一种检测改性淀粉止血粉中一氯乙酸残留量的方法

技术领域

本发明涉及医疗器械技术领域，特别涉及一种检测改性淀粉止血粉中一氯乙酸残留量的方法。

背景技术

近年来，随着科学与加工技术的发展，以淀粉为原材料制备的止血材料，因其良好的止血作用和生物安全性，被广泛研究，并有了一些产品应用于临床，如Arista止血装置，可吸收多糖止血粉(HaemoCer

2020版《中华人民共和国药典》的“羧甲淀粉钠”项下新增了一氯乙酸的检测项，其中规定的方法为：取样品0.5g，按照步骤加水提取定容至25mL,过滤后取续滤液作为供试液；配制每1mL含氯乙酸40μg的对照品溶液。照离子色谱法(通则0513)试验，含氯乙酸不得过0.2％。GB/T28193-2011《表面活性剂中卤代乙酸(盐)残留量的测定方法》中的方法为：使用反相C

以这两个方法检测本止血粉中一氯乙酸残留量时，存在两个问题，1、样品不溶解，溶胀吸水较多，制备供试液时需要稀释的倍数较大，其限度不能满足产品的检测要求。2、在检测改性淀粉止血粉中一氯乙酸残留量时，供试液在一氯乙酸的主峰位置附近有干扰峰，与一氯乙酸的峰不能有效分离。

发明内容

针对现有的样品溶胀吸水较多，供试液制备时需要稀释的倍数较大，限度不能满足产品的检测要求以及供试液在一氯乙酸的主峰位置附近有干扰峰，与一氯乙酸的峰不能有效分离等现有技术缺陷，本发明提供了一种检测改性淀粉止血粉中一氯乙酸残留量的方法。该方法采用高比例的乙腈水溶液作为提取溶液，使用反相C

本发明的检测改性淀粉止血粉中一氯乙酸残留量的方法包括如下步骤：

1、标准曲线方程式的建立：精密称取一氯乙酸11.8mg置于10mL棕色容量瓶中，用提取溶剂定容至刻度，混匀后作为一氯乙酸储备溶液，储备溶液浓度为1.18mg/mL。使用储备溶液稀释，配制一氯乙酸标准对照溶液，其浓度分别为0.802、1.20、2.01、3.01、6.02μg/mL，进行色谱分析，通过色谱分析得出相应的质量浓度所对应的峰面积平均值，建立标准曲线方程式。

2、供试品溶液的制备及测定：取改性淀粉止血粉样品约1.00g，精密称定，置10mL棕色容量瓶中，准确加入溶剂5.00mL，密封混合均匀，置于37℃±1℃，浸提1h，取出放冷至室温后取上清液过滤，取续滤液作为供试品溶液。进行色谱分析，记录色谱图，通过色谱分析和标准曲线方程式计算得供试品溶液中一氯乙酸的含量，根据提取溶液的稀释比例计算得供试品改性淀粉止血粉中一氯乙酸的残留量。

3、检测限和定量限的测定：使用一氯乙酸储备溶液稀释至不同浓度，进行色谱分析，记录色谱图，通过色谱分析，以信噪比S/N≈10作为定量限，信噪比S/N≈3作为检测限，分析并计算得该方法检测样品中的一氯乙酸残留量的定量限和检测限。

其中，提取溶剂为乙腈水溶液，乙腈与水体积比为7:3～5:5。

其中，高效液相色谱法包括以下条件：采用岛津Inertsil C8-3(5μm，4.6mm×250mm)色谱柱，柱温为40℃，荧光检测器波长为214nm，进样量为20μL，流动相为乙腈水溶液，流速为0.8mL/min。

其中，流动相的pH值为2.65～2.80。

其中，乙腈水溶液体积分数1-15min内为2％～4％，16-45min内为20％，46-60min内为2％～4％或者乙腈水溶液体积分数为2％～4％，采集90min。

相对于现有技术，本发明具有如下有益效果：

1、本发明在提取过程中提取溶液稀释倍数小，提高了仪器的检测限度，使其能够达到改性淀粉止血粉产品限度要求。

2、应用于检测改性淀粉止血粉中一氯乙酸残留时，一氯乙酸峰与杂质峰分离效果好，能够达到定量测定的要求。

3、方法重现性好，回收率高，简单快速准确。

4、本发明丰富了一氯乙酸检测的方法，填补了改性淀粉止血粉中一氯乙酸残留量检测方法的空白。

附图说明

图1为本发明实施例1的HPLC图；

图2为本发明试验例1专属性试验HPLC图；

图3为本发明试验例2线性回归曲线图；

图4为本发明试验例2线性与范围HPLC图；

图5为本发明试验例3灵敏度试验定量限HPLC图；

图6为本发明试验例3灵敏度试验检出限HPLC图；

图7为本发明试验例4精密度试验HPLC图；

图8为本发明试验例5回收率试验HPLC图。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

(1)标准曲线方程式的建立：称取一氯乙酸11.8mg置于10mL棕色容量瓶中，用提取溶剂定容至刻度，混匀后作为一氯乙酸储备溶液，储备溶液浓度为1.18mg/mL。使用储备溶液稀释，配制一氯乙酸标准对照溶液，其浓度分别为0.802、1.20、2.01、4.01、6.02μg/mL，进行色谱分析，通过色谱分析得出相应的质量浓度所对应的峰面积平均值，建立标准曲线方程式。

