治疗腰椎间盘突出症的中成药、制备方法及用途

技术领域

本发明涉及中药制剂技术领域，特别是涉及一种治疗腰椎间盘突出症的中成药、制备方法及用途。

背景技术

腰椎间盘突出症，是在腰椎间盘退变的基础上，纤维环破裂髓核突出进而压迫和刺激神经根所引起的一系列症状和体征的疾病。腰椎间盘突出症是临床上最常见的疾病之一，是脊柱科的常见病、多发病。腰椎间盘突出症的治疗方法很多，目前可分为非手术治疗和手术治疗。中医在非手术治疗方面疗效显著，发挥着独特的重要作用，是非手术治疗的常用方法。肝肾亏虚、筋骨失养是其发病的内在因素，风、寒、热、湿、瘀邪闭阻经络是发病外在因素，故临床常以补益肝肾、祛邪通络为主要治法。

舒筋健腰丸是独家批文品种，由狗脊、金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎、牛大力、女贞子、桑寄生、菟丝子、延胡索、两面针、乳香、没药共13味中药组成。功能主治为补益肝肾，强健筋骨，驱风除湿，活络止痛；用于腰膝酸痛。现执行标准为：《中华人民共和国卫生部药品标准中药成方制剂》第十二册(标准编号：WS3-B-2441-97)，【制法】为：狗脊、金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎的木部加水煎煮二次，滤过，合并滤液，浓缩成稠膏；其余牛大力等八味及黑老虎的皮部共粉碎成粗粉，加入上述稠膏，混匀，干燥，粉碎成细粉，过筛，混匀，粉末中加入适量炼蜜和水制丸，用活性炭包衣，干燥，打光，即得。临床服用量大，一次5克，一日3次。部分患者反馈服用舒筋健腰丸后出现恶心、呕吐等胃肠道不适症状。

糖尿病是一种以胰岛素分泌缺陷、胰岛素抵抗或两者并存所致的高血糖为特征的慢性代谢性疾病。2019年国际糖尿病联盟公布的流行病学调查数据显示，全球20～79岁成年人中约有4.63亿人诊断为糖尿病，发病率高达9.3％，其中，我国糖尿病患者高达1.16亿，是全球糖尿病患者最多的国家。糖尿病患者需要长期良好控制血糖，降低并发症的风险。由于舒筋健腰丸是浓缩水蜜丸，其中含约30％蜂蜜，糖尿病患者不宜长期服用。

发明内容

基于此，有必要针对上述问题，提供一种治疗腰椎间盘突出症的中成药及其制备方法，在原有的中药组合物基础上，对其制备方法进行改进，对乳香、没药、黑老虎皮部提取挥发油包合，减少对胃肠道的刺激；增加药效成分纯化富集，减少服用量，提高患者依从性；制成无糖制剂，增加糖尿病患者适用人群。

一种治疗腰椎间盘突出症的中成药的制备方法，包括以下重量份的原料及以下步骤：

制备稠膏1：将400-800份狗脊进行水回流提取，过滤，得提取液，将提取液加入大孔吸附树脂柱中进行吸附，待提取液全部通过大孔树脂后，用水冲洗树脂，至水洗脱液无色，续用一定浓度乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩成稠膏；

制备稠膏2：将130-350份牛大力、100-300份金樱子、300-450份鸡血藤、100-200份千斤拔、300-500份黑老虎(其中的木部)、10-60份两面针、100-300份桑寄生加水浸泡，煎煮，过滤，收集滤液，浓缩成稠膏；

制备细粉：将10-60份女贞子、10-60份菟丝子、10-60份延胡索粉碎成细粉；

制备挥发油包合物：将上述黑老虎的皮部破碎(10-20目)，加水浸泡，加热提取，收集黑老虎挥发油，10-30份乳香(制)、4-30份没药(制)加水浸泡，加热提取，收集乳香、没药挥发油；黑老虎挥发油和乳香、没药挥发油混合，包合，得挥发油包合物。

制备稠膏3：将上述黑老虎皮部提取挥发油后的水提液过滤，收集滤液，浓缩成稠膏；

混合：将所述稠膏1、稠膏2、稠膏3、细粉和挥发油包合物混合，即得所述中成药的混合物。

可以理解地，黑老虎“木部”是指黑老虎药材的木质部，黑老虎“皮部”主要是黑老虎药材的韧皮部。黑老虎“皮部”、“木部”用粉碎机械可分离。

上述制备方法，对原舒筋健腰丸中的狗脊、牛大力、两面针、桑寄生、黑老虎皮部、乳香(制)和没药(制)等原料药的有效成分提取方法进行了改进。狗脊为蚌壳蕨科植物金毛狗脊(Cibotium barometz(L.)J.Sm.)的干燥根茎，具有强腰膝、补肝肾、祛风湿的功效，含有山奈素、金粉蕨素等丰富的黄酮类化合物。牛大力为豆科崖豆藤属植物美丽崖豆藤(Millettia specisoa Champ.)的干燥根，具有补虚润肺，强筋活络的功效，在两广地区被广泛用作煲汤的原料，其主要化学成分为牛大力多糖、总黄酮、生物碱等,现代药理研究发现其具有提高免疫功能、抗疲劳、抗氧化、抗炎等作用。两面针为芸香科植物两面针(Zanthoxylum nitidum(Roxb.)DC.)干燥根，具有活血化瘀，行气止痛，祛风通络，解毒消肿的功效，研究表明两面针具有抗菌、抗炎、抗肿瘤等多种作用，其生物碱类成分具有消炎、镇痛、抑制溃疡、抗肿瘤等作用，是两面针的主要药效成分。桑寄生为桑寄生科植物桑寄生(Taxillus chinensis(DC.)Danser.)的干燥带叶茎枝，有补肝肾，强筋骨，除风湿，通经络，益血，安胎的功效。乳香为橄榄科乳香树(Boswellia carterii Birdw.)及同属植物(Boswellia hhaw-dajiana Birdw.)树皮渗出树脂，没药为橄榄科植物地丁树(Commiphoramyrrha Engl.)及哈地丁树(Commiphora molmol Engl.)的干燥树脂，常见于活血化瘀、舒筋通络处方中，现代药理作用也非常显著，具有抗炎、镇痛、抗癌等药理活性。黑老虎为木兰科南五味子属(Kadsura coccinea(Lem.)A.C.Smith)的干燥根，黑老虎皮部挥发油是黑老虎重要药效成分，具有行气、活血、祛风、止痛的功效，但其在制剂过程中容易高温损失。由于临床患者反馈服用舒筋健腰丸后对胃肠道有一定的刺激性，在工艺改良中，去掉半数致死量更小、毒性更强的乳香、没药的水提液，将黑老虎、乳香、没药挥发油用β-环糊精包合后入药，以期降低舒筋健腰丸的刺激性，同时提高挥发油稳定性、增加溶解度、提高生物利用度、掩盖挥发油气味等，提高患者的使用依从性。本发明的舒筋健腰丸(浓缩水丸)是无糖剂型，可适用于糖尿病人群。

