一种抗衰老的组合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及抗衰老技术领域，具体而言，涉及一种抗衰老的组合物及其制备方法和应用。

背景技术

衰老(Aging)是指机体对环境的生理和心理适应能力进行性降低、逐渐趋向死亡的现象，是由于干细胞衰退、DNA退化、饮食精神因素、衰老基团活跃等综合作用的结果。随着机体的逐渐衰老，伴随着衰老诱发的相关性疾病威胁着人体健康，衰老给人们健康和生活带来一定的困扰，严重影响人们生活质量。

目前关于抗衰老产品研究广泛，其中主要是延缓衰老的保健产品，美白抗皱护肤面膜和面霜等。而专注于海洋产业，以及中药介入或药食同源中药与食品结合产品较少。

鉴于此，特提出本发明。

发明内容

本发明的目的在于提供一种抗衰老的组合物及其制备方法和应用。

本发明是这样实现的：

第一方面，本发明实施例提供了一种抗衰老的组合物，按重量份数计，其主料包括：10～90份海参肽、10～90份茯苓多糖和10～90份橄榄多酚。

第二方面，本发明实施例提供了如前述实施例所述的组合物的制备方法，其包括：按照前述实施例所述的组合物中的重量份数将组分混合。

第三方面，本发明实施例提供了如前述实施例所述的组合物在制备抗衰老的产品中的应用。

第四方面，本发明实施例提供了一种抗衰老的产品，其活性成分包括如前述实施例所述的组合物。

本发明具有以下有益效果：

本发明提供的组合物中，海参肽可以有效延缓皮肤衰老，茯苓多糖可以通过提高机体免疫力进行延缓衰老，橄榄多酚通过抗氧化来延缓衰老，三种组分之间协同增效，以有效提高产品延缓衰老水平。

附图说明

为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。

图1为单纯形设计图；

图2为各混料组DPPH·清除能力；

图3为各混料组ABTS

图4为各混料组OH·清除能力；

图5为各混料组对N

图6为各混料组对N

图7为各混料组对N

图8为各混料组对N

图9为显微镜下各混料组对N

图10为各混料组对N

图11为混合组的体外抗氧化等高线图和三维表面图；

图12为混合组的抗衰老等高线图和三维表面图。

具体实施方式

为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

本发明实施例提供了一种抗衰老的组合物，按重量份数计，其主料(活性成分)包括：10～90份海参肽(SCP)、10～90份茯苓多糖(PCP)和10～90份橄榄多酚(OPP)。

海参自古以来为滋补强身的名贵珍品，被列为海味八珍之首。《本草纲目拾遗》中记载“海参性温补，足敌人参，故名海参”，因此选取天然野生的东海乌参为原料。经过生物酶解得到的海参肽具有良好的溶解性、稳定性、乳化性、低黏度性、易消化吸收、无抗原性，营养价值极高，是滋补佳品。

茯苓为多孔菌科真菌茯苓Poria cocos(Schw.)Wolf的干燥菌核茯苓性甘、淡，平。归心、肺、脾、肾经。功能主治利水渗湿，健脾，宁心。用于水肿尿少，痰饮眩悸，脾虚食少，便塘泄泻，心神不安，惊悸失眠。茯苓多糖是其主要活性成分之一。

橄榄(青果)为橄榄科植物橄榄Canarium album Raeusch.的干燥成熟果实。甘、酸，平。归肺、胃经。清热解毒，利咽，生津。用于咽喉肿痛，咳嗽痰黏，烦热口渴，鱼蟹中毒。橄榄富含多种功能活性成分，其中多酚类化合物占主要部分，橄榄多酚具有抗氧化、抗菌消炎、抗炎、抗病毒、抗癌抑癌等药理作用。

海参肽可以有效延缓皮肤衰老，但是成本较高，而茯苓多糖可以通过提高机体免疫力进行延缓衰老，橄榄多酚通过抗氧化来延缓衰老，组分之间协同增效，以有效提高产品延缓衰老水平，降低生产成本。

在一些实施例中，所述海参肽的制备方法包括以下步骤：

采用液氮浸没煮熟且去除石灰嘴、内膜和筋的海参后，将海参置于95～97℃的热水中，浸泡5～20min；浸泡后，海参清洗至海参表面细小折皱里的有害重金属污垢脱落为止；

