一种提取蚯蚓活性粗脂肪的方法

技术领域

本发明涉及一种提取蚯蚓活性粗脂肪的方法，属于应用生物技术领域。

背景技术

蚯蚓又名地龙，是环节动物门寡毛纲的陆栖无脊椎动物，其生命活动过程能够显著影响土壤肥力,被称为“生态系统工程师”。蚯蚓食性杂，繁殖效率高，在物质循环、生物多样性等方面发挥着特殊作用，目前利用蚯蚓来处理生活垃圾、畜禽粪便等高含水有机固废已经发展成重要的环保产业，如何深度开发蚯蚓、高附加值利用已成为国内外关注的焦点。目前，蚯蚓深加工主要集中在蚯蚓液化、蚯蚓体中提取高活性的酶制剂等，缺少对蚯蚓体中脂肪应用的系统研究。

蚯蚓体的脂肪主要分布在蚯蚓的体壁和消化道中，参与合成脂肪体、糖原及细胞膜结构，蚯蚓体内的脂肪酸、甾醇等成分在蚯蚓的生长、发育和生殖上有重要作用。有研究表明，不同品种蚯蚓活体的粗脂肪含量为约为1.5～4.5%。在保持蚯蚓体脂肪生物活性的同时，将其高效提取，必将有力提升蚯蚓利用价值，有力助推蚯蚓产业健康发展。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有问题，提供一种提取蚯蚓活性粗脂肪的方法。

本发明的技术方案是：一种提取蚯蚓活性粗脂肪的方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）蚯蚓清肠；将鲜活蚯蚓放入自来水中，让蚯蚓在自来水中吐出吞入腔肠中的物料，自来水用量为蚯蚓体重的1～2倍；静置6～8小时，捞出蚯蚓，用流动自来清洗，去除杂物，得到清肠后的蚯蚓，备用；

（2）蚯蚓自溶酶解；将清肠后蚯蚓放入保温桶中，均匀加入糖制剂，糖制剂加入量为清肠后的蚯蚓体重的2%～4%；强制搅拌蚯蚓和糖制剂混合物，搅拌转速为5转/分钟，同时保持保温桶温度为45～55℃，让蚯蚓溶酶解12～24小时后用5毫米筛网过滤去除杂质，收集得到蚯蚓酶解液，备用；

（3）蚯蚓冻干；将蚯蚓酶解液放入真空冷冻干燥箱中，冷冻干燥后得到蚯蚓冻干粉；

（4）脂肪提取；采用索氏提取法提取蚯蚓冻干粉中的脂肪。

步骤（2）中，所述糖制剂的成分包括蔗糖：葡萄糖：果糖，蔗糖：葡萄糖：果糖的重量比为3～5：1～3：2～4。

步骤（3）中，所述冻干粉的含水率需低于2%。

步骤（3）中，采用索氏提取法提取蚯蚓冻干粉中的脂肪,具体包括以下步骤：

步骤1）、准备低沸程30～60℃石油醚为提取剂；将蚯蚓冻干粉装入滤纸袋中，封口，放入浸提管内；向索氏提取器的脂肪瓶中倒入1/2体积的提取剂，连接索氏提取器；

步骤2）、恒温45～55℃加热脂肪瓶，脂肪瓶中提取剂蒸发气化进入冷凝管，提取剂被冷凝后滴入抽提管内萃取蚯蚓冻干粉中的脂肪，当抽提管内的提取剂的上液面高出回流管时提取剂回流到脂肪瓶中；

步骤3）、按照步骤2）往复回馏抽提4小时，得到蚯蚓粗脂肪和石油醚混合物；

步骤4）、将混合物转移到回转蒸发仪，恒温45～55℃回收纯净石油醚，得到浓缩的蚯蚓粗脂肪和石油醚混合物；

步骤5）、将浓缩的蚯蚓粗脂肪和石油醚混合物放在通风橱中，抽风挥发12小时，让残留石油醚充分挥发，得到蚯蚓粗脂肪；同时，回转蒸发仪回收得到的纯净石油醚再用于提取蚯蚓活性粗脂肪。

本发明方法先进科学，通过本发明，要解决的技术问题：（1）蚯蚓体的绿色酶解。充分调动蚯蚓自溶酶活性，减少蚯蚓酶解过程中化学药品的使用量。（2）蚯蚓体脂肪类物质的高效提取。使蚯蚓体充分释放脂肪，同时有效萃取、收集脂肪类物质。（3）蚯蚓体脂肪类物质生物活性的高效保持。在提起蚯蚓蚯蚓体脂肪类物质的同时，保持其生物活性，为后续高附加值利用提供生物学功能支撑。