在其中一个实施例中，原料药及重量为：狗脊360.0kg、金樱子115.2kg、鸡血藤216.0kg、千斤拔86.4kg、黑老虎216.0kg、牛大力144.0kg、女贞子18.0g、桑寄生108.0kg、菟丝子18.0kg、延胡索15.6kg、两面针15.6kg、乳香7.2kg、没药12.0kg。

在其中一个实施例中，所述制备稠膏1步骤具体为：对狗脊进行回流提取1-3次，单次回流提取的时间为1-3h，过滤，合并滤液，得提取液,将提取液加入大孔吸附树脂柱中进行吸附，待提取液全部通过大孔树脂后，用水冲洗树脂，至水洗脱液无色，用3-5倍柱体积的50-80％乙醇溶液进行洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩成稠膏。优选的，大孔吸附树脂型号为D101。

在其中一个实施例中，所述制备稠膏1步骤具体为：用水溶液对狗脊进行回流提取2次，过滤，合并滤液，得提取液，将提取液以3BV/h的流速加入D101大孔吸附树脂柱中进行吸附，用5倍柱体积的水溶液以4BV/h的流速进行清洗，用3倍体积的70％乙醇溶液以3BV/h的流速进行洗脱，收集洗脱液，浓缩成稠膏。

在其中一个实施例中，所述制备稠膏2步骤具体为：牛大力药材破碎过5-12目筛网后和金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎的木部、桑寄生、两面针一起加水浸泡0.5-3h，加水量为固体质量的8-12倍，煎煮1-3次，单次煎煮时间为2-4h，过滤，合并滤液，浓缩成稠膏。

在更优选的实施例中，所述制备稠膏2步骤具体为：将牛大力破碎过8目筛网，与金樱子、鸡血藤、千斤拔、黑老虎的木部、两面针、桑寄生第一次加8倍水，浸泡1小时，提取4小时，第二次加6倍水，提取2小时，过滤，合并滤液，浓缩成稠膏。

在实施例中，所述制备稠膏3步骤具体为：将黑老虎皮部提取挥发油后的水提液过滤，收集滤液，浓缩成稠膏。

在其中一个实施例中，所述制备挥发油包合物步骤中，黑老虎的皮部破碎过10-20目筛网，加水浸泡0.5-1h，加热提取4-10h，收集挥发油。乳香、没药加水浸泡0.5-1h，加热提取6-15h，收集挥发油。黑老虎、乳香、没药挥发油混合，β-环糊精饱和水溶液法包合或研磨法包合。

在其中一个实施例中，所述制备挥发油包合物步骤中，黑老虎、乳香、没药混合挥发油与β-环糊精的比例为1:6-10，包合温度为20-50℃，包合时间为10min-3h。

在其中一个实施例中，制备挥发油包合物步骤具体为：黑老虎的皮部破碎过20目筛网，加8倍水浸泡0.5h，加热提取6h，收集黑老虎挥发油；乳香(制)、没药(制)加8倍水浸泡0.5h，加热提取9h，收集乳香、没药挥发油；黑老虎挥发油和乳香、没药挥发油混合，加入等量乙醇混合均匀，与β-环糊精按1:10比例，30℃包合1h，冷却至室温，将包合物溶液抽滤，将滤饼置于50℃真空干燥箱中干燥5h，得黑老虎、乳香、没药混合挥发油β-环糊精包合物。

在其中一个实施例中，所述制备细粉步骤具体为：将女贞子、菟丝子、延胡索粉碎成细粉。

在其中一个实施例中，所述制备方法还包括制剂步骤：将所述中成药的混合物进行制剂，得到丸剂、胶囊或片剂。

在其中一个实施例中，所述丸剂的制备通过以下方法得到：细粉、挥发油包合物、适量淀粉和微晶纤维素混匀，再加入稠膏1、稠膏2和稠膏3，混匀，制丸，用活性炭包衣，干燥，打光，即得舒筋健腰丸(浓缩水丸)。

本发明提供了一种由上述制备方法得到的中成药。该中成药相比于用现有工艺制备得到的中成药，减少对胃肠道的刺激，服用量更少，对治疗腰椎间盘突出症具有更好的效果，增加糖尿病患者适用人群。

本发明还提供了一种由上述制备方法得到的中成药在制备治疗腰椎间盘突出症药物中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

本发明的制备方法，对原舒筋健腰丸中的狗脊、牛大力、两面针、桑寄生、黑老虎皮部、乳香(制)和没药(制)等原料药的有效成分提取方法进行了改进。(1)狗脊水提，再用大孔树脂高效富集提取液中的黄酮类有效物质，提高有效物质含量。(2)牛大力、两面针和桑寄生由药材粉碎入药改为水提取。牛大力提取前先破碎，过5-12目筛网，此时牛大力多糖水提的转移率达80.0％，刺桐碱转移率为68.1％，总黄酮转移率为67.8％。两面针水提取后在成品舒经健腰丸(浓缩水丸)中检测出两面针碱。(3)黑老虎皮部挥发油是黑老虎重要药效成分。在斑马鱼的半数致死量实验中，乳香挥发油的半数致死量浓度大于乳香水提液，没药挥发油的半数致死量浓度大于没药水提液，乳香挥发油和没药挥发油的安全性高于其药材水提液，因此在工艺改良中，去掉乳香、没药的水提液。将黑老虎皮部、乳香、没药三种药材的挥发油用β-环糊精包合后入药，降低舒筋健腰丸对胃肠道的刺激性，同时提高挥发油稳定性、增加溶解度、提高生物利用度、掩盖挥发油气味等，提高患者的使用依从性。(4)该方法制备得到的舒筋健腰丸(浓缩水丸)是稠膏直接加药粉及辅料制丸，不需要稠膏干燥后粉碎再制丸，因此相比原舒筋健腰丸的能耗更低，产程更短，生产效率更高。(5)本发明得到的舒筋健腰丸(浓缩水丸)不加蜂蜜作为粘合剂，适合糖尿病症状的腰膝酸痛患者长期服用。(6)本发明的舒筋健腰丸(浓缩水丸)每次服用1g(原制剂每次服用5g)，服用剂量更少，患者依从性好。(7)本发明的舒筋健腰丸(浓缩水丸)对治疗腰椎间盘突出症有效，在改善背根神经疼痛方面效果更好。

