一种金莲花提取物、抗菌组合物及应用

技术领域

本发明涉及中药提取物技术领域，尤其涉及一种金莲花提取物及其应用，以及含有该金莲花提取物的抗菌组合物。

背景技术

金莲花为毛茛科金莲花属植物，含荭草苷、牡荆苷、3,4-二甲氧基苯甲酰胺、黎芦酰胺、棕榈酸、生物碱、香豆素、甾萜类化合物等成分，能够清热解毒，消肿，明目，具有抗菌、抗氧化、抗癌、降压、抗炎和解痉作用，临床上可用于治疗急慢性扁桃体炎、急性中耳炎、急性鼓膜炎、急性结膜炎等。

在抗菌方面，清热解毒类中药常与西药联合应用以提高疗效。金莲花作为一种具有清热解毒的中药，也有人将其中成药与西药联合应用。但是中西药联用具有一定的复杂性，既可能增强疗效，也可能降低疗效甚至产生毒副作用。并且对于抗菌类西药如阿奇霉素、头孢类抗生素等，虽然抗菌效果优异，但也大多具有一定的胃肠道反应，甚至使胃肠道的功能失常而降低药物的吸收利用。

发明内容

针对以上技术问题，本发明提供一种金莲花提取物、抗菌组合物及制备方法和应用。该金莲花提取物药性温和，同时还具有良好的抗菌活性，能够单独用作抗菌药物，与西药联合应用时不仅能增强抗菌作用，还能缓解西药的胃肠道反应。

为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下技术方案：

第一方面，本发明实施例提供一种金莲花提取物，其制备方法具体包括以下步骤：

步骤a、将金莲花炒炭，置于pH为5～6的水中，加入纤维素酶进行酶解；

步骤b、将酶解后的物料固液分离，向所得液体中加入乙醇至乙醇体积百分浓度达到65～75％，静置12～24h，去除沉淀。

以上制备方法通过对金莲花炒炭、酶解、醇沉，使制得的金莲花提取物具有良好的抗菌作用，能够单独用作抗菌药物，也可以与西药联合应用以增强药效。并且，该金莲花提取物药性温和，不会引起胃部不适，使其对于脾胃虚弱人群同样适用。试验还发现，将该金莲花提取物与西药联合应用时，不仅能够增强抗菌作用，还能缓解西药的胃肠道反应，减少患者用药过程的不适感。

优选地，步骤a中所述水的重量为所述金莲花炒炭后重量的4～7倍。

优选地，步骤a中以柠檬酸调节所述水的pH。试验发现，柠檬酸不仅能够作为pH调节剂，还有利于炒炭后的金莲花中有效成分的渗出，使酶解、醇沉后的产物具有更强的抗菌活性。

优选地，步骤a中所述纤维素酶的质量为所述金莲花炒炭后重量的1.5％～2.5％。

优选地，步骤a中酶解的条件为：在40～45℃条件下搅拌酶解2～3h，然后升温至90～95℃，保持10～15min灭酶。该酶解条件既能对炒炭后金莲花中的物质进行充分水解，使酶解、醇沉后的产物具有更好的抗菌活性以及对脾胃的保护作用，又具有较高的酶解效率，缩短生产时间。

优选地，步骤b中所述固液分离为3000～3500r/min离心5～8min，以去除部分大分子物质，并将活性小分子成分保留在上清液中。

优选地，所述制备方法还包括将步骤b中去除沉淀的料液进行干燥。

优选地，所述干燥的温度≤60℃。干燥温度过高会使产品中的成分发生变化，从而对其临床效果产生一定影响。干燥的方式可采用常规干燥方式，如喷雾干燥、真空干燥、冷冻干燥等。干燥前可先对料液进行浓缩，以缩短干燥时间，提高干燥效率。

第二方面，本发明实施例还提供上述金莲花提取物在制备抗菌产品中的应用。上述金莲花提取物具有良好的抗菌活性，且能降低其他药物的胃肠道反应，可单独用于制备成抗菌产品，也可以与其他抗菌药物制成复方抗菌药物。

第三方面，本发明实施例还提供一种抗菌组合物，含有上述金莲花提取物。

优选地，所述抗菌组合物还含有阿奇霉素。本发明通过试验发现，阿奇霉素与上述金莲花提取物合用具有协同作用，能够显著提高抗菌效果，所得组合物的抗菌效果优于二者单独使用的效果之和。

