一种用于骨组织的过氧化氢浸泡冲洗工艺

技术领域

本发明属于生物医药材料技术领域，具体为一种用于骨组织的过氧化氢浸泡冲洗工艺。

背景技术

骨组织的重要性和骨相关疾病带来的危害，加速了骨组织工程的发展。在此大背景下，骨组织工程因具有治疗骨相关损伤或疾病的巨大潜力，而成为修复损伤器官的新的前沿的方法。通常而言，骨组织工程的研究包含了三大元素：支架、细胞和生长因子。上述三者中，对支架的研究是目前研究较为活跃的领域之一。

例如公开号为CN113398665A的发明公开了一种高纯双氧水生产工艺用滤芯的清洗方法，包括以下操作步骤：清洗空间顶部设置有高强度太阳能照射灯，使用照射灯照射滤芯所在的位置进行升温操作，对滤芯外表面的双氧水进行加热分解操作，将二氧化锰为基质，催化剂、清洗溶剂、改性活性炭吸附料、树脂吸附有机物混合使用的双氧水分解溶剂均匀地涂覆在滤芯的外表面，将滤芯放置在太阳能光照灯的底部，进行静置分解。本发明所述的一种高纯双氧水生产工艺用滤芯的清洗方法，以二氧化锰为基质，催化剂、清洗溶剂、改性活性炭吸附料、树脂吸附有机物混合制备双氧水分解溶剂，加快双氧水分解速率，不易出现残留的情况，同时采用光照加热分解的方法，增加清洗效果。

目前人们在制备骨骼标本的时候，常常是通过使用过发浓度的过氧化氢直接对骨骼以及内部的骨组织和骨基质进行浸泡的，同时在浸泡之后使用清水进行冲洗，但这样得到的骨骼标本常常会出现保存时间较短的，并产生细菌，导致骨骼以及内部的骨基质发黑的情况发生，进而降低了骨骼标本的使用时间，因此提出一种一种用于骨组织的过氧化氢浸泡冲洗工艺，以解决背景技术中所提出的问题。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明提供了一种用于骨组织的过氧化氢浸泡冲洗工艺，解决了直接使用过氧化氢对骨骼进行清洗导致骨骼标本储存时间较短的问题，具有对提高对骨骼标本保存时间的优点。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种用于骨组织的过氧化氢浸泡冲洗工艺，其步骤包括：

S1：过氧化氢的浸泡工艺：

S11：原料准备：取一段骨组织，将需要浸泡的骨组织放入至容器之中；

S12：配制溶液：将配置好的含5％的过氧化氢1.5倍以上的比例浸泡同种异体骨14—18个小时；

S13：浸泡搅拌：将浸泡后的骨组织分别于第0.2—0.7小时、第0.9—1.2个小时、第1.5—1.7小时后，使用玻璃棒搅拌同种异体骨，搅拌次数一共为三次；

S2：过氧化氢浸泡后的冲洗工艺：

S21：第一次浸泡冲洗：取出过氧化氢浸泡14—18小时后的骨组织，并使用纯化水流冲洗30分钟；

S22：第二次浸泡冲洗：将经过纯化流水冲洗后的骨组织使用纯化水浸泡15分钟，浸泡后再使用纯化水流水冲洗30分钟；

S23：冲洗滤干：将经过纯化流水冲洗后的骨组织再次使用纯化水浸泡15分钟，随后使用纯化水流水冲洗30分钟之后使用过滤网将骨组织过滤筛出，晒出后通过热风滤干。

优选的，S11中，所选用的骨组织选用长骨，并切段；选用的容器为带有玻璃密封盖的玻璃容器。

优选的，S12中，选用含5％的过氧化氢按比例为1.5-2倍率进行浸泡，浸泡温度为30℃，浸泡时间为16个小时。

优选的，S2中所采用浸泡时的纯化水均为30℃，电阻率大于0.1x10^6Ω*cm的去离子水。

优选的，S2中所采用冲洗时纯化水的均为25℃，电阻率大于0.1x10^6Ω*cm的去离子水。

优选的，S2中，所采用的纯化水，冲洗时纯化水流的速度为3m/s。

优选的，S23中，所采的过滤网为无菌过滤纱布，所采用热风干燥的温度为40℃，风速为3.5m/s热风干燥30分钟。

与现有技术相比，本发明的有益效果如下：

本申请通过将需要浸泡的骨组织放入容器中，将配置好的含5％过氧化氢1.5倍的比例浸泡同种异体骨16个小时，分别于浸泡后第0.5、第1、第1.5小时用玻璃棒搅拌同种异体骨，共三次，随后取出过氧化氢浸泡16个小时后的骨组织，用纯化水流水冲洗30分钟，流水冲洗后用纯化水浸泡15分钟，浸泡后再用纯化水流水冲洗30分钟，流水冲洗后再用纯化水浸泡15分钟，最后再用纯化水流水冲洗30分钟后滤干，从而完成对骨骼内外部的清理，最终通过热风干燥后得到使用时间为4—5年的骨骼标本。

