天冬组合在制备舒缓作用化妆品中的用途

技术领域

本发明涉及医药技术领域，尤其涉及天冬组合在制备舒缓作用化妆品中的用途。

背景技术

二冬汤，中医方剂名。出自《医学心悟》卷三。具有养阴清热，生津止渴之功效。主治上消，渴而多饮；肺热咳嗽，痰少等症。症见咳嗽痰少、口渴多饮、舌红、脉细数。临床上常用于治疗糖尿病、百日咳、肺结核、慢性支气管炎、阴虚咳嗽等。

方中麦冬、天冬、花粉养阴清肺，生津润燥；黄芩、知母、荷叶清除肺热；人参、甘草补益肺气。全方扶正祛邪并用，共奏养阴清热、生津止渴之效。

在此基础上，继续研究天冬组合物的新用途，扩展其外用的应用领域。

“湿疹”是由多种内外因素引起的一种具有明显渗出倾向的炎症性皮肤病，临床上急性期皮损以丘疱疹为主，有渗出倾向，慢性期以苔藓样变为主，皮疹呈多形性。慢性期则局限，而且有浸润、肥厚、瘙痒剧烈等现象，容易复发，病因复杂。湿疹的原因和诱发因素常因个体因素和疾病的不同阶段而异，因此不易确定，其诱因可分为外因和内因，前者在食物方面常见的有鱼，虾等，吸入方面的如花粉，尘螨，羊毛等，微生物如体表化脓性球菌和浅表真菌的感染，生活环境中的如日光，炎热，干燥，各种动物皮毛，皮屑，及各种化学物质如化妆品，肥皂，合成纤维等，内因如慢性感染病灶，慢性胆囊炎，扁桃体炎，肠寄生虫；内分泌及代谢改变方面如月经周期，妊娠等因素，血循环障碍常见的如小腿静脉曲张诱发小腿湿疹；神经精神因素与本病的发生也有密切关系，如精神紧张及过度疲劳等。

发明内容

本发明的目的是提供一种新的治疗和/或预防湿疹的药物的。

本发明的目的之一是提供天冬组合在制备舒缓作用化妆品中的用途；所述的天冬组合物由如下的原料制成：天冬、麦冬、花粉、黄芩、知母、荷叶、甘草、人参。

本发明的目的之一是提供天冬组合物在制备治疗和/或预防湿疹药物的用途；所述的天冬组合物由如下的原料制成：天冬、麦冬、花粉、黄芩、知母、荷叶、甘草、人参。

本发明的目的之一是提供天冬组合物提取物在制备舒缓作用化妆品中的用途；

所述的天冬组合物由如下的原料制成：天冬、麦冬、花粉、黄芩、知母、荷叶、甘草、人参。

本发明的目的之一是提供天冬组合物提取物在制备治疗和/或预防湿疹药物的用途；

所述的天冬组合物由如下的原料制成：天冬、麦冬、花粉、黄芩、知母、荷叶、甘草、人参。

所述的天冬组合物由如下重量份的原料制成：天冬3-9、麦冬5-15、花粉1-5、黄芩1-5、知母1-5、荷叶1-5、甘草0.5-2、人参0.5-2。

优选的，所述的天冬组合物提取物的制备方法包括以下步骤：

取全部药材，采用水提、40-80%体积百分浓度的乙醇提取、或者30-80％的多元醇提取制备而成。

优选的，所述的天冬组合物提取物的制备方法包括以下步骤：

取全部药材，混合，粉碎，过30-120目筛，以体积百分比30-80％的1,2-丁二醇溶液作为溶剂浸渍提取两次，第一次加入相当于药材总重量3-12倍的溶剂浸提40-100小时，过滤，收集浸出液，药渣再加入相当于药材总重量3-10倍的溶剂浸提30-60小时，过滤，合并浸出液，即得。

