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检测SARS-CoV-2的寡核苷酸和试剂盒

文献发布时间：2023-06-19 11:34:14

技术领域

本发明属于生命科学和生物技术领域，特别涉及一种用于检测SARS-CoV-2及其B.1.1.7突变株的引物、探针、方法和试剂盒，采用荧光RT-PCR技术，用于检测临床样本中的SARS-CoV-2及其B.1.1.7突变株。

背景技术

冠状病毒在系统分类上属套式病毒目(Nidovirales)冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。冠状病毒属的冠状病毒是具囊膜(envelope)、基因组为线性单股正链的RNA病毒，是自然界广泛存在的一大类病毒。

冠状病毒主要引起呼吸道和胃肠道感染，并且在遗传学上被分为四个主要的病毒属：甲型冠状病毒(Alphacoronavirus)、乙型冠状病毒(Betacoronavirus)、丙型冠状病毒(Gammacoronavirus)和丁型冠状病毒(Deltacoronavirus)。前两个属主要感染哺乳动物，而后两个属主要感染鸟类。人们先前已鉴定六种人类冠状病毒，包括HCoV-NL63和HCoV-229E，它们属于甲型冠状病毒；HCoV-OC43、HCoV-HKU1、严重急性呼吸综合征(SARS)冠状病毒(SARS-CoV)和中东呼吸综合征(MERS)冠状病毒(MERS-CoV)，属于乙型冠状病毒。直到2003年SARS大流行和2012年MERS疫情发生后，冠状病毒才引起全球关注。SARS-CoV和MERS-CoV被认为是高致病性的，而且SARS-CoV和MERS-CoV可能由蝙蝠传播给果子狸或单峰驼，最后传播给人类。

一种称为SARS-CoV-2的新型冠状病毒导致包括中国在内的全世界绝大多数国家和地区发生病毒性肺炎。SARS-CoV-2可导致2019年冠状病毒病(COVID-19)。通过对现有病例的观察和研究，SARS-CoV-2感染人体后的潜伏期中位数为3天，最长可达24天(Wei-jieGuan et al.Clinical Characteristics of Coronavirus Disease 2019in China.NEJM,28February 2020,doi:10.1056/NEJMoa2002032)；此外，有人估算SARS-CoV-2的基本再生数(R0)为3.6～4.0(95％置信区间)(Jonathan M Read et al.Novel coronavirus 2019-nCoV:early estimation of epidemiological parameters and epidemicpredictions.medRxiv,28January 2020,doi:10.1101/2020.01.23.20018549)。

2020年12月，英国科学家发现了一种被称为B.1.1.7的SARS-CoV-2变种，引起世界一片哗然。《科学》杂志刊文称，变种病毒传播能力要比原始毒株高70％左右，而伦敦最近SARS-CoV-2感染病例超过60％都来自这种变种病毒。《科学》杂志称，病毒复制时会产生突变，研究人员观察B.1.1.7变种病毒的基因组时，被它已经出现17个位点的大量突变震惊。据英国广播公司(BBC)报道，B.1.1.7变种病毒最早在9月被发现，到了11月，伦敦大约有四分之一的SARS-CoV-2感染病例与该变种病毒有关，12月中旬，这一数字已接近三分之二。

鉴于SARS-CoV-2及B.1.1.7突变株病例的出现和迅速增加给全球公共卫生、研究界和医学界带来了复杂的挑战。疫情提醒人们正在出现和重新出现传染性病原体的挑战。对SARS-CoV-2及其突变株进行持续监测、及时诊断和开展强有力的研究以了解这种新型病原体及其变种病毒的基本生物学特性有助人们制定有效的对策。

发明内容

本发明提供一种用于检测SARS-CoV-2及其B.1.1.7突变株的方法、寡核苷酸和试剂盒，选择了B.1.1.7突变株位点N501Y和缺失突变位点HV69-70del，设计引物探针，采用荧光RT-PCR方法快速鉴别B.1.1.7突变株；在SARS-CoV-2RdRp基因保守性区域设计引物探针，同时引入针对RNaseP(Human RNaseP protein)基因的扩增引物和探针，可以有效地避免检测临床样本时遇到的假阴性。