将清洗后的海参与水按照1:(1.5～2.5)混合后，升温至105～110℃保温1～2h；然后在密闭条件下自然降温至55～60℃；

将自然降温后的产物进行搅拌剪切，制得95％以上通过60目筛网的浆料；将所述浆料过滤后升温至45～55℃，与复合中性蛋白酶按照质量比为100:(0.1～1)混合，于51～52℃保温酶解10～12h，获得酶解产物；其中，按质量百分比计，所述复合中性蛋白酶包括：45％的巯基蛋白酶系的菠萝蛋白酶、30％的木瓜蛋白酶和25％的枯草芽孢杆菌产中性蛋白酶；

将酶解后的产物进行脱腥处理和脱色处理后，浓缩获得含海参肽的溶液。

在一些实施例中，所述脱腥处理包括：将酶解后的产物与经过自溶处理的面包酵母自溶液按照质量比为100:(0.1～0.5)混合，35～45℃保温脱腥处理2～4h。

在一些实施例中，所述脱色处理包括：将脱腥处理后的物料通过80目振动筛过滤，滤液打回蒸煮酶解罐，打开搅拌机，加热，使罐内物料温度升至90℃，保温灭酶10～30分钟，然后打开罐体夹套冷却水阀门，待罐内物料温度降至80℃，加入物料质量1％的糖用活性炭，保温脱色1h；再加入物料质量1.5％的糖用活性炭，保温脱色1h；脱色完成后将物料用板框压滤机过滤。

在一些实施例中，所述浓缩包括：将板框过滤机过滤后的滤液再用陶瓷膜过滤机过滤，滤液打入真空浓缩机，保持温度50～60℃，浓缩至物料的波美浓度30～36°Bé时止，得到浓缩液。

在一些实施例中，所述制备方法还包括：将所述浓缩液进行干燥，制得粉状的海参肽。

在一些实施例中，所述干燥包括：将浓缩液经喷雾干燥机制成海参肽粉，控制喷雾干燥机的出口温度95-98℃，控制成品海参肽粉的水分为2-3％，喷雾干燥的海参肽粉用于食品和保健品行业；或者浓缩液用-40℃冷冻干燥机干燥后，再用水冷式不锈钢粉碎机粉碎成200-300目的海参肽粉，控制成品海参肽粉的水分为2-3％，冷冻干燥的海参肽粉用于对产品气味有特殊要求的化妆品、美容院和特医食品行业；或者浓缩液打入高浓缩比低温真空浓缩机内，保持真空浓缩机内温度35-45℃，浓缩至波美浓度50-65°Bé的膏状，膏状的海参肽用于化妆品和美容院行业对气味和色泽有特殊要求的液体产品。

在一些实施例中，所述海参肽包括由专利申请号为“CN201810961331.X”、发明名称为“一种海参肽的制备方法”的专利提供的海参肽的制备方法所得的海参肽。

在一些实施例中，海参肽、茯苓多糖和橄榄多酚的重量份数可以独立地为10份、15份、20份、25份、30份、35份、40份、45份、50份、55份、60份、65份、70份、75份、80份、85份、90份中的任意一种或任意两种之间的范围。

在一些优选实施例中，按重量份数计，其包括：30～60份海参肽、20～50份茯苓多糖和10～30份橄榄多酚。

在一些优选实施例中，按重量份数计，其包括：40～60份海参肽、30～50份茯苓多糖和10～20份橄榄多酚。

优选实施例的方案是发明人提出并验证过的，相比限定范围外的方案具有更优异的抗衰效果。

在一些实施例中，其还包括辅料。

在一些实施例中，所述辅料为水。

优选地，所述水和所述主料的质量浓度比为20mg：(150～300)mL，该体积比具体可以为20:150、20:160、20:170、20:180、20:190、20:200、20:210、20:220、20:230、20:240、20:250、20:260、20:270、20:280、20:290、20:300中的任意一种或任意两种之间的范围。

