茜草环肽化合物在制药中的应用

技术领域

本发明涉及环状肽，具体涉及茜草环肽化合物在制药中的应用。

背景技术

当前，新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染引起的新型冠状病毒感染疾病 (COVID-19)疫情已被世界卫生组织列为国际关注的突发公共卫生事件。

2002～2003年间，冠状病毒SARS-CoV引起重症急性呼吸综合征(SARS)， 其暴发流行曾造成全球恐慌，当时报告的临床诊断病例超过80000例，平均 病死率约11％。SARS-CoV-2是与SARS-CoV同类的一种烈性病毒，病毒来 源至今不明。与SARS-CoV不同，SARS-CoV-2病毒感染除了呼吸系统严重 受损和肠道炎症外，临床患者还表现有肝损伤、神经损伤、心肌损伤、肾损 伤等多脏器损伤。新型冠状病毒肺炎重症患者多遭遇细胞因子风暴综合征 (CSS)。

新型冠状病毒疾病爆发以来，科学工作者们从结构生物学、免疫学、药 物学多角度对新型冠状病毒进行研究，目前尚无特效单体化合物药物。寻找 作用明确、作用机制清楚的单体化合物是防治新冠状病毒的迫切需求。

通过蛋白质-蛋白质的相互作用，通过计算机分子对接仿真的方法，从民 间食用植物和中草药寻找抗新冠状病毒活性化合物是目前抗疫战的一个重要 主战场。新型冠状病毒基因编码多个结构蛋白，其中S蛋白可特异性地与宿 主受体结合，是病毒入侵宿主易感细胞的关键蛋白。已有的研究表明，S蛋 白、3CL蛋白、CD-SIGN受体、ACE2受体是潜在抗冠状病毒作用靶点。不 同研究团队通过上述不同靶点发现了一些潜在的中草药活性化学成分。

人类免疫缺陷病毒(HIV)，即艾滋病病毒，是造成人类免疫系统缺陷的一 种病毒。1983年，HIV被首次发现。它是一种感染人类免疫系统细胞的慢病 毒(lentivirus)，属逆转录病毒的一种。HIV通过破坏人体的T淋巴细胞，进而 阻断细胞免疫和体液免疫过程，导致免疫系统瘫痪，从而致使各种疾病在人 体内蔓延，最终导致艾滋病。HIV可攻击人体免疫系统，使人体丧失免疫功 能。因此，HIV感染者因机体抵抗力极度下降，会出现多种感染，如带状疱 疹、肺结核、肺炎、脑炎等多种病原体引起的严重感染，后期常常发生恶性 肿瘤，并发生长期消耗，以至全身衰竭而死亡。

艾滋病自1981年被发现至今30余年，肆虐全球，已经夺去超过3400万 人的生命，发展成为全球范围的严重公共卫生和社会问题。据估计，2017年， 全世界有3690万人感染上HIV。近两年，每年约有200万新发HIV/AIDS患 者，其中包含15万未成年人。据国家卫健委数据显示，截至2018年9月， 我国报告存活感染者85.0万，死亡26.2万例，估计新发感染者每年8万例左 右。HIV感染者需要每天甚至终身服用抗病毒药物。虽然服用抗病毒药物已被证明能有效抑制艾滋病发作，但这类药物价格昂贵且副作用严重。人们急 需找到治疗HIV感染的新化合物。

HIV蛋白水解酶就像化学剪刀一样。它将艾滋病病毒的原料切割成构建 新病毒所需的特定部分。只有此酶激活后，病毒才会有感染性。英地那韦 Indinavir即是一种HIV蛋白水解酶抑制剂。HIV-蛋白是筛选抗HIV病毒药物 的一个靶标。

据世界卫生组织的统计数据表明，全球感染乙肝人数约为4亿，每年约 有134万人因此丧生。我国慢性乙肝病毒携带者达到了1.2亿，乙肝患者有 3000万，年新增乙肝患者100万，居四大传染病之首。HBV(乙型肝炎病毒) 感染促进肝炎、肝硬化和肝癌产生，而且能够通过血液、体液、不安全性行 为和未消毒的针头进行传播，此外被感染的母亲在分娩过程中也能够传染给 子女。