优选的，所述的天冬组合物提取物的制备方法包括以下步骤：

取全部药材，混合后加水提取2-3次，每次加水量相当于药材总重量的6-12倍，每次提取时间为1-3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.15-1.20的清膏，加入乙醇，使含醇量为40-70%，静置12-24小时，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.10-1.25的浸膏，即得。

优选的，所述的天冬组合物提取物的制备方法包括以下步骤：

取除黄芩之外的7味药材，粉碎，加入相当于7味药材总重量15-25倍的水，然后加入相当于7味药材总重量8-12%的葡萄糖、6-10%的NaCl，密封，于121℃灭菌15-30min，作为发酵基质。取相当于7味药材总重量20-30倍的复合发酵菌液接种于发酵基质中，于相对湿度60-68%，25-32℃条件下有氧培养10-30天，得七味中药发酵液；所述的复合发酵菌液中含有红曲菌、酿酒酵母、蛋白酶高产菌、纤维素酶高产菌；

另取黄芩药材，加入相当于黄芩药材重量8-12倍的水，煎煮2-3次，每次0.5-1.5小时，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩至70～80℃下相对密度为1.20～1.25的清膏，得黄芩提取液；

将七味中药发酵液和黄芩提取液合并，混匀，即得。

所述的复合发酵菌液的制备方法包括以下步骤：

将新鲜的红曲菌种接种于PDA平板上，30℃培养3-7天，用0.1%Tween 80水溶液洗下PDA平板上的红曲孢子，然后将约2×106个孢子接种于红曲种子培养基中，在30℃，180rpm摇床培养20-40小时，得发酵菌液1；其中，红曲种子培养基为：蛋白胨8-12 g/L，葡萄糖8-12 g/L，NaCl 40-60 g/L，pH 7.2~7.4；

在复合菌种子培养基中，接入6%的复合菌种，在30℃，180 rpm摇床培养18-36小时，得发酵菌液2；其中，合菌种子培养基为：蛋白胨8-12 g/L，葡萄糖8-12 g/L，NaCl 40-60g/L，pH 7.2~7.4；复合菌种组成为：酿酒酵母、蛋白酶高产菌和纤维素酶高产菌，各菌比例为1：1：1；

将发酵液1和发酵液2按比例1:1混合得发酵菌液；

各菌种保藏编号为：红曲霉菌GDMCC 3.77、酿酒酵母GDMCC 2.121、蛋白酶高产菌GDMCC 1.256、纤维素酶高产菌GDMCC 3.576。

以下是本发明天冬组合物的药材来源：

（1）天冬

中药名。为百合科植物天冬Asparagus cochinchinensis(Lour.)Merr.的干燥块根。从河北、山西、陕西、甘肃等省的南部至华东、中南、西南各省区都有分布。具有养阴润燥，清肺生津之功效。常用于肺燥干咳，顿咳痰黏，腰膝酸痛，骨蒸潮热，内热消渴，热病津伤，咽干口渴，肠燥便秘。

性味与归经：甘、苦，寒。归肺、肾经。

（2）麦冬

本品为百合科植物麦冬Ophiopogon japonicus （L.f）Ker-Gawl. 的干燥块根。麦冬在我国分布广泛，主要产于浙江、四川、福建、安徽等地。根据产地不同，又将麦冬分为了川麦冬、杭麦冬、湖北麦冬。