另一方面，本发明实施例还提供了如前述任意实施例所述的组合物的制备方法，其包括：按照前述任意实施例所述的组合物中的重量份数将组分混合。

在一些实施例中，所述混合包括：先将前述主料混合均匀后，再添加溶剂混匀。

另一方面，本发明实施例还提供了如前述任意实施例所述的组合物在制备抗衰老的产品中的应用。

在一些实施例中，所述抗衰老是指具有以下至少一种功能：抗氧化活性、抗应激损伤、延长寿命和降低脂褐素的积累。

在一些实施例中，所述产品包括：试剂、试剂盒、食品、保健品和护肤品中的任意一种。

另一方面，本发明实施例还提供了一种抗衰老的产品，其活性成分包括如前述任意实施例所述的组合物。

在一些实施例中，所述产品包括：试剂、试剂盒、食品、保健品和护肤品中的任意一种。

以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。

实施例1

(一)构建比例

抗衰老的试剂的主料配比如下。

通过Minitab软件对海参肽(SCP)、茯苓多糖(PCP)、橄榄多酚(OPP)三个组分进行单纯质心混料设计，得出如下质量比例(后续的比例排列顺序也按照海参肽(SCP)、茯苓多糖(PCP)和橄榄多酚(OPP)进行)。

表1单纯质心混料设计表

单纯形设计图见图1。

本实施例采用的海参肽是由专利申请号为“CN201810961331.X”、发明名称为“一种海参肽的制备方法”的专利提供的海参肽的制备方法所得的海参肽。茯苓多糖为水溶性多糖，多糖含量≥70％，橄榄多酚符合国家检验标准，羟基酪醇含量≥25％。

(二)指标检测

1、体外抗氧化

1.1DPPH·清除能力

(1)在96孔板中依次加入20μL 800μg/mL的样品溶液(表1的10个抗衰老试剂)和180μL 150μmol/L DPPH工作液，混匀后避光反应30min，517nm处测定吸光值A

(2)同操作测定A

(3)同操作测定A

1.2ABTS

(1)96孔板中依次加入800μg/mL的样品溶液20μL和ABTS工作液180μl，30℃避光反应6min，立即检测734nm处的吸光值A

(2)同操作测定A

(3)同操作测定A

1.3OH·清除能力

(1)取1mL 9mmol/L FeSO

(2)同操作测定A

(3)同操作测定A

2、抗衰老

2.1寿命实验

秀丽隐杆线虫的同期化，取怀孕成虫于涂布尿嘧啶缺陷型大肠杆菌的NGM培养基内，观察其产卵情况，开始产卵4h后，将怀孕成虫挑去，将卵培养48h至L4期成虫，该批成虫即为同期化成虫。制备含药菌液，并将含药菌液涂布在5氟板上，设空白对照组(Control，含有无菌水的菌液)和10组混料组，10组混料组均为含药菌液，药物(表1的抗衰老试剂)浓度均为0.125mg/mL。将同期化的线虫，随机挑取至铺有菌液的五氟板上，此时记为第0天，20℃下培养，观察记录线虫的存活情况。

线虫死亡及剔除标准：无运动迹象，用铂丝轻触后10s无反应；线虫因爬出培养皿失踪或致死、虫卵在体内孵化成袋样虫的不计入数据。

2.2行动力实验

寿命试验期间，在16、18、20、22天记录线虫的行动力，其中行动自如，自由爬动的记为行动A；铂丝轻触后线虫身体扭动或头部扭动记为行动C；介于两者之间为行动B。

2.3应激实验

2.3.1氧化应激

按照寿命实验所用的实验方法制备含药菌液和同期化成虫。将同期化的秀丽隐杆线虫挑至含药板上，两天转一次板，给药7天后，在96孔板中，每孔加入140mmol/L的百草枯溶液50μL，将各组线虫挑至百草枯溶液中，记录存活率。

2.3.2热应激

按照寿命实验所用的实验方法制备含药菌液和同期化成虫。将同期化的秀丽隐杆线虫挑至含药板上，两天转一次板，给药7天后，将板放入37℃的培养箱中13h，记录线虫的存活率。

2.4脂褐素含量

按照寿命实验所用的实验方法制备含药菌液和同期化成虫。将同期化的秀丽隐杆线虫挑至含药板上，两天转一次板，给药11天，荧光显微镜下照射观察脂褐素积累情况。

实验结果

1、混料组的体外抗氧化

DPPH·、ABTS

2、各混料对秀丽隐杆线虫的抗衰老作用

2.1各混料对线虫寿命的影响

线虫的寿命是评定延缓线虫衰老的一个关键性指标，和自然衰老的线虫相比，若有效延长秀丽隐杆线虫的寿命说明有效延缓衰老。结果显示，混料组整体延长了秀丽隐杆线虫的平均寿命，其中0.5+0.5+0最大寿命和平均寿命均高，平均寿命延长了40.10％，0.333+0.333+0.333平均寿命延长29.82％，0.667+0.167+0.167平均寿命延长了23.20％，海参肽组平均寿命延长30.40％。0.667+0.167+0.167在寿命早期占有一定优势，0.167+0.667+0.167在寿命中期占有一定优势，0.5+0+0.5在寿命后期占有一定优势。说明两种或者三种混合能有效延缓衰老，具体见图5和表2。

