一种取代的2-芳氨基嘧啶类化合物、药物组合物及其用途

技术领域

本发明属于化学医药领域，本发明涉及一种取代的2-芳氨基嘧啶类化合物、药物组合物及其用途。

背景技术

表皮生长因子受体(EGFR)属于受体酪氨酸激酶，与HER2、HER3和HER4共同组成ErbB受体家族。当其与表皮生长因子(EGF)等配体结合后，受体被激活并形成二聚体，进一步激活细胞内关键酪氨酸残基的磷酸化，最后激活细胞内的下游信号通路，如：参与细胞凋亡的PI3K-AKT-mTOR途径，参与细胞周期进程和增殖的RAS-RAF-MEK途径。当EGFR结构域发生基因突变，会使得下游信号通路过表达，最终导致以非小细胞肺癌(NSCLC)为代表的肿瘤细胞形成、增殖、侵袭和迁移。因此，EGFR是抗癌药物开发的主要靶点之一。

奥西替尼(Osimertinib，AZD9291)是第三代EGFR-TKI靶向药，虽然其针对L858R/T790M突变导致的耐药具有较高的响应率，但患者也会出现耐药性(Clinical CancerResearch[2015]，17:3924-3933)。2015年首次报道(Nature Medicine[2015]，21:560-562)15例患者AZD9291的耐药分析，其中获得第三种突变，即EGFR

在2016年报道了一种能够针对C797S突变从而克服AZD9291耐药的化合物EAI045(Nature[2016]，534:129-132)。EAI045属于一种变构抑制剂，在联合EGFR单抗药物后，针对L858R/T790M/C797S突变的小鼠体内药效模型中显示了较好的肿瘤抑制效果；但该化合物未能进入临床研究。2017年报道了布加替尼(Brigatinib，AP26113)和EGFR单抗联用能克服C797S突变导致的AZD9291耐药(Nature Communications[2017]，8:14768)，在PC9(EGFR

目前的一些2-苯氨基嘧啶抑制剂报道(例如WO2012051587A1、CN113354685A、CN113166110A)，已具有用于已经转移至CNS的癌症的治疗潜能或特性，但仍有待进一步提高脑屏障渗透性能、增强代谢稳定性、改进药动学性质和成药潜能。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明提供了一种新的取代的2-芳氨基嘧啶类化合物或其药学上可接受的盐，其具有增强的代谢稳定性、更长的代谢半衰期，对激活型或耐药型突变体形式EGFR显示出比野生型EGFR更高的抑制活性，可以有效减少副作用。

本发明还提供了一种药物组合物，其包括上述化合物或其药学上可接受的盐。

此外，本发明提供了上述化合物或其药学上可接受的盐的用途。

本发明首先提供了一种具有通式(I)所示结构的化合物或其药学上可接受的盐，

其中：

X选自C、N；

R

R

R

R

R

R、R’、R”、R”’、R””分别独立地选自H、卤素、CN、OH、NH

“杂”表示杂原子或杂原子团，所述C

在本发明的一种实施方式中，R、R’、R”、R”’、R””分别独立地选自H、F、Cl、Br、I、-CN、-OH、-NH

在本发明的一种实施方式中，R

在本发明的一种实施方式中，R

在本发明的一种实施方式中，R

在本发明的一种实施方式中，R

在本发明的一种实施方式中，R

在本发明的一种实施方式中，R

在本发明的一种实施方式中，R

在本发明的一种实施方式中，所述化合物具体选自：

在本发明的一种实施方式中，所述的药学上可接受的盐为无机盐或有机盐，无机盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；所述有机盐选自甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、戊二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、对甲苯磺酸盐、抗坏血酸盐。