性味与归经：甘、微苦，微寒。归心、肺、胃经。

功能与主治：养阴生津，润肺清心。用于肺燥干咳，阴虚痨嗽，喉痹咽痛，津伤口渴，内热消渴，心烦失眠，肠燥便秘。

（3）花粉（天花粉）

本品为葫芦科植物栝楼Trichosanthes kirilowii Maxim.或双边栝楼Trichosanthes rosthornii Harms的干燥根。

性味与归经甘、微苦，微寒。归肺、胃经。

功能与主治：清热泻火，生津止渴，消肿排脓。用于热病烦渴，肺热燥咳，内热消渴，疮疡肿毒。

（4）黄芩

本品为唇形科植物黄芩Scutellaria baicalensis Georgi的干燥根。

性味与归经：苦，寒。归肺、胆、脾、大肠、小肠经。

功能与主治：清热燥湿，泻火解毒，止血，安胎。用于湿温、暑湿，胸闷呕恶，湿热痞满，泻痢，黄疸，肺热咳嗽，高热烦渴，血热吐衄，痈肿疮毒，胎动不安。

（5）知母

本品为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bge. 的干燥根茎。

性味与归经：苦、甘，寒。归肺、胃、肾经。

功能与主治：清热泻火，滋阴润燥。用于外感热病，高热烦渴，肺热燥咳，骨蒸潮热，内热消渴，肠燥便秘。

（6）甘草

甘草，中药名。为豆科植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.、胀果甘草Glycyrrhiza inflata Bat.或光果甘草Glycyrrhiza glabra L.的干燥根和根茎。分布于东北、华北、陕西、甘肃、青海、新疆、山东等地。具有补脾益气，清热解毒，祛痰止咳，缓急止痛，调和诸药之功效。常用于脾胃虚弱，倦怠乏力，心悸气短，咳嗽痰多，脘腹、四肢挛急疼痛，痈肿疮毒，缓解药物毒性、烈性。

（7）人参

本品为五加科植物人参Panax ginseng C. A. Mey. 的干燥根和根茎。多于秋季采挖，洗净经晒干或烘干。栽培的俗 称“园参”；播种在山林野生状态下自然生长的称“林下山参”，习称“籽海”。

性味与归经：甘、微苦，微温。归脾、肺、心、肾经。

功能与主治：大补元气，复脉固脱，补脾益肺，生津养血， 安神益智。用于体虚欲脱，肢冷脉微，脾虚食少，肺虚喘咳，津伤口渴，内热消渴，气血亏虚，久病虚羸，惊悸失眠，阳痿宫冷。

（8）荷叶

本品为睡莲科植物莲Nelumbo nucifera Gaertn.的干燥叶。夏、秋二季采收，晒至七八成干时，除去叶柄，折成半圆形或折扇形，干燥。

性味与归经：苦，平。归肝、脾、胃经。

功能与主治：清暑化湿，升发清阳，凉血止血。用于暑热烦渴，暑湿泄泻，脾虚泄泻，血热吐衄，便血崩漏。荷叶炭收涩化瘀止血。用于出血症和产后血晕。

本发明方中，天冬、麦冬、花粉养阴润燥，共为君药；黄芩、荷叶清热解毒散结，消肿排脓，治痈疮疔毒，知母清热泻火，共为臣药，其中黄芩尚有清泻下焦湿热之效；人参、甘草补益肺气，肺主皮毛，以增强皮肤防御功能，另外，甘草调和诸药，且有清热解毒之功，与人参共为佐使之药。诸药合用，共奏清热解毒散结，祛湿润燥养血，祛风止痒之效。

本发明的天冬组合物可以与相应辅料配合制备成霜剂、膏剂、乳剂、露剂等外用制剂或者化妆品。

如实验例7所示，本发明天冬组合物具有良好的治疗湿疹作用。

附图说明

图1是天冬组合物对小鼠湿疹模型的影响结果对比图。

具体实施方式

下面通过实施例进一步说明本发明。应该理解的是，本发明的实施例是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进都属于本发明要求保护的范围。除非另有说明，本发明中的乙醇量的百分数是体积百分数。

实施例1：

天冬组合物组成如下：

天冬3 kg、麦冬5 kg、花粉1 kg、黄芩1 kg、知母1 kg、荷叶1 kg、甘草0.5 kg、人参0.5 kg。

天冬组合物提取物的制备方法为：

取全部药材，混合后用40%乙醇回流提取2次，每次乙醇用量为药材总量的4倍，提取时间为1小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.15的清膏，即得。