附图说明

图1为挥发油薄层色谱图；

其中，A、乳香挥发油，B、没药挥发油，C、黑老虎挥发油，D、混合挥发油包合物超声提取液。

图2为斑马鱼经钙黄绿素活体染色图；

其中，提取物11为黑老虎、乳香、没药混合挥发油β-环糊精包合物，提取物15为黑老虎、乳香、没药混合挥发油。

图3为舒筋健腰丸(浓缩水丸)刺桐碱TIC叠图；

其中，S1：刺桐碱、S2：牛大力药材、S3：舒筋健腰丸(浓缩水丸)、S4：舒筋健腰丸(浓缩水丸牛大力阴性)。

图4为舒筋健腰丸(浓缩水丸)两面针碱TIC叠图。

具体实施方式

为了便于理解本发明，下面将结合较佳的实施例对本发明进行更全面的描述。但是，本发明可以以许多不同的形式来实现，并不限于本文所描述的实施例。相反地，提供这些实施例的目的是使对本发明的公开内容的理解更加透彻全面。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。

实施例1

工艺条件筛选实施例

1狗脊提取方法筛选

1.1狗脊水提取液和乙醇洗脱液的总黄酮检测方法

标准品溶液的配制：精密称取芦丁标准品20mg，用60％乙醇溶解并定容于100mL容量瓶中，摇匀。

标准曲线的制备：分别精密量取芦丁标准液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，置于25mL容量瓶中，加入2.0mL30％乙醇和1.0mL5％NaNO

狗脊总黄酮的含量测定：精密量取狗脊水提取液或乙醇洗脱液适量，置于25mL容量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入2.0mL30％乙醇”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的量，计算，即得。

1.2狗脊工艺筛选

1.2.1狗脊回流提取次数的选择

称取300g狗脊，提取3次，第一次加8倍水、第二次加6倍水、第三次加6倍水，每次提取2h，收集每次提取液，测定提取液中的总黄酮含量，见表1。

表1提取次数的确定

根据试验结果，第三次提取液中，总黄酮的提取率比较低，因此，选择提取次数为2次。

1.2.2回流提取加水倍数选择

称取300g狗脊各3份，加(6倍，4倍)、(8倍，6倍)、(10倍，8倍)水提取2次，每次2h，合并提取液，测定提取液中的总黄酮含量，见表2。

表2加水倍数的确定

根据实验结果，(8倍，6倍)和(10倍，8倍)提取总黄酮提取率差异较小，考虑生产能耗，选择加水倍数为8倍、6倍。

1.2.3回流提取时间的选择

称取300g狗脊各3份，提取2次，第一次加8倍量水，第2次加6倍量水，提取时间为(0.5h、0.5h)、(1h、1h)、(2h、2h)，测定提取液中的总黄酮含量，见表3。

表3回流提取时间确定

根据实验结果，提取2次，第一次加8倍量水提取2h，第2次加6倍量水提取2h，总黄酮提取更充分。

1.2.4洗脱乙醇浓度选择

取上述按最佳提取工艺提取的药液100mL各3份，分别上样于已处理好的湿体积为130mL的3根D101树脂柱，上样吸附，然后用5倍柱体积的水溶液进行清洗至流出液无色，分别用3倍柱体积的50％乙醇、70％乙醇、85％乙醇洗脱，当流出液体颜色明显变深时开始收集洗脱液，测定收集的乙醇洗脱液的总黄酮含量，结果见表4。

表4洗脱乙醇浓度确定

根据试验结果，乙醇浓度在70％和85％洗脱，总黄酮含量高，且相差不大，考虑成本，70％乙醇最佳。

1.2.5大孔吸附树脂型号的选择

取上述按最佳工艺方法提取的药液100mL各4份，分别上样于已处理好的湿体积为130mL的4种不同类型树脂柱，上样吸附，然后用5倍柱体积的水溶液以4BV/h的流速进行清洗，分别用3倍柱体积的70％乙醇洗脱，测定收集的乙醇洗脱液的总黄酮含量，结果见表5。

表5大孔吸附树脂型号的确定

根据试验结果4种大孔树脂的吸附率由高到低依次为D101>FL-3>AB-8>HPD100，优选大孔吸附树脂D101型号。

1.2.6洗脱乙醇用量选择

取上述按最佳提取工艺提取的药液100mL各3份，分别上样于已处理好的湿体积为130mL的3根D101树脂柱，上样吸附，然后用5倍柱体积的水溶液进行清洗至流出液无色，分别用2倍、3倍、5倍柱体积的70％乙醇洗脱，当流出液体颜色明显变深时开始收集洗脱液，测定收集的乙醇洗脱液的总黄酮含量，结果见表6。

表6洗脱乙醇浓度确定

根据试验结果，3倍柱体积70％乙醇洗脱，总黄酮基本洗脱完全。

1.2.7狗脊水提液过D101大孔树脂柱前后干膏收率

称取300g狗脊，提取2次，第一次加8倍量水回流提取2h，第2次加6倍量水回流提取2h，合并滤液，取滤液100mL2份，分别加入蒸发皿中蒸干，测得平均干膏2.19g，干膏收率为25.9％；另取滤液100mL各2份，分别加入已处理好的湿体积为130mL的D101大孔树脂柱吸附，加5倍柱体积水溶液进行清洗至流出液无色，3倍柱体积70％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，蒸干，测得平均干膏0.63g，干膏收率为7.5％。

由上述实验可确定狗脊总黄酮最佳富集工艺条件为：狗脊回流提取2次，第一次加8倍水，第二次加6倍水，每次提取2h，提取液过D101大孔树脂柱吸附，5倍柱体积水溶液进行清洗至流出液无色，3倍柱体积70％乙醇溶液洗脱，收集洗脱液，减压回收乙醇，浓缩成浸膏。

2牛大力水提取工艺考察

2.1检测方法(结果均换算为每1g牛大力所得各成分的量)

2.1.1牛大力多糖检测

2.1.1.1牛大力药材多糖的含量测定

供试品溶液的制备：取牛大力粉末(过四号筛)5g，精密称定，至500mL圆底烧瓶中，精密加入蒸馏水320mL，称定重量，加热回流106min，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，过滤，精密吸取滤液5mL，精密加入无水乙醇20mL，不断搅拌使之成为含醇量达80％溶液，得到均匀乳白色沉淀，放入冰箱静置过夜，离心，沉淀用沸水溶解至50mL容量瓶中，定容。

