一种间充质干细胞培养基添加剂及其应用

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域。具体而言，本发明涉及一种间充质干细胞的培养基及其应用。

背景技术

间充质干细胞是一种多能干细胞，它具有干细胞的所有共性，即自我更新和多向分化能力。间充质干细胞不仅存在于骨髓中，也存在胚胎、脂肪、牙龈、牙髓、骨骼肌、骨外膜和骨小梁中。

由于间充质干细胞具有多向分化的潜能，将间充质干细胞移植到体内是治疗自身免疫性疾病、血液系统疾病，心血管疾病，肝硬化，神经系统疾病，膝关节半月板部分切除损伤修复，自身免疫性疾病等严重危害人类健康疾病的有效方法。但是，由于间充质干细胞在体内的数量较少、增殖较慢，大大的限制了间充质干细胞在临床中的应用。

目前，间充质干细胞的体外增殖途径是将间充质干细胞接种于间充质干细胞培养基进行体外培养。然而，现有的培养基培养的间充质干细胞大多存在活性和增殖能力较差的问题。现急需研究一种能够提高间充质干细胞的增殖率和细胞活性的培养基。

为此，提出本发明。

发明内容

本发明目的在于提供间充质干细胞的培养基添加剂、培养基及培养间充质干细胞的方法、应用。

为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：

一种间充质干细胞的培养基添加剂，包括小蘖碱。

可选地，小蘖碱在培养基中的终浓度为1～3mg/mL。

可选地，还包括补骨脂素。

可选地，补骨脂素在培养基中的终浓度为15-30μmol/mL。

可选地，还包括何首乌多糖。

可选地，何首乌多糖在培养基中的终浓度为2～5mg/L。

可选地，还包括谷胱甘肽。

可选地，谷胱甘肽在培养基中的终浓度为10～20mg/mL。

可选地，所述间充质干细胞包括脐带血间充质干细胞、骨髓间充质干细胞或牙龈间充质干细胞。

一种间充质干细胞的培养基，包括以上任一所述的培养基添加剂。

可选地，还包括基础培养成分。

可选地，所述基础培养成分为a-MEM培养基。

培养间充质干细胞的方法，包括将充间质干细胞接种到以上任一所述的培养基中，允许生长的条件下培养。

可选地，所述间充质干细胞包括脐带血间充质干细胞、骨髓间充质干细胞或牙龈间充质干细胞。

以上任一所述的培养基添加剂在培养间充质干细胞、制备间充质干细胞培养基中的应用。

本发明具备下述有益效果：

本发明的间充质干细胞的培养基添加剂可以提升间充质干细胞的存活率、增殖速度和活性，除了可以添加小檗碱外，还可以与补骨脂素、何首乌多糖、谷胱甘肽相互配合，获得更优异地间充质干细胞培养效果。

具体实施方式

本发明至少包括以下任意一种实施方式。

本发明涉及一种间充质干细胞的培养基添加剂，包括小蘖碱。小檗碱是从中药黄连中分离的一种季铵生物碱，是黄连抗菌的主要有效成分。小檗碱可用于治疗胃肠炎、细菌性痢疾等肠道感染、眼结膜炎、化脓性中耳炎等，还具有阻断α-受体，抗心律失常作用。本发明发现小蘖碱具有提高充间质干细胞的存活率、增殖速度和活性。

在一些可选地方式中，小蘖碱在培养基中的终浓度为1～3mg/mL。

在一些可选地方式中，一种间充质干细胞的培养基添加剂中还包括补骨脂素。补骨脂素是自中药补骨脂中提取的有效活性成分之一。补骨脂素具有雌激素样作用，能对雌激素受体起到一定调节作用，还可以发挥抗肿瘤、抗骨质疏松、抗氧化和保护心血管等植物雌激素样作用。

在一些可选地方式中，补骨脂素在培养基中的终浓度为15-30μmol/mL。

在一些可选地方式中，一种间充质干细胞的培养基添加剂中还包括何首乌多糖。何首乌多糖是植物何首乌块根中提取到的一种新活性成分，具有免疫调节、抗氧化、抗衰老和抗老年痴呆等生物活性作用。

在一些可选地方式中，何首乌多糖在培养基中的终浓度为2～5mg/L。

在一些可选地方式中，一种间充质干细胞的培养基添加剂中还包括谷胱甘肽。谷胱甘肽是一种含γ-酰胺键和巯基的三肽，由谷氨酸、半胱氨酸及甘氨酸组成，存在于几乎身体的每一个细胞，谷胱甘肽能帮助保持正常的免疫系统功能，并具有抗氧化作用、整合解毒作用。

