一种修复和维持阴道微生态平衡的益生菌制剂

技术领域

本发明属于制药技术领域，涉及一种修复和维持阴道微生态平衡的益生菌制剂。

背景技术

人体健康和微生物组的平衡息息相关，近年来研究较多的主要为肠道微生物组，然而女性生殖道菌群的平衡不但与女性自身的身体健康息息相关，更会影响到后代的健康。

阴道微生态平衡与女性生殖道疾病之间存在着重要的关系，乳酸杆菌是绝大多数育龄期女性阴道定殖的主要细菌，在维持女性阴道健康中发挥着关键作用，在健康女性阴道中乳杆菌的丰度通常在70％以上，常见的乳杆菌有20多种，如卷曲乳杆菌、詹氏乳杆菌、格氏乳杆菌、惰性乳杆菌和约氏乳杆菌等；其他常见菌还有双歧杆菌、大肠埃希菌和拟杆菌等；另外还有一些菌群被认为与及菌群失衡和疾病有关，如阴道加德纳菌、气球菌和普氏菌等；此外还有一些条件致病菌如白色假丝酵母菌；这些菌之间相互作用，相互制约，达到动态平衡，才能维持身体健康。

任何影响生态系统的要素都会引发某些破坏平衡的现象，并导致生物链的断裂；当存在不平衡时，突然增加的繁殖就会导致菌群的紊乱。阴道所处的解剖位置对阴道自洁十分不利，且为开放性腔道，它内通子宫颈，外连会阴，与尿道和肛门相毗邻。生理环境的特殊性，阴道和外阴温暖潮湿的特征，非常适合多种病原生物的生长繁殖。尤其是在外阴部位富含蛋白的分泌物，极易成为病原生物繁殖的温床，因此女性尿路感染的发病率要比男性高的多。

目前现有的阴道感染性疾病的诊治理念，均以杀灭微生物为主要的治疗方法。大量的抗生素，口服或外用治疗剂(阴道栓、泡腾片等)，以及过度清洁灌洗，在杀灭致病菌的同时，严重影响了阴道内酸碱和菌群平衡，自洁自卫功能遭到破坏。

因此，想要提供一种可以修复和维持阴道微生态平衡的制剂。

发明内容

针对现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种修复和维持阴道微生态平衡的益生菌制剂。本发明提供的益生菌制剂具有抗菌消炎、除肿镇痛、抑菌止痒的作用，同时具有清新除味的功能，能够有效缓解女性阴道炎所带来的不适感；同时本发明提供的益生菌制剂还能够预防妇科炎症、由HIV或HPV引发的宫颈癌等疾病；本发明提供的益生菌制剂不添加任何化学添加剂，天然健康无副作用。

为达此目的，本发明采用以下技术方案：

第一方面，本发明提供了一种修复和维持阴道微生态平衡的益生菌制剂，所述益生菌制剂包括益生菌粉剂，所述益生菌粉剂由植物乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、嗜酸乳杆菌、詹氏乳杆菌和格氏乳杆菌组成。

本发明提供的益生菌粉剂能够有效修复和维持女性阴道微生态平衡，能够预防阴道细菌感染，具有抗菌消炎、除肿镇痛、抑菌止痒的作用。五种益生菌相互配合，替换掉任何一种益生菌均无法达到本发明的效果。

为了进一步增加本发明提供的益生菌制剂的效果，优选本发明所述益生菌粉剂中包含如下重量份的组分：有效活菌数为(0.5～5)×10

为了进一步增加益生菌制剂的抗菌消炎以及止痒作用，本发明所述益生菌制剂中还包括植物粉剂，所述植物粉剂包含车前草提取物和龙胆草提取物。本发明选用的车前草提取物和龙胆草提取物具有清新除味功效，更能有效缓解女性阴道炎所带来的不适感。

作为本发明的一种优选技术方案，以重量份计，所述植物粉剂包含如下重量份的组分：车前草提取物10-20份，例如12份、15份、16份、18份等，和龙胆草提取物10-20份，例如12份、15份、16份、18份等。