科研工作者在过去三十多年一直都在寻找HBV的细胞靶标。据《美国国 家科学院院刊》，美国科罗拉多大学和中国厦门大学研究小组在肝细胞中发现 了乙型肝炎病毒的两种主要靶标：小分子蛋白Bcl-2和Bcl-xL。这项发现可 能在被HBV感染的病人治疗上产生深刻的临床意义和药物开发上的意义，也 给科研工作者研发出新的方法以治疗乙型肝炎疾病开辟了一条新途径。

环肽是一类主要由氨基酸以肽键连接形成的环状化合物。环肽这种大环 分子具有明确的固定构象，能够与受体很好地契合，加上分子内不存在游离 的氨端和羧端使得对氨肽酶和羧肽酶的敏感性大大降低。通常情况下，环肽 的代谢稳定性和生物利用度远远高于直链肽。目前，在自然界发现的环肽化 合物约有500种，很多环肽具有良好的生物活性。茜草科类型环肽是从茜草 中发现的一类双环或单环环己肽，目前，已发现的茜草科类型环肽化合物约 40种，包括单糖苷配糖体、二聚体等，如Yayehuanin A、RA-V、RA-II、RA-VII、RA-I、RA-III、RA-X、RA-XI、RA-XII、RA-XVI、RY-II等。茜草科类型环 肽对炎性疾病、免疫疾病和肿瘤疾病、疱疹病毒有良好的生物活性，有较高 的医药应用价值。具有代表性的如下：

公开号为CN104829696A的发明专利公开了茜草科类型环肽化合物 rubicordilinA、rubicordilin B和rubicordilin C在制备治疗NF-κB信号通路异 常激活的相关炎症和癌症的药物中的应用。

本申请人之前申请的公开号为CN109134618A的发明专利，公开了一种 从茜草属植物丫野还(Rubia hangii)中提取分离得到的茜草环肽二糖苷丫野还 宁甲(YayehuaninA)，发现该化合物能够用于制备治疗或预防NF-κB信号通路 异常激活的相关炎症疾病、免疫疾病和癌症的药物。

公开号为CN103877562A的发明专利公开了茜草科类型环肽化合物RA- Ⅴ、RA-Ⅰ、RA-Ⅶ、RA-Ⅻ等在制备Hedgehog信号通路异常激活的相关癌 症的药物中的应用。

公开号为CN101921319A的发明专利公开了茜草科类型环肽化合物 RA-Ⅴ、RA-Ⅰ、RA-XXⅣ、RA-Ⅻ等在制备治疗单纯疱疹病毒Ⅰ型相关疾病 的药物中的应用。

目前尚未见有茜草属植物中的茜草环肽化合物可用于潜在的防治冠状病 毒疾病药物、防治艾滋病药物、防治乙型肝炎药物的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一类茜草环肽化合物在制药中的应用。

具体的，本发明的技术方案为：具有下述式1～5中任一所示结构的茜草 环肽化合物或其药效学上可接受的盐在制备治疗冠状病毒药物和/或治疗艾 滋病病毒药物和/或治疗乙型肝炎病毒药物中的应用；

上述技术方案中，所述的冠状病毒为SARS-CoV-2。

进一步的，本发明还包括一种治疗冠状病毒的药物，其含有治疗上有效 剂量的具有上述式1～5中任一所示结构的茜草环肽化合物或其药效学上可接 受的盐。其中，所述的冠状病毒为SARS-CoV-2。为了解决药物的成型等问 题，该药物还含有药学上可接受的载体。

更进一步的，本发明还包括一种治疗艾滋病病毒的药物，其含有治疗上 有效剂量的具有上述式1～5中任一所示结构的茜草环肽化合物或其药效学上 可接受的盐。为了解决药物的成型等问题，该药物还含有药学上可接受的载 体。