天冬组合物提取物配合辅料制备成滋润霜，其制备方法为：

取上述天冬组合物提取物和适量甘油硬脂酸酯、柠檬酸、EDTA四钠加入适量去离子水中加热至80℃，搅拌溶解至均匀透明，搅拌均与，保温80℃，得水相溶液待用。将适量C10-18脂酸甘油三酯类、牛油果树果脂、鲸蜡硬脂醇、二辛基谜、生育酚乙酸酯一起加热至80℃，搅拌溶解至均匀透明，搅拌均匀，保温80℃，得油相溶液待用。将油相溶液加入水相溶液中，高速均质5min，消泡后搅拌降温，即得。

实施例2：

天冬组合物组成如下：

天冬9 kg、麦冬15 kg、花粉5 kg、黄芩5 kg、知母5 kg、荷叶5 kg、甘草2 kg、人参2kg。

天冬组合物提取物的制备方法为：

取全部药材，混合后用80%乙醇回流提取3次，每次乙醇用量为药材总量的10倍，提取时间为4小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.20的清膏，即得。

实施例3：

天冬组合物组成如下：

天冬6 kg、麦冬10 kg、花粉2 kg、黄芩45 kg、知母3 kg、荷叶2 kg、甘草1 kg、人参2 kg。

天冬组合物提取物的制备方法为：

取全部药材，混合后用60%乙醇回流提取3次，每次乙醇用量为药材总量的6倍，提取时间为3小时，合并提取液，过滤，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.17的清膏，即得。

天冬组合物提取物配合辅料制备成洗发水，其制备方法为：

将适量丙二醇加入适量水中混合制成水溶液，然后加入天冬组合物提取物，混合均匀，得到溶液A；将适量乙二胺四乙酸二钠用适量水溶解，然后加入适量脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠，并于80℃水浴下加热溶解，随后加入6混合均匀，再加入适量椰油酰胺丙基甜菜碱和乳化硅油，混合均匀，得到溶液B；将溶液A和溶液B混合均匀，再加入适量珠光浆、阳离子瓜尔胶、柠檬酸、凯松、香精、适量水混合均匀，即得。

实施例4：

天冬组合物组成如下：

天冬4 kg、麦冬6 kg、花粉2 kg、黄芩2 kg、知母2 kg、荷叶2 kg、甘草0.6 kg、人参0.5kg。

天冬组合物提取物的制备方法为：

取全部药材，混合后加水提取2次，每次加水量相当于药材总重量的6倍，每次提取时间为1小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.15的清膏，加入乙醇，使含醇量为40%，静置12小时，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.10的浸膏，即得。

天冬组合物提取物配合辅料制备成沐浴露，其制备方法为：

将适量月桂酰基氨基酸、聚六亚甲基胍、壳聚糖加入到适量去离子水中，加热40-60℃，搅拌均匀，然后边搅拌边添加上述天冬组合物提取物和适量霍霍巴油、丙二醇、牛奶蛋白，继续搅拌30-60min。最后加入香精，搅拌均匀。静置至常温，陈化24h，消泡，即得。

实施例5：

天冬组合物组成如下：

天冬8 kg、麦冬13 kg、花粉4 kg、黄芩4 kg、知母4 kg、荷叶4 kg、甘草1.7 kg、人参1.7 kg。

天冬组合物提取物的制备方法为：

取全部药材，混合后加水提取3次，每次加水量相当于药材总重量的12倍，每次提取时间为3小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.20的清膏，加入乙醇，使含醇量为70%，静置24小时，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.25的浸膏，即得。

实施例6：

天冬组合物组成如下：

天冬5 kg、麦冬11 kg、花粉4 kg、黄芩3 kg、知母3 kg、荷叶2 kg、甘草0.9 kg、人参1.2 kg。

天冬组合物提取物的制备方法为：

所述的天冬组合物提取物的制备方法包括以下步骤：

取全部药材，混合后加水提取2次，每次加水量相当于药材总重量的8倍，每次提取时间为2小时，合并提取液，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.16的清膏，加入乙醇，使含醇量为50%，静置18小时，滤过，滤液浓缩至80℃时相对密度为1.20的浸膏，即得。