在本发明的一种实施方式中，所述药学上可接受的盐选自盐酸盐、硫酸盐、琥珀酸盐或甲磺酸盐。

本发明还提供一种药物组合物，包括所述的化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂。

本发明还提供所述的化合物或其药学上可接受的盐在制备治疗哺乳动物尤其是人类由EGFR激活型或耐药型突变体介导的疾病特别是癌症的药物中的用途。

本发明还提供所述的化合物或其药学上可接受的盐的用途，其中所述的癌症是非小细胞肺癌。

本发明还提供所述的化合物或其药学上可接受的盐与一种抗肿瘤剂的组合在制备由EGFR激活型或耐药型突变体介导的疾病的药物中的用途，所述抗肿瘤剂选自以下：

(i)作用于DNA结构的抗肿瘤药物；

(ii)影响核酸合成的抗肿瘤药物；

(iii)影响核酸转录的抗肿瘤药物；

(iv)微管蛋白合成的抗肿瘤药物；

(v)细胞信号通路抑制剂如表皮生长因子受体抑制剂；

(vi)抗肿瘤单抗。

本发明提供了一种新的表皮生长因子受体的活化突变形式的2-芳氨基嘧啶类抑制剂，其具有更好的药效学性能、代谢稳定性更高，对激活型或耐药型突变体形式EGFR显示出比野生型EGFR更高的抑制活性，可以有效减少皮疹和腹泻等副作用。

具体实施方式

下面将结合实施例对本发明的技术方案进行详细的描述。

在本发明中C

C

C

C

C

C

C

3～6元杂环基、5～6元杂环基、3～14元杂环基分别是指具有3至6个环碳原子、5至6个环碳原子、3至14个环碳原子的单环或多环烃基，其中1至3个氢原子被杂原子或杂原子团取代；

5～6元杂芳基是指具有5至6个环碳原子的单环或多环芳基，其中1至3个氢原子被杂原子或杂原子团取代；

C

C

如本文使用的术语“疾病”是指损害或干扰细胞、器官或组织的正常功能的任何病症或紊乱。

如本文所使用的术语“抑制剂”是指化合物或试剂具有抑制靶向蛋白或多肽的生物学功能的能力，例如通过抑制蛋白质或多肽的活性或表达。

如本文使用的术语“抗肿瘤剂”是指在肿瘤病症治疗中有用的任何试剂。

如本文使用的术语“药学可接受的”是指在合理的医学范围内，适用于与人和其他哺乳动物的组织接触而没有过度毒性、剌激、过敏反应等，并且有合理的利益/风险比的组分。“药学上可接受的盐”是指任何无毒性的盐，其在施用于受者后，能够直接或间接地提供本发明的化合物或化合物的前药。

如本文所使用的术语“有效量”或“有效治疗量”是指本文所述的化合物或药物组合物的量是足以达到预期的应用，包括，但不限于治疗疾病。在一些实施方案中，所述量是检测到的有效用于杀伤或抑制癌细胞生长或扩散；肿瘤的大小或数量；或癌症的严重性水平，阶段和进展。有效治疗量可以根据预定应用发生变化，例如体外或者体内，疾病的状况和严重程度，受试者年龄，重量，或给药方式等。该术语也适用于剂量将诱导靶细胞，例如，减少细胞迁移的一个特定的响应。具体剂量将取决于，例如，特定的化合物中选取，受试者物种和他们的年龄/现有的健康状况或健康状况的风险，给药途径，疾病的严重程度，与其他药剂组合给药，给药时间，给其施用的组织，和给药装置等。

在本发明中“给药”或“给予”个体化合物是指向需要治疗的个体提供本发明的化合物。

本发明的化合物可以含有一个或多个不对称中心，并且因此作为外消旋物和外消旋混合物、单一对映体、单独的非对映体和非对映体混合物出现。这些化合物的所有此类异构体形式均明确地包括在本发明中。本发明的化合物还可以表现为多种互变异构形式，在此情况下，本发明明确地包括本文所述的化合物的所有互变异构形式。此类化合物的所有此类异构体形式包括在本发明中。本文所述的化合物的所有结晶形式明确地包括在本发明中。