(2)供试品溶液的制备：取改性淀粉止血粉约1.00g，精密称定，置10mL棕色容量瓶中，准确加入提取溶剂(乙腈:水＝7:3)5.00mL，密封混合均匀，置于37℃±1℃，浸提1h，取出放冷至室温后取上清液经0.22μm滤膜过滤，取续滤液作为供试品溶液。

(3)色谱条件：进样量20μL，采用岛津Inertsil C8-3(5μm，4.6mm×250mm)色谱柱，柱温为40℃，流动相为乙腈水溶液(1-15min，乙腈:水＝2:98；15-45min，乙腈:水＝20:80；46-60min，乙腈:水＝2:98)，流速为0.8mL/min，荧光检测器波长为214nm。

(4)检测分析：进行色谱分析，记录色谱图至60min，通过色谱分析和标准曲线方程式计算得供试品溶液中一氯乙酸的含量，根据提取溶液的稀释比例计算得供试品改性淀粉止血粉中一氯乙酸的残留量。结果表明，在该色谱条件下，一氯乙酸与杂质分离度大于1.5，符合检测要求。分离一氯乙酸与杂质的的HPLC图谱如图1所示。

效果试验

1、专属性

空白溶剂的配制：量取乙腈700mL和水300mL，混合均匀后过滤，作为空白溶剂备用；

空白样品浸提液制备：取未羧化样品约1g，按照浸提液制备方法制备空白样品浸提液；

供试品加氯乙酸浸提液制备：精密称取一氯乙酸，配制浓度约为20μg/mL的溶液作为一氯乙酸对照溶液，取样品约1g，精密称定，置10mL棕色容量瓶中，加上述氯乙酸对照溶液5mL，按照浸提液制备方法制备供试品加氯乙酸浸提液。

取上述各溶液20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，空白样品浸提液中一氯乙酸出峰位置无检出峰，供试品加氯乙酸浸提液中检出一氯乙酸，主峰与杂质峰能够完全分离，溶剂无干扰，空白无干扰。专属性试验HPLC图谱如图2所示。

2、线性与范围

精密称取一氯乙酸11.8mg置于10mL棕色容量瓶中，用溶剂定容至刻度，混匀后作为氯乙酸储备溶液，储备溶液浓度为1.18mg/mL。

取储备溶液0.85mL，置于50mL棕色容量瓶中，用溶剂定容后混匀，浓度为20.06μg/mL。精密量取上述溶液0.4mL、0.6mL、1mL、2mL、3mL分别置10mL棕色容量瓶中，加溶剂稀释至刻度，摇匀。取上述各溶液20μL注入液相色谱仪，每个浓度平行进样3次，记录色谱图，结果显示，在0.8024μg/mL～6.018μg/mL浓度范围内，一氯乙酸峰面积与浓度线性关系良好y＝1198.9x-156.75，R

表1一氯乙酸浓度与峰面积线性结果表

3、灵敏度试验

(1)定量限试验

取储备溶液0.85mL，置于50mL棕色容量瓶中，用溶剂定容后混匀，作为一氯乙酸稀释溶液，浓度为20.06μg/mL。

取上述溶液0.25mL置于10mL棕色容量瓶中，用溶剂定容后混匀，取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，测得一氯乙酸的定量限为0.5015μg/mL(S/N≈10)。定量限试验HPLC图谱如图5所示。

(2)检出限试验

取储备溶液0.85mL，置于50mL棕色容量瓶中，用溶剂定容后混匀，浓度为20.06μg/mL。

取上述溶液80μL置于10mL棕色容量瓶中，用溶剂定容后混匀，取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，测得一氯乙酸的检出限为0.16048μg/mL(S/N≈3)。检出限试验HPLC图谱如图6所示。

4、精密度试验

取储备溶液0.85mL，置于50mL棕色容量瓶中，用溶剂定容后混匀，浓度为20.06μg/mL。

取上述溶液1.0mL置于10mL棕色容量瓶中，用溶剂定容后混匀，取20μL注入液相色谱仪，连续进样6次，记录色谱图，结果见表2，精密度试验HPLC图谱如图7所示。

表2一氯乙酸精密度检测试验结果

5、回收率试验

取储备溶液0.85mL，置于50mL棕色容量瓶中，用溶剂定容后混匀，浓度为20.06μg/mL作为①溶液备用。

对照溶液1：取①溶液2.0mL置于25mL容量瓶中，用溶剂定容后混匀，浓度为1.6048μg/mL。对照溶液2：取①溶液2.5mL置于25mL容量瓶中，用溶剂定容后混匀，浓度为2.006μg/mL。对照溶液3：取①溶液3.0mL置于25mL容量瓶中，用溶剂定容后混匀，浓度为2.4072μg/mL。样品加对照浸提液供试液制备：取样品约1g，精密称定9份，分别置10mL棕色容量瓶中，其中1-3号加入5mL对照溶液1，4-6号加入5mL对照溶液2，7-9号加入5mL对照溶液3，使含一氯乙酸浓度分别为对照限度的80％～120％，密封后充分混匀，置于37℃浸提1h，取出放冷至室温，上清液过滤，取滤液作为样品加对照浸提液供试液。

取对照溶液2和1-9号样品加对照浸提液供试液各20μL，注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算一氯乙酸的平均回收率为98.5％，RSD为2.37％，试验结果见表3。回收率试验HPLC图谱如图8所示。

表3样品的一氯乙酸回收率试验结果