实施例7

天冬组合物组成如下：

天冬500g，麦冬800g，天花粉300g，黄芩400g，知母300g，荷叶各300g，甘草150g，人参100g；

天冬组合物提取物的制备方法为：

取除黄芩之外的7味药材，粉碎，加入相当于7味药材总重量15倍的水，然后加入相当于7味药材总重量8%的葡萄糖、6%的NaCl，密封，于121℃灭菌15min，作为发酵基质。取相当于7味药材总重量20倍的复合发酵菌液接种于发酵基质中，于相对湿度60%，25℃条件下有氧培养10天，得七味中药发酵液；所述的复合发酵菌液中含有红曲菌、酿酒酵母、蛋白酶高产菌、纤维素酶高产菌；

另取黄芩药材，加入相当于黄芩药材重量8倍的水，煎煮2次，每次0.5小时，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩至70℃下相对密度为1.20的清膏，得黄芩提取液；

将七味中药发酵液和黄芩提取液合并，混匀，即得。

复合发酵菌液的制备方法为：

将新鲜的红曲菌种接种于PDA平板上，30℃培养3天，用0.1%Tween 80水溶液洗下PDA平板上的红曲孢子，然后将约2×106个孢子接种于红曲种子培养基中，在30℃，180 rpm摇床培养20小时，得发酵菌液1；其中，红曲种子培养基为：蛋白胨8 g/L，葡萄糖8 g/L，NaCl40g/L，pH 7.2~7.4；

在复合菌种子培养基中，接入6%的复合菌种，在30℃，180 rpm摇床培养18小时，得发酵菌液2；其中，合菌种子培养基为：蛋白胨8g/L，葡萄糖8g/L，NaCl 40 g/L，pH 7.2~7.4；复合菌种组成为：酿酒酵母、蛋白酶高产菌和纤维素酶高产菌，各菌比例为1：1：1；

将发酵液1和发酵液2按比例1:1混合得发酵菌液；

各菌种保藏编号为：红曲霉菌GDMCC 3.77、酿酒酵母GDMCC 2.121、蛋白酶高产菌GDMCC 1.256、纤维素酶高产菌GDMCC 3.576。

实施例8

天冬组合物组成如下：

天冬500g，麦冬800g，天花粉300g，黄芩400g，知母300g，荷叶各300g，甘草150g，人参100g；

天冬组合物提取物的制备方法为：

取除黄芩之外的7味药材，粉碎，加入相当于7味药材总重量20倍的水，然后加入相当于7味药材总重量10%的葡萄糖、8%的NaCl，密封，于121℃灭菌20min，作为发酵基质。取相当于7味药材总重量25倍的复合发酵菌液接种于发酵基质中，于相对湿度65%，28℃条件下有氧培养20天，得七味中药发酵液；所述的复合发酵菌液中含有红曲菌、酿酒酵母、蛋白酶高产菌、纤维素酶高产菌；

另取黄芩药材，加入相当于黄芩药材重量10倍的水，煎煮2次，每次1小时，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩至75℃下相对密度为1.22的清膏，得黄芩提取液；

将七味中药发酵液和黄芩提取液合并，混匀，即得。

复合发酵菌液的制备方法为：

将新鲜的红曲菌种接种于PDA平板上，30℃培养5天，用0.1%Tween 80水溶液洗下PDA平板上的红曲孢子，然后将约2×106个孢子接种于红曲种子培养基中，在30℃，180 rpm摇床培养20-40小时，得发酵菌液1；其中，红曲种子培养基为：蛋白胨10 g/L，葡萄糖10 g/L，NaCl 50 g/L，pH 7.2~7.4；