在本发明中，位于每条探针5’端的x1、x2、x3和x4为荧光报告基团，位于每条探针5’端的y1、y2、y3和y4为发出荧光或不发出荧光的淬灭基团。

本发明中的同一条探针的荧光报告基因和淬灭基团以诸如“FAM-TARMA/BHQ1”或“VIC/HEX/JOE-TAMRA/BHQ1”之类的形式给出，“-”左边的表示荧光报告基团，“-”右边的表示淬灭基团。FAM-TARMA/BHQ1表示一条探针的荧光报告基因为FAM，淬灭基团可选自TARMA或BHQ1。VIC/HEX/JOE-TAMRA/BHQ1表示，一条探针的荧光报告基因可选自VIC、HEX或JOE，淬灭基团可选自TAMRA或BHQ1。

本发明提供用于检测SARS-CoV-2的寡核苷酸，所述寡核苷酸至少包括(1)～(3)中的一种：(1)用于检测突变位点N501Y的第一引物对和第一探针；(2)用于检测缺失位点HV69-70del的第二引物对和第二探针；(3)用于检测SARS-CoV-2RdRp基因保守性区域的第三引物对和第三探针。

本发明还提供用于检测B.1.1.7突变株的寡核苷酸，其特征在于，所述寡核苷酸包括：(1)用于检测突变位点N501Y的第一引物对和第一探针；(2)用于检测缺失位点HV69-70del的第二引物对和第二探针；(3)用于检测SARS-CoV-2RdRp基因保守性区域的第三引物对和第三探针。

进一步地，所述寡核苷酸包括(4)用于检测内参基因的第四引物对和第四探针。

进一步地，所述第一引物对和第一探针的碱基序列分别为SEQ ID NO:1～3。

进一步地，所述第二引物对和第二探针的碱基序列分别为SEQ ID NO:4～6。

进一步地，所述第三引物对和第三探针的碱基序列分别为SEQ ID NO:7～9。

进一步地，所述第四引物对和第四探针的碱基序列分别为SEQ ID NO:10～12。

进一步地，每条探针的荧光报告基因和淬灭基团选自FAM-TARMA/BHQ1、VIC/HEX/JOE-TAMRA/BHQ1、ROX/Texas Red-BHQ2和Cy5/LC Red640-BHQ2/BHQ3中的任何一种。

本发明还提供一种检测B.1.1.7突变株的方法，所述方法包括：(1)提取样本中的核酸；(2)采用荧光RT-PCR方法确定样本中是否存在SARS-CoV-2，其中，所述一组引物和探针的碱基序列为SEQ ID NO:1～12。

本发明还提供一种用于检测SARS-CoV-2的试剂盒，所述试剂盒包括荧光RT-PCR反应液，所述荧光RT-PCR反应液包括寡核苷酸，所述寡核苷酸至少包括(1)～(3)中的一种：(1)用于检测突变位点N501Y的第一引物对和第一探针；(2)用于检测缺失位点HV69-70del的第二引物对和第二探针；(3)用于检测SARS-CoV-2RdRp基因保守性区域的第三引物对和第三探针。

本发明还提供一种用于检测B.1.1.7突变株的试剂盒，所述试剂盒包括荧光RT-PCR反应液，所述荧光RT-PCR反应液包括寡核苷酸，所述寡核苷酸包括：(1)用于检测突变位点N501Y的第一引物对和第一探针；(2)用于检测缺失位点HV69-70del的第二引物对和第二探针；(3)用于检测SARS-CoV-2RdRp基因保守性区域的第三引物对和第三探针。

进一步地，所述寡核苷酸还包括(4)用于检测内参基因的第四引物对和第四探针。

进一步地，所述第一引物对和第一探针的碱基序列分别为SEQ ID NO:1～3。

进一步地，所述第二引物对和第二探针的碱基序列分别为SEQ ID NO:4～6。

进一步地，所述第三引物对和第三探针的碱基序列分别为SEQ ID NO:7～9。

进一步地，所述第四引物对和第四探针的碱基序列分别为SEQ ID NO:10～12。

进一步地，每条探针的荧光报告基因和淬灭基团选自FAM-TARMA/BHQ1、VIC/HEX/JOE-TAMRA/BHQ1、ROX/Texas Red-BHQ2和Cy5/LC Red640-BHQ2/BHQ3中的任何一种。

