物悬液和海水混合后，进行发酵。在本发明中，所述发酵的时间优 选为5～10d，进一步优选为7d；所述发酵的温度优选为20～25℃， 进一步优选为25℃。

发酵后，本发明优选将发酵后的发酵液进行过滤，得到所述的大 型海藻发酵产物。在本发明中，所述过滤优选包括粗滤和精滤，所述 粗滤优选过10～20目筛，进一步优选过20目筛；所述精滤优选过 200～300目筛，进一步优选过300目筛。精滤后的发酵液更适合滤食 性贝类食用。

本发明提供的大型海藻发酵产物的制备方法，不仅制备简单，而 且原料来源广泛，解决了大型海藻难以作为贝类高效利用的人工饲料 的难题。

本发明提供了上述技术方案中所述的大型海藻发酵产物或上述 技术方案中所述的制备方法得到的大型海藻发酵产物在饲喂双壳贝 类苗种中的应用。在本发明中，所述双壳贝类的种类包括菲律宾蛤仔、 贻贝、蚶、扇贝和牡蛎，进一步优选为菲律宾蛤仔。本发明提供的大 型海藻发酵产物用于饲喂双壳贝类，可显著促进双壳贝类壳长和壳高 的增长，适用于双壳贝类苗种的饲喂。

为了进一步说明本发明，下面结合实施例对本发明提供的一种可 用作双壳贝类饵料的大型海藻发酵产物及其制备方法和应用进行详 细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

一种可用作双壳贝类饵料的大型海藻发酵产物，制备步骤为：

1、选取健康菲律宾蛤仔10只，用无菌海水冲洗外壳3次，用灭 菌手术刀解剖取肠道，用无菌注射器取无菌海水冲洗肠道3次，收集 冲洗后的悬液，用无菌匀浆器匀浆，加入无菌海水至20mL，得到海 水贝类肠道微生物悬液，上述海水贝类肠道微生物悬液中微生物的活 菌数不低于1000CFU/mL。

2、称取新鲜石莼100g，用灭菌纯水洗净，然后放入灭菌磨碎机 内磨碎，获得大型海藻磨碎液约100mL，上述制备得到的大型海藻 磨碎液的粒径约为300目。

3、选取一个500mL的锥形瓶，洗净，放入烘箱烘干备用。

4、将锥形瓶放入制作好的大型海藻磨碎液，加入10mL的海水 贝类肠道微生物悬液和100mL的灭菌海水。

5、将锥形瓶放入到恒温培养箱，调节温度25℃，发酵7d。

6、取发酵液用20目的筛绢网粗滤，再用300目筛绢网过滤，获 得石莼发酵液，过滤产物即为本发明可用作双壳贝类饵料的大型海藻 发酵产物。

实施例2

一种可用作双壳贝类饵料的大型海藻发酵产物，制备步骤为：

1、选取健康菲律宾蛤仔10只，用无菌海水冲洗外壳3次，用灭 菌手术刀解剖取肠道，用无菌注射器取无菌海水冲洗肠道3次，收集 冲洗后的悬液，用无菌匀浆器匀浆，加入无菌海水至20mL，得到海 水贝类肠道微生物悬液，上述海水贝类肠道微生物悬液中微生物的活 菌数不低于1000CFU/mL。

2、称取新鲜萱藻100g，用灭菌纯水洗净，然后放入灭菌磨碎机 内磨碎，获得大型海藻磨碎液约100mL，上述制备得到的大型海藻 磨碎液的粒径为300目。

3、选取一个500mL的锥形瓶，洗净，放入烘箱烘干备用。

4、将锥形瓶放入制作好的大型海藻磨碎液，加入10mL的海水 贝类肠道微生物悬液和100mL的灭菌海水。

5、将锥形瓶放入到恒温培养箱，调节温度25℃，发酵7d。

6、取发酵液用20目的筛绢网粗滤，再用300目筛绢网过滤，获 得萱藻发酵液，过滤产物即为本发明可用作双壳贝类饵料的大型海藻 发酵产物。

实施例3

采用实施例1和实施例2的方法制备大型海藻发酵产物，每种方 法连续制备两个批次，对得到的大型海藻发酵产物以及试验中使用的 菲律宾蛤仔肠道组织样本分别提取总DNA，检测各样本的微生物群 落结构(-80℃保存送百迈客公司检测)，检测结果见表1和表2。