试剂配制：精密称取10g苯酚，加入200mL水使溶解，混匀，得到5％苯酚溶液，棕色瓶保存。

对照品溶液制备：精密称取无水葡萄糖10mg，加水定容至100mL，摇匀，即得。

标准曲线的制备：分别精密量取0.1mg/mL的葡萄糖标准溶液0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7、0.8、0.9mL置于10mL具塞试管中，依次加水使体积为1.0mL，空白对照为1.0mL水，各加5％的苯酚溶液1.0mL，充分振摇混匀，再迅速加入浓硫酸6.0mL，振摇，室温静置30min，于490nm波长处测定吸收值(A)，以葡萄糖对照品浓度(C)为横坐标，A为纵坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液含量测定：取1mL供试品溶液，照标准曲线的制备项下的方法，自“各加入5％苯酚溶液1.0mL”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中多糖的量，计算，即得。

2.1.1.2提取液多糖的含量检测

取提取液适量，按上述方法检测。

2.1.2牛大力总黄酮测定

2.1.2.1牛大力药材总黄酮的含量测定

供试品溶液的制备：精密称取牛大力药材粉末(过四号筛)10g，超声提取2次，每次加入80％乙醇200mL，提取60分钟，静置过滤，合并滤液，减压浓缩，用80％乙醇定容至25mL。

标准品溶液的配制：精密称取芦丁标准品20mg，用60％乙醇溶解并定容于100mL容量瓶中，摇匀。

标准曲线的制备：分别精密量取芦丁标准液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0mL，分别置于25mL容量瓶中，加入2.0mL30％乙醇和1.0mL5％NaNO

牛大力药材总黄酮的含量测定：精密量取供试品溶液0.2mL，置于25mL容量瓶中，照标准曲线的制备项下的方法，自“加入2.0mL30％乙醇”起，依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中总黄酮的量，计算，即得。

2.1.2.2提取液总黄酮的含量检测

将提取液浓缩至浸膏，取浸膏适量，按上述方法检测。

2.1.3牛大力中刺桐碱的测定

2.1.3.1牛大力药材刺桐碱的含量测定(QDA测定)

供试品制备方法：取牛大力粉末1g(过四号筛)，精密称定，置100mL锥形瓶中，精密加入50％乙醇50mL，称定重量，超声提取40min，放冷至室温，用50％乙醇补足重量，摇匀，滤过，即得。

对照品溶液的制备：精密称取1.50mg刺桐碱于25mL容量瓶，用甲醇溶解，定容，即得。

色谱条件：色谱柱xBridge Amide(250mm×4.6mm，3.5μm)，以乙腈为流动相A，0.1％甲酸水溶液为流动相B，按下表进行梯度洗脱：仪器：waters ARC超高效液相色谱仪；检测器：ACQUITY QDa质谱检测器；检测波长为280nm；流速为0.5mL/min；柱温为30℃。进样量2μl。

表7洗脱条件

2.1.3.2提取液刺桐碱的含量测定

将提取液浓缩至浸膏，取浸膏适量，按上述方法检测。

2.2试验方法

2.2.1牛大力药材粒度大小对提取的影响

称取2份牛大力药材各300g，分别为常规饮片、破碎料(8目筛)，分别加水提取2次，加水量为8倍，6倍，提取时间为4小时，2小时，滤过，合并滤液。测定提取液中多糖、总黄酮、刺桐碱含量，结果见表8。

表8药材粒度的确定

根据实验结果，破碎料(8目筛)牛大力多糖、总黄酮、刺桐碱等成分提取更充分。

2.2.2牛大力药材提取次数选择

称取1份牛大力破碎料(8目筛)300g，加水提取3次，第一次加8倍水，浸泡1小时，提取4小时，第二次加6倍水，提取2小时，第3次加6倍水，提取2小时，分别滤过，收集滤液，测定多糖、总黄酮、刺桐碱含量，结果见表9。

表9提取次数考察

根据试验结果，第三次提取液中，各成分的提取率都比较低，因此，选择提取次数为2次。

2.2.3牛大力药材提取时间选择

称取3份牛大力破碎料(8目筛)各300g，分别加水提取2次，加水量为8倍，6倍，提取时间分别为(1小时，1小时)、(2小时，2小时)、(4小时，2小时)，分别滤过，合并2次滤液。测定多糖、总黄酮、刺桐碱含量，结果见表10。

表10提取时间的考察

根据试验结果，提取时间(2小时，2小时)和(4小时，2小时)牛大力各成分的提取率没有明显差异。

2.2.4牛大力水提多糖、总黄酮、刺桐碱转移率

按牛大力药材各成分含量测定方法测定药材中多糖、总黄酮、刺桐碱含量，计算转移率。结果见表11。

表11牛大力水提转移率情况

由上表可知，牛大力水提多糖的转移率为80.0％，总黄酮转移率为67.8％，刺桐碱转移率为68.1％。

3黑老虎提取挥发油工艺筛选

3.1粉碎度对黑老虎皮挥发油提取的影响

分别称取黑老虎皮不破碎料、黑老虎皮破碎料(10目筛网)、黑老虎皮破碎料(20目筛网)各300g，分别置5000mL圆底烧瓶中，加10倍水，与挥发油测定器连接，浸泡0.5小时，加热提取5小时，挥发油提取量分别为0.62mL、2.15mL、4.25mL。黑老虎皮破碎料(20目)挥发油提取量明显高于黑老虎皮不破碎料、黑老虎皮破碎料(10目筛网)，故优选黑老虎皮破碎料(20目筛网)进行提取。

3.2加水量对黑老虎皮挥发油提取的影响

称取黑老虎皮破碎料(20目筛网)300g，共3份，置5000mL圆底烧瓶中，分别加入8倍、10倍、12倍水，与挥发油测定器连接，浸泡0.5小时，加热提取5小时，挥发油提取量分别为4.15mL，4.08mL，4.25mL。加水量对黑老虎皮挥发油提取影响较小，故选择8倍水进行提取。

3.3黑老虎皮挥发油提取时间的确定

称取黑老虎皮破碎料(20目筛网)300g，置5000mL圆底烧瓶中，加入8倍水，与挥发油测定器连接，浸泡0.5小时，加热提取，每隔1小时记录挥发油提取量，记录数据如表12。

