一种中华跌打丸鹅不食草薄层鉴别的方法

技术领域

本发明涉及中药制剂中药材的薄层鉴别领域，具体涉及一种中华跌打丸鹅不食草薄层鉴别的方法。

背景技术

中华跌打丸的处方由32味中药材组成，现行质量标准只有4味药材的薄层鉴别方法，显然无法全面控制中华跌打丸的质量。且由于药材多，有效成分较为复杂，成分之间相互影响较大，使中华跌打丸的质量控制存在一定的困难。鹅不食草在中华跌打丸中为佐使药，气味辛香，走窜经络，助诸药以活血通络，散瘀行气，其主要成分为短叶老颧草素。为了更全面地控制中华跌打丸的质量，需对中华跌打丸鹅不食草进行薄层鉴别研究，以提高中华跌打丸的质量控制水平。

《中国药典（2020年版）》《鼻舒适片质量标准研究》《鼻敏颗粒药学部分研究》等文献记载的鹅不食草薄层鉴别方法中供试品的制备方法对于成分复杂的中华跌打丸易出现有效成分提取不完全的情况。而《碧云喷雾剂定性定量方法研究》上记载的供试品制备方法操作较为复杂，且耗时较长。

中国专利 CN101236190A公开了一种辛夷鼻炎丸中鹅不食草的薄层鉴别方法，其步骤如下：取辛夷鼻炎丸成品和鹅不食草对照药材各2g，研细，加乙酸乙酯20ml，超声30分钟，放冷，滤过，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯2ml使溶解，制成供试品溶液和对照药材溶液。分别吸取供试品和对照药材溶液点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（90~120℃）-甲苯-甲酸（10:20:0.5）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，加热至斑点显色清晰。供试品色谱在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。但该方法的供试品溶液制备方法简单，而中华跌打丸为中药复方制剂，所用药材种类比辛夷鼻炎丸更多，成分之间存在相互影响，简单的提取容易存在干扰或有效成分提取不完全的情况。

发明内容

本发明的目的在于提供一种中华跌打丸鹅不食草薄层鉴别的方法，采用回流提取方法对样品进行初步处理，进一步萃取以除去水溶性杂质，减少干扰，并通过调整展开剂与显色剂，提高检测的专属性。

本发明的技术方案：一种中华跌打丸鹅不食草薄层鉴别的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1）将中华跌打丸剪碎，加入乙醇溶液回流提取后过滤，收集滤液，蒸干得到残渣；

2）残渣用水分散，再用石油醚萃取，蒸干，溶解即得供试品；

3）将供试品、阴性样品、对照药材分别点于硅胶G薄层板上，以石油醚-二氯甲烷为展开剂进行薄层色谱鉴别。

优选地，所述步骤1）中，所述乙醇溶液的体积百分比为70%~100%，用量为50~200ml。

优选地，所述步骤1）中，所述乙醇溶液的回流提取时间为0.5~3 h。

优选地，所述步骤2）中，所述水的用量为20~50 ml。

优选地，所述步骤2）中，所述石油醚的沸程规格为30~60℃或60~90℃。

优选地，所述步骤2）中，所述石油醚萃取次数为1~3次，每次15~50 ml。

优选地，所述步骤2）中，所述蒸干后使用与萃取步骤相同沸程规格的石油醚溶解。

优选地，所述步骤3）中，所述石油醚-二氯甲烷的体积比为1~2:1。

优选地，所述步骤3）中，所述石油醚的沸程规格为60~90℃。

优选地，所述步骤3）中，所述鉴别显色剂为硫酸乙醇溶液，所述鉴别条件为在90~110℃加热至斑点显色清晰。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

1、用于中华跌打丸的质量控制，确保临床用药的安全；

2、中华跌打丸为复方制剂，成分之间存在相互影响。经过本发明制备的供试品溶液能够有效对样品进行除杂，减少其他成分干扰，提高检测的准确性；

3、在薄层鉴别色谱图中，优化了展开剂和显色剂，使显色斑点清晰，具有较强的专属性。

附图说明

图1 实施例1~6各批供试品的薄层色谱图

其中，1、10为鹅不食草阴性样品溶液10μL点样量薄层色谱图，2、9分别为对照药材溶液5μL点样量薄层色谱图，3~8为实施例1~6各批供试品溶液10μL点样量薄层色谱图。