本发明每克所述益生菌制剂中，总的有效活菌数为(1～10)×10

本发明所述的益生菌制剂的制备方法为常规方法，例如混合即可。

本发明所述的益生菌制剂的使用方法为：将本发明益生菌制剂溶于适量温水中，调制成浓稠溶液，涂抹于患处。

第二方面，本发明提供了第一方面所述的益生菌制剂在制备预防妇科炎症的药物中的应用。

本发明所述妇科炎症包括阴道炎、盆腔炎或宫颈炎。

第三方面，本发明提供了第一方面所述的益生菌制剂在制备预防宫颈癌的药物中的应用，优选所述宫颈癌由HIV或HPV引发。

第四方面，本发明提供了第一方面所述的益生菌制剂在制备抗菌消炎、除肿镇痛或抑菌止痒药物中的应用。

与现有技术相比，本发明具有以下有益效果：

(1)本发明提供的益生菌制剂能够有效修复和维持女性阴道微生态平衡，能够预防阴道细菌感染，具有抗菌消炎、除肿镇痛、抑菌止痒的作用；

(2)本发明所述植物粉剂中包含车前草提取物和龙胆草提取物可以进一步增加益生菌粉剂的抗菌消炎以及止痒作用，具有清新除味功效，更能有效缓解女性阴道炎所带来的不适感；

(3)本发明提供的益生菌制剂能够有效预防妇科炎症，并且有效预防由HIV或HPV等病毒引发的宫颈癌等疾病；

(4)本发明提供的益生菌制剂不添加任何化学添加剂，天然健康无副作用。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明的技术方案。本领域技术人员应该明了，所述具体实施方式仅仅是帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。

本发明提供一种用于修复和维持阴道微生态平衡的益生菌制剂。本发明实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行，所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。

除非另有定义，本文所用的所有技术和科学术语与术语本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在限制本发明。本文所使用的术语“和/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

以下对发明技术方案进行详细描述，以使其更容易理解和掌握。

下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

本发明下述实施例中采用的原料来源如下：

植物乳杆菌冻干粉：威凯海思(山东)生物工程有限公司；

鼠李糖乳杆菌冻干粉：西安维特生物科技有限责任公司；

嗜酸乳杆菌冻干粉：西安维特生物科技有限责任公司；

卷曲乳杆菌冻干粉：西安维特生物科技有限责任公司；

詹氏乳杆菌冻干粉：陕西森弗天然制品有限公司；

格氏乳杆菌冻干粉：陕西森弗天然制品有限公司；

车前草提取物：陕西华实生物科技有限公司；

龙胆草提取物：陕西斯诺特生物技术有限公司；

蛇床子提取物：西安赛邦生物技术有限公司。

实施例1

本实施例提供了一种益生菌制剂，由益生菌粉剂和植物粉剂组成。

以重量份计，所述益生菌粉剂由植物乳杆菌20份、鼠李糖乳杆菌10份、嗜酸乳杆菌20份、詹氏乳杆菌20份和格氏乳杆菌30份组成，所述植物粉剂由车前草提取物10份和龙胆草提取物10份组成；

制备方法为：将上述各配方量组分混合得到益生菌制剂。

实施例2

本实施例提供了一种益生菌制剂，由益生菌粉剂和植物粉剂组成。

以重量份计，所述益生菌粉剂由植物乳杆菌25份、鼠李糖乳杆菌15份、嗜酸乳杆菌25份、詹氏乳杆菌25份和格氏乳杆菌35份组成，所述植物粉剂由车前草提取物15份和龙胆草提取物15份组成；

制备方法为：将上述各配方量组分混合得到益生菌制剂。

实施例3

本实施例提供了一种益生菌制剂，由益生菌粉剂和植物粉剂组成。

以重量份计，所述益生菌粉剂由植物乳杆菌30份、鼠李糖乳杆菌20份、嗜酸乳杆菌30份、詹氏乳杆菌30份和格氏乳杆菌40份组成，所述植物粉剂由车前草提取物20份和龙胆草提取物20份组成；

制备方法为：将上述各配方量组分混合得到益生菌制剂。

实施例4

本实施例提供了一种益生菌制剂。

以重量份计，所述益生菌粉剂由植物乳杆菌25份、鼠李糖乳杆菌15份、嗜酸乳杆菌25份、詹氏乳杆菌25份和格氏乳杆菌35份组成，所述植物粉剂由蛇床子提取物15份和龙胆草提取物15份组成。

制备方法为：将上述各配方量组分混合得到益生菌制剂。

实施例5

本实施例提供了一种益生菌制剂。

以重量份计，所述益生菌制剂由植物乳杆菌20份、鼠李糖乳杆菌10份、嗜酸乳杆菌20份、詹氏乳杆菌20份和格氏乳杆菌30份组成；

制备方法为：将上述各配方量组分混合得到益生菌制剂。

对比例1

本对比例提供了一种益生菌制剂，由益生菌粉剂和植物粉剂组成。

以重量份计，所述益生菌粉剂由植物乳杆菌30份、鼠李糖乳杆菌20份、嗜酸乳杆菌30份、卷曲乳杆菌30份和格氏乳杆菌40份组成，所述植物粉剂由车前草提取物20份和龙胆草提取物20份组成；

