一种抗蛋白酶3抗体测定试剂盒及其测定方法

技术领域

本发明涉及医疗检测技术领域，具体为一种抗蛋白酶3抗体测定试剂盒及其测定方法。

背景技术

蛋白酶3(Proteinase3，PR3)是中性粒细胞胞浆嗜天青颗粒中的一种丝氨酸蛋白酶，分子量约为29KDa的糖蛋白。PR3能降解多种细胞外基质如弹性蛋白、血红蛋白、IV型胶原等多种组织成分。此外，蛋白酶3通过组织蛋白酶G促进血小板活化，并使C1抑制剂失活。

韦格纳肉芽肿(Wegener′sgranulomatosis，WG)是一种特殊类型的坏死性肉芽肿性血管炎。其临床的复杂性和诊治的困难性一直是困扰风湿病专科医师的问题。WG的诊断主要依据临床症状，而临床表现复杂多样、因人而异。抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)是对WG最有诊断意义的自身抗体。ANCA产生的荧光模式包括胞浆型(cANCA)、核周型(pANCA)。过去WG的诊断主要是根据典型的临床表现和病史，但有些患者，尤其是限局性的患者很难诊断，病检是确诊WG的重要手段。但一次或单部位病检阴性并不能排除WG。目前的研究认为大部分WG患者的ANCA特异性靶抗原是PR3，抗PR3抗体与WG的诊断和疾病活动密切相关。胞浆型ANCA(cytoplasmicANCA，cANCA)和抗 PR3抗体对WG诊断意义有高度的敏感性和特异性。国外报道在活检证实为WG的患者中，抗PR3抗体特异性为90％以上。敏感性是与疾病的活动性有关。通常抗PR3抗体滴度与疾病活动一致，活动性WG 患者在病变尚未影响到呼吸系统时抗PR3抗体敏感性是65％，当患者出现呼吸系统、肾脏损害时其灵敏度达90％以上。活动期滴度较高，部分缓解期滴度很低，完全缓解的患者多数测不到。缓解期抗PR3抗体滴度的升高可能预示着复发，并且有助于将感染和复发区分开。对于此病的检测方法主要为间接免疫荧光法和酶联免疫吸附法，但这些方法都存在着不足之处。

发明内容

为解决现有技术存在的缺陷，本发明提供一种抗蛋白酶3抗体测定试剂盒及其测定方法。

为了解决上述技术问题，本发明提供了如下的技术方案：

本发明一种抗蛋白酶3抗体测定试剂盒，包括Anti-PR3IgG-R1 试剂，Anti-PR3IgG-R2试剂，Anti-PR3IgG磁分离试剂，Anti-PR3IgG 校准品；

所述的Anti-PR3IgG-R1试剂的内容物为含有生物素标记的浓度为0.5μg/ml的PR3抗原，0.5％的牛血清白蛋白以及0.1mol/L、pH8.0 的Tris缓冲液；所述的Anti-PR3IgG-R2试剂的内容物为含有ALP标记的浓度为0.5μg/ml的羊抗体多克隆抗体，3.0％的牛血清白蛋白以及0.1mol/L、pH7.5的Tris缓冲液；所述的Anti-PR3IgG磁分离试剂的内容物为含有链霉亲和素标记的的浓度为0.5mg/ml的磁性微粒， 0.5％的牛血清白蛋白以及0.1mol/L、pH8.0的Tris缓冲液； Anti-PR3IgG校准品；所述的Anti-PR3IgG校准品的内容物为含有一定浓度的抗PR3抗体IgG，3.0％的牛血清白蛋白和0.1mol/L、pH7.5 的Tris缓冲液。

一种抗蛋白酶3抗体测定试剂盒的测定方法，一种抗蛋白酶3抗体测定试剂盒的测定方法，其特征在于，包括以下几个步骤，

步骤1：加入20μL校准品、质控品或待测标本至检测管中，其中待测标本按照1：:2倍进行预稀释；

步骤2：加入50μL的Anti-PR3IgG-R1试剂至检测管中，混匀后，在37±0.5℃温育15分钟；

步骤3：加入50μL的Anti-PR3IgG磁分离试剂至检测管中，混匀后，，在37±0.5℃温育5分钟，磁分离去上清；

步骤4：加入30μL的清洗液至检测管中，混匀，磁分离去上清，并重复两遍；

步骤5：加入150μL的Anti-PR3IgG-R2试剂至检测管中，混匀后，在37±0.5℃温育10分钟，磁分离去上清。

步骤6：重复步骤五两边，在加入200μL的化学发光底物至检测管中，混匀。

步骤7：检测发光强度。

作为本发明的一种优选技术方案，其中检测结果是利用四参数逻辑拟合得到校准品剂量-反应曲线的回归方程，再根据待测样本的相对发光强度可以从回归曲线上反算出样本中的Anti-PR3IgG的浓度，结果以RU/ml表示。