表1菲律宾蛤仔肠道细菌群落组成

通过16S rDNA高通量测序研究了用于发酵大型海藻磨碎液的健 康菲律宾蛤仔肠道细菌群落组成，发现蛤仔肠道细菌群落主要以变形 菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes)、 放线菌门(Actinobacteria)、蓝细菌(Cyanobacteria)、疣微菌门 (Verrucomicrobia)等为优势门。虽然不同蛤仔个体肠道细菌群落结 构有差异，但优势门基本一致，不同蛤仔个体之间的差异不会影响最 终的发酵产物。

表2大型海藻发酵液细菌群落组成

通过16S rDNA高通量测序研究了萱藻和石莼两种大型海藻发酵 液的细菌群落组成，发现不同大型海藻、不同批次的发酵液细菌群落 优势门有变形菌门(Proteobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)、 Epsilonbacteraeota、蓝细菌(Cyanobacteria)、梭杆菌门(Fusobacteria)、 拟杆菌门(Bacteroidetes)、疣微菌门(Verrucomicrobia)等，与菲律宾 蛤仔肠道的优势门基本相同，进一步说明不同蛤仔个体之间的差异不 会影响最终的发酵产物。

实施例4

将实施例1和实施例2的大型海藻发酵液投喂菲律宾蛤仔，同时设置空 白对照组、投喂常规饵料组、投喂无发酵大型海藻磨碎液组。其中，常规饲 料组投喂金藻和角毛藻，每日投喂量为5000cell/mL(投喂后金藻和角毛藻在 桶内的终浓度)；空白对照组不投喂；其他处理组每日投喂量为5000cell/mL (大型海藻发酵液按规则和不规则形状细胞计数；大型海藻磨碎液仍可见大 量规则细胞，按规则细胞计数)。记录投喂三周后不同试验组蛤仔壳长、壳 高增长值，检测结果如表3和图1所示；图1中SL为壳长；SH为壳高；control 为无投喂；mock为投喂常规饵料(金藻、角毛藻)；HMF为投喂萱藻发酵液； SCF为投喂石莼发酵液；HMF+SCF为投喂萱藻发酵液和石莼发酵液；HM为 投喂无发酵萱藻新鲜磨碎液(即表3中投喂无发酵新鲜萱藻磨碎液)；SC投 喂无发酵石莼新鲜磨碎液(即表3中投喂无发酵新鲜石莼磨碎液)；HM+SC 为投喂无发酵萱藻新鲜磨碎液和无发酵石莼新鲜磨碎液(即表3中投喂无发酵新鲜萱藻磨碎液和无发酵新鲜石莼磨碎液)。

表3不同投喂方式对蛤仔壳长和壳高的影响

由表3和图1的结果可知，单独投喂石莼发酵产物组蛤仔壳长增 长值最高，为349±53μm；单独投喂萱藻发酵产物组蛤仔壳长增长值 次之，为315±69μm。这两个试验组蛤仔壳长的增长值显著高于无投 喂组和投喂常规饵料组蛤仔的壳长增长值(p＜0.05)。投喂无发酵 萱藻新鲜磨碎液试验组、无发酵石莼新鲜磨碎液试验组、投喂无发酵 萱藻新鲜磨碎液和无发酵石莼新鲜磨碎液试验组蛤仔的壳长、壳高增 长值均显著低于无投喂组和投喂常规饵料组蛤仔的壳长、壳高增长值 (p＜0.05)。表3和图1的结果提示将大型海藻磨碎后与健康菲律 宾蛤仔肠道微生物共同发酵后得到的发酵产物可用作蛤仔的饵料。

由上述实施例的结果可知，本发明提供的大型海藻发酵产物适口 性良好，可显著促进双壳贝类生长，可以用作双壳贝类的饵料；同时， 本发明提供的大型海藻发酵产物的制备方法简单，原料来源广泛，填 补了国内适用于贝类苗种摄食的大型海藻类饲料的空白。

尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明 一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经 创造性前提下获得其它实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。