<化合物或其药学上可接受的盐>

本发明提供一种新的表皮生长因子受体的活化突变形式的2-芳氨基嘧啶化合物或其药学上可接受的盐，其结构式如通式(I)所示：

其中：

X选自C、N；

R

R

R

R

R

R、R’、R”、R”’、R””分别独立地选自H、卤素、CN、OH、NH

“杂”表示杂原子或杂原子团，所述C

在本发明的某些实施方式中，X选自C、N；进一步地，X优选为C。

在本发明的某些实施方式中，R、R’、R”、R”’、R””分别独立地选自H、卤素、CN、OH、NH

在本发明的某些实施方式中，R

在本发明的某些实施方式中，R

在本发明的某些实施方式中，R

在本发明的某些实施方式中，R

在本发明的某些实施方式中，R

通式(I)的化合物包括其药学上可接受的盐。本发明所述药学上可接受的盐为无机盐或有机盐，无机盐包括盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、高氯酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、酸式磷酸盐；所述有机盐选自甲酸盐、乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、丙酮酸盐、羟乙酸盐、乙二酸盐、丙二酸盐、丁二酸盐、戊二酸盐、富马酸盐、马来酸盐、乳酸盐、苹果酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、以乙磺酸盐、苯磺酸盐、水杨酸盐、对甲苯磺酸盐、抗坏血酸盐。优选地，从成药性角度考虑，本发明所述盐为盐酸盐、硫酸盐、琥珀酸盐或甲磺酸盐。

应该理解的某些式(I)的化合物或其药学上可接受的盐可以处于溶剂化合物形式以及非溶剂化物形式，例如像水和形式。应该理解的是本发明涵盖拥有活化突变EGFR抑制活性的所有此类溶剂化合物形式。

本发明通式(I)的化合物的合成可以由普通合成化学技术人员来实现。本文背景技术提及的文献均整体地引入本文以供参考。制备方法在实施例有详细的描述。

<药物组合物>

本发明提供了一种药物组合物，包括本发明所述式(I)化合物或其药学上可接受的盐以及药学上可接受载体、赋形剂或稀释剂。

本发明化合物或其药学上可接受的盐可以配制为用于口服给药的固体制剂，包括，但不限于胶囊剂、片剂、丸剂、散剂、颗粒剂等。在这些固体剂型中，本发明通式(I)化合物作为活性成分与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，例如与柠檬酸钠或磷酸二钙。或与下属成分混合：(1)填料或增溶剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸等；(2)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖、阿拉伯胶等；(3)保湿剂，例如，甘油等；(4)崩解剂、例如琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些符合硅酸盐和碳酸钠等；(5)缓溶剂，例如石蜡等；(6)吸收加速剂，例如季铵化合物等；(7)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯等；(8)吸附剂，例如，高岭土等；(9)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠等，或其混合物。胶囊剂、片剂、丸剂中也可包含缓冲剂。

所述固体剂型例如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材料如肠溶衣和其他本领域公知的材料晶型包衣或微囊化。他们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性成分的释放可以延迟的方式在消化道的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性成分也可与上述赋形剂中的一种或者多种形成微胶囊形式。

本发明化合物或其药学上可接受的盐可以配制为用于口服给药的液体剂型，包括，但不限于药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆、酊剂等。除了作为活性成分的通式(I)化合物或其药学上可接受的盐外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，例如水和其他溶剂，增溶剂和乳化剂、例如，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油类，特别是棉籽油、花生油、玉米油、橄榄油、蓖麻油、芝麻油等或这些物质的混合物等。除了这些惰性稀释剂外，本发明液体剂型也可包括常规助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味剂、矫味剂和香料等。

所述悬浮剂包括，例如，乙氧基化十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇、和脱水山梨醇、微晶纤维素、琼脂等或这些物质的混合物。