再进一步的，本发明还包括一种治疗乙型肝炎病毒的药物，其含有治疗 上有效剂量的具有上述式1～5中任一所示结构的茜草环肽化合物或其药效学 上可接受的盐。为了解决药物的成型等问题，该药物还含有药学上可接受的 载体。

上述药物可以单位剂量形式给药，给药途径可为肠道或非肠道，如口服、 静脉注射、肌肉注射、皮下注射、腹腔注射、鼻腔、口腔粘膜、眼、肺和呼 吸道、皮肤、阴道、直肠等。为阻断病毒入侵的第一阶段S蛋白与人体ACE2 的抓持作用，优选鼻腔和眼粘膜给药。

上述药物的剂型可以是药学上可接受的剂型，如液体剂型、固体剂型或 半固体剂型。其中，液体剂型可以是溶液剂(包括真溶液和胶体溶液)、乳剂(包 括o/w型、w/o型和复乳)、混悬剂、注射剂(包括水针剂、粉针剂和输液)、 滴眼剂、滴鼻剂、洗剂或搽剂等；固体剂型可以是片剂(包括普通片、肠溶片、 含片、分散片、咀嚼片、泡腾片、口腔崩解片)、胶囊剂(包括硬胶囊、软胶囊、 肠溶胶囊)、颗粒剂、散剂、微丸、滴丸、栓剂、膜剂、贴片、气(粉)雾剂或 喷雾剂等；半固体剂型可以是软膏剂、凝胶剂、糊剂等。

上述提及的药学上可接受的载体是指药学领域常规的药物载体，例如： 稀释剂、赋形剂如水等，填充剂如淀粉、蔗糖等；黏合剂如纤维素衍生物、 藻酸盐、明胶和聚乙烯吡咯烷酮；湿润剂如甘油；崩解剂如琼脂、碳酸钙和 碳酸氢钠；吸收促进剂如季铵化合物；表面活性剂如十六烷醇；吸附载体如 高岭土和皂黏土；润滑剂如滑石粉、硬脂酸钙和硬脂酸镁、以及聚乙二醇等。 另外还可以在药物中加入其它辅剂如着色剂、防腐剂、香料、矫味剂或甜味 剂等。

上述药物中，优选含有重量比为0.1～99.5％的具有上述式1～5中任一所 示结构的茜草环肽化合物或其药效学上可接受的盐，进一步优选含有重量比 为0.5～95％的具有上述式1～5中任一所示结构的茜草环肽化合物或其药效学 上可接受的盐。

上述药物的使用量根据用药途径、患者的年龄、体重、所治疗的疾病的 类型和严重程度等变化，其日剂量可以是0.01～10mg/kg体重，优选0.1～5 mg/kg体重，分2～4次使用。药物组合物可单独服用，或与其他治疗药物或 对症药物合并使用并调整剂量。

本发明中，上述式2～5所示结构的茜草环肽化合物均为现有已知化合物， 分别为丫野还宁甲(也称Yayehuanin A)、RA-Ⅶ、RA-Ⅴ、RA-Ⅰ，可采用现 有方法进行制备或直接从市场上购买获得。它们分子式等性质如下：

丫野还宁甲：分子式为C

RA-Ⅶ：分子式为C

RA-Ⅴ：分子式为C

RA-Ⅰ：分子式为C

本发明中，上述式1所示结构的茜草环肽化合物为本申请人研究团队从 茜草属植物丫野还(Rubia hangii)中新分离得到的化合物，在本申请中命名为 丫野还宁乙(Yayehuanin B)，在本申请中也称为化合物1。其制备方法主要包 括以下步骤：

1)以茜草科茜草属植物丫野还(Rubia hangii)的茎和/叶为原料，获取其提 取物；

2)所得提取物过大孔树脂柱，用体积比为0：100～100：0的低碳醇/水梯 度洗脱，收集体积比为90：10～100：0的低碳醇/水洗脱部位，回收溶剂，得 到纯化物A；