表12不同提取时间黑老虎皮挥发油提取量

由表12可知，提取6小时后，黑老虎皮提取的挥发油量增加很少，表明提取6小时即可。

由上述实验可确定黑老虎皮挥发油提取工艺为：黑老虎皮破碎料(20目筛网)，加8倍水，浸泡0.5小时，加热提取6小时。

4乳香、没药提取挥发油工艺筛选

4.1加水量对乳香、没药挥发油提取的影响

按处方比例称取乳香48g，没药80g，共3份，置2000mL圆底烧瓶中，分别加入8倍、10倍、12倍水，与挥发油测定器连接，浸泡0.5小时，加热提取6小时，挥发油提取量分别为3.62mL，3.64mL，3.63mL。加水量对乳香、没药挥发油提取影响较小，故选择8倍水进行提取。

4.2乳香、没药挥发油提取时间的确定

按处方比例称取乳香48g，没药80g，置2000mL圆底烧瓶中，加入8倍水，与挥发油测定器连接，浸泡0.5小时，加热提取，每隔1小时记录挥发油提取量，记录数据如表13。

表13不同提取时间乳香、没药挥发油提取量

由表13可知，提取9小时后，乳香、没药提取的挥发油量增加很少，表明提取9小时即可。

由上述实验可确定乳香、没药挥发油提取工艺为：乳香、没药加8倍水，浸泡0.5小时，加热提取9小时。

5黑老虎、乳香、没药混合挥发油的包合工艺研究

5.1挥发油制备

黑老虎挥发油：称量2880g黑老虎，皮部、木部分离，皮部破碎(20目筛网)，加8倍水，浸泡0.5小时，加热提取6小时，收集挥发油。

乳香、没药挥发油：称量96g乳香(制)、160g没药(制)，加8倍水，浸泡0.5小时，加热提取9小时，收集挥发油。

黑老虎挥发油和乳香、没药挥发油混合，加入无水硫酸钠除去挥发油中的水分，将除水后的挥发油置于4℃冰箱中冷藏，得混合挥发油。

5.2挥发油的配制

精密量取黑老虎、乳香、没药混合挥发油，并精密量取混合挥发油等量的无水乙醇，加入混合挥发油中，混合均匀。

5.3黑老虎、乳香、没药混合挥发油β-环糊精包合物制备方法

称取实验所需量β-环糊精，置于锥形瓶中，量取10倍量蒸馏水加入β-环糊精中，磁力搅拌器加热至60℃并搅拌至β-环糊精溶解，降温至实验所需温度，制成β-环糊精饱和水溶液。精密量取2mL黑老虎、乳香、没药混合挥发油配制液，在搅拌状态下，缓慢加入β-环糊精饱和水溶液中，加橡皮塞。将黑老虎、乳香、没药混合挥发油β-环糊精包合物溶液冷却至室温，放于4℃冰箱中，冷藏过夜。将包合物溶液抽滤，滤饼置于50℃真空干燥箱中，干燥3.5h，取出轻压成粉末状，用20mL石油醚Ⅰ抽滤洗涤，重复3次，再将其置于50℃烘箱中，干燥0.5h，得黑老虎、乳香、没药混合挥发油β-环糊精包合物。

5.4黑老虎、乳香、没药混合挥发油β-环糊精包合物制备工艺确定

选取包合时间(h)、环糊精与挥发油的比例(g/mL)、包合温度(℃)三个考察因素，每个因素中分别选定3个水平，根据L

表14正交因素水平表

评价指标：包合率(％)＝(挥发油回收量)/(挥发油加入量*空白回收率)*100％

挥发油回收量：将混合挥发油β-环糊精包合物样品加入1000mL的圆底烧瓶中，加入500mL蒸馏水，并加入沸石，水蒸气蒸馏法提取2h，静置1h后准确读数。

空白回收率：用移液管准确量取2mL混合挥发油，加入1000mL的圆底烧瓶中，加入500mL蒸馏水，加入沸石，水蒸气蒸馏法提取2h，静置1h后准确读数，分别取3次样品测定3次，测得空白回收率平均值。空白回收率(％)＝(混合挥发油实际回收量)/(混合挥发油加入量)*100％。

正交实验结果见表15，结果方差分析表见表16。

表15正交实验结果

表16方差分析表

注：F

从K值得出，A

对实验结果的包合率方差结果分析，由于包合时间没有显著性影响(p<0.05)，结合生产节能的考虑，进一步优化上述包合条件，比较1.5h，1:10，30℃与1h，1:10，30℃包合条件下的包合率。1.5h，1:10，30℃条件下的包合率80％，1h，1:10，30℃条件下的包合率为79.5％，此条件下的包合率非常接近，因此综合考虑生产成本及生产效益，选择1h，1:10，30℃包合条件为最佳条件。

对1h，1:10，30℃包合条件进行复核验证，包合率分别为79.5％、80％、79％，RSD为0.62％。表明在此包合条件下，包合率稳定；包合率高，表明此包合方法稳定可行。

5.5包合物中黑老虎、乳香、没药挥发油的特征薄层斑点

取混合挥发油包合物1g，加10mL甲醇超声30min，取上清液，作为包合物供试品。分别取100μL黑老虎挥发油、没药挥发油、乳香挥发油，用石油醚定容至10mL，作为黑老虎挥发油对照溶液、没药挥发油对照溶液、乳香挥发油对照溶液。照薄层色谱法(《中国药典》2015年版四部通则0502)试验，吸取上述溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙醚(4：1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷5％香草醛浓硫酸乙醇溶液，105℃加热显色，日光灯下检视。结果见图1薄层色谱图。

如图1所示，A、B、C、D分别为乳香挥发油、没药挥发油、黑老虎挥发油、混合挥发油包合物的薄层斑点。从薄层色谱图可以得出，a框中的斑点为没药挥发油特征斑点，b框中的斑点为黑老虎挥发油特征斑点。

6乳香、没药水提液与挥发油毒性研究

6.1实验材料与仪器

甲基纤维素、三卡因均购于南京化学试剂一厂，苯甲基磺酰氟(碧云天生物技术研究所)，丰年虾(天津丰年水产养殖有限公司)，AB野生型斑马鱼(国家斑马鱼资源中心)，三蒸水(实验室自制)。

6.2实验方法

6.2.1斑马鱼喂养与繁殖

根据《The Zebrafish Book》中所指导的方式方法对斑马鱼进行喂养，喂养环境水温保持28.5℃，每日光照时间保持14h，早晚各喂一次丰年虾。确定胚胎收集时间后的前一天晚上，在产卵缸中设置隔板，在前一天的晚上将等量雄性、雌性斑马鱼放置到产卵缸中隔板的两边。在正常光照、饲养要求条件下，于22:30关闭灯源，并在第二天早上8:30重新开启光源。此时可将产卵缸中的隔板抽离，让雄性、雌性斑马鱼进行接触。30min后可以在产卵缸中收集斑马鱼胚胎，在使用Egg water进行清洗后放置到28.5℃的光照培养箱中进行饲养。