本发明的有益效果为：

（1）依照上述方法，蚯蚓粗脂肪(F1)的产率为蚯蚓鲜重的3.6%～4.2%。同时，采用高温（105℃）30分钟灭活蚯蚓，干热风（75℃）烘干蚯蚓，采用索氏提取法和相同的提取技术参数提取，蚯蚓粗脂肪（F2）产率为蚯蚓鲜重的2.2%～2.3%。F1粗脂肪提取量是F2的1.64～1.83倍。

（2）采用管碟法测定蚯蚓粗脂肪对大肠杆菌的抑制效果，以自来水为对照(CK)。结果表明，CK无明显抑菌圈形成，F1抑菌圈的平均直径17.3～18.6mm，F2抑菌圈的平均直径为6.8～7.3mm，F1抑菌圈直径是F2的2.47～2.55倍。

（3）测定蚯蚓粗脂肪超氧化物歧化酶（SOD）活性，F1的SOD酶活为2.36～2.65units/g.Pr，F2的SOD酶活为0.61～0.63units/g.Pr，F1的SOD酶活是F2的3.75～4.21倍。

本技术方法得到蚯蚓粗脂肪，具有高产率和高生物活性的特点，为其进一步加工利用奠定了生物学基础。

本发明采用“酶解+低温干燥+有机萃取”的技术方法，提取蚯蚓体中的活性脂肪，为后续蚯蚓脂肪产品的深加工提供原料。目前，市场对蚯蚓的开发利用主要集中在活性酶，忽视对脂肪的开发利用。本专利市场实施可能性大，预期经济效益显著。

附图说明

图1为本发明的流程示意图。

具体实施方法

下面结合具体实施例对本发明进一步进行描述。但本发明的保护范围并不仅限于此：

案例1：

（1）蚯蚓清肠。将鲜活蚯蚓放入自来水中，让蚯蚓在自来水中会吐出吞入腔肠中的物料，自来水用量为蚯蚓体重的2倍。静置6小时，捞出蚯蚓，用流动自来清洗，去除杂物，备用。

（2）蚯蚓自溶酶解。将清肠后蚯蚓放入保温桶中，均匀加入糖制剂（蔗糖：葡萄糖：果糖=5：3：4，重量比），糖制剂加入量为鲜活蚯蚓体重的4%。强制搅拌蚯蚓体和糖制剂混合物，搅拌转速为5转/分钟，同时保持桶温55℃，让蚯蚓溶酶解24小时后用5毫米筛网过滤去除杂质，收集得到蚯蚓酶解液，备用。

（3）蚯蚓冻干。将蚯蚓酶解液放入真空冷冻干燥箱中，冷冻干燥后得到蚯蚓冻干粉，冻干粉的含水率需低于2%。

（4）蚯蚓脂肪提取。采用低沸程（30～60℃）石油醚为提取剂。将冻干粉装入滤纸袋中，放入浸提管内；向索氏提取器烧脂肪瓶中倒入1/2体积的提取剂，连接索氏提取器各部分，恒温（55℃）加热回馏4小时，得到蚯蚓粗脂肪和石油醚混合物；将混合物转移到回转蒸发仪，恒温（55℃）回收纯净石油醚，得到浓缩的蚯蚓粗脂肪和石油醚混合物；将混合物放在通风橱中，抽风挥发12小时，让残留石油醚充分挥发，得到蚯蚓粗脂肪。同时，回转蒸发仪回收得到的纯净石油醚再用于提取蚯蚓活性粗脂肪。

有益效果：

（1）依照上述方法，蚯蚓粗脂肪(F1)的产率为蚯蚓鲜重的3.6%。同时，采用高温（105℃）30分钟灭活蚯蚓，干热风（75℃）烘干蚯蚓，采用索氏提取法和相同的提取技术参数提取，蚯蚓粗脂肪（F2）产率为蚯蚓鲜重的2.2%。F1粗脂肪提取量是F2的1.64倍。

（2）采用管碟法测定蚯蚓粗脂肪对大肠杆菌的抑制效果，以自来水为对照(CK)。结果表明，CK无明显抑菌圈形成，F1抑菌圈的平均直径18.6mm，F2抑菌圈的平均直径为7.3mm，F1抑菌圈直径是F2的2.55倍。

（3）测定F1和F2的超氧化物歧化酶（SOD）活性分别为2.65 units/g.Pr和0.63units/g.Pr，F1的SOD酶活是F2的4.21倍。

案例2：

（1）蚯蚓清肠。将鲜活蚯蚓放入自来水中，让蚯蚓在自来水中会吐出吞入腔肠中的物料，自来水用量为蚯蚓体重的1倍。静置8小时，捞出蚯蚓，用流动自来清洗，去除杂物，备用。

（2）蚯蚓自溶酶解。将清肠后蚯蚓放入保温桶中，均匀加入糖制剂（蔗糖：葡萄糖：果糖=3：1：2，重量比），糖制剂加入量为鲜活蚯蚓体重的2%。强制搅拌蚯蚓体和糖制剂混合物，搅拌转速为5转/分钟，同时保持桶温45℃，让蚯蚓溶酶解12小时后用5毫米筛网过滤去除杂质，收集得到蚯蚓酶解液，备用。

