一种鉴别甜菊糖苷来源的方法

技术领域

本发明涉及药物来源检测方法，具体地说，涉及一种鉴别甜菊糖苷来源的方法。

背景技术

甜菊糖苷是一种从菊科草本植物甜菊叶中精提的新型天然低热量甜味剂，是一类以甜菊醇为母核的一系列化合物，其组成中包含莱鲍迪苷A,(简称Reb A)，莱鲍迪苷B(RebB),Reb D,Reb M、蛇菊苷(ST苷)，杜克苷(dul A)等一系列化合物，据JECFA2019披露，已经有60多种甜菊糖苷化合物成分存在于甜菊糖苷提取物中。因其甜度高、热量低、无毒性、耐高温、耐酸碱和水溶性好等优点，甜菊糖苷被国际社会誉为“第三代健康糖源”和“最佳天然甜味剂”，美国食品药品监督管理局允许其作为高倍甜味剂应用于食品行业。伴随着甜菊产品的深入研究，新发现的Reb A、reb D、Reb M、Reb E等甜菊糖苷化合物具有更优的甜味特性。但因这些成分在甜菊叶中含量很低，采用传统的植物提取工艺提取的甜菊糖苷无法满足市场的供应，因此有很多生产商采用基因工程改造过的酶或微生物将货值较低的的甜菊糖苷STV或Reb A等成分转化成货值较高的reb D、reb M等成分，即酶催化甜菊糖苷；也有部分厂商，以葡萄糖或蔗糖等为糖原，采用生物工程改造菌株生产特定的甜菊糖苷如Reb A、reb D、Reb M，但在一些追求天然植物来源的消费者看来这三种加工生产的甜菊糖苷是不同的。

甜菊糖苷通常以粉末的形式进行批量生产，无论是植物提取来源的还是微生物发酵来源的，其外观、颜色、味道和密度并没有明显的差异，且采用传统的HPLC方法或HPLC-MS等手段都无法区分这三种来源的甜菊糖苷。甜菊糖苷通常作为食品甜味剂添加进食品中被摄入，因此，消费者不能从其外观辨别出其来源于甜叶菊提取或是基因工程酶或微生物发酵。

尽管有些消费者对甜菊糖苷的来源不感兴趣，但对于某些国家特殊的消费者来说，他们不能接受通过基因改造的微生物发酵生产的甜菊糖苷，因为通过微生物发酵生产的甜菊糖苷涉及到基因改造的问题，如中国、欧洲等多国，该类产品的上市需要严格的审批手续来控制产品风险。

因此，市场上亟需有一种方法，通过该方法，消费者可准确地判断出甜菊糖苷样品是来源于甜叶菊提取还是来源于生物发酵。以这种方式可避免基因工程加工所得的甜菊糖苷产品混入天然的甜菊糖苷产品的市场中。

发明内容

为解决上述技术问题，本发明的目的在于提供一种鉴别甜菊糖苷来源的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种鉴别甜菊糖苷来源的方法，其中，所述的方法包括如下步骤：

S1、选取多组不同真实来源的甜菊糖苷粉末样本；

S2、测定每个所述甜菊糖苷粉末样本的稳定同位素比值δ

S3、选取未知来源的待测甜菊糖苷粉末样本，测定稳定同位素比值δ

S4、将上述步骤S3得到的稳定同位素比值δ

本发明通过测定甜菊糖苷样品的稳定碳同位素比率相对大小的δ

就本发明而言，由甜叶菊植物提取的或微生物发酵的甜菊糖苷均具有非常相似的物理和化学特性，使用普通的检测方法很难确定甜菊糖苷样品是否来源于甜叶菊提取，对于一些特殊消费者而言确定甜菊糖苷是天然来源的或基因工程来源的是至关重要的。