6.2.2半数致死量实验

观察收集的斑马鱼胚胎，显微镜观察挑选得到发育正常1dpf(day postfertilization)的斑马鱼胚胎，每组给药乳香水提液、乳香挥发油、没药水提液、没药挥发油均为30个胚胎，置于24孔板中，每孔10个胚胎，每孔2.0mL溶液，用培养基做空白对照，每24h更换药液。统计不同给药量的乳香水提液、乳香挥发油、没药水提液、没药挥发油给药24h、48h、72h、96h、120h后斑马鱼胚胎/幼鱼的死亡率，计算其半数致死量。

6.3实验结果

乳香、没药水提液和挥发油半数致死量见表17。

表17半数致死量(mg/mL)

在给药时间为48h、72h、96h时，乳香挥发油的半数致死量大于乳香水提液；给药时间为48h、72h、96h、120h时，没药挥发油的半数致死量大于没药水提液。在给药48h时，乳香挥发油半数致死量是乳香水提液半数致死量16倍，在给药48h时，没药挥发油半数致死量是没药水提液半数致死量4.7倍。由此可见，乳香挥发油和没药挥发油的安全性明显高于其药材水提液。

在本发明中，去掉乳香、没药的水提液，以乳香、没药挥发油入药。

7黑老虎、乳香、没药混合挥发油和包合物对斑马鱼胃肠道刺激性研究

7.1材料与仪器

钙黄绿素、阿尔新蓝购于上海麦克林生化科技有限公司。

XW-80A旋涡混合器(上海医科大学仪器厂)，BSA224S电子天平(美国Sartourius公司)，Research plus移液器(德国Eppendorf公司)，Pax-250B智能光照培养箱(宁波赛福实验仪器有限公司)，SZX16斑马鱼体视镜(Olympus Olympus)。

7.2实验方法

7.2.1斑马鱼喂养与繁殖

根据《The Zebrafish Book》中所指导的方式方法对斑马鱼进行喂养，喂养环境水温保持28.5℃，每日光照时间保持14h，早晚各喂一次丰年虾。确定胚胎收集时间后的前一天晚上，在产卵缸中设置隔板，在前一天的晚上将等量雄性、雌性斑马鱼放置到产卵缸中隔板的两边。在正常光照、饲养要求条件下，于22:30关闭灯源，并在第二天早上8:30重新开启光源。此时可将产卵缸中的隔板抽离，让雄性、雌性斑马鱼进行接触。30min后可以在产卵缸中收集斑马鱼胚胎，在使用Egg water进行清洗后放置到28.5℃的光照培养箱中进行饲养。

7.2.2胃肠道蠕动的测量

观察收集的斑马鱼幼鱼，显微镜观察挑选得到发育正常4dpf(day postfertilization)的斑马鱼幼鱼，置于24孔板中，每孔10条幼鱼，每孔加入不同浓度的混合挥发油、混合挥发油β-环糊精包合物，每孔2.0mL溶液，用培养基做空白对照。每24h更换药液。平行3次实验。给药至5dpf，移除药液，并加入0.2％的钙黄绿素溶液，并在恒温25℃环境下培育10min，而后采用人工海水进行清洗，清洗3次后继续滴入三卡因溶液(质量分数0.02％)使其麻醉。取双凹载玻片，先在凹槽位置滴入3％甲基纤维素，将麻醉后的斑马鱼幼鱼使用吸管转移至其表面并使用发圈适当调整位置，让斑马鱼保持侧卧、水平的状态，使其两侧眼、体节重合，以便于使用荧光显微镜观察并记录其1min内的胃肠道蠕动次数。

7.3实验结果

黑老虎、乳香、没药混合挥发油β-环糊精包合物、黑老虎、乳香、没药混合挥发油组斑马鱼经钙黄绿素活体染色，如图2所示。

表18 1min内斑马鱼胃肠道蠕动次数

注：*表示P<0.05，与对照组之间的差异具有显著性意义。

由表18可知，混合挥发油β-环糊精包合物随着浓度的增加幼鱼胃肠道1min内蠕动次数依次为(11.1±1.57)次，(11.5±1.62)次，(13.4±1.95)次。混合挥发油β-环糊精包合物在0.0001mg/mL、0.001mg/mL的给药剂量下不会使1min内幼鱼胃肠道蠕动次数显著异常，0.01mg/mL会使1min内幼鱼胃鱼肠道蠕动次数显著异常。随着混合挥发油浓度的增加幼鱼胃肠道1min内蠕动次数依次为(13.2±1.71)次，(14.1±1.88)次，(15.8±2.01)次，混合挥发油在0.001mg/mL、0.01mg/mL、0.1mg/mL的给药剂量下均会使幼鱼胃肠道蠕动次数显著异常，混合挥发油在此三个浓度下可刺激胃肠道蠕动。

在给药剂量0.001mg/mL下，混合挥发油可造成幼鱼胃肠道蠕动显著异常，而混合挥发油β-环糊精包合物不会；在给药剂量0.01mg/mL下，混合挥发油β-环糊精包合物、混合挥发油均会使得幼鱼胃肠道蠕动异常，但是混合挥发油蠕动次数更大，异常情况更加严重。所以混合挥发油对幼鱼胃肠道的刺激性大于混合挥发油β-环糊精包合物。

以上是对本发明药物组合物的部分工艺条件筛选的试验，本发明所付出的劳动不限于上述试验，由以上试验可以看出本发明药物组合物经过发明人不断思考、验证的过程才得出较原舒筋健腰丸的效果更好的产品。

实施例2

一种治疗腰椎间盘突出症的中成药，原料药为：狗脊360.0kg、金樱子115.2kg、鸡血藤216.0kg、千斤拔86.4kg、黑老虎216.0kg、牛大力144.0kg、女贞子18.0g、桑寄生108.0kg、菟丝子18.0kg、延胡索15.6kg、两面针15.6kg、乳香7.2kg、没药12.0kg。