本发明化合物和其药学上可接受的盐可以配置为用于胃肠外注射的剂型，包括，但不限于生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，以及用于重新溶解成无菌的可注射溶液和分散液的无菌粉末。适宜的载体、稀释剂、溶剂、赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。

本发明化合物或其药学上可接受的盐可以配置为用于局部给药的剂型，包括如软膏剂、散剂、栓剂、滴剂、喷射剂和吸入剂等。作为活性成分的本发明通式(I)化合物或其药学上可接受的盐在无菌条件下和生理上可接受的载体及任选的防腐剂、缓冲剂，和必要时可能需要的推进剂一起混合。

本发明式(I)的化合物或其药学上可接受的盐将以0.01-2000mg/kg、特别是2.5-1000mg/kg、特别是5-500mg/kg范围内的单位剂量向哺乳动物给予，并且这应该提供一个有效剂量。然而，每日剂量将必然取决于被治疗宿主、具体的给药途径、以及正在被治疗的疾病的严重性而变化。因此，可以由治疗任何具体患者的从业者决定最适剂量。

<用途>

本发明提供一种如上述定义的式(I)的化合物及其药学上可接受的盐在制备治疗哺乳动物尤其是人类由EGFR激活型或耐药型突变体介导的疾病，特别是癌症的药物中的用途应用。

在本发明中，所述激活型突变体形式的EGFR、耐药型突变体形式的EGFR可以为例如L858R激活突变体、Exon19缺失激活突变体、T790M抗性突变体和/或C797S抗性突变体。因此，由EGFR激活型或耐药型突变体介导的疾病、障碍、紊乱或病况可以为例如L858R激活突变体、Exon19缺失激活突变体、T790M抗性突变体和/或C797S抗性突变体所介导的疾病、障碍、紊乱或病况，本发明尤其适用于EGFR耐药型突变体介导的疾病、障碍、紊乱或病况如T790M抗性突变体、C797S抗性突变体。可能易受使用式(I)的化合物或其药学上可接受的盐影响的治疗影响的癌症类型包括，但不限于：卵巢癌、宫颈癌、结直肠癌、乳腺癌、胰腺癌、神经胶质瘤、恶性胶质瘤、黑色素瘤、前列腺癌、白血病、淋巴瘤、非霍奇金淋巴瘤、肺癌、肝细胞癌、胃癌、胃肠道间质瘤、甲状腺癌、胆管癌、子宫内膜癌、肾癌、间变性大细胞淋巴瘤、急性髓细胞白血病、多发性骨髓瘤、黑色素瘤以及间皮瘤。优选地，其中所述的癌症包括非小细胞肺癌、转移性非小细胞肺癌。

本发明所述癌症的治疗，式(I)的化合物或其药学上可接受的盐将被给予哺乳动物，更具体的是人。

本发明所述激活型突变体形式的EGFR、耐药型突变体形式的EGFR活性治疗可作为单独的疗法应用或除本发明化合物之外，可以涉及常规的手术或放射疗法(例如本发明所述的WBRT)，可与其他药学上可接受的治疗剂联合给药，与其他抗肿瘤药物组合，此联合治疗可通过同时、顺序或分开使用治疗的各组分来实现。所述治疗剂肿瘤剂包括但不限于：作用于DNA化学结构的抗肿瘤药物，如顺铂，影响核苷酸合成的抗肿瘤药物如甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶等，影响核酸转录的抗肿瘤药物如阿霉素、表阿霉素、阿克拉霉素等，作用于微管蛋白合成的抗肿瘤药物如紫杉醇、长春瑞滨等，芳香化酶抑制剂如氨鲁米特、来曲唑、瑞宁德等，细胞信号通路抑制剂如表皮生长因子受体抑制剂伊马替尼、吉非替尼、厄洛替尼、阿法替尼、奥西替尼等、6-(4-溴-2-氯-苯基氨基)-7-氟-3-甲基-3H-苯并咪唑-5-羧酸(2-羟基-乙氧基)-酰胺或其药学上可接受的盐、1-[(1S)-1-(咪唑并[1,2-a]吡啶-6-基)乙基]-6-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-1H[1,2,3]三唑并[4,5-b]吡嗪或其药学上可接受的盐。抗肿瘤单抗，例如抗CTLA-4抗体、免疫抑制剂PD-1、PD-L1、OX40激动剂抗体等，待组合的各成分可同时或顺序的给予，以单一制剂形式或者以不同制剂的形式给予。所述组合不仅包括本发明化合物的一种或其他活性剂的组合，而且也包括本发明化合物的两种或更多的其他活性剂的组合。