进一步地，每条引物和探针的浓度范围为75～300nM。

进一步地，所述荧光RT-PCR反应液还包括10～50mM Tris(pH 8.0～8.8)、10～50mM KCl、10～20mM硫酸铵、0.01％～0.1％Tween 20、0.2～2mg/mL BSA、0.1～0.3mMdATP、0.1～0.3mM dTTP、0.1～0.3mM dCTP、0.1～0.3mM dGTP、0.1～0.3mM dUTP和3～6mM氯化镁。

所述试剂盒还包括酶混合液，所述酶混合液包括1.5～3U Taq DNA聚合酶，0.5～3U Taq抗体，0.1～2U TS-UNG酶，2～10U逆转录酶和2～10U RNA酶抑制剂。

进一步地，所述试剂盒还包括病毒保存液，所述病毒保存液包括10～500mM Tris-EDTA，1％～10％TritonX-100,0.1％～2％SDS,10～100mM乙酸钠，0.1～1％无水乙醇，10～500mM尿素。

进一步地，所述试剂盒还包括阳性质控和阴性质控，所述阳性质控为SARS-CoV-2/B.1.1.7假病毒，所述阴性质控为RNaseP假病毒。

进一步地，所述试剂盒操作流程为：(1)荧光RT-PCR试剂配制：将荧光RT-PCR反应液和酶混合液混匀，分别加入5μL的病毒保存液和阴性质控、阳性质控；(2)荧光RT-PCR检测：进行荧光RT-PCR扩增，扩增结束后确定样本中是否存在B.1.1.7突变。

有益效果：(1)本发明选择了B.1.1.7突变株位点N501Y、HV69-70del及SARS-CoV-2RdRp基因保守性区域设计引物探针，同时引入人类基因组管家基因RNaseP作为内参基因(IC)，从而可以有效地避免临床样本采样失误等一系列因素导致的结果异常，更重要地，本发明可以同时鉴别SARS-CoV-2及其B.1.1.7突变株；(5)本发明可以从复杂样本检测出SARS-CoV-2及其B.1.1.7突变株，具有灵敏度高、特异性好、检测结果快速客观等优点，为诊断B.1.1.7突变株感染提供可靠的结果。

附图说明

图1：10例SARS-CoV-2阴性拭子样本用病毒保存液在常温下裂解后的检测结果。

图2：10例SARS-CoV-2阴性拭子样本磁珠法提取核酸后的检测结果。

图3：10例SARS-CoV-2阴性拭子样本离心柱法提取核酸后的检测结果。

图4：针对B.1.1.7假病毒的不同处理方法对比。

图5：针对SARS-CoV-2假病毒的不同提取方法对比。

图6：20例SARS-CoV-2阳性拭子样本的检测结果。

图7：20例SARS-CoV-2阴性拭子样本的检测结果。

图8：2例人工样本的检测结果。

图9：阳性参考品P1-P4的检测结果。

图10：阳性参考品P5-P8的检测结果，其中(a)阳性参考品P5的检测结果；(b)：阳性参考品P6的检测结果；(c)：阳性参考品P7的检测结果；(d)：阳性参考品P8的检测结果。

图11：阴性参考品N1-N10的检测结果。

图12：对1000copies/mL、500copies/mL、250copies/mL B.1.1.7假病毒进行20次重复检测，其中(a)：对1000copies/mL B.1.1.7假病毒进行20次重复检测(针对N501Y)；(b)：对1000copies/mL B.1.1.7假病毒进行20次重复检测(针对HV69-70del)；(c)：对1000copies/mL B.1.1.7假病毒进行20次重复检测(针对RdRp)；(d)：对500copies/mLB.1.1.7假病毒进行20次重复检测(针对N501Y)；(e)：对500copies/mL B.1.1.7假病毒进行20次重复检测(针对HV69-70del)；(f)：对500copies/mL B.1.1.7假病毒进行20次重复检测(针对RdRp)；(g)：对250copies/mL B.1.1.7假病毒进行20次重复检测(针对N501Y)；(h)：对250copies/mL B.1.1.7假病毒进行20次重复检测(针对HV69-70del)；(i)：对250copies/mLB.1.1.7假病毒进行20次重复检测(针对RdRp)。

图13：对1000copies/mL、500copies/mL、250copies/mL SARS-CoV-2假病毒进行20次重复检测，其中(a)：对1000copies/mL SARS-CoV-2假病毒进行20次重复检测(针对RdRp)；(b)：对500copies/mL SARS-CoV-2假病毒进行20次重复检测(针对RdRp)；(c)：对250copies/mL SARS-CoV-2假病毒进行20次重复检测(针对RdRp)。