3)所得纯化物A上硅胶柱，用体积比为100：0～0：100的氯仿/甲醇梯度 洗脱，收集体积比为80：20的氯仿/甲醇洗脱部位，回收溶剂，得到纯化物B；

4)所得纯化物B上高速逆流色谱仪进行分离，分段收集流分，检识(以 UPLC-MS检识)并合并流分，回收溶剂，得到式(I)所示结构的化合物；其中，

进行高速逆流色谱分离时的固定相和流动相为水与选自以下有机溶剂中 的一种或两种以上的选择组成的、对茜草型环肽化合物分配系数在0.2～10之 间的两相体系：

酯类溶剂、醇类溶剂、酮类溶剂、醚类溶剂、卤代烃类溶剂、烷烃类溶 剂、腈类溶剂、酸类溶剂。

上述化合物1制备方法的步骤1)中，通常是以水和/或低碳醇为溶媒对茜 草科茜草属植物丫野还的枝和/或叶进行提取，以获取丫野还的提取物；其中 所述丫野还的枝和/或叶可以是新鲜的或干燥的。所述的低碳醇具体可以是甲 醇和/或乙醇。甲醇和乙醇的浓度均可以是10～100v/v％，优选为50～100v/v％。 在提取时的操作(如提取的方式、提取的次数、每次提取的时间)等均与现有相 同，优选采用加热提取或回流提取。提取所得的提取液经浓缩除去溶媒后得 到的浸膏即为丫野还的提取物。

为了减轻后续大孔树脂的负担，优选是对步骤1)所得提取物进行萃取除 杂后再上大孔树脂柱进行富集。所述的萃取操作具体是将提取物用石油醚或 正己烷萃取萃取，以除去提取物中的叶绿素、甾醇等杂质。

上述化合物1制备方法的步骤2)中，所述的大孔树脂为能吸附分离茜草 环肽的药用级大孔吸附树脂，优选的型号为Amberlite XAD16、X-5、AB-8 或DA101等。在对大孔树脂柱进行洗脱时，优选是收集体积比为100：0的 低碳醇/水洗脱部位。该步骤中所述的低碳醇可以是甲醇或乙醇。在用低碳醇 /水混合溶剂对树脂柱进行洗脱之前，优选先用水洗柱以除去一些水溶性杂 质。

上述化合物1制备方法的步骤4)中，在进行高速逆流色谱分离时的固定 相和流动相的溶剂中，所述的酯类溶剂优选为选自醋酸乙酯、醋酸丁酯和醋 酸戊酯中的一种或两种以上的组合；所述的醇类溶剂优选为选自甲醇、乙醇、 丙醇、异丙醇、正丁醇、异丁醇、正戊醇和2-戊醇中的一种或两种以上的组 合；所述的酮类溶剂优选为选自丙酮、丁酮、环戊酮、甲基异丁酮和环己酮 中的一种或两种以上的组合；所述的醚类溶剂优选为选自乙醚、甲基叔丁基 醚、二氧六环、四氢呋喃中的一种或两种以上的组合；所述的卤代烃类溶剂 优选为选自二氯甲烷、三氯甲烷、四氯化碳中的一种或两种以上的组合；所 述的烷烃类溶剂优选为选自正己烷、正庚烷、异辛烷、石油醚(包括沸程 30～60℃的石油醚和沸程为60～90℃的石油醚)、汽油中的一种或两种以上的组 合；所述的腈类溶剂优选为乙腈；所述的酸类溶剂优选为选自甲酸和/或乙酸。

上述化合物1制备方法的步骤4)中，由于高速逆流色谱两相溶剂体系的 配比与两相比例相关，因此两相溶剂的总组成比例可根据上下两相的比例做 出改变，而不影响上相的组成或者下相的组成，不影响两相溶剂的分配系数。 本申请人的试验结果表明，进行高速逆流色谱分离时的固定相和流动相优选 乙酸乙酯-醇-水组成的两相体系，其中醇为选自甲醇、乙醇、丙醇、异丙醇、 正丁醇、异丁醇、正戊醇和2-戊醇中的一种或两种以上的组合。更优选其中 的醇为正丁醇，此时，所述乙酸乙酯、正丁醇和水的体积比优选为3：1：4。