1.制备工艺如下：

(1)先将狗脊用水回流提取2次，第一次加8倍水，第二次加6倍水，每次提取2小时，过滤，合并滤液，得提取液，提取液以3BV/h的流速加入大孔吸附树脂柱中吸附，然后用5倍柱体积的水溶液以4BV/h的流速进行清洗至流出液无色，再用3倍柱体积70％乙醇以3BV/h的流速洗脱，收集乙醇洗脱液，减压回收乙醇，浓缩得到稠膏34.56kg(相对密度1.30，82℃，含固物68％)；

(2)牛大力破碎过8目筛网与金樱子、鸡血藤、千斤拔、桑寄生、两面针、黑老虎的木部第一次加8倍水，浸泡1小时，提取4小时，第二次加6倍水，提取2小时，过滤，合并滤液，浓缩得到稠膏75.63kg(相对密度1.32，79℃，含固物70％)；

(3)将黑老虎的皮部破碎过20目筛网，加8倍水浸泡0.5小时，加热提取6小时，收集黑老虎挥发油；乳香(制)、没药(制)加8倍水浸泡0.5小时，加热提取9小时，收集乳香、没药挥发油；黑老虎挥发油和乳香、没药挥发油混合，加入等量乙醇，混合均匀，按挥发油与β-环糊精1:10比例，按水饱和溶液法包合，温度30℃，包合1h，将包合物溶液抽滤，滤饼置于50℃真空干燥箱中干燥5h，得黑老虎、乳香、没药混合挥发油β-环糊精包合物16.31kg；

(4)将黑老虎皮部提取挥发油后的水提液过滤，收集滤液，浓缩得到稠膏10.89kg(相对密度1.29，75℃，含固物63％)；

(5)其余女贞子、菟丝子、延胡索粉碎得到细粉49.02kg，加入挥发油包合物、淀粉2.50kg和微晶纤维素2.50kg，混匀，再加入稠膏，混匀，制丸，用活性炭包衣，干燥，打光，即得舒筋健腰丸(浓缩水丸)约150kg。相等的处方量，原剂型舒筋健腰丸可制得约750kg，服用量5g/次，舒筋健腰丸(浓缩水丸)服用量可减少到每次服用约1g。

2.舒筋健腰丸(浓缩水丸)刺桐碱检测

精密称取刺桐碱对照品适量，加甲醇溶解，配成一定浓度的对照品溶液(S1)；精密称取牛大力药材1g(S2)、舒筋健腰丸(浓缩水丸)2.5g(S3)、舒筋健腰丸(浓缩水丸牛大力阴性)2.5g(S4)，分别加50mL浓度为50％的乙醇，按牛大力药材刺桐碱的含量测定(2.1.3.1)测定，得等离子(TIC)图，见图3舒筋健腰丸(浓缩水丸)刺桐碱TIC叠图，结果见表19。

表19样品中刺桐碱的转移率

根据实验结果，牛大力水提后，舒筋健腰丸(浓缩水丸)检测到刺桐碱，舒筋健腰丸(浓缩水丸牛大力阴性)没检出刺桐碱，说明牛大力水提后能在舒筋健腰丸(浓缩水丸)中检出，牛大力刺桐碱在成品中的转移率为67.5％。

3.舒筋健腰丸(浓缩水丸)两面针检测

供试品制备：分别取舒筋健腰丸(浓缩水丸)、舒筋健腰丸(浓缩水丸两面针阴性)、两面针药材粉末(过三号筛)约1g，精密称定，置50mL具塞锥形瓶中，用移液管加入70％甲醇20mL，超声处理30min，放冷，过滤，滤液置50mL容量瓶中，滤渣与滤纸加入70％甲醇20mL，超声处理30min，放冷，过滤，滤液置同一容量瓶中，用适量70％甲醇洗涤2次，洗液并入同一容量瓶中，用70％甲醇定容至刻度，摇匀，即得。

对照品制备：取氯化两面针碱对照品适量，精密称定，用70％甲醇制成1mL含5μg的溶液，即得。

色谱条件与色谱方法：以十八烷基硅烷键合硅胶填充剂为色谱柱，柱温35℃，流速0.5mL/min，流动相A为乙腈，B为0.1％甲酸水溶液，流动相条件见表20：

表20流动相条件

质谱条件：正离子模式；Probe；温度：600；Capillary：0.8；模式：SIR；Mass：348.12；Cone Voltage：15V。

测定方法：分别精密吸取2μl注入Waters Arc-PUV-QDa超高效液相色谱中测定。

结果见图4舒筋健腰丸(浓缩水丸)两面针碱TIC叠图。

通过以上实验表明：两面针通过水提，在舒筋健腰丸(浓缩水丸)中检测到两面针碱，在舒筋健腰丸(浓缩水丸两面针阴性)中没检出两面针碱，说明阴性无干扰。

4.舒筋健腰丸(浓缩水丸)性状、外观、水分、溶散时限、重量差异检查

4.1性状

舒筋健腰丸(浓缩水丸)为黑色包衣浓缩水丸，除去包衣后显黑褐色；味甘、涩、微苦。

4.2外观

舒筋健腰丸(浓缩水丸)圆整，大小、色泽均匀，无粘连现象。

4.3水分

舒筋健腰丸(浓缩水丸)水分为6.1％，符合2020年版《中国药典》四部0108丸剂通则水分要求，浓缩水丸不得过9.0％。

4.4溶散时限

舒筋健腰丸(浓缩水丸)溶散时限为45分钟，符合2020年版《中国药典》四部0108丸剂通则溶散时限要求，浓缩水丸应在2小时内全部溶散。

4.5重量差异

舒筋健腰丸(浓缩水丸)每丸重0.05g，重量差异符合2020年版《中国药典》四部0108丸剂通则要求(±12％)。

5.舒筋健腰丸(浓缩水丸)稳定性考察

5.1稳定性考察方案

恒温恒湿加速试验：将舒筋健腰丸(浓缩水丸)用药用高密度聚乙烯塑料瓶封装后，放置于温度调节为40±2℃、相对湿度为75％±5％的稳定性试验箱环境中保存6个月，分别于放置的0月，1月，2月，3月，6月末各抽样检查一次。其中稳定性试验箱生产厂家为重庆创测科技有限公司，型号为CSH-222SD-C。

5.2特女贞苷含量测定

照高效液相色谱法(中国药典2015年版四部通则0512)测定。

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-水(17:83)为流动相；检测波长为224nm。理论板数按特女贞苷峰计算应不低于5000。

对照品溶液的制备取特女贞苷对照品适量，精密称定，加80％甲醇制成每1ml含65μg的溶液，即得。

供试品溶液的制备取本品适量，研细，取约1g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入80％甲醇50ml，称定重量，超声处理(功率250W，频率37kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用80％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20ml，蒸干，残渣用80％甲醇5ml使溶解，加在中性氧化铝柱(100～200目，5g，内径约1.5cm)上，用80％甲醇50ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加80％甲醇使溶解，转移至10ml量瓶中，加80％甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。