附图说明

图1为本发明的流程图；

图2为本发明过氧化氢浸泡时间H—保存时间T的折线图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明提供一种技术方案：一种用于骨组织的过氧化氢浸泡冲洗工艺，其步骤包括：

S1：过氧化氢的浸泡工艺：

S11：原料准备：取一段骨组织，将需要浸泡的骨组织放入至容器之中；

S12：溶液配置：将配置好的含5％的过氧化氢1.5倍以上的比例浸泡同种异体骨14—18个小时；

S13：浸泡搅拌：将浸泡后的骨组织分别于第0.2—0.7小时、第0.9—1.2个小时、第1.5—1.7小时后，使用玻璃棒搅拌同种异体骨，搅拌次数一共为三次；

S2：过氧化氢浸泡后的冲洗工艺：

S21：第一次浸泡冲洗：取出过氧化氢浸泡14—18小时后的骨组织，并使用纯化水流冲洗30分钟；

S22：第二次浸泡冲洗：将经过纯化流水冲洗后的骨组织使用纯化水浸泡15分钟，浸泡后再使用纯化水流水冲洗30分钟；

S23：冲洗滤干：将经过纯化流水冲洗后的骨组织再次使用纯化水浸泡15分钟，随后使用纯化水流水冲洗30分钟之后使用过滤网将骨组织过滤筛出，晒出后通过热风滤干。

过氧化氢化学式为H2O2，因有两个O原子，故俗称双氧水，外观为无色透明液体，是一种强氧化剂，其水溶液适用于医用伤口消毒及环境消毒、食品消毒和外伤性伤口的清创以及消毒，其过氧化氢溶液也适用于对骨组织的消毒，同时过氧化氢在温度低于50℃时且在没有催化剂的作用下，其自然分解的速度是非常缓慢的，且过氧化氢的分解物为水和氧气，进而避免了采用其他消毒溶液导致骨组织受损的情况发生，因此采用过氧化氢来对骨组织进行消毒非常安全的且对骨组织的保护效果好的。

其中，S11中，所选用的骨组织选用长骨；选用的容器为带有玻璃密封盖的玻璃容器；

通过选用长骨，由于长骨的长度较长，形状较为规整，内部所含有的骨组织含量较多即，同时也便于对长骨的切段，因此使得长骨相比于其他含有骨组织的骨骼更适合于本申请，同时由于骨组织是位于长骨内部的，因此需要将长骨切段，从而将长骨内部的骨组织暴露出来，从而使得骨组织与过氧化氢溶液充分接触，以保证对骨组织的中的抗原进行消除操作；

这里值得说明的是：需要切段的骨骼切割两段即可，从而防止切割段数过，导致骨骼磨损消耗的量过多的情况发生，从而后续地对骨骼的拼接，同时玻璃容器的选择，防止了过氧化氢与容器发反应的情况发生，同时玻璃容器的选择还便于操作人员观测对骨骼浸泡时的进度，通过使用玻璃盖，进而避免了过氧化氢在对骨骼进行清洗时，外界的污染物进入至反应容器之中，进而导致对内部骨骼的污染。

其中，S12中，选用含5％的过氧化氢按比例为1.5-2倍率进行浸泡，浸泡温度为30℃，浸泡时间为16个小时；

有研究发现，在30℃的条件下，高浓度的过氧化氢的浸泡，可以消除部分异种骨的抗原性，且浸泡时间越长，抗原性消除越彻底，分析过氧化氢消除同种异体骨抗原性的机制可能在于强氧化剂作用下发生包括胶原蛋白在内的蛋白质变性，异体骨粒内抗原物质发生蛋白变性，使其抗原决定簇构象发生改变，从而减弱或消除了其抗原性，而胶原蛋白的变性影响骨粒的生物力学特性，选择合适的过氧化氢作用时间既可以消除抗原性又能保留胶原结构。

其中，S2中所采用浸泡时的纯化水均为30℃，电阻率大于0.1x10^6Ω*cm的去离子水；

普通的水含有多种离子，如钠离子、氯离子等，本申请需要极其纯净的不能含任何离子的水，普通水无法满足需要，通过去除钠离子和了氯离子，从而防止了普通水中个各种矿物离子对浸泡在纯化水中的骨组织造成影响，进而最大限度的保留骨骼中的骨组织即骨基质。

其中，S2中所采用冲洗时纯化水的均为25℃，电阻率大于0.1x10^6Ω*cm的去离子水；且冲洗时纯化水流的速度为3m/s；

通过使用纯化水来对切段的骨组织进行清洗，从而防止使用普通水冲洗时有微量离子的存在会附着在骨组织上，进而对骨组织造成损伤的情况发生，同时3m/s的冲洗的速度，从而保证了纯化水具有对在每段骨骼内部中的软组织进行冲洗清除，取出骨组织上附着的各种残的物质等。