本发明通过检测多组不同真实来源的甜菊糖苷样本的稳定同位素比值δ

本发明建立了一种鉴别甜菊糖苷来源的方法，具有判别准确率高，检测指标少，样品前处理简单，样品需要量少的优点。

甜叶菊(C

进一步的，步骤S01中，不同真实来源的甜菊糖苷样本包括来源于甜叶菊植物提取的甜菊糖苷样本、从头合成甜菊糖苷样本或者酶催化甜菊糖苷样本。

具体地说，当甜菊糖苷样本来源于甜叶菊植物提取时，步骤S2中确定的稳定同位素比值δ

当甜菊糖苷样本来源于从头合成甜菊糖苷时，步骤S2中确定的稳定同位素比值δ

当甜菊糖苷样本来源于酶催化甜菊糖苷时，步骤S2中确定的稳定同位素比值δ

进一步的，所述的从头合成甜菊糖苷为以糖源为原料从头合成所得到的甜菊糖苷。

进一步的，所述的糖源为葡萄糖和/或蔗糖。

进一步的，所述的酶催化甜菊糖苷为以植物提取的甜菊糖苷为底物，通过生物发酵或酶转化得到的甜菊糖苷。

进一步的，采用元素分析-稳定同位素质谱仪测试时，载气He流速为200mL/min，反应管温度为950℃，还原管温度为600℃。

本发明中，在采用元素分析-稳定同位素质谱仪测试时，可参照现有技术的方法进行，也可以按照下述方法对样品进行处理及检测：

将样品过100目筛处理，称样1-10mg，用锡纸包裹样品，经元素分析仪高温燃烧后将样品中的有机碳转化为CO

与现有技术相比，本发明具有如下优点：

本发明通过检测多组不同真实来源的甜菊糖苷样本的稳定同位素比值δ

具体实施方式

下面将结合本发明实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1

S1、选取多组不同真实来源的甜菊糖苷粉末样本，样本分别来源于甜叶菊植物提取、从头合成甜菊糖苷和酶催化甜菊糖苷，每组样本8个；

S2、测定已知来源的甜菊糖苷粉末样本的稳定同位素比值δ

表1-1、来源于甜叶菊植物提取的甜菊糖苷的稳定同位素比值δ

表1-2、来源于从头合成甜菊糖苷的稳定同位素比值δ

表1-3、来源于酶催化甜菊糖苷稳定同位素比值δ

根据测得的稳定同位素比值δ

当甜菊糖苷样本来源于甜叶菊植物提取时，确定的稳定同位素比值δ

当甜菊糖苷样本来源于从头合成甜菊糖苷时，确定的稳定同位素比值δ

当甜菊糖苷样本来源于酶催化甜菊糖苷时，确定的稳定同位素比值δ

S3、选取3个未知来源的待测甜菊糖苷粉末样本，测定稳定同位素比值δ

表2、稳定同位素比值δ

S4、将上述步骤S3得到的稳定同位素比值δ

结果显示，第一个样本“未知-1”的来源为甜叶菊植物提取，第二个样本“未知-2”的来源为从头合成甜菊糖苷，第三个样本“未知-3”的来源为酶催化甜菊糖苷。

采用元素分析-稳定同位素质谱仪测试时，载气He流速为200mL/min，反应管温度为950℃，还原管温度为600℃。

本发明人采用上述方法判别甜菊糖苷的来源时，具有鉴别准确率高，检测指标少以及样品前处理简单的优点。可适用于对批量样本的判别，提高实验人员的效率。

试验例1

本试验例考察了本发明方法鉴别待测甜菊糖苷粉末样本来源的判别正确率。

方法：选取三组待测甜菊糖苷粉末样本，样本分别来源于甜叶菊植物提取、从头合成甜菊糖苷和酶催化甜菊糖苷，每组样本10个；用锡杯包好，置于元素分析-稳定同位素质谱仪的样品盘上，载气He流速为200mL/min，反应管温度为950℃，还原管温度为600℃，测定稳定同位素比值δ

表3、不同方法的判别正确率

注：A——甜叶菊植物提取

B——从头合成甜菊糖苷

C——酶催化甜菊糖苷

从上述结果可以看出，本发明方法用于鉴别甜菊糖苷来源时，具有鉴别准确率高、检测指标少以及样品前处理简单的优点。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。