表2.混料组正常条件下对N

注：同一列中不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。

2.2各混料对线虫行动力的影响

寿命实验中，选取20、22和24天分别记录线虫的行动能力，其中行动自如，自由爬动的记为行动A；铂丝轻触后线虫身体扭动或头部扭动记为行动C；介于两者之间为行动B，因此A、B占比越高说明线虫活性越好。由图可以看出，与control组相比混料组死亡率降低，即对机体没有毒性并未影响线虫肌肉收缩等功能，影响线虫正常活动，反而相比之下行动更加活跃，Motion A，Motion B占比增加，死亡率减少，其中，随着天数的增加0.333+0.333+0.333与0.5+0.5+0改善秀丽隐杆线虫行动力的能力更明显。具体见图6。

2.3各混料对线虫氧化应激和热应激的影响

氧化应激是以高浓度百草枯作为自由基诱导剂，建立秀丽线虫体内氧化损伤模型，研究海参肽的抗氧化活性，而热刺激在一定程度上能够加速线虫的衰老进程，通过对线虫在热激损伤情况下存活率的评估来衡量药物对于热刺激导致的线虫衰老所产生的保护作用。通过百草枯应激和热应激，混料组的存活率均高于control组，其中百草枯应激实验SCP、0.167+0.667+0.167组存活率较高，热应激实验0.333+0.333+0.333组存活率较高，具体见图7～8。

2.4各混料对线虫的脂褐素积累的影响

脂褐素是由溶酶体消化后的化合物和脂肪残基组成，可自发荧光，在线虫中随着年龄的增长而积累。荧光越亮说明脂褐素越多，荧光越暗脂褐素越少。通过Image J软件折算出，脂褐素在荧光显微镜下的累积光密度，进行比较作图，0.333+0.333+0.333明显低于control组，是众多组中脂褐素最少的，可以有效减少脂褐素的积累，其次是SCP、OPP、0.167+0.667+0.167、0.5+0+0.5组，具体见图9～10。

3、海参肽、茯苓多糖和橄榄多酚混料比例的优化

海参肽、茯苓多糖和橄榄多酚之间的相互作用效应：体外抗氧化

通过混料设计，对于海参肽、茯苓多糖、橄榄多酚三者混合的DPPH·、ABTS+、OH·清除能力等值线图和混合曲面可知，DPPH·、ABTS

海参肽、茯苓多糖和橄榄多酚之间的相互作用效应：线虫实验指标

通过混料设计，对于海参肽、茯苓多糖、橄榄多酚三者混合的寿命、氧化应激、热应激、脂褐素积累实验等值线图和混合曲面(图12)可知，海参肽与茯苓多糖占比越多，寿命越长；百草枯氧化应激与热应激中，海参肽与茯苓多糖占比越高，存活率越高；热应激三个组分占比均一时，存活率达到一定水平；海参肽占比越高，脂褐素积累量越低，衰老程度越低。

选取海参肽49.5％，茯苓多糖39.3％，橄榄多酚11.2％。此时DPPH·清除率可达80.14％；与Control组相比，寿命延长了24.39％，氧化应激存活率提高了58.33％，热应激存活率提高了57.5％，脂褐素荧光表达量降低了16％。

选取海参肽66.7％，茯苓多糖22.3％，橄榄多酚11.0％。此时DPPH·清除率可达69.31％；与Control组相比，寿命延长了20.03％，氧化应激存活率提高了50.82％，热应激存活率提高了55.81％，脂褐素荧光表达量降低了6％。

选取海参肽56.6％，茯苓多糖29.1％，橄榄多酚14.4％。此时DPPH·清除率可达69.31％；与Control组相比，寿命延长了25.17％，氧化应激存活率提高了61.42％，热应激存活率提高了33.33％，脂褐素荧光表达量降低了14％。

以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。