在一些可选地方式中，谷胱甘肽在培养基中的终浓度为10～20mg/mL。

在一些可选地方式中，所述间充质干细胞包括脐带血间充质干细胞、骨髓间充质干细胞或牙龈间充质干细胞。

本发明还涉及一种间充质干细胞的培养基，包括以上任一所述的培养基添加剂。在一些可选地方式中，还包括基础培养成分；本领域技术人员应该理解基础培养成分为间充质干细胞常规培养成分，通常为一些基础培养基。在一些可选地方式中，所述基础培养成分为a-MEM培养基。

本发明还涉及培养间充质干细胞的方法，包括将充间质干细胞接种到以上任一所述的培养基中，允许生长的条件下培养。允许生长的条件应当理解为适合充间质干细胞生长或增殖的条件，如温度、湿度、空气氛围等。

在一些可选地方式中，所述间充质干细胞包括脐带血间充质干细胞、骨髓间充质干细胞或牙龈间充质干细胞。

本发明还涉及以上任一所述的培养基添加剂在培养间充质干细胞、制备间充质干细胞培养基中的应用。

本发明提供的间充质干细胞的培养基添加剂可以提升间充质干细胞的存活率、增殖速度和活性，除了可以添加小檗碱外，还可以与补骨脂素、何首乌多糖、谷胱甘肽相互配合，进一步提升间充质干细胞培养效果。

下面主要结合具体实施例对本发明作进一步详细的说明。提供以下实施例以说明本发明的实施方案，并非意在限制本发明。本发明可以任选包括未通过实施例示出的实施方案。

具体实施方式中未详细描述的方法可参考本领域常规方法或厂家说明书；具体实施方式中未描述出处的试剂均可通过商业化渠道获得。

实施例1

一种间充质干细胞的培养基添加剂，其在培养基中的终浓度为：何首乌多糖(5mg/L)、补骨脂素(30μmol/mL)、谷胱甘肽(10mg/mL)和小蘖碱(1mg/mL)。

实施例2

一种间充质干细胞的培养基添加剂，其在培养基中的终浓度为：何首乌多糖(2mg/L)、补骨脂素(15μmol/mL)、谷胱甘肽(20mg/mL)和小蘖碱(3mg/mL)。

实施例3

一种间充质干细胞的培养基添加剂，其在培养基中的终浓度为：何首乌多糖(3mg/L)、补骨脂素(20μmol/mL)、谷胱甘肽(15mg/mL)和小蘖碱(2mg/mL)。

实施例4

一种间充质干细胞的培养基添加剂，其在培养基中的终浓度为：何首乌多糖(4mg/L)、补骨脂素(25μmol/mL)、谷胱甘肽(10mg/mL)和小蘖碱(1mg/mL)。

实施例5

一种间充质干细胞的培养基添加剂，其在培养基中的终浓度为：何首乌多糖(5mg/L)、补骨脂素(30μmol/mL)和小蘖碱(1mg/mL)。

实施例6

一种间充质干细胞的培养基添加剂，其在培养基中的终浓度为：何首乌多糖(5mg/L)、谷胱甘肽(10mg/mL)和小蘖碱(1mg/mL)。

实施例7

一种间充质干细胞的培养基添加剂，其在培养基中的终浓度为：补骨脂素(30μmol/mL)、谷胱甘肽(10mg/mL)和小蘖碱(1mg/mL)。

实施例8

一种间充质干细胞的培养基添加剂，其在培养基中的终浓度为：补骨脂素(30μmol/mL)、小蘖碱(1mg/mL)。

实施例9

一种间充质干细胞的培养基添加剂，其在培养基中的终浓度为：小蘖碱(1mg/mL)。

实验例

分别采用实施例1-9的培养基添加剂，添加至a-MEM培养基中，分别用于培养脐带血间充质干细胞、骨髓间充质干细胞或牙龈间充质干细胞。具体步骤包括：取1×10

结束培养后，采用流式细胞仪进行细胞计数，并对细胞进行CD90-FITC、CD73-PE抗体检测，细胞标记方法为：细胞用PBS缓冲盐溶液洗涤一次，加入CD90-FITC、CD73-PE抗体5μL，于4℃避光孵育30min，孵育结束后用PBS缓冲盐溶液再洗涤一次，使用流式细胞仪分析CD90和CD73阳性细胞数。

采用实施例1-9的培养基添加剂制备的培养基以及无添加剂的a-MEM培养基，分别培养脐带血间充质干细胞后，细胞总数、CD90和CD73阳性细胞数如下表所示。

采用实施例1-9的培养基添加剂制备的培养基以及无添加剂的a-MEM培养基，分别培养骨髓间充质干细胞后，细胞总数、CD90和CD73阳性细胞数如下表所示。

采用实施例1-9的培养基添加剂制备的培养基以及无添加剂的a-MEM培养基，分别培养牙龈间充质干细胞后，细胞总数、CD90和CD73阳性细胞数如下表所示。

以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。