图14：阳性参考品J1、J2检测结果，其中(a)：阳性参考品J1的检测结果；(b)：阳性参考品J2的检测结果。

具体实施方式

在检测SARS-CoV-2及其B.1.1.7突变株的方法中，本发明在SARS-CoV-2RdRP基因、B.1.1.7突变株位点N501Y、HV69-70del保守性区域设计引物探针，同时引入人类基因组管家基因RNaseP作为内参基因(IC)，检测临床样本中是否存在SARS-CoV-2。

与此同时，可根据针对RdRp、HV69-70del和N501Y的扩增是否同时起线来确定临床样本是否存在B.1.1.7突变株。当同时起线时，就可确定临床样本存在B.1.1.7突变株。当使用IC时，不论SARS-CoV-2及其B.1.1.7突变株是否存在，针对IC的扩增均应起线，不然表明样本采集或核酸提取存在异常，应重新采集样本或提取核酸。扩增时使用的引物和探针如表1所示。

表1.引物和探针

表1共含有4条TaqMan探针，每条探针的5’端(x1、x2、x3和x4)为荧光报告基团，3’端(y1、y2、y3和y4)为发出荧光或不发出荧光的淬灭基团。这4条探针的荧光报告基团可选自FAM、TET、VIC、JOE、HEX、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、TAMRA、ROX、Texas Red、LC RED640和LCRED705等；淬灭基团可选自BHQ0、BHQ1、BHQ2、BHQ3、Dabcyl、Eclipse和NFQ等，淬灭基团的选择原则在于淬灭基团的荧光吸收光谱与荧光报告基团的发射光谱存在重叠。表1中的这四条探针的荧光报告基团和淬灭基团优选组合方式为FAM-TARMA/BHQ1、VIC/HEX/JOE-TAMRA/BHQ1、ROX/Texas Red-BHQ2和Cy5/LC Red640-BHQ2/BHQ3中的任何一种。优选地，每条探针的荧光报告基团各不相同，这样就可在单管中同时进行四通道检测。

优选的靶基因荧光报告基团为FAM、ROX和Cy5，这是因为这三种荧光报告基团在荧光RT-PCR检测中具有本底荧光低和荧光检测信号高的优点；选择内参基因荧光报告基团为VIC。

在进行荧光RT-PCR之前，通常情况下需要提取临床样本中的核酸(RNA)，提取核酸的方法有很多种，比如碱裂解法、磁珠法和柱提法。本发明优选一种可在常温快速裂解样本中病毒的病毒保存液，可以直接取样本进行核酸检测。为了便于说明，本发明采用磁珠法提取和柱提法对临床样本中的核酸进行提取效果的对比。所述的快速核酸提取试剂包括10～500mM Tris-EDTA，1％～10％TritonX-100,0.1％～2％SDS,10～100mM乙酸钠，0.1～1％无水乙醇，10～500mM尿素。

不过注意的是，磁珠法和柱提法的核酸提取方法均可用于本发明的临床样本核酸提取。

为了便于说明，在以下实施例中，以用于检测SARS-CoV-2RdRp基因的探针的荧光报告基团和淬灭基团为FAM-BHQ1、用于检测B.1.1.7突变株位点HV69-70del基因的探针的荧光报告基团和淬灭基团为ROX-BHQ2、用于B.1.1.7株位点N501Y基因的探针的荧光报告基团和淬灭基团为CY5-BHQ3、用于人基因组管家基因RNaseP的探针的荧光报告基团和淬灭基团为VIC-BHQ1为例进行说明。在本发明的实施例中使用的阳性质控包括含有SARS-CoV-2RNA片段的假病毒(下称SARS-CoV-2假病毒)和含有B.1.1.7突变株RNA片段的假病毒(下称B.1.1.7假病毒)；阴性质控为含RNaseP的假病毒(下称RNaseP假病毒)。

以下实施例进一步说明本发明。这些实施例不是用来限制本发明范围，而是提供对本发明的进一步理解。

实施例1：利用荧光RT-PCR方法检测SARS-CoV-2及其B.1.1.7突变株

本实施例中采用试剂盒对SARS-CoV-2及其B.1.1.7突变株进行荧光RT-PCR检测，试剂盒包括荧光RT-PCR反应液、酶混合液、阳性质控、阴性质控，试剂盒还可包括在常温下快速裂解样本中病毒的病毒保存液。荧光RT-PCR反应液配制体系见表2。酶混合液配制体系见表3。阳性质控包括SARS-CoV-2假病毒和B.1.1.7假病毒，阴性质控为RNaseP假病毒。病毒保存液配制见表4。