结果见表21。

表21特女贞苷含量测定

通过舒筋健腰丸(浓缩水丸)6个月加速试验表明：舒筋健腰丸(浓缩水丸)中女贞子以特女贞苷计含量变化趋势平稳，产品质量稳定。

实验例1

采用阳性和模型对照，中成药舒筋健腰丸(浓缩水丸)治疗腰椎间盘突出症的实验研究。

1.材料与方法

1.1实验动物选择与分组

4周龄SD大鼠，雄性，造模时动物体重范围：177～266g，分组时动物体重范围：220～339g。随机分为5组：A：假手术组；B：模型组；C：阳性对照(芬必得)组；D：舒筋健腰丸(浓缩水丸)实施例组；E：原舒筋健腰丸组。阴性对照组21只，其余各组为22-24只。来源：湖南斯莱克景达实验动物有限公司。

1.2试验方法

(1)阴性对照、受试物、阳性对照配制

①阴性对照-0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)：称取CMC-Na，加入纯水溶解，配成浓度为0.5％CMC-Na溶液，其中，羧甲基纤维素钠(CMC-Na)购自天津市大茂化学试剂厂。

②受试物-实施例：称取一定量实施例制备的舒筋健腰丸(浓缩水丸)，粉碎成细粉，加入0.5％CMC-Na溶液搅拌溶解至均匀没有块状物，制成浓度为0.027g/mL的药液(相当于2.19g生药/kg，约相当于成人临床日拟用量的3g的1倍)。

③阳性对照-芬必得酚咖片：取1片芬必得酚咖片，研磨后，在药粉中一边加入0.5％CMC-Na一边搅拌溶液，至均匀没有块状物，配制总量为8.85mL，配成浓度为0.0565g/mL的母液；然后吸取母液适量，用0.5％CMC-Na溶液稀释至浓度为0.0051g/mL的药液。其中，芬必得酚咖片生产厂家为中美天津史克制药有限公司。

④原舒筋健腰丸：称取一定量原剂型的舒筋健腰丸，粉碎成细粉，加入0.5％CMC-Na溶液搅拌溶解至均匀没有块状物，制成浓度为0.135g/mL的药液(相当于2.19g生药/kg，约相当于成人临床日拟用量的15g的1倍)。

(2)主要试剂

①戊巴比妥钠：配成浓度为20mg/mL的溶液。按称取戊巴比妥钠100mg，用适量0.9％氯化钠注射液溶解后加至5mL的配制比例进行调配。生产厂家为德国默克公司(北京华美生物科技技术有限公司分装)。

②注射用青霉素钠：配成浓度为16万单位/mL的溶液。每次按取1瓶注射用青霉素钠，用适量0.9％氯化钠注射液溶解后加至10mL的配制比例进行调配，现用现配。生产厂家为河北远征药业有限公司。

(3)溶媒

①用于配制受试物、芬必得酚咖片的溶媒为0.5％羧甲基纤维素钠(CMC-Na)(分析纯)，生产厂家为天津市大茂化学试剂厂。

②用于配制戊巴比妥钠、注射用青霉素钠的溶媒均为0.9％氯化钠注射液，规格为100mL/瓶，生产厂家为广东科伦药业有限公司。

(4)试验步骤：

造模前(T0)，选用检疫合格的动物进行造模，假手术组为21只，剩余的合格动物分5批进行造模。造模时，选用检疫合格的动物采用腹腔麻醉的方式，每只动物均给予2％戊巴比妥钠(3mL/kg)麻醉，俯卧固定，碘酒、酒精依次消毒，以L5/L6以L5/L6棘突间隙为中心，取后背正中切口约4cm，逐层切开皮肤及皮下组织，分离腰椎旁肌，深达椎板，暴露L5的横突和椎间孔。将直径为0.8mm，长度为4mm的L形钛棒在L5椎间孔以背中线约30-40°和-10低于椎体水平线15°角度约4mm进入椎间孔。当钢棒压迫神经节，同侧后肢肌肉通常表现出一两次轻微的抽搐。另在大鼠背正中以腰椎L5～L6为中心切口，以手术刀做一长约2cm纵形切口，组织钳向切口两侧牵开皮肤及皮下组织，以血管钳分离显露鼠尾2个节段的椎间纤维环。以手术刀尖于纤维环上做一切口，挤压鼠尾椎间，可见清亮胶冻状髓核组织于纤维环切口处突出。刮匙刮出2节段髓核，移除大鼠背部伤口覆盖物，以镊子夹持髓核组织小心移植于L5椎间孔内。放置后，对背部肌肉和皮肤逐层进行缝合，且对尾部切口也进行缝合。假手术组动物仅不取出、放置尾部椎间盘髓核及不放置L型钢棒。造模完成，每只动物的右侧肌肉均连续注射3天青霉素，以防感染。连续造模5天，每批造模动物在造模第8天(T8)，将造模SD大鼠根据动物运动功能评分和体重随机均衡分到其余4组，各组为22-24只，均为雄性。分组后进行灌胃给药。芬必得组连续给药5天后，间隔2天给药一次，其余各组动物均每天给药1次，连续29天。在第29天末次给药后1h全部麻醉后，采集血液进行生化学各项检查。

表22组别、剂量设计一览表

2.试验结果

表23舒筋健腰丸对腰椎间盘突出症大鼠的血清IgG、IgM、IL-1、IL-6、COX-2、PGE-2影响

注：与假手术组相比，

注：与假手术组相比，

在本试验条件下，受试物舒筋健腰丸能够降低大鼠的血清和病变位置的炎症因子IL-1、氧化及疼痛相关因子(NO、PGE2)的水平，降低背根神经节病变位置肽能神经递质(CGRP、SP)的浓度，初步提示受试物舒筋健腰丸可能是通过抑制炎症反应、氧化应激及改善神经根性疼痛等多个靶点发挥作用。受试物舒筋健腰丸(浓缩水丸)实施例组的大鼠血清和病变位置的炎症因子IL-1、氧化及疼痛相关因子(NO、PGE2)、背根神经节病变位置肽能神经递质(CGRP、SP)的浓度比原舒筋健腰丸组水平低，且病变位置的CGRP差异有统计学意义，初步提示本发明的舒筋健腰丸(浓缩水丸)在改善背根神经疼痛方面比原舒筋健腰丸效果更好。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。