其中，S23中，所采的过滤网为无菌过滤纱布，所采用热风干燥的温度为40℃，风速为3.5m/s热风干燥30分钟；通过40℃热风以3.5m/s的条件下，从而防止了温度过高而对骨基质造成伤害，进而导致骨基质由于温度过高而脆化，保证了骨骼以及骨基质在干燥后仍具有一定的硬度同，时在30分钟的干燥时间下，从而最大限度的去除了骨组织中的水分，避免了由于骨组织中存在残留的水分进而导致骨组织内部细菌滋等情况的发生；

这里值得说明的是：在对切段的骨骼进行干燥时，需要不断的对切段骨骼进行角度的调整，同时需要保证空气的流通，尽量避免骨组织在狭小密闭的空间之中进行干燥，从而防止蒸发后的水汽再次凝结在骨骼的内部，最终，所得到的骨骼标本所能使用的时间为4—5年。

实施例一、

S1：过氧化氢的浸泡工艺：

S11：原料准备：取一段骨组织，将需要浸泡的骨组织放入至容器之中；

S12：溶液配置：将配置好的含5％的过氧化氢1.5倍的比例浸泡同种异体骨14个小时；

S13：浸泡搅拌：将浸泡后的骨组织分别于第0.2小时、第0.9个小时、第1.6小时后，使用玻璃棒搅拌同种异体骨，搅拌次数一共为三次；

S2：过氧化氢浸泡后的冲洗工艺：

S21：第一次浸泡冲洗：取出过氧化氢浸泡14小时后的骨组织，并使用纯化水流冲洗30分钟；

S22：第二次浸泡冲洗：将经过纯化流水冲洗后的骨组织使用纯化水浸泡15分钟，浸泡后再使用纯化水流水冲洗30分钟；

S23：冲洗滤干：将经过纯化流水冲洗后的骨组织再次使用纯化水浸泡15分钟，随后使用纯化水流水冲洗30分钟之后使用过滤网将骨组织过滤筛出，晒出后通过热风滤干。

实施例二、

S1：过氧化氢的浸泡工艺：

S11：原料准备：取一段骨组织，将需要浸泡的骨组织放入至容器之中；

S12：溶液配置：将配置好的含5％的过氧化氢1.7倍以上的比例浸泡同种异体骨16个小时；

S13：浸泡搅拌：将浸泡后的骨组织分别于第0.7小时、第1.3个小时、第1.6小时后，使用玻璃棒搅拌同种异体骨，搅拌次数一共为三次；

S2：过氧化氢浸泡后的冲洗工艺：

S21：第一次浸泡冲洗：取出过氧化氢浸泡18小时后的骨组织，并使用纯化水流冲洗30分钟；

S22：第二次浸泡冲洗：将经过纯化流水冲洗后的骨组织使用纯化水浸泡15分钟，浸泡后再使用纯化水流水冲洗30分钟；

S23：冲洗滤干：将经过纯化流水冲洗后的骨组织再次使用纯化水浸泡15分钟，随后使用纯化水流水冲洗30分钟之后使用过滤网将骨组织过滤筛出，晒出后通过热风滤干。

S1：过氧化氢的浸泡工艺：

S11：原料准备：取一段骨组织，将需要浸泡的骨组织放入至容器之中；

S12：溶液配置：将配置好的含5％的过氧化氢1.5倍以上的比例浸泡同种异体骨16个小时；

S13：浸泡搅拌：将浸泡后的骨组织分别于第0.5小时、第1个小时、第1.5小时后，使用玻璃棒搅拌同种异体骨，搅拌次数一共为三次；

S2：过氧化氢浸泡后的冲洗工艺：

S21：第一次浸泡冲洗：取出过氧化氢浸泡16小时后的骨组织，并使用纯化水流冲洗30分钟；

S22：第二次浸泡冲洗：将经过纯化流水冲洗后的骨组织使用纯化水浸泡15分钟，浸泡后再使用纯化水流水冲洗30分钟；

S23：冲洗滤干：将经过纯化流水冲洗后的骨组织再次使用纯化水浸泡15分钟，随后使用纯化水流水冲洗30分钟之后使用过滤网将骨组织过滤筛出，晒出后通过热风滤干。

需要说明的是，在本文中，诸如第一和第二等之类的关系术语仅仅用来将一个实体或者操作与另一个实体或操作区分开来，而不一定要求或者暗示这些实体或操作之间存在任何这种实际的关系或者顺序。而且，术语“包括”、“包含”或者其任何其他变体意在涵盖非排他性的包含，从而使得包括一系列要素的过程、方法、物品或者设备不仅包括那些要素，而且还包括没有明确列出的其他要素，或者是还包括为这种过程、方法、物品或者设备所固有的要素。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。