（3）蚯蚓冻干。将蚯蚓酶解液放入真空冷冻干燥箱中，冷冻干燥后得到蚯蚓冻干粉，冻干粉的含水率需低于2%。

（4）蚯蚓脂肪提取。采用索氏提取法提取蚯蚓冻干粉中的脂肪。采用低沸程（30～60℃）石油醚为提取剂。将冻干粉装入滤纸袋中，放入浸提管内；向索氏提取器瓶脂肪瓶中倒入1/2体积的提取剂，连接索氏提取器各部分，恒温（45℃）加热回馏4小时，得到蚯蚓粗脂肪和石油醚混合物；将混合物转移到回转蒸发仪，恒温（45℃）回收纯净石油醚，得到浓缩的蚯蚓粗脂肪和石油醚混合物；将混合物放在通风橱中，抽风挥发12小时，让残留石油醚充分挥发，得到蚯蚓粗脂肪。同时，回转蒸发仪回收得到的纯净石油醚再用于提取蚯蚓活性粗脂肪。

有益效果：

（1）依照上述方法，蚯蚓粗脂肪(F1)的产率为蚯蚓鲜重的4.2%。同时，采用高温（105℃）30分钟灭活蚯蚓，干热风（75℃）烘干蚯蚓，采用索氏提取法和相同的提取技术参数提取，蚯蚓粗脂肪（F2）产率为蚯蚓鲜重的2.3%。F1粗脂肪提取量是F2的1.83倍。

（2）采用管碟法测定蚯蚓粗脂肪对大肠杆菌的抑制效果，以自来水为对照(CK)。结果表明，CK无明显抑菌圈形成，F1抑菌圈的平均直径17.3mm，F2抑菌圈的平均直径为6.8mm，F1抑菌圈直径是F2的2.54倍。

（3）测定F1和F2的超氧化物歧化酶（SOD）活性分别为2.43 units/g.Pr和0.61units/g.Pr，F1的SOD酶活是F2的3.98倍。

案例3：

（1）蚯蚓清肠。将鲜活蚯蚓放入自来水中，让蚯蚓在自来水中会吐出吞入腔肠中的物料，自来水用量为蚯蚓体重的2倍。静置7小时，捞出蚯蚓，用流动自来清洗，去除杂物，备用。

（2）蚯蚓自溶酶解。将清肠后蚯蚓放入保温桶中，均匀加入糖制剂（蔗糖：葡萄糖：果糖=4：2：3，重量比），糖制剂加入量为鲜活蚯蚓体重的3%。强制搅拌蚯蚓体和糖制剂混合物，搅拌转速为5转/分钟，同时保持桶温50℃，让蚯蚓溶酶解18小时后用5毫米筛网过滤去除杂质，收集得到蚯蚓酶解液，备用。

（3）蚯蚓冻干。将蚯蚓酶解液放入真空冷冻干燥箱中，冷冻干燥后得到蚯蚓冻干粉，冻干粉的含水率需低于2%。

（4）蚯蚓脂肪提取。采用索氏提取法提取蚯蚓冻干粉中的脂肪。采用低沸程（30～60℃）石油醚为提取剂。将冻干粉装入滤纸袋中，放入浸提管内；向索氏提取器脂肪瓶中倒入1/2体积的提取剂，连接索氏提取器各部分，恒温（50℃）加热回馏4小时，得到蚯蚓粗脂肪和石油醚混合物；将混合物转移到回转蒸发仪，恒温（50℃）回收纯净石油醚，得到浓缩的蚯蚓粗脂肪和石油醚混合物；将混合物放在通风橱中，抽风挥发12小时，让残留石油醚充分挥发，得到蚯蚓粗脂肪。同时，回转蒸发仪回收得到的纯净石油醚再用于提取蚯蚓活性粗脂肪。

有益效果：

（1）依照上述方法，蚯蚓粗脂肪(F1)的产率为蚯蚓鲜重的3.92%。同时，采用高温（105℃）30分钟灭活蚯蚓，干热风（75℃）烘干蚯蚓，采用索氏提取法和相同的提取技术参数提取，蚯蚓粗脂肪（F2）产率为蚯蚓鲜重的2.2%。F1粗脂肪提取量是F2的1.78倍。

（2）采用管碟法测定蚯蚓粗脂肪对大肠杆菌的抑制效果，以自来水为对照(CK)。结果表明，CK无明显抑菌圈形成，F1抑菌圈的平均直径17.8mm，F2抑菌圈的平均直径为7.2mm，F1抑菌圈直径是F2的2.47倍。

（3）测定F1和F2的超氧化物歧化酶（SOD）活性分别为2.36 units/g.Pr和0.63units/g.Pr，F1的SOD酶活是F2的3.75倍。