上述化合物1制备方法的步骤4)中，进行高速逆流色谱分离的溶剂体系， 可以是上相为固定相，下相为流动相；也可以是下相为固定相，上相为流动 相。在进行高速逆流色谱仪分离时，温度通常为10～35℃，主机为正转，也 可为反转，转速优选为750～900rpm，流速优选为0.5～15.0mL/min。高速逆流 色谱取待分离样品的准备、上样、分段收集流分等操作均与现有技术相同。 优选如下：

高速逆流色谱取待分离样品的准备：取步骤3)所得纯化物B干品，称重， 取上相溶液或下相溶液，或上下相均有的溶液，体积相当于干品质量数的100 倍量，溶解干品，离心取上清液，即得。

取不超过高速逆流色谱仪进样杯体积的待分离样品10～17mL，进样注入 高速逆流色谱仪，每5～15mL收集1个流分；UPLC-MS检测，合并环肽化合 物纯净的流分，减压回收溶剂，得到逆流色谱纯化物。

申请人经过试验发现，上述化合物1～5与冠状病毒靶点(S蛋白、3CL蛋 白、DC-SIGN受体蛋白、ACE2受体蛋白)、艾滋病毒靶点(HIV-1蛋白)以及 乙肝病毒靶点(Bcl-2、Bcl-xL)均有较强的结合能力，对新型冠状病毒、艾滋 病病毒和乙型肝炎病毒具有潜在药用价值，有望用于抗冠状病毒药物和/或抗 艾滋病病毒和/或抗乙型肝炎病毒药物的制备。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步的详述，以更好地理解本发明的 内容，但本发明并不限于以下实施例。

实施例1：化合物1～5的制备

1)获取提取物

取茜草属植物丫野还(Rubia hangii)的干燥茎和叶(15.0kg)，经粉粹后， 用80v/v％甲醇回流提取3次(60L×3次)，时间为每次3小时，提取液经减压 浓缩得浸膏；将浸膏加甲醇/水(甲醇和水的体积比为50:50)15L混悬后，用石 油醚萃取3次，每次萃取溶剂用量为15L。萃取完毕，取甲醇/水相(下相)， 过滤，减压除去有机溶剂，补加水9L，甲醇3L，上XAD-16大孔树脂柱

2)Fr.2-1的高速逆流色谱分离

2.1)量取正己烷690mL、乙酸乙酯900mL、无水乙醇690mL、纯水900mL， 配制体积比为2.3:3:2.3:3的混合溶液，充分振摇后静置0.5h，上下两层完全 分层澄清，分离上下层，得到上相溶液与下相溶液，分别超声脱气10min， 备用；

2.2)取Fr.2-1，取步骤2.1)的上下相溶液各7.5mL，溶解Fr.2-1，溶液用棉 花过滤，取滤液备用；

2.3)取步骤2.1)的下相溶液作固定相，泵入高速逆流色谱仪分离管，待固 定相充满整个分离管后，调节主机为正转，至最大转速(900r/min)，同时将 步骤2.1)的上相溶液作流动相泵入，待流动相从柱口流出且固定相不流出， 两相溶剂在分离管中达到动态平衡后,取步骤2.2)的滤液15mL，注入进样阀， 流速2mL/min的条件下，210nm波长下检测，分离样品，总分离时间350min， 每7min收集1个流分。用真空离心浓缩仪将各流分旋干，分别取各流分旋干 物，以色谱醇甲醇溶解，UPLC-MS检测。其中流分27～29为分子量[M-H]

3)Fr.2-2的高速逆流色谱分离

3.1)量取乙酸乙酯600mL、正丁醇200mL、纯水800mL，配制体积比为 3:1:4的混合溶液，充分振摇后静置0.5h，上下两层完全分层澄清，分离上下 层，得到上相溶液与下相溶液，分别超声脱气10min，备用；