表2.荧光RT-PCR反应液配制体系表(1人份)

表3.酶混合液配制体系(1人份)

表4.病毒保存液配制体系

检测临床样本中SARS-CoV-2及其B.1.1.7突变株时，需将荧光RT-PCR反应液和酶混合液混匀，以及计算所需的样本数n份[n＝临床样本数+1管阳性对照+1管阴性对照]。将20μL荧光RT-PCR反应液加入到不同的反应管中，然后分别往不同的反应管中加入5μL含样本的病毒保存液、5μL阴性对照和5μL阳性对照。

将各个反应管按一定顺序放入荧光PCR仪(ABI 7500)上，按以下程序进行荧光RT-PCR扩增，扩增程序如表5所示：

表5.荧光RT-PCR扩增程序

荧光RT-PCR扩增结束后，根据FAM通道、VIC通道、ROX通道、Cy5通道的Ct值检测SARS-CoV-2是否存在，若存在，同时可确定这种病毒是否为B.1.1.7突变株，其检测结果判断如表6所示。

表6.检测结果Cutoff值及结果判读

1.RNaseP内参基因VIC通道为阴性，说明样本中含有PCR反应抑制物、提取失败或实验过程中漏加样本，建议重新采样、提取及测试。极少数样本可能因采样问题出现SARS-CoV-2核酸检测结果为阳性，而内参无扩增信号或Ct值＞40，这种情况阳性结果仍然可信，必要时重新采样复测确认。

2.临床样本常见检测结果如表7所示，其他异常结果需结合临床进行结果解释。

表7.临床样本常见结果解释

实施例2：病毒保存液检测结果同磁珠法、离心柱法核酸提取检测结果对比

为方便说明，本实施例中以正常人口咽拭子作为临床样本，通过对实施例1中的病毒保存液、磁珠法核酸提取试剂及过柱法提取试剂作为对照进行对比说明，其中磁珠法核酸提取试剂选择艾康生物技术(杭州)有限公司核酸提取或纯化试剂(浙杭械备20200539号)，过柱法核酸提取试剂为QIAGEN QIAamp Virus RNA Mini KIT。操作方法如下：取10例正常人咽拭子的的植绒拭子，置于1mL实施例1中的病毒保存液中，涡旋15秒后，放置于56℃水浴进行样本灭活30分钟。取200μL灭活的样本按照核酸提取或纯化试剂(浙杭械备20200539号)说明书方法，在艾康生物技术(杭州)有限公司制造的

表8三种不同样本处理方法的内参基因检测结果

检测结果如图1～3所示，直接检测的结果与磁珠法和过柱法的检测结果相一致。

更进一步验证，本实施例中以SARS-CoV-2假病毒及B.1.1.7假病毒进行进一步验证，取100μL SARS-CoV-2假病毒及B.1.1.7假病毒(以上两者浓度约为10

表9SARS-CoV-2假病毒及B.1.1.7假病毒验证

针对B.1.1.7假病毒的三种处理方法的扩增结果如图4所示，针对SARS-CoV-2假病毒的三种处理方法的扩增结果见图5，从结果可以看出，实施例1所述的直接检测法的结果与磁珠法、离心柱法的检测结果一致。此外，由表9和图4可知，当存在B.1.1.7假病毒时，针对RdRp、HV69-70del和N501Y的扩增均起线。此外，不论是存在B.1.1.7假病毒还是存在SARS-CoV-2假病毒，针对IC的扩增均起线。

实施例3：SARS-CoV-2及其B.1.1.7突变株临床样本验证

取20例经过临床确认的SARS-CoV-2阳性咽拭子样本、20例经过临床确认的SARS-CoV-2阴性咽拭子样本及人工合成的B.1.1.7假病毒2例(下称人工样本1和人工样本2)，用于临床评价。

按照实施例1中描述的方法，配制SARS-CoV-2荧光RT-PCR反应液配制体系，对这40例临床样本和2例人工样本进行荧光RT-PCR扩增，并记录检测结果。本发明针对SARS-CoV-2及其B.1.1.7突变株检测结果分析如表10所示。样本检测扩增结果见图6～8。