制备方法为：将上述各配方量组分混合得到益生菌制剂。

对比例2

本对比例提供了一种益生菌制剂，由益生菌粉剂和植物粉剂组成。

以重量份计，所述益生菌粉剂由植物乳杆菌10份、鼠李糖乳杆菌30份、嗜酸乳杆菌10份、詹氏乳杆菌10份和格氏乳杆菌20份组成，所述植物粉剂由车前草提取物25份和龙胆草提取物25份组成；

制备方法为：将上述各配方量组分混合得到益生菌制剂。

性能测试一：抗炎消肿试验

1.实验材料：

Balb/c小鼠，SPF级，雌性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司；实施例1-5以及对比例1-2提供的7种益生菌制剂；CMC-Na购自国药集团化学试剂有限公司；蜂胶速效防敏脱毛膏购自滋生源化妆品有限公司；

2.实验方法：

A、蛋清液致小鼠足肿胀实验

80只Balb/c小鼠随机分为8组，每组10只，1-7组小鼠分别给药实施例1-5以及对比例1-2提供的7种益生菌制剂，8组为致炎不用药组；

除8组外，各组小鼠于双后肢膝关节以下至足底部涂擦给药，每隔30min(待上次药干燥后)涂擦1次，每日2次，连续给药5d；末次给药0.5h后，用0.5mL注射器于每只小鼠右后足趾腱膜下注射10％蛋清溶液30μL(第8组小鼠也做同样处理但不给药)，诱导小鼠右足趾肿胀，左足趾作为对照；致炎2h后，颈椎脱臼法处死小鼠，立即用剪刀剪取小鼠两后足趾膝关节以下的相同部位，电子天平称量左、右足质量，计算肿胀度及肿胀抑制率；

肿胀度＝右足质量-左足质量；

肿胀抑制率＝(致炎不用药组肿胀度-给药组肿胀度)/致炎不用药组肿胀度×100％。

测试结果见表1：

表1

注：结果为

与未给药组比较，

由表1数据可知，本发明提供的益生菌制剂可以抑制蛋清液所致的小鼠足趾肿胀，由实施例1-3可知，在本发明的优选技术方案内，本发明提供的益生菌制剂可以明显抑制蛋清液所致的小鼠足趾肿胀(P＜0.05或P<0.01)，实施例1-3提供的益生菌制剂对小鼠足趾肿胀的抑制率均高于实施例4-5的益生菌制剂的抑制率，由此可知，本发明优选在益生菌制剂中添加车前草提取物以及龙胆草提取物，可以进一步增加益生菌制剂的抗炎效果。由实施例1-3和对比例1-2的对比可知，各组分以及组分添加量均在本发明优选范围内时得到的更佳。

B、CMC-Na致小鼠皮下气囊白细胞游走试验

选取80只小鼠，随机分成8组，每组10只小鼠：1-7组小鼠分别给药实施例1-5以及对比例1-2提供的7种益生菌制剂，8组为空白未用药组。

实验前1d用脱毛膏将背部肩胛间区(背正中)约2cm×2cm大小的范围脱毛，皮肤无缺口、损伤；各组动物在脱毛区涂抹给予相应的药物，每隔30min(待上次药干燥后)涂抹1次，每日2次，连续给药7d，于第6天给药1h后，在背部肩胛间区(背正中)皮下注射2mL空气形成气囊，于第7天给药1h后，向气囊内注入1％CMC-Na溶液2mL致炎，致炎后3h和6h分别从囊内吸取渗出液0.1mL，并使用全自动血液分析仪进行白细胞计数分析，记录各组白细胞总数，并计算其抑制率；

抑制率＝(空白未用药组白细胞总数-给药组白细胞总数)/空白未用药组白细胞总数×100％。

测试结果见表2：

表2

注：结果为

与未给药组比较，

由表2数据可知，本发明提供的益生菌制剂可以抑制CMC-Na致炎后小鼠皮下气囊白细胞游走，由实施例1-3可知，在本发明的优选技术方案内，本发明提供的益生菌制剂能够明显抑制CMC-Na致炎后6h的小鼠皮下气囊白细胞游走(P＜0.05或P<0.01)，并且实施例1-3提供的益生菌制剂对CMC-Na致炎抑制率均高于实施例4-5的益生菌制剂的抑制率，由此可知，本发明优选在益生菌制剂中添加车前草提取物以及龙胆草提取物，能够有效抑制小鼠皮下白细胞游走，抗炎效果才能达到最佳。由实施例1-3和对比例1-2的对比可知，各组分以及组分添加量均在本发明优选范围内时得到的更佳。