在复合菌种子培养基中，接入6%的复合菌种，在30℃，180 rpm摇床培养24小时，得发酵菌液2；其中，合菌种子培养基为：蛋白胨10 g/L，葡萄糖10 g/L，NaCl 50 g/L，pH 7.2~7.4；复合菌种组成为：酿酒酵母、蛋白酶高产菌和纤维素酶高产菌，各菌比例为1：1：1；

将发酵液1和发酵液2按比例1:1混合得发酵菌液；

各菌种保藏编号为：红曲霉菌GDMCC 3.77、酿酒酵母GDMCC 2.121、蛋白酶高产菌GDMCC 1.256、纤维素酶高产菌GDMCC 3.576。

实施例9

天冬组合物组成如下：

天冬600g，麦冬700g，天花粉400g，黄芩400g，知母200g，荷叶各200g，甘草100g，人参200g；

天冬组合物提取物的制备方法为：

取除黄芩之外的7味药材，粉碎，加入相当于7味药材总重量25倍的水，然后加入相当于7味药材总重量12%的葡萄糖、10%的NaCl，密封，于121℃灭菌30min，作为发酵基质。取相当于7味药材总重量30倍的复合发酵菌液接种于发酵基质中，于相对湿度68%，32℃条件下有氧培养30天，得七味中药发酵液；所述的复合发酵菌液中含有红曲菌、酿酒酵母、蛋白酶高产菌、纤维素酶高产菌；

另取黄芩药材，加入相当于黄芩药材重量12倍的水，煎煮3次，每次1.5小时，过滤，合并滤液，滤液减压浓缩至70～80℃下相对密度为1.25的清膏，得黄芩提取液；

将七味中药发酵液和黄芩提取液合并，混匀，即得。

复合发酵菌液的制备方法为：

将新鲜的红曲菌种接种于PDA平板上，30℃培养7天，用0.1%Tween 80水溶液洗下PDA平板上的红曲孢子，然后将约2×106个孢子接种于红曲种子培养基中，在30℃，180 rpm摇床培养40小时，得发酵菌液1；其中，红曲种子培养基为：蛋白胨12 g/L，葡萄糖12 g/L，NaCl 60 g/L，pH 7.2~7.4；

在复合菌种子培养基中，接入6%的复合菌种，在30℃，180 rpm摇床培养36小时，得发酵菌液2；其中，合菌种子培养基为：蛋白胨12 g/L，葡萄糖12 g/L，NaCl 60 g/L，pH 7.2~7.4；复合菌种组成为：酿酒酵母、蛋白酶高产菌和纤维素酶高产菌，各菌比例为1：1：1；

将发酵液1和发酵液2按比例1:1混合得发酵菌液；

各菌种保藏编号为：红曲霉菌GDMCC 3.77、酿酒酵母GDMCC 2.121、蛋白酶高产菌GDMCC 1.256、纤维素酶高产菌GDMCC 3.576。

实施例11

天冬组合物组成如下：

天冬6 kg、麦冬8 kg、花粉3 kg、黄芩2 kg、知母5 kg、荷叶3 kg、甘草1 kg、人参1.6 kg。

天冬组合物提取物的制备方法为：

取全部药材，混合，粉碎，过30目筛，以体积百分比30％的1,2-丁二醇溶液作为溶剂浸渍提取两次，第一次加入相当于药材总重量3倍的溶剂浸提40小时，过滤，收集浸出液，药渣再加入相当于药材总重量3倍的溶剂浸提30小时，过滤，合并浸出液，即得。

实施例12

天冬组合物组成如下：

天冬7 kg、麦冬10 kg、花粉2 kg、黄芩2 kg、知母3 kg、荷叶4 kg、甘草2 kg、人参0.6 kg。

天冬组合物提取物的制备方法为：

取全部药材，混合，粉碎，过30目筛，以体积百分比80％的1,2-丁二醇溶液作为溶剂浸渍提取两次，第一次加入相当于药材总重量12倍的溶剂浸提100小时，过滤，收集浸出液，药渣再加入相当于药材总重量10倍的溶剂浸提60小时，过滤，合并浸出液，即得。