下列实施例用于说明而非限定通式(I)化合物的合成方法。温度均为摄氏度。如果没有另外说明，所有的蒸发均在减压下进行。如果没有另外说明，否则试剂是自商业供货商购得且未经进一步纯化即使用。终产物、中间体和原料的结构通过标准分析方法确认，例如元素分析、光谱特征分析，例如MS、NMR。使用的缩写是本领域常规缩写。

中间体A

5-氟-4-甲基-2-硝基苯酚

将3-氟-4-甲基苯酚(10.00g,79.31mmol)、苄基三乙基氯化铵(1.77g,7.93mmol)溶于二氯甲烷(80mL)中，在0℃下缓慢滴加65％浓硝酸(7.35g,79.31mmol)，滴加完毕后继续搅拌0.5h。反应结束后在冰浴下向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液，调pH值至8.0～9.0，萃取，水相再用二氯甲烷(40mL×2)萃取，合并有机相，再依次用水(40mL)和饱和氯化钠(40mL×2)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到粗品，经柱色谱[PE:EA＝200:1(v/v)]分离纯化得到红棕色油状物中间体A(11.30g)，收率为83.2％。

中间体B

1-氟-5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯

将中间体A(11.30g,66.00mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(100mL)中，加入无水碳酸钾(13.71g,99.00mmol)和碘甲烷(14.12g,99.30mmol)，于室温下搅拌过夜。反应结束后加入冰水(220mL)，有固体析出，室温搅拌1h后静置20min，抽滤，滤饼用水(50mL)洗涤后于50℃真空干燥箱干燥过夜，得到类白色固体中间体B(11.61g)，收率为94.6％，无需后处理可直接用于下一步反应。

中间体C

1-(1-(5-甲氧基-2-甲基-4-硝基苯基)哌啶-4-基)-4-甲基哌嗪

将中间体B(11.61g,62.52mmol)溶于N,N-二甲基甲酰胺(200mL)中，加入无水碳酸钾(17.33g,125.04mmol)、1-甲基-4-(哌啶-4-基)哌嗪(17.24g,93.73mmol)，于120℃搅拌4h，反应结束后冷却至室温后，再将反应液缓慢加入冰水(400mL)中，有固体析出，室温搅拌1.5h后静置30min，抽滤，滤饼用水(60mL)洗涤后于50℃真空干燥箱干燥过夜，得到黄色固体中间体C(20.02g)，收率为92.1％，无需后处理可直接用于下一步反应。

中间体D

2-甲氧基-5-甲基-4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯胺

将中间体C(20.02g,57.51mmol)加入乙醇和水的混合溶液[210mL,EtOH:H

中间体E

N-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基)甲酰胺

将醋酸酐(1.51g,14.70mmol)和甲酸(0.76g,16.51mmol)充分混合，回流搅拌4h，随后将反应冷却至室温，并将其加入四氢呋喃(15mL)溶解的中间体D(1.50g,4.71mmol)中，于室温下搅拌2h，反应结束后加入饱和碳酸氢钠溶液，调pH值至8.0～9.0，用二氯甲烷(25mL×4)萃取，合并有机相，再用饱和氯化钠(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到淡黄色固体中间体E(1.48g)，收率为90.5％，无需后处理可直接用于下一步反应。ESI-HRMS(m/z):347.2331[M+H]