图2 不同取样量优化的薄层色谱图

其中，1为阴性样品溶液，2为对照药材溶液，3为供试品溶液-18g，4为供试品溶液-30g。

图3 不同提取方式优化的薄层色谱图

其中，1为阴性样品溶液，2为对照药材溶液，3为供试品溶液-超声，4为供试品溶液-50℃温水浴，5为供试品溶液-回流。

图4 不同萃取溶剂优化的薄层色谱图

其中，1为对照药材溶液，2为供试品溶液-石油醚（30~60℃），3为供试品溶液-石油醚（60~90℃）。

图5 不同材料薄层板优化的薄层色谱图

其中，a为G板，b为GF

图6 不同点样量优化的薄层色谱图

其中，1为阴性样品溶液，2为对照药材溶液，供试品溶液3~6的点样量分别为5μL、10μL、15μL、20μL。

图7 不同展开剂优化的薄层色谱图

其中，a为石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（1:1），b为石油醚（60~90℃）-二氯甲烷-氨水（1:1:0.01），c为石油醚（60~90℃）-三氯甲烷-乙酸乙酯（3:1:1），d为正己烷-丙酮（15:1），e为环己烷-无水乙醇（10:1）；1为阴性样品溶液，2为对照药材溶液，3为供试品溶液。

图8 不同显色剂优化的薄层色谱图

其中，a为10%硫酸乙醇溶液，b为5%磷钼酸乙醇溶液，c为2%三氯化铁乙醇溶液，d为1%三氯化铝乙醇溶液，e为1%香草醛硫酸溶液；1为阴性样品溶液，2为对照药材溶液，3为供试品溶液。

具体实施方式

下面以实施例作进一步说明，但本发明不局限于这些实施例。

实施例1

1）供试品制备：

把中华跌打丸剪碎，称取30g，加体积百分比为70%的乙醇溶液100ml，回流提取2h，过滤，滤液蒸干，加30ml水分散，用石油醚（60~90℃）充分萃取2次，每次20ml，合并石油醚（60~90℃）萃取液，蒸干，残渣加石油醚（60~90℃）1ml溶解，作为供试品溶液。

2）阴性样品制备：

取缺鹅不食草的阴性药材18g，同供试品方法制备即得缺鹅不食草阴性样品溶液。

3）对照药材制备：

取鹅不食草对照药材1g，加乙酸乙酯10ml，超声10min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解即得对照药材溶液。

4）鉴别：

吸取供试品、阴性样品、对照药材溶液分别点于硅胶G薄层板上，石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（1:1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在105℃加热至斑点显色清晰，检视方法为置日光下检视。

实施例2

1）供试品制备：

把中华跌打丸剪碎，称取30g，加体积百分比为80%的乙醇溶液150ml，回流提取2.5h，过滤，滤液蒸干，加50ml水分散，用石油醚（30~60℃）充分萃取3次，每次30ml，合并石油醚（30~60℃）萃取液，蒸干，残渣加石油醚（30~60℃）1ml溶解，作为供试品溶液。

2）阴性样品制备：

取缺鹅不食草的阴性药材18g，同供试品方法制备即得缺鹅不食草阴性样品溶液。

3）对照药材制备：

取鹅不食草对照药材1g，加乙酸乙酯10ml，超声10min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解即得对照药材溶液。

4）鉴别：

吸取供试品、阴性样品、对照药材溶液分别点于硅胶G薄层板上，石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（2:1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在90℃加热至斑点显色清晰，检视方法为置日光下检视。

实施例3

1）供试品制备：

把中华跌打丸剪碎，称取30g，加体积百分比为70%的乙醇溶液50ml，回流提取1 h，过滤，滤液蒸干，加20ml水分散，用石油醚（60~90℃）15ml充分萃取1次，收集石油醚（60~90℃）萃取液，蒸干，残渣加石油醚（60~90℃）1ml溶解，作为供试品溶液。

2）阴性样品制备：

取缺鹅不食草的阴性药材18g，同供试品方法制备即得缺鹅不食草阴性样品溶液。

3）对照药材制备：

取鹅不食草对照药材1g，加乙酸乙酯10ml，超声10min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解即得对照药材溶液。

4）鉴别：

吸取供试品、阴性样品、对照药材溶液分别点于硅胶G薄层板上，石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（1:1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在105℃加热至斑点显色清晰，检视方法为置日光下检视。