优选地，所述金莲花提取物的干燥品的质量与所述阿奇霉素的质量比为3～4:1。金莲花提取物的干燥品与阿奇霉素在该质量比范围内既能保持良好的抗菌作用，又能减少阿奇霉素的胃肠道反应。

具体实施方式

为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合具体实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用于解释本发明，并不用于限定本发明。

实施例1

本实施例提供了一种金莲花提取物，其制备方法具体包括以下步骤：

步骤a、将金莲花炒炭，置于相当于金莲花炒炭后6倍重量的pH为5.5(以柠檬酸调节pH)的水中，加入相当于金莲花炒炭后重量的2.0％的纤维素酶在40～45℃条件下搅拌酶解2.5h，然后升温至95℃，保持10min灭酶；

步骤b、将酶解后的物料在3200r/min的转速下离心7min，取上清液，加入乙醇至乙醇体积百分浓度达到70％，静置18h，去除沉淀。将料液在40～50℃真空干燥，即得。

实施例2

本实施例提供了一种金莲花提取物，其制备方法具体包括以下步骤：

步骤a、将金莲花炒炭，置于相当于金莲花炒炭后4倍重量的pH为5(以柠檬酸调节pH)的水中，加入相当于金莲花炒炭后重量的1.5％的纤维素酶在40～45℃条件下搅拌酶解3h，然后升温至95℃，保持15min灭酶；

步骤b、将酶解后的物料在3000r/min的转速下离心8min，取上清液，加入乙醇至乙醇体积百分浓度达到75％，静置12h，去除沉淀。将料液在40～60℃喷雾干燥，即得。

实施例3

本实施例提供了一种金莲花提取物，其制备方法具体包括以下步骤：

步骤a、将金莲花炒炭，置于相当于金莲花炒炭后7倍重量的pH为6(以柠檬酸调节pH)的水中，加入相当于金莲花炒炭后重量的2.5％的纤维素酶在40～45℃条件下搅拌酶解2h，然后升温至90℃，保持15min灭酶；

步骤b、将酶解后的物料在3500r/min的转速下离心5min，取上清液，加入乙醇至乙醇体积百分浓度达到75％，静置24h，去除沉淀。将料液冷冻干燥，即得。

实施例4

本实施例提供了一种抗菌组合物，由阿奇霉素和实施例1制得的金莲花提取物组成。金莲花提取物的质量与阿奇霉素的质量比为3.5:1。

实施例5

本实施例提供了一种抗菌组合物，由阿奇霉素和实施例1制得的金莲花提取物组成。金莲花提取物的质量与阿奇霉素的质量比为3:1。

实施例6

本实施例提供了一种抗菌组合物，由阿奇霉素和实施例1制得的金莲花提取物组成。金莲花提取物的质量与阿奇霉素的质量比为4:1。

对比例1

本对比例提供了一种抗菌组合物，由阿奇霉素和金莲花提取物组成，金莲花提取物的质量与阿奇霉素的质量比为3.5:1。其中金莲花提取物的制备方法为：

步骤a、将金莲花置于相当于其6倍重量的pH为5.5(以柠檬酸调节pH)的水中，加入相当于该金莲花重量的2.0％的纤维素酶在40～45℃条件下搅拌酶解2.5h，然后升温至95℃，保持10min灭酶；

步骤b、将酶解后的物料在3200r/min的转速下离心7min，取上清液，加入乙醇至乙醇体积百分浓度达到70％，静置18h，去除沉淀。将料液在40～50℃真空干燥，即得。

对比例2

本对比例提供了一种抗菌组合物，由阿奇霉素和金莲花提取物组成，金莲花提取物的质量与阿奇霉素的质量比为3.5:1。其中金莲花提取物的制备方法为：

步骤a、将金莲花炒炭，置于相当于其6倍重量的pH为5.5(以柠檬酸调节pH)的水中在40～45℃条件下超声提取1.5h；

步骤b、将超声提取后的物料在3200r/min的转速下离心7min，取上清液，加入乙醇至乙醇体积百分浓度达到70％，静置18h，去除沉淀。将料液在40～50℃真空干燥，即得。