性能测试二：扭体镇痛试验

1.实验材料：

Balb/c小鼠，SPF级，雌性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司；实施例1-5以及对比例1-2提供的7种益生菌制剂；冰乙酸购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；蜂胶速效防敏脱毛膏购自滋生源化妆品有限公司；

2.实验方法：

选取80只小鼠，随机分为8组：1-7组小鼠分别给药实施例1-5以及对比例1-2提供的7种益生菌制剂，8组为空白不用药组；

各组小鼠试验前1d将小鼠腹部脱毛，约2cm×2cm大小的范围，皮肤无缺口、损伤；各组小鼠腹部皮肤涂擦给予相应的药物，每天1次，连续5d；末次给药后30min腹腔注射0.6％醋酸溶液(0.1mL/10g)，观察并记录小鼠扭体反应(腹部内凹，伸展四肢，臀部抬高)的潜伏期(从注射醋酸至发生扭体的间隔时间)和10、15、20min内小鼠的扭体次数。

测试结果见表3：

表3

注：结果为

与未给药组比较，

由表3数据可知，与空白未用药组比较，本发明提供的益生菌制剂可以延长扭体发生的潜伏期，减少小鼠的扭体次数；由实施例1-3可知，在本发明的优选技术方案内，本发明提供的益生菌制剂能够明显延长扭体发生的潜伏期，并且在末次给药10，15，20min内可以明显减少小鼠的扭体次数(P＜0.05或P＜0.01)，即本发明优选技术方案内的益生菌制剂能够有效缓解小鼠发生扭体，并能够显著减少扭体发生的次数，可见具有显著的镇痛效果。

由实施例1-3和实施例4-5的对比可知，本发明优选在益生菌制剂中添加车前草提取物以及龙胆草提取物，由实施例1-3和对比例1-2的对比可知，各组分以及组分添加量均在本发明优选范围内时得到的更佳。

性能测试三：止痒试验

1.实验材料：

Balb/c小鼠，SPF级，雌性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司；实施例1-5以及对比例1-2提供的7种益生菌制剂；右旋糖酐-40购自北京鼎国昌盛生物技术有限公司；蜂胶速效防敏脱毛膏购自滋生源化妆品有限公司。

2.实验方法：

选取80只小鼠随机分为7组，每组10只小鼠，1-7组小鼠分别给药实施例1-5以及对比例1-2提供的7种益生菌制剂，8组为致炎不用药组；

各组小鼠于实验前1d将背部肩胛间区(背正中)脱毛，约2cm×2cm大小的范围，皮肤无缺口、损伤。采用腹部涂抹给药，每隔30min(待上次药干燥后)涂抹1次，每天2次，连续的给药7d，末次给药30min后，向小鼠尾静脉注射右旋糖酐1.25mg/kg；以小鼠前爪搔抓头部，后爪搔抓躯干，嘴咬全身各部位作为瘙痒指征，记录小鼠第一次搔抓的时间(即潜伏时间)、30min内小鼠搔痒次数及搔痒持续总时间；

测试结果见表4：

表4

注：结果为

与未给药组比较，

由表4数据可知，与空白未用药组比较，本发明提供的益生菌制剂可以延长小鼠瘙痒反应的潜伏时间，并缩短了抓挠持续时间，同时也降低了小鼠致痒后30min内的挠抓次数；由实施例1-3可知，在本发明的优选技术方案内，本发明提供的益生菌制剂明显有效止痒，并且车前草和龙胆草的存在还会有祛除异味，提升清凉感的作用。由实施例1-3和实施例4-5的对比可知，本发明优选在益生菌制剂中添加车前草提取物以及龙胆草提取物。

性能测试四：对肿瘤抑制作用

1.实验材料：

5周龄Balb/c小鼠，SPF级，雌性，购自北京维通利华实验动物技术有限公司；实施例1-5以及对比例1-2提供的7种益生菌制剂，HPV16阳性人宫颈癌SiHa细胞株，购自中国医学科学院基础医学院研究所细胞中心，蜂胶速效防敏脱毛膏购自滋生源化妆品有限公司；

2.实验方法：

2.1造模与分组

取对数生长期的SiHa细胞，常规消化，用MEM培养基重悬清洗2遍，计数，制成浓度为2×10

2.2给药

各组模型组小鼠正常饲养，1-7组每天每50mm

表5

注：结果为

与未给药组比较，

由表5可知，本发明提供的益生菌制剂能够抑制肿瘤生长速率，由实施例1-3可知，在本发明的优选范围内，对肿瘤抑制作用极为明显。由实施例1-3和实施例4-5的对比可知，本发明在益生菌制剂中添加车前草提取物以及龙胆草提取物能够明显抑制肿瘤生长。