3.2)取Fr.2-2，取步骤3.1)的下相溶液15mL，溶解A002，溶液离心，取 上清液备用；

3.3)取步骤3.1)的上相溶液作固定相，泵入高速逆流色谱仪分离管，待固 定相充满整个分离管后，调节主机为正转，至最大转速(900r/min)，同时将 步骤3.1)的下相溶液作流动相泵入，待流动相从柱口流出且固定相不流出， 两相溶剂在分离管中达到动态平衡后,取步骤3.2)的上清液15mL，注入进样 阀，流速2mL/min的条件下，210nm波长下检测，分离样品，总分离时间 350min，每7min收集1个流分。用真空离心浓缩仪将各流分旋干，分别取各 流分旋干物，以色谱醇甲醇溶解，UPLC-MS检测。其中流分18～19为分子量 [M-H]

表1：分子量[M-H]

注：溶剂为氘代甲醇，氢谱500MHz，碳谱125MHz

因此，可确定本实施例所得分子量[M-H]

对本实施例所得分子量[M-H]

Yayehuanin B：白色无定型粉末；UV(MeOH)λmax 215nm(肩峰)，274nm；

表2：分子量[M-H]

注：溶剂为氘代甲醇，氢谱500MHz，碳谱125MHz

因此，可确定本实施例所得分子量[M-H]

实施例2：化合物1～5与S蛋白的分子对接

用Kingdraw软件分别画出化合物1、2、3、4、5的分子结构，分别保存 为mol格式，然后用Open babel软件转换为mol2格式，保存。其后，用 Avogadro软件优化3D构象，保存为mol2格式，再用pymol软件查看3D结 构，保存为pdb格式。最后，通过Autodock Tools分配相关电荷，自动设置 可扭转键，导出为pdbqt格式文件。

S蛋白采用从青岛海洋科学与技术试点国家重点实验室新冠状病毒药物 靶标结构信息共享平台系统下载的pdbqt格式文件，运行autodock vina进行 分子对接，对接参数：

center_x＝-32.81

center_y＝25.66

center_z＝4.79

size_x＝23

size_y＝21

size_z＝21

seed＝2020

energy_range＝5

exhaustiveness＝400

num_modes＝20

对接结果如下述表3所示。

表3：化合物1～5与新冠病毒潜在靶标(包括S蛋白、3CL蛋白、DC-SIGN 受体蛋白、ACE2受体蛋白)的分子对接结果

实施例3：化合物1～5与Ace2受体蛋白(结合区)的分子对接

化合物1、2、3、4、5的pdbqt格式分子结构采用实施例2保存的文件。

Ace2受体蛋白采用从青岛海洋科学与技术试点国家重点实验室新冠状 病毒药物靶标结构信息共享平台系统下载的与Ace2受体蛋白与S蛋白结合物 的pdb格式文件，删除S蛋白，并通过Autodock Tools加氢以及分配相关电 荷。添加原子类型为AD4，导出为pdbqt格式文件。选择原Ace2受体蛋白与 S蛋白结合的RBD结合位置作为对接活性口袋。

运行autodock vina进行分子对接，对接参数：

center_x＝-32.81

center_y＝25.66

center_z＝4.79

size_x＝23

size_y＝21

size_z＝21

seed＝2020

energy_range＝5

exhaustiveness＝400

num_modes＝20

对接结果如上述表3所示。

实施例4：化合物1～5与新冠病毒3CL蛋白的分子对接

化合物1、2、3、4、5的pdbqt格式分子结构采用实施例2保存的文件。

3CL蛋白采用从青岛海洋科学与技术试点国家重点实验室新冠状病毒药 物靶标结构信息共享平台系统下载的pdbqt格式文件，运行autodock vina进 行分子对接，对接参数：