中间体F

1-(2-(甲硫基)嘧啶-4-基)-3-苯基-1H-吡唑-4-甲醛

将2-甲硫基-4-氯嘧啶(5.11g,32.02mmol)充分溶解于N,N-二甲基甲酰胺(35mL)中，加入无水碳酸钾(8.04g,58.22mmol)和3-苯基-1H-吡唑-4-甲醛(L-2,5.00g,29.13mmol)，于50℃下搅拌12h，反应结束后冷却至室温后，再将反应液缓慢加入冰水(80mL)中，搅拌3h后有固体析出，静置20min，过滤所得固体，滤饼用水(10mL)洗涤后于50℃真空干燥箱干燥过夜，得到类白色固体中间体F(7.01g)，收率为81.4％，无需后处理可直接用于下一步反应。ESI-HRMS(m/z):297.0735[M+H]

中间体G

1-(2-(甲基磺酰基)嘧啶-4-基)-3-苯基-1H-吡唑-4-甲醛

将中间体F(7.01g,23.72mmol)和钼酸铵四水合物(2.92g,2.37mmol)充分溶解于乙醇(50mL)中,于室温下缓慢滴加30％过氧化氢溶液(26.82g,236.53mmol)，滴加完毕后搅拌2h，反应结束后加水(70mL)，用二氯甲烷(70mL×3)萃取，合并有机相，再用10％亚硫酸钠溶液(30mL×2)洗涤，最后依次用水(70mL)、饱和氯化钠(60mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到白色固体中间体G(6.53g)，收率为84.3％，无需后处理可直接用于下一步反应。ESI-HRMS(m/z):328.1768[M+H]

中间体H

1-(2-((2-甲氧基-5-甲基-4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基)氨基)嘧啶-4-基)-3-苯基-1H-吡唑-4-甲醛

在氮气保护下，将中间体E(1.48g,4.27mmol)加入超干四氢呋喃(9mL)中，再加入超干N,N-二甲基乙酰胺(6mL)使其充分溶解。随后将温度降低至5℃，缓慢滴加1.0mol/L四氢呋喃溶液溶解的超干叔丁醇钠(6mL)溶液，滴加完毕后搅拌2h。再将反应温度调节至室温，加入中间体G(1.68g，5.12mmol)，继续搅拌1h，反应结束后向反应液中加入饱和碳酸氢钠溶液，调pH值至8.0～9.0，用二氯甲烷(30mL×3)萃取，合并有机相，再用饱和氯化钠(40mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到粗品，经柱色谱[DCM:MeOH＝15:1(v/v)]分离纯化得到淡黄色固体中间体H(1.06g)，收率为43.9％。ESI-HRMS(m/z):567.3224[M+H]

实施例1

4-(4-((二甲基氨基)甲基)-3-苯基-1H-吡唑-1-基)-N-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基)嘧啶-2-胺

将中间体H(1.00g,1.80mmol)加入甲醇(20mL)中，再加入二甲胺(0.24g,5.31mmol)、冰醋酸(2滴)和无水硫酸镁(1.73g,14.12mmol)，于70℃下搅拌2h。反应结束后将温度调节至室温，加入氰基硼氢化钠(3.31g,5.32mmol)，搅拌至过夜。反应结束后向反应液中加入水(30mL)用以淬灭反应，再加入二氯甲烷(30mL×6)萃取，合并所有有机相，再用饱和氯化钠(60mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到粗品，经柱色谱[DCM:MeOH＝10:1(v/v)]分离纯化得到目的产物实施例1(0.21g)，收率为19.5％。

成盐：

4-(4-((二甲基氨基)甲基)-3-苯基-1H-吡唑-1-基)-N-(2-甲氧基-5-甲基-4-(4-(4-甲基哌嗪-1-基)哌啶-1-基)苯基)嘧啶-2-胺盐酸盐