表10.SARS-CoV-2核酸检测及其B.1.1.7突变株临床验证结果

从表10和图6～8中可以看出，不同样本的检测准确性和特异性符合临床检测要求。在图6中，鉴于针对RdRp基因的一对引物和探针时在这个基因的保守型区域设计的，因此，在20例SARS-CoV-2阳性咽拭子样本中，针对RdRp基因的扩增均起线，针对内参基因的扩增也均起线，而针对HV69-70del突变位点和N501Y突变位点的扩增均未起线。在图7中，在20例阴性咽拭子样本中，针对RdRp基因、HV69-70del突变位点和N501Y突变位点的扩增均未起线，只有针对内参基因的扩增均起线。在图8中，在两例人工样本中，针对RdRp基因、HV69-70del突变位点和N501Y突变位点的扩增均起线，此外针对内参基因的扩增也均起线。

实施例4参考品体系建立及评价

本实施例中，针对本发明所述的试剂盒设置如下参考品进行性能评价。

阳性参考品设置：选择含有SARS-CoV-2RNA片段的假病毒浓度在1×10

阴性参考品设置：选择1份甲型流感病毒H1N1核酸提取物，标记为N1；1份甲型流感病毒H3N2核酸提取物，标记为N2；1份乙型流感病毒Victoria型核酸提取物，标记为N3；1份呼吸道合胞病毒A型核酸提取物，标记为N4；1份呼吸道合胞病毒B型核酸提取物，标记为N5；1份腺病毒3型核酸提取物，标记为N6；1份腺病毒7型核酸提取物，标记为N7；1份副流感病毒1型核酸提取物，标记为N8；1份副流感病毒3型核酸提取物，标记为N9；1份人口咽脱落细胞提取物，标记为N10。

按照实施例2种所述的方法对试剂盒中设置的参考品进行阴阳符合率的评价。结果如下所示：

阳性参考品P1～P4检测结果为FAM、VIC通道检测结果均为阳性，如图9所示。

阳性参考品P5～P8检测结果为VIC、ROX、Cy5通道检测结果均为阳性，如图10所示。

阴性参考品N1～N10检测结果为FAM、ROX、Cy5通道检测结果均为阴性，仅VIC通道检测结果为阳性。如图11所示。

实施例5检测灵敏度分析

在本实施例中，对含有SARS-CoV-2假病毒和B.1.1.7假病毒分别进行2倍梯度稀释，按照实施例1、2中的方法对梯度稀释样本进行检测，初步判断试剂盒的检测下限，初步判断结果为检测下限为500copies/mL左右。

按照实施例1所述的方法分别对SARS-CoV-2假病毒和B.1.1.7假病毒在不同浓度(浓度分别为S1:1000copies/mL、S2:500copies/mL、S3:250copies/mL)下重复20次检验，以95％检出率来确认试剂盒的检测下限。检测结果详见表11，针对RdRp基因的一对引物和探针分别对1000、500、250copies/mL SARS-CoV-2假病毒的检出率为100％、100％、100％；针对B.1.1.7突变株位点N501Y的一对引物和探针分别对1000、500、250copies/mL B.1.1.7假病毒的检出率为100％、100％、95％；针对B.1.1.7突变株位点HV69-70del的一对引物和探针分别对1000、500、250copies/mL B.1.1.7假病毒的检出率为100％、100％、95％。综上所述，本发明的试剂盒检测下限(LOD)为500copies/mL。如图12～13所示。

表11：SARS-CoV-2假病毒及其B.1.1.7假病毒在不同浓度下的检出率

实施例6检测精密度分析

按照实施例1所述的方法别对1例中浓度B.1.1.7突变株阳性参考品(J1，浓度约10

表12.阳性参考品J1检测结果

表13.阳性参考品J2检测结果

实施例7反应特异性分析

本实施例中，针对本发明所述的试剂盒对其他冠状病毒及呼吸道病原体等交叉样本进行验证。结果详见表14，从结果可以得出，本发明的试剂盒对其他冠状病毒及呼吸道病原体检测无交叉反应，由此可知本发明的试剂盒特异性良好。

表14.交叉病原体验证结果

序列表

<110> 利多（香港）有限公司

<120> 检测SARS-CoV-2的寡核苷酸和试剂盒

<160> 12

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 24

<212> DNA