center_x＝-9.267

center_y＝11.516

center_z＝68.612

size_x＝19.228

size_y＝28.944

size_z＝20.254

seed＝2020

energy_range＝5

exhaustiveness＝400

num_modes＝20

对接结果如上述表3所示。

实施例5：化合物1～5与新冠病毒受体DC-SIGN蛋白的分子对接

化合物1、2、3、4、5的pdbqt格式分子结构采用实施例2保存的文件。 DC-SIGN蛋白从RCSD蛋白质数据库(https://www.rcsb.org/)下载(PDB ID： 6GHV)。利用pymol软件中删去晶体结构的水分子和原配体EZ8，并通过 Autodock Tools加氢以及分配相关电荷。添加原子类型为AD4，导出为pdbqt 格式文件。选择原配体抑制剂EZ8在DC-SIGN蛋白F链的结合位置作为对 接活性口袋。

运行autodock vina进行分子对接，对接参数：

center_x＝4.799

center_y＝9.951

center_z＝79.263

size_x＝22.5

size_y＝22.5

size_z＝22.5

seed＝2020

energy_range＝5

exhaustiveness＝400

num_modes＝20

对接结果如上述表3所示。

实施例6：化合物1～5与艾滋病病毒HIV-1蛋白酶的分子对接

化合物1、2、3、4、5的pdbqt格式分子结构采用实施例2保存的文件。

HIV-1蛋白酶的PDB结构从RCSD蛋白质数据库(https://www.rcsb.org/) 下载(PDB ID：1HSG)。利用pymol软件中删去晶体结构的水分子和原配体 MK1，并通过AutodockTools加氢以及分配相关电荷。添加原子类型为AD4， 导出为pdbqt格式文件。选择原配体抑制剂MK1在HIV-1蛋白酶的结合位置 作为对接活性口袋。

运行autodock vina进行分子对接，对接参数：

center_x＝16

center_y＝25

center_z＝4

size_x＝30

size_y＝30

size_z＝30

seed＝2020

energy_range＝5

exhaustiveness＝400

num_modes＝20

对接结果如下述表4所示。

表4：化合物1～5与艾滋病病毒HIV-1蛋白的分子对接结果

实施例7：化合物1～5与乙肝病毒Bcl-2蛋白的分子对接

化合物1、2、3、4、5的pdbqt格式分子结构采用实施例2保存的文件。

Bcl-2蛋白的PDB结构从RCSD蛋白质数据库(https://www.rcsb.org/) 下载(PDBID：6gl8)。利用pymol软件中删去晶体结构的水分子和原配体 F3Q，并通过Autodock Tools加氢以及分配相关电荷。添加原子类型为AD4， 导出为pdbqt格式文件。选择原配体抑制剂F3Q在Bcl-2蛋白的结合位置作 为对接活性口袋。

运行autodock vina进行分子对接，对接参数：

center_x＝17.806

center_y＝2.92

center_z＝15.208

size_x＝15

size_y＝15

size_z＝18.75

seed＝2020

energy_range＝5

exhaustiveness＝400

num_modes＝20

对接结果如下述表5所示。

表5：化合物1～5与乙型肝炎病毒潜在靶标(包括Bcl-2蛋白和Bcl-xL蛋 白)的分子对接结果

实施例8：化合物1～5与乙肝病毒Bcl-xL蛋白的分子对接

化合物1、2、3、4、5的pdbqt格式分子结构采用实施例2保存的文件。 Bcl-xL蛋白的PDB结构从RCSD蛋白质数据库(https://www.rcsb.org/)下 载(PDB ID：3sp7)。利用pymol软件中删去晶体结构的水分子和原配体03B， 并通过Autodock Tools加氢以及分配相关电荷。添加原子类型为AD4，导出 为pdbqt格式文件。选择原配体抑制剂03B在Bcl-xL蛋白的结合位置作为对 接活性口袋。

运行autodock vina进行分子对接，对接参数：

center_x＝-3.361

center_y＝5.194

center_z＝-5.139

size_x＝28.5

size_y＝28.5

size_z＝15

seed＝2020

energy_range＝5

exhaustiveness＝400

num_modes＝20

对接结果如上述表5所示。