实施例12

天冬组合物组成如下：

天冬8 kg、麦冬6 kg、花粉4 kg、黄芩4 kg、知母4 kg、荷叶2 kg、甘草1 kg、人参1.3 kg。

天冬组合物提取物的制备方法为：

取全部药材，混合，粉碎，过80目筛，以体积百分比50％的1,2-丁二醇溶液作为溶剂浸渍提取两次，第一次加入相当于药材总重量8倍的溶剂浸提70小时，过滤，收集浸出液，药渣再加入相当于药材总重量6倍的溶剂浸提40小时，过滤，合并浸出液，即得。

实施例13：药效实验

取SPF级KM小鼠50只，适应性喂养3天后按照体重随机分为：空白组、湿疹模型组、天冬组合物低剂量组（实施例3提取物，2.5 mg/ml）、天冬组合物中剂量组（实施例3提取物，5 mg/ml）、天冬组合物高剂量组（实施例3提取物，10 mg/ml），共5组，每组10只。

实验前一天取各组小鼠腹部剪毛，面积为2cm×2cm，然后在对应脱毛处涂抹适量脱毛膏，数分钟后用温水将残余脱毛膏擦洗干净，小鼠脱毛后检查脱毛处皮肤是否出现损伤改变或药物残留，脱毛后第1天（d1）采用移液器均匀涂抹5%溶液DNCB丙酮橄榄油溶液0.1ml于除空白组外的各组小鼠腹部致敏（注意吸头勿与脱毛处皮肤接触致划伤），第7天除空白组外各小鼠用 1%DNCB 丙酮橄榄油溶液 30μl 右耳内外耳部均匀涂抹激发，左侧耳部涂抹 30μl 丙酮橄榄油溶液基质，后每2天重复上述激发过程，共激发3次。于致敏当天（d1）1h 后开始给予相应药物采用微量移液器外涂后湿敷于小鼠右耳正反两面及小鼠腹部致敏皮肤，空白组不予处理，模型组给予纯水 1ml，天冬组合物剂量组（实施例3提取物）分别给予相应浓度，每日两次，连续11天。

造模后第12天（末次激发后24h），颈椎脱臼处死小鼠，立即沿双耳耳基线剪下双耳，用 8mm 打孔器取得两耳耳片组织（注意耳片取得部位保持一致），分析天平称重后将小鼠右耳组织用配置的组织标本固定液固定。观察小鼠右耳皮损表现，记录小鼠双耳重量，计算出相应耳廓肿胀度（耳廓肿胀度=右耳称重-左耳称重）。进一步做病理切片，HE染色，计算真皮浸润炎性细胞数。

末次激发后24h可见湿疹模型组小鼠右耳皮肤出现明显红斑、水肿，少数皮肤可见糜烂、渗出结痂，出现急性湿疹样改变。如下表1所示，与空白组相比，湿疹模型组肿胀度明显（P<0.05）；天冬组合物剂量组（实施例3提取物）小鼠耳廓肿胀值结果均小于湿疹模型组（P<0.05），表明天冬组合物剂量组（实施例3提取物）具有减轻DNCB所致小鼠耳部肿胀的作用。这表明天冬组合物对皮肤具有较好的舒缓作用，对湿疹具有明显治疗作用。

表1 实施例3提取物对湿疹小鼠耳廓组织肿胀值影响（x±S）

与空白组相比，*P<0.05；与湿疹模型组相比，#P<0.05。

如图1所示，与空白组相比，湿疹模型组炎性细胞浸润数明显增多（P<0.05）。而天冬组合物各剂量组小鼠耳廓肿胀值结果均小于湿疹模型组，耳部皮损在红肿程度及损害方面均有减少（P<0.05），其中天冬组合物高浓度剂量组效果最好。