实施例4

1）供试品制备：

把中华跌打丸剪碎，称取30g，加体积百分比为90%的乙醇溶液200ml，回流提取3h，过滤，滤液蒸干，加25ml水分散，用石油醚（60~90℃）充分萃取2次，每次50ml，合并石油醚（60~90℃）萃取液，蒸干，残渣加石油醚（60~90℃）1ml溶解，作为供试品溶液。

2）阴性样品制备：

取缺鹅不食草的阴性药材18g，同供试品方法制备即得缺鹅不食草阴性样品溶液。

3）对照药材制备：

取鹅不食草对照药材1g，加乙酸乙酯10ml，超声10min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解即得对照药材溶液。

4）鉴别：

吸取供试品、阴性样品、对照药材溶液分别点于硅胶G薄层板上，石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（1.5:1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在110℃加热至斑点显色清晰，检视方法为置日光下检视。

实施例5

1）供试品制备：

把中华跌打丸剪碎，称取30g，加体积百分比为85%的乙醇溶液180ml，回流提取0.5h，过滤，滤液蒸干，加45ml水分散，用石油醚（30~60℃）40ml充分萃取1次，收集石油醚（30~60℃）萃取液，蒸干，残渣加石油醚（30~60℃）1ml溶解，作为供试品溶液。

2）阴性样品制备：

取缺鹅不食草的阴性药材18g，同供试品方法制备即得缺鹅不食草阴性样品溶液。

3）对照药材制备：

取鹅不食草对照药材1g，加乙酸乙酯10ml，超声10min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解即得对照药材溶液。

4）鉴别：

吸取供试品、阴性样品、对照药材溶液分别点于硅胶G薄层板上，石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（2:1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在98℃加热至斑点显色清晰，检视方法为置日光下检视。

实施例6

1）供试品制备：

把中华跌打丸剪碎，称取30g，加无水乙醇80ml，回流提取1 h，过滤，滤液蒸干，加35ml水分散，用石油醚（60~90℃）充分萃取2次，每次25ml，合并石油醚（60~90℃）萃取液，蒸干，残渣加石油醚（60~90℃）1ml溶解，作为供试品溶液。

2）阴性样品制备：

取缺鹅不食草的阴性药材18g，同供试品方法制备即得缺鹅不食草阴性样品溶液。

3）对照药材制备：

取鹅不食草对照药材1g，加乙酸乙酯10ml，超声10min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解即得对照药材溶液。

4）鉴别：

吸取供试品、阴性样品、对照药材溶液分别点于硅胶G薄层板上，石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（1:1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在108℃加热至斑点显色清晰，检视方法为置日光下检视。

实施例1 ~ 实施例6结果见图1。

结果可见，各批供试品溶液在与对照品薄层色谱相应位置上有一个对应的斑点，说明该薄层鉴别方法专属性强，各批样品均一性良好。

同时，本发明开展了系列条件优化，包括：取样量、提取方式、萃取溶剂、不同材料薄层板、点样量、展开剂、显色剂等。

1、取样量优化

1）供试品制备：

取中华跌打丸两份，剪碎，一份18g，一份30g，分别加体积百分比为70%的乙醇溶液100ml，85~90℃水浴回流2h，过滤，滤液蒸干，残渣加水30ml溶解，用石油醚（60~90℃）充分萃取2次，每次20ml，合并石油醚（60~90℃）液，蒸干，残渣加石油醚（60~90℃）1ml溶解，作为供试品溶液-18g和供试品溶液-30g。

2）阴性样品制备：

取缺鹅不食草阴性药粉，称取18g，同供试品方法制备即得缺鹅不食草阴性样品溶液。

3）对照药材制备：

取鹅不食草对照药材1g，加乙酸乙酯10ml，超声10min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。

4）鉴别：

吸取供试品、阴性样品、对照药材溶液分别点于硅胶G薄层板上，石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（1:1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在105℃加热至斑点显色清晰，检视方法为置日光下检视。

结果见图2，由图谱可知供试品取样量为18g的斑点比较模糊，故中华跌打丸鹅不食草薄层鉴别的供试品制备取样量为30g。

2、提取方式优化

1）供试品制备：

取中华跌打丸三份，各30g，剪碎，分别加体积比70%乙醇100ml，再分别用超声、50℃温水浴、85~90℃水浴回流处理2h，过滤，滤液蒸干，残渣加水30ml溶解，用石油醚（60~90℃）充分萃取2次，每次20ml，合并石油醚（60~90℃）液，蒸干，残渣加石油醚（60~90℃）1ml溶解，分别作为供试品溶液-超声、供试品溶液-50℃温水浴、供试品溶液-回流。

