一种无二甲苯的石蜡包埋脱水透明剂

技术领域

本发明涉及一种无二甲苯的石蜡包埋脱水透明剂。

背景技术

组织包埋的质量是医学科研工作的基石，常规的包埋过程包括梯度乙醇脱水、二甲苯透明、浸蜡等。其中，组织脱水过程是影响包埋质量的关键环节。

适宜的脱水透明剂既能增加石蜡切片制作的快捷度，又能保证切片的质量，这对后续的组织染色、免疫组化等实验是至关重要的。但是现在的常规脱水透明剂二甲苯存在使组织脆性增加、质地变硬的弊端，加之二甲苯挥发被人体吸收后能够使人体出现毒性反应，故急需探寻一种对人体伤害较低且脱水透明程度较好的新型脱水透明剂。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种无二甲苯的石蜡包埋脱水透明剂，本发明提供的脱水透明剂能够替代常规石蜡包埋程序中无水乙醇的脱水、二甲苯的透明作用。采用本发明脱水透明剂进行处理后的组织切片流畅，组织无变脆、变硬。

本发明提供了一种无二甲苯的石蜡包埋脱水透明剂，所述脱水透明剂是由正丁醇和松节油混合而成。

优选地，所述脱水透明剂中正丁醇和松节油的体积比为1-7∶1-3，更优选的，所述脱水透明剂中正丁醇和松节油的体积比为1∶1。

本发明所述脱水透明剂是用于对离体组织进行石蜡包埋过程中进行脱水使用。

在一些实施例中，本发明所采用的离体组织为脑、肾、胃、肝、十二指肠组织。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明采用由正丁醇和松节油的混合物作为石蜡包埋程序中的脱水透明剂，替代无水乙醇和二甲苯，使得处理后的组织切片流畅，组织无变脆、变硬；HE染色后，采用新型脱水透明剂处理组织的细胞核、细胞质分明，组织的着色度、色泽、透明度与常规脱水程序无差；本发明采用正丁醇联合松节油用于组织脱水既能够避免二甲苯对人的毒性作用，还可以减少无水酒精过度脱水对组织的破坏。

附图说明

图1为采用常规组织包埋脱水透明剂进行脱水包埋后，各离体组织HE染色结果；

图2为采用本发明组织包埋脱水透明剂进行脱水包埋后，各离体组织HE染色结果；

图3为采用本发明组织包埋脱水透明剂进行脱水包埋后，各离体组织免疫组化染色结果；

图4为采用常规组织包埋脱水透明剂进行脱水包埋后，各离体组织免疫组化染色；

图中1为肝离体组织，2为海马离体组织，3为脑皮质离体组织，4为肾离体组织，5为胃离体组织，6为十二指肠离体组织。

具体实施方式

本发明提供了一种无二甲苯的石蜡包埋脱水透明剂，其是由正丁醇和松节油混合而成，所述脱水透明剂中正丁醇和松节油的体积比为1∶1。当脱水透明剂中正丁醇和松节油的体积比为1-7∶1-3范围时，其脱水效果与以下实验结果相接近。

利用本发明的脱水透明剂进行组织石蜡包埋试验，具体试验过程如下：

1、材料与方法

1.1实验试剂

无水乙醇(天津市光复科技发展有限公司，20190728)；二甲苯(天津市标准科技有限公司，20171212)；正丁醇(天津市福晨化学试剂厂2011210)；松节油(天津市欧博凯化工有限公司，190318)；中性树胶(中国上海标本模型厂，20161113)；Bax(Abcam公司，ab32503)；NeUN(巴傲得生物工程有限公司，cs89330)；通用型二抗(博士德生物工程有限公司，14D12L24B2722)；DAB显色液(北京中杉金桥生物技术有限公司，ZLI-9018)

1.2方法

断头法处死灌胃卷茎蓼治疗的多发性脑梗模型大鼠，取脑、肝、肾、胃、二指肠组织，4％多聚甲醛固定组织48h，自来水流水冲洗2h，蜡板上将组织修整至1×1×0.5cm大小。所有组织均经新型脱水程序：60％乙醇15min，70％乙醇15min，80％乙醇15min，90％乙醇15min，60℃下正丁醇：松节油(体积比为1∶1)3h，60℃下蜡缸I30min，60℃下蜡缸II30min，常规石蜡包埋。石蜡切片机制作5μm厚切片，待行HE染色、免疫组化染色，结果与常规脱水程序组织比较。常规脱水程序如下表1，使用本发明脱水透明剂的新型脱水程序如下表2。

表1常规脱水程序

表2新型脱水程序

HE染色过程：二甲苯I、II各20min，100％乙醇I、II各10min，95％、80％、70％乙醇各5min，苏木精染核5min，自来水冲洗2min，盐酸-乙醇分化2s，5％氨水返蓝30s，80％、95％乙醇各3min，伊红染色2min，80％、95％、100％乙醇各5min，二甲苯I、II各10min，中性树胶：松节油(40∶1)混合封片、晾干，显微镜下观察。SABC免疫组化染色：切片依次经二甲苯I、II各20min脱蜡，100％、95％、80％、70％乙醇各5min脱水，纯水冲洗3min，PBS冲洗5min(重复3次)，柠檬酸40火力3min、20火力2min抗原修复，3％H2O2孵育30min，PBS冲洗5min(重复3次)，37℃温箱血清封闭20min，滴加Bax一抗(1∶200)，4℃过夜，PBS冲洗5min(重复3次)，二抗37℃温箱30min，PBS冲洗5min(重复3次)，37℃SABC工作液孵育30min，DAB显色，镜下观察，纯水冲洗终止显色，苏木素复染2min，梯度酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶：松节油(40∶1)封片。

2、结果

2.1HE染色结果

对比图1和图2(图中序号1-6依次为肝离体组织，海马离体组织脑皮质离体组织，肾离体组织，胃离体组织，十二指肠离体组织)，可以发现采用本发明的脱水透明剂对离体组织进行脱水包埋处理的离体组织石蜡切片顺畅，可以形成完整的蜡带，切出的蜡片非常平整且没有出现组织变脆、质地变硬的现象。

采用本发明脱水包埋处理后的离体组织经HE染色后，细胞核呈紫蓝色、细胞质呈红色，且细胞核、细胞质分明，在组织切片色泽、着色程度、以及透明度和常规脱水处理无明显差异。在HE染色中，我们观察到脑组织细胞出现了核固缩、神经元缺失，肝脏轻微的脂肪变性，肾、胃、十二指肠无明显病理改变。而采用常规脱水包埋处理的组织He染色后，组织贴片不紧密出现褶皱、卷边，部分组织会出现组织断裂以及结构不完整例如肠组织。

2.2免疫组化结果

本发明将通过免疫组化染色检测促凋亡因子BAX在卷茎蓼治疗的多发性脑梗模型大鼠的脑、肾、胃、肝、十二指肠中的表达，结果发现利用本发明脱水包埋处理后的各离体组织中均能够看到棕黄色颗粒的阳性表达，结果与常规脱水程序无差异，如图3-4(图中序号1-6依次为肝离体组织，海马离体组织脑皮质离体组织，肾离体组织，胃离体组织，十二指肠离体组织)。

以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。