作为本发明的一种优选技术方案，当样本检测浓度低于1RU/ml 时，则报告为小于1RU，样本检测浓度高于200RU/ml时，则报告为大于200RU。

作为本发明的一种优选技术方案，该试剂盒的检测范围在 [2,200]RU/ml。

作为本发明的一种优选技术方案，检测见过的判断采用通过正常人实验，采用正态分布分析分析得到正常值参考区间为[2,20]RU/ml。

本发明的有益效果是：该种肺炎衣原体IgM抗体检测试剂盒，是将间接化学发光免疫分析法和磁微粒分离技术相结合的一种测定方法，用于体外定量测定人血清中抗蛋白酶3抗体IgG的含量，来对局限于肾脏的小血管炎和Churg-Strauss综合征等该种小血管性血管炎进行检测，具有准确度高的特点。

具体实施方式

以下结合实施例对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此 处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发 明。

实施例：本发明一种抗蛋白酶3抗体测定试剂盒，包括 Anti-PR3IgG-R1试剂，Anti-PR3IgG-R2试剂，Anti-PR3IgG磁分离试剂，Anti-PR3IgG校准品；

所述的Anti-PR3IgG-R1试剂的内容物为含有生物素标记的浓度为0.5μg/ml的PR3抗原，0.5％的牛血清白蛋白以及0.1mol/L、pH8.0 的Tris缓冲液；所述的Anti-PR3IgG-R2试剂的内容物为含有ALP标记的浓度为0.5μg/ml的羊抗体多克隆抗体，3.0％的牛血清白蛋白以及0.1mol/L、pH7.5的Tris缓冲液；所述的Anti-PR3IgG磁分离试剂的内容物为含有链霉亲和素标记的的浓度为0.5mg/ml的磁性微粒， 0.5％的牛血清白蛋白以及0.1mol/L、pH8.0的Tris缓冲液； Anti-PR3IgG校准品；所述的Anti-PR3IgG校准品的内容物为含有一定浓度的抗PR3抗体IgG，3.0％的牛血清白蛋白和0.1mol/L、pH7.5 的Tris缓冲液。

一种抗蛋白酶3抗体测定试剂盒的测定方法，包括以下几个步骤，

步骤1：加入20μL校准品、质控品或待测标本至检测管中，其中待测标本按照1：:2倍进行预稀释；

步骤2：加入50μL的Anti-PR3IgG-R1试剂至检测管中，混匀后，在37±0.5℃温育15分钟；

步骤3：加入50μL的Anti-PR3IgG磁分离试剂至检测管中，混匀后，，在37±0.5℃温育5分钟，磁分离去上清；

步骤4：加入30μL的清洗液至检测管中，混匀，磁分离去上清，并重复两遍；

步骤5：加入150μL的Anti-PR3IgG-R2试剂至检测管中，混匀后，在37±0.5℃温育10分钟，磁分离去上清。

步骤6：重复步骤五两边，在加入200μL的化学发光底物至检测管中，混匀。

步骤7：检测发光强度。

其中检测结果是利用四参数逻辑拟合得到校准品剂量-反应曲线的回归方程，再根据待测样本的相对发光强度可以从回归曲线上反算出样本中的Anti-PR3IgG的浓度，结果以RU/ml表示。

当样本检测浓度低于1RU/ml时，则报告为小于1RU，样本检测浓度高于200RU/ml时，则报告为大于200RU。

该试剂盒的检测范围在[2,200]RU/ml。

检测见过的判断采用通过正常人实验，采用正态分布分析分析得到正常值参考区间为[2,20]RU/ml。

在对样本进行检测需要利用Anti-PR3IgG质控试剂进行质控，其中Anti-PR3IgG质控品的内容物含有一定浓度的抗PR3抗体IgG，3.0％的牛血清白蛋白和0.1mol/L、pH7.5的Tris缓冲液。

本发明的有益效果是：该种肺炎衣原体IgM抗体检测试剂盒，是将间接化学发光免疫分析法和磁微粒分离技术相结合的一种测定方法，用于体外定量测定人血清中抗蛋白酶3抗体IgG的含量，来对局限于肾脏的小血管炎和Churg-Strauss综合征等该种小血管性血管炎进行检测，具有准确度高的特点。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。