对比例3

本对比例提供了一种抗菌组合物，由阿奇霉素和金莲花提取物组成，金莲花提取物的质量与阿奇霉素的质量比为3.5:1。其中金莲花提取物的制备方法为：

步骤a、将金莲花炒炭，置于相当于金莲花炒炭后6倍重量的pH为5.5(以柠檬酸调节pH)的水中，加入相当于金莲花炒炭后重量的2.0％的纤维素酶在40～45℃条件下搅拌酶解2.5h，然后升温至95℃，保持10min灭酶；

步骤b、将酶解后的物料在3200r/min的转速下离心7min，取上清液，在40～50℃真空干燥，即得。

效果例1

对实施例1、4以及对比例1～3所得产品进行抗菌效果的考察。

将-20℃保存的肺炎克雷伯菌在LB琼脂培养基平板上活化，挑取菌团，用无菌生理盐水配制成终浓度为1×10

将加入待测药液的平板盖上培养皿盖，置于37℃培养24h，然后取出，测量各组抑菌圈直径。空白对照组抑菌圈直径为1.16cm，其余各组抑菌圈直径平均值如表1所示。

表1各组待测药液的抑菌结果

由表1试验结果可见，在相同的药物浓度下，实施例1的金莲花提取物具有一定的抑菌活性，实施例4将金莲花提取物与阿奇霉素合用后，所得抗菌组合物的抗菌活性优于单独使用阿奇霉素或金莲花提取物，说明本发明的金莲花提取物与阿奇霉素具有良好的协同效应。由对比例1～3的数据可见，将阿奇霉素与其他提取方法制备的金莲花提取物合用后，其协同效应明显不及实施例4，说明用本发明实施例提供的金莲花提取物制得的抗菌组合物具有更强的抗菌活性。

效果例2

本效果例考察了实施例1、4以及对比例1～3所得产品对消化道功能的影响。

实验动物：SPF级昆明小鼠，雌雄各半，体重20～22g。按体重随机分为实施例1组、实施例4组、对比例1组、对比例2组、对比例3组、阿奇霉素组和空白对照组，根据阿奇霉素的人用药临床常用量换算小鼠给药量，实施例4组、对比例1组、对比例2组、对比例3组和阿奇霉素组均按240mg/kg对小鼠进行灌胃(实施例4、对比例1～3的给药量均按阿奇霉素计算)，实施例1组的给药量与实施例4组中金莲花提取物的给药量相等。每天给药一次，连续给药3d。空白对照组灌胃等体积的生理盐水。给药期间每天对小鼠进行称重并观察其摄食情况。

各组小鼠的体重变化如表2所示。

表2各组小鼠的体重变化

a：给药组与空白对照组比较P＜0.05；

b：给药组与阿奇霉素组比较P＜0.05。

实验期间，实施例1、4组和空白对照组小鼠摄食正常，阿奇霉素组小鼠从第2天起摄食减少，对比例各组小鼠摄食也比空白对照组有所减少，但比阿奇霉素组摄食稍多。

末次给药后1h，每只小鼠灌胃黑色半固体糊(每150ml含有5g CMC、8g奶粉、4g糖、4g淀粉和1g活性炭)0.8ml，10min后处死小鼠，结扎胃贲门和胃幽门，剪下胃并称重，质量记为m

胃排空率＝[0.8-(m

小肠推动率＝(小肠全长-糊推动长度)/小肠全长。

各组小鼠的胃排空率和小肠推动率如表3所示。

表3各组小鼠的胃排空率和小肠推动率

a：给药组与空白对照组比较P＜0.05；

b：给药组与阿奇霉素组比较P＜0.05。

由表2、3的试验结果可见，实施例1的金莲花提取物对消化道功能无影响，实施例4将金莲花提取物与阿奇霉素合用后，所得抗菌组合物对消化道的影响与单独使用阿奇霉素相比显著下降，说明本发明的金莲花提取物能够减少阿奇霉素的胃肠道反应。由对比例1～3的数据可见，将阿奇霉素与其他提取方法制备的金莲花提取物合用后，减少胃肠道反应的效果明显不及实施例4，说明本发明实施例提供的金莲花提取物能够更好地减少阿奇霉素的胃肠道反应。

取各组小鼠的胃以及幽门下1cm的肠段进行病理学检查，各组小鼠胃壁及肠壁组织结构均未见异常病变。

以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。