2.3取材

28d后，取材前12h小鼠禁食不禁水，采用1％戊巴比妥钠0.1mg/g，腹腔注射麻醉，分离小鼠肿瘤组织，称重，结果见表6；

表6

注：结果为

与未给药组比较，

由表6可知，本发明提供的益生菌制剂能够抑制肿瘤生长速率，由实施例1-3可知，在本发明的优选范围内，对肿瘤抑制作用极为明显，肿瘤重量最轻，即本发明提供的益生菌制剂能够有效预防HPV，或有HPV等病毒引发的宫颈癌。由实施例1-3和实施例4-5的对比可知，本发明在益生菌制剂中添加车前草提取物以及龙胆草提取物能够明显抑制肿瘤生长。

性能测试五：阴道抑菌性试验

1.实验材料：

大耳白兔，雌性，购自北京众垒养殖专业合作社；实施例1-5以及对比例1-2提供的7种益生菌制剂，大肠杆菌菌种购自湖南丰晖生物科技有限公司，白色念珠菌菌种购自北京索莱宝科技有限公司，细菌/真菌DNA提取试剂盒购自赛默飞；

2.实验方法：

2.1致病菌的培养及菌悬液的制备：

致病菌培养：将本实验室保存的大肠杆菌平板活化后，转接至30mL LB液体培养基中，37℃，220rpm过夜培养后，4℃，4000rpm离心收集菌体。

菌悬液的制备：将收集的菌体溶入生理盐水中，配制成OD

2.2造模与分组

细菌性阴道炎模型兔：取体重为2kg无阴道炎症的健康试验兔作为造模动物；取制备好的高浓度大肠杆菌菌悬液0.5mL，用带导管的注射器，注射入兔阴道深处，并将兔倒置放置2min；每天一次，连续一周进行注射；取兔阴道分泌物做临床检测，规定兔阴道出现明显红肿，阴道镜检中出现典型致病菌增多、胺试验后呈阳性，阴道pH值较原先有显著升高(pH升高量＞1)，即为造模成功。

霉菌性阴道炎模型兔：制备方式与细菌性阴道炎类似，将大肠杆菌菌悬液替换为白色念珠菌菌悬液。

2.3阴道炎症改善试验

细菌性阴道炎症的改善：将造模成功的试验兔随机分为8组，每组2只，1-7组分别给药实施例1-5和对比例1-2提供的7种益生菌制剂，每日以带导管的注射器冲洗试验兔阴道一次，每只兔每次按照0.5g益生菌制剂/kg的用量将益生菌制剂调配成益生菌溶液，连续用药一周；8组为空白不用药组；另设一组健康对照组；一周后将试验兔处死，取处死兔的阴道进行10mL无菌生理盐水的冲洗，收集冲洗液，将冲洗液稀释后，进行菌种的鉴别和计数。

菌种的鉴别和计数：取收集的冲洗液，按照细菌/真菌DNA提取试剂盒说明书的方法进行混合液的DNA提取；以提取的DNA为模板进行菌株多样性测序。

不同用药组兔阴道菌群统计情况见表7：

表7

注：本次鉴定只针对乳酸杆菌、大肠杆菌和白色念珠菌。

霉菌性阴道炎症的改善：试验方法同细菌性阴道炎症的改善。

不同用药组兔阴道菌群统计情况见表8：

表8

注：本次鉴定只针对乳酸杆菌、大肠杆菌和白色念珠菌。

由表7和表8可知，本发明提供的益生菌制剂能够改善阴道菌群分布，可以修复和维持阴道微生态平衡。由表可知，实施例1～3提供的益生菌制剂能够明显改善阴道菌群分布，对细菌性阴道炎和霉菌性阴道炎具有明显的改善作用，促进有益菌群的定植，强化阴道粘膜免疫防御机能，可以用于辅助治疗阴道炎以及预防阴道炎的发生。

由本发明的实施例和性能测试可知，本发明提供的益生菌制剂具有清热除湿、敛疮止带、抑菌止痒、消肿镇痛、清新除味等功效，能够有效维持女性阴道微生态环境的平衡、预防阴道细菌感染，从而达到防治女性阴道炎、宫颈炎、私处瘙痒、白带异常等妇科炎症，并且对HIV、HPV等病毒引起的宫颈癌也有一定的防治功效。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。