2）阴性样品制备：

取缺鹅不食草阴性药粉，称取18g，同供试品方法制备即得缺鹅不食草阴性样品溶液。

3）对照药材制备：

取鹅不食草对照药材1g，加乙酸乙酯10ml，超声10min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。

4）鉴别：

吸取供试品、阴性样品、对照药材溶液分别点于硅胶G薄层板上，石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（1:1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在105℃加热至斑点显色清晰，检视方法为置日光下检视。

结果见图3，供试品-回流的斑点比供试品-超声、供试品-50℃温水浴的斑点清晰，故确定中华跌打丸鹅不食草薄层鉴别的提取方式为回流提取。

3、萃取溶剂优化

1）供试品制备：

取中华跌打丸两份，各30g，剪碎，分别加体积百分比为70%的乙醇溶液100ml，回流2h，过滤，滤液蒸干，残渣加水30ml溶解，对应使用石油醚（30~60℃）、石油醚（60~90℃）分别萃取2次，每次20ml，各自合并石油醚（30~60℃）、石油醚（60~90℃）液，蒸干，残渣各自加石油醚（30~60℃）、石油醚（60~90℃）1ml溶解，即得供试品溶液-石油醚（30~60℃）和供试品溶液-石油醚（60~90℃）。

2）对照药材制备：

取鹅不食草对照药材1g，加乙酸乙酯10ml，超声10min，过滤，滤液蒸干，残渣加乙酸乙酯1ml溶解，作为对照药材溶液。

3）鉴别：

吸取供试品、对照药材溶液分别点于硅胶G薄层板上，石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（1:1）为展开剂，10%硫酸乙醇溶液为显色剂，在105℃加热至斑点显色清晰，检视方法为置日光下检视。

结果见图4，由图谱可知石油醚（30~60℃）和石油醚（60~90℃）均可用作中华跌打丸鹅不食草薄层鉴别的供试品萃取溶剂。

4、不同材料薄层板优化

取中华跌打丸鹅不食草供试品溶液、阴性样品溶液及对照药材溶液分别用硅胶G板、H板和GF

结果见图5，由图谱可知三种不同材料薄层板的斑点均清晰明显，综合考虑成本等因素，本方法选择硅胶G板。

5、点样量优化

取中华跌打丸鹅不食草供试品溶液、阴性样品溶液及对照药材溶液，采用不同点样量点于同一硅胶G薄层板上，进行点样量的考察。

结果见图6，供试品溶液点样量为5μL时，斑点不清晰；供试品溶液点样量为10μL时，斑点比较清晰；供试品溶液点样量15μL、20μL时，斑点底色较重。因此，选择供试品溶液的点样量为10μL。

6、展开剂优化

取中华跌打丸鹅不食草供试品溶液、阴性样品溶液及对照药材溶液点于同一硅胶G薄层板上，分别采用不同的展开剂进行展开，考察不同的展开剂对薄层分离效果的影响。

结果见图7，由图谱可知石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（1:1）、石油醚（60~90℃）-二氯甲烷-氨水（1:1:0.01）均可作为中华跌打丸鹅不食草薄层鉴别的展开剂，但石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（1:1）展开效果较好且更为稳定，故采用石油醚（60~90℃）-二氯甲烷（1:1）为展开剂。

7、显色剂优化

取中华跌打丸鹅不食草供试品溶液、阴性样品溶液及对照药材溶液点于同一硅胶G薄层板上，展开，分别用不同显色剂显色，考察不同显色剂对薄层鉴别效果的影响。

结果见图8，由图谱可知：5%磷钼酸乙醇溶液显色底色较重，采用10%硫酸乙醇溶液、2%三氯化铁乙醇溶液、1%香草醛硫酸溶液显色均能对中华跌打丸鹅不食草进行鉴别，而10%硫酸乙醇溶液、1%香草醛硫酸溶液显色效果更好。由于1%香草醛硫酸溶液所用的硫酸量大而危险性较高，故采用10%硫酸乙醇溶液显色。

虽然上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。