将实施例1(0.21g)溶解于乙腈(2mL)，搅拌下缓慢加入1N HCl(2mL)，搅拌片刻后冷冻干燥除去溶剂，得黄色固体，即为实施例1化合物的盐酸盐(0.26g)。

按与实施例1基本操作相似的操作合成实施例2-20(参见表1)，从而得到期望的产物。

表1实施例2-20的结构和质谱数据

注：实施例7的制备过程：选用外消旋DL-氨基丙醇底物，将中间体H(1.00g,1.80mmol)加入甲醇(20mL)中，再加入DL-氨基丙醇(0.39g,5.20mmol)、冰醋酸(2滴)和无水硫酸镁(1.73g,14.12mmol)，于70℃下搅拌2h。反应结束后将温度调节至室温，加入氰基硼氢化钠(3.31g,5.32mmol)，搅拌至过夜。反应结束后向反应液中加入水(30mL)用以淬灭反应，再加入二氯甲烷(30mL×6)萃取，合并所有有机相，再用饱和氯化钠(60mL)洗涤，无水硫酸钠干燥，抽滤，滤液减压浓缩得到粗品，经柱色谱[DCM:MeOH＝10:1(v/v)]分离纯化制得相应的外消旋产物(0.15g)，收率为13.54％。

实施例9、10的制备过程参照实施例7，分别选用D-氨基丙醇、L-氨基丙醇底物替换DL-氨基丙醇来制得相应的手性产物。

实施例20活性测试

测定1：Lance筛选测定EGFR抑制活性

通过Lance Ultra assay测定来确定IC

详细说明：Lance筛选测定作为基于TR-FRET的384孔测定进行。在第一步中，将EGFR

参照化合物(商购Lazertinib)的结构式：

实验结果显示在表2。

表2本发明实施例以及参照化合物(商购Lazertinib)活性测定的数据

测定2：使用人体肝脏微粒体进行化合物稳定性的评价

将实施例化合物的肝微粒体酶稳定性与Lazertinib进行比较。

测定系统：本发明化合物的代谢稳定性利用由男女混合的肝脏微粒体用1mMNADPH进行试验。样品使用质谱仪进行分析。将HRMS用于确定峰面积响应比率(对应于试验化合物或对照物的峰面积除以分析内标的峰面积)而不运行标准曲线。为了检测到所有的可能代谢物，在适当的m/z范围内进行HRMS扫描。

测定条件：该测定用一次孵育(N＝1)进行。将试验化合物在37℃下在含有0.5毫克/毫升肝脏微粒体蛋白的缓冲液中孵育。通过加入辅因子引发反应，并于0、2、4、8、16、24、36、48小时取样，平行孵育阳性对照物(5μM睾丸素)并于0、2、4、8、16、24、36、48小时取样。

测定质量控制：平行进行对照化合物睾丸素以证实(肝脏)微粒体的酶活性。最终时间点后，利用荧光测定法来确认NADPH添加到反应混合物中。对照物的T1/2满足可接受的内标。

分析方法：

液相色谱柱：Thermo BDS Hypersil C18 30X2.0mm，3μm，具有保护柱M.P.，缓冲液：25mM甲酸接缓冲液，pH 3.5；水相(A)：90％水，10％缓冲液；有机相(B)：90％乙腈，10％缓冲液；流速：300微升/分钟自动进样器：注射体积10微升。梯度程序参见表3。

表3梯度程序

通过使用人体肝微粒体，如本发明中所述实施例4、7、9和10表现出大于24小时的代谢半衰期，实施例3、5、8和11表现出介于16-24小时的代谢半衰期，显著大于Lazertinib的15小时的代谢半衰期。相对较长的代谢半衰期使得本发明具有降低医疗剂量和扩大给药时间间隔的潜能。

以上所提供的实施例并非用以限制本发明所涵盖的范围，所描述的步骤也不是用以限制其执行顺序。本领域技术人员结合现有公知常识对本发明做显而易见的改进，亦落入本发明